犊牛健康生长是奶牛养殖业持续发展的保障，提高犊牛免疫力及抗氧化性能对促进其健康生长和提高养殖经济效益具有重要意义。枸杞多糖（LBP）是从枸杞果实中分离提取得到的安全、绿色、无毒副作用的天然多糖[1]，具有调节机体免疫[2-3]、抗氧化[4]、抑菌[5]、消炎[6]等功能。研究表明，在鸡[7]、兔[8]、鱼[9]、猪[10]、羊[11]饲粮中添加一定量的LBP可以提高动物的生长性能、饲料利用率，但LBP在反刍动物牛生产中的研究鲜有报道。本试验旨在探究LBP对荷斯坦母犊生长性能、消化水平、免疫功能及抗氧化能力的影响，为LBP在犊牛养殖生产实践中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验时间与地点饲养试验于2021年5月30日至8月4日在新疆昌吉市阿什里乡吉缘牧业进行。1.2试验材料LBP购自山西碧福康生物科技有限公司（有效成分含量≥50%）。地磅购自上海台迈衡器有限公司，卷尺、80-2型号离心机、采血针、5 mL采血管、离心管、移液枪、无菌手套等耗材均由新疆子琦生物有限公司提供。1.3试验设计与饲养管理采用单因素方差完全随机试验设计，选取48头自然分娩、生长发育良好，体重（70±5）kg、（50±5）日龄的健康荷斯坦母犊，随机分为4组，每组12个重复，且各组犊牛初始体重无显著差异（P0.05）。预试期7 d，正式试验期60 d。预试期时，让犊牛适应试验人员、环境和LBP的味道，降低应激。正式试验期所有组犊牛在饲喂开食料的基础上，第1~20 d给予3×2.5 L/d的代乳粉冲泡奶，第21~40 d给予2×2.5 L/d的代乳粉冲泡奶，第41~60 d给予1×2.5 L/d的代乳粉冲泡奶。代乳粉冲泡奶是代乳粉和39 ℃温水按1∶7冲泡得到。试验期间犊牛自由采食开食料和饮水。试验1组（TG 1组）、试验2组（TG 2组）、试验3组（TG 3组）分别在犊牛代乳粉中添加5、10、15 g/(头·d) LBP，对照组为不添加处理。开食料及代乳粉营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.07.001.T001表1开食料及代乳粉营养水平营养水平开食料代乳粉干物质（DM）90.340粗蛋白（CP）20.3121.0粗脂肪（EE）7.8516.0粗灰分（Ash）4.1110.0中性洗涤纤维（NDF）30.910酸性洗涤纤维（ADF）9.530钙（Ca）1.370.3磷（P）0.690.3注：开食料为嘉吉饲料的普瑞纳1116，代乳粉为荷兰纽维德公司的喜利康。%1.4测定指标及方法1.4.1体重及日增重正式试验第0、20、40、60 d时称量犊牛体重，计算平均日增重（ADG）。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)1.4.2营养物质表观消化率正式试验最后4 d，每组随机挑选5头牛，每天每头牛采用直肠取粪法人工收集粪样3次，每次250 g，共计12次，用于测定粪样中粗蛋白（CP）、粗脂肪（EE）、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）、钙（Ca）、磷（P）、盐酸不溶灰分（AIA）含量。营养物质表观消化率采用AIA法测定[12]。营养物质表观消化率＝[1－(饲粮中AIA含量×粪样中某营养物质含量)/(粪样中AIA含量×饲粮中某营养物质含量)]×100%(2)1.4.3血清中免疫、抗氧化指标正式试验第0、30、60 d晨饲前颈静脉采集血液样品，每次10 mL，于干燥的环境中静置3 h，置于离心机中，在3 500 r/min条件下离心15 min，收集血清于1.5 mL的离心管中。采用比色法在迈瑞-420全自动生化仪上检测血清中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）含量；采用酶联免疫吸附法在使用华卫德朗DR-200BS酶标分析仪检测犊牛血清中白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）的含量。1.5数据统计与分析数据采用Excel 2010软件整理，采用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同水平枸杞多糖对犊牛体重、平均日增重的影响（见表2）由表2可知，0~20 d，TG 3组犊牛ADG比CON组显著提高（P0.05）；21~40 d，TG 2组犊牛ADG比TG 3组显著提高（P0.05）；41~60、0~60 d，TG 2组犊牛ADG比CON显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.07.001.T002表2不同水平枸杞多糖对犊牛体重、平均日增重的影响项目CON组TG 1组TG 2组TG 3组体重/(kg/头)0 d69.24±6.4668.90±7.4869.37±7.1268.74±5.1020 d81.49±8.9783.63±10.7984.79±9.6084.72±6.0540 d102.70±11.04105.80±13.73106.54±12.48103.43±7.9760 d119.71±14.98126.13±16.58130.53±15.20126.90±11.87ADG/[g/(头·d)]0~20 d612.50±181.37b736.25±290.10ab771.25±195.36ab798.75±168.00a21~40 d1 003.00±139.35ab1 056.82±202.96ab1 087.50±182.56a935.42±184.05b41~60 d1 005.83±196.43b1 125.00±183.60ab1 199.58±285.62a1 173.75±245.50ab0~60 d856.53±154.99b968.40±177.43ab1 019.44±138.98a969.31±147.75ab注：同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表4、表5与此同。2.2不同水平枸杞多糖对犊牛营养物质表观消化率的影响（见表3）由表3可知，TG 1组犊牛CP、EE消化水平最高，TG 3组犊牛NDF、ADF消化水平最高。TG 1组犊牛CP、EE、Ca、P消化水平分别比CON组高27.59%、40.92%、34.17%、35.00%（P0.05）；TG 3组犊牛NDF、ADF消化水平分别比CON组高17.53%、12.86%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.07.001.T003表3不同水平枸杞多糖对犊牛营养物质表观消化率的影响组别CPNDFADFEECaPCON组66.66±14.37b63.79±9.5461.29±6.1253.64±8.93b63.01±14.26b61.35±16.06bTG 1组85.05±6.48a70.13±8.4068.92±6.2975.59±10.24a84.54±5.05a82.82±6.05aTG 2组72.19±11.13ab65.43±14.6758.57±16.1566.30±12.09ab63.99±7.33b68.49±12.42abTG 3组77.24±5.51ab74.97±11.7969.17±11.7066.72±4.08ab68.65±7.73b61.69±7.28b注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。%2.3不同水平枸杞多糖对犊牛血清中免疫指标的影响（见表4）由表4可知，TG 2组、TG 3组犊牛血清的免疫指标含量高于对照组。30 d时，TG 3组犊牛血清中IgA水平比CON组高11.24%（P0.05），60 d时，TG 2组、TG 3组犊牛血清中IgA水平分别比CON组高9.20%、12.07%（P0.05）。60 d时，TG 2组、TG 3组犊牛血清中IL-6含量分别比CON组高17.39%、15.54%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.07.001.T004表4不同水平枸杞多糖对犊牛血清中免疫指标的影响项目CON组TG 1组TG 2组TG 3组IgA/(g/L)0 d1.54±0.181.59±0.251.54±0.241.57±0.2130 d1.69±0.17b1.7±0.23ab1.73±0.23ab1.88±0.25a60 d1.74±0.13b1.81±0.22ab1.90±0.16a1.95±0.20aIgG/(g/L)0 d11.11±0.7411.29±0.7411.26±0.9211.19±0.8430 d12.13±0.7712.17±0.8512.26±1.1112.78±0.9160 d12.55±1.0112.84±1.2413.07±0.8213.13±1.16IL-2/(ng/L)0 d318.68±36.41332.36±37.16321.05±35.56322.28±34.2130 d258.27±37.35282.46±49.17286.85±49.04277.48±51.2660 d174.44±31.4191.94±45.25190.78±34.74187.21±39.44IL-6/(ng/L)0 d154.95±12.88157.88±18.94159.49±19.90158.96±18.7830 d134.67±10.34139.48±18.66140.92±15.06146.14±15.0860 d119.15±16.81b123.2±19.84ab139.87±19.63a137.66±17.17a2.4不同水平枸杞多糖对犊牛血清中抗氧化指标的影响（见表5）由表5可知，60 d时，TG 2组、TG 3组犊牛血清中SOD活性分别比CON组高4.40%、4.16%（P0.05）。30 、60 d时，TG 3组犊牛血清中MDA含量分别比CON组低9.03%、13.09%（P0.05）。60 d时，TG 1组、TG 2组、TG 3组犊牛血清中ROS分别比CON组低7.21%、7.03%、7.61%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.07.001.T005表5不同水平枸杞多糖对犊牛血清中抗氧化指标的影响项目CON组TG 1组TG 2组TG 3组SOD/(U/mL)0 d44.14±4.4746.09±4.2244.74±4.3145.94±4.2430 d48.07±2.6747.50±1.9647.79±2.8049.5±2.7660 d49.53±1.62b50.65±2.82ab51.71±1.92a51.59±2.39aMDA/(μmol/L)0 d4.87±0.654.63±0.734.75±0.664.85±0.7930 d4.32±0.32a4.23±0.24ab4.17±0.27ab3.93±0.53b60 d4.05±0.28a3.85±0.42ab3.84±0.17ab3.52±0.55bROS/(AU/mL)0 d481.77±50.98488.71±52.19481.58±42.96489.62±56.0230 d438.46±19.22436.13±21.57438.92±18.11434.57±17.8160 d409.48±23.67a379.97±19.79b380.68±18.41b378.33±15.54b3讨论3.1不同水平枸杞多糖对犊牛生长性能及营养物质表观消化率的影响本研究发现，添喂LBP可以不同程度提高犊牛体重、ADG及消化水平，与Chen等[10]发现在仔猪日粮中添加LBP可以显著提高其ADG、ADFI，降低F/G、马小俊等[13]发现给不同品种羊添喂枸杞可提高其采食量及EE、粗纤维、Ca、P、DM等消化水平的研究结果一致。LBP是从天然植物中提取出来的高分子量酸性杂多糖，在肠道中作为能量物质被肠道中微生物所利用，生成短链脂肪酸（SCFA）[14-15]。犊牛的消化系统功能发育不成熟，胃酸分泌量欠佳，导致营养物质进入胃肠道中不能完全被利用，而LBP被肠道菌群所代谢生成的SCFA可以降低犊牛肠道的pH值，为胃肠道营造酸性环境，进而提高消化率[16]。LBP还可以诱导消化酶的表达，如给肉仔鸡添喂2 000 mg/kg的LBP可以增加其肠道中脂肪酶、淀粉酶和蛋白酶的活性[7]。LBP能够抑制多形核嗜中性粒细胞（PMN）的聚集与ICAM-1的表达，诱导核转录因子（NF-κB）活化，提高肿瘤坏死因子（TNF-α）水平，导致肠黏膜通透性及组织学变化，减少肠道氧化损害，提高胃肠道对营养素的吸收能力[17]；还可以通过提高肠道中V/C比值，改善肠道形态，维持肠道完整性，促进营养素的消化吸收[18]。3.2不同水平枸杞多糖对犊牛血清中免疫指标的影响免疫系统是机体执行免疫应答及免疫功能的重要系统，是由免疫器官、免疫细胞和免疫活性因子组成的互动网络，对生物体健康及生长发育至关重要[19-20]。本试验发现，添喂LBP可以提高犊牛血清中IgA、IgG、IL-2、IL-6水平，与Long等[7]在肉鸡日粮中添加LBP，可以提高肉鸡血清中IgG和IgA含量。Ding等[14]给环磷酰胺诱导的免疫和菌群失调的小鼠补喂LBP，可以提高免疫相关细胞因子IL-2、IL-6、IL-1β、TNF-α的产生的研究结果一致。原因可能是LBP可以提高肠道益生菌中普雷沃氏菌科、双歧杆菌、拟杆菌与理研菌科的含量，降低有害菌中大肠杆菌的含量[21]，提高肠道中有益菌的比例抑制有害菌的生长，通过益生菌诱导机体产生适量的免疫球蛋白（如IgG和IgA）[22]；LBP可以通过刺激Toll样受体2、4介导的NF-κB信号通路诱导DC表型和功能成熟，产生细胞因子[23]。3.3不同水平枸杞多糖对犊牛血清中抗氧化指标的影响生物体的氧化损伤随着年龄的增长而增加，ROS、MDA是造成氧化损伤的主要原因。ROS可损伤蛋白质、脂质和核酸等生物分子[24]。MDA是自由基和脂质通过过氧化反应产生的对细胞膜具有攻击性的脂质过氧化物[25]。SOD是一种重要的抗氧化剂，能够催化超氧阴离子自由基生成，通过清除自由基，阻止氧化应激造成的氧化损伤，维持氧化还原的平衡[26]。本研究发现，添喂LBP可以显著提高犊牛血清中SOD活性，显著降低血清中MDA含量、ROS活性。Tang等[27]发现，LBP可以提高机体内SOD、过氧化氢酶（CAT）的活性，降低MDA含量。Zhou等[28]研究发现，使用LBP处理被电离辐射损伤的小鼠，可以显著提高小鼠骨髓有核细胞中的SOD活性、降低MDA含量，与本试验研究结果一致。造成这一现象的原因可能是LBP可以通过直接清除机体内活性氧、过氧化物或激活内源性抗氧化酶抑制氧化应激反应。研究表明，LBP可以激活磷酸肌醇3激酶（PI3K）/AKT/Nrf2通路，诱导Nrf2核转位，增加Nrf2蛋白的核表达，并显著上调Nrf2蛋白及其下游蛋白在细胞核中的表达水平和增加Nrf2依赖的抗氧化反应元件（ARE）靶基因表达，从而通过激活Nrf2/ARE通路清除ROS减少DNA损伤[29-30]。4结论本试验研究发现，枸杞多糖可以通过提高犊牛消化率、免疫功能、抗氧化能力，达到提高犊牛生长性能的目的，且饲喂10 g/(头·d) LBP时效果较好。