鸡球虫病主要是由艾美耳属球虫（Eimeria coccidia）感染肠道，从而引起鸡腹泻甚至死亡的寄生虫性传染病，其中以雏鸡的发病率最高[1]。临床中常使用化学药物防治鸡球虫病，肉、蛋中能够检测到药物残留，降低了肉、蛋产品的质量和安全性，给人类健康带来潜在的危害[2]。近年来，鸡球虫病免疫预防的研究工作取得了一定进展，但仍存在一些问题，因此需要寻找一种有效、健康、环保的制剂防治球虫病。大蒜精油具有天然性、多功能性、无毒副作用和无抗药性等优点[3-4]，能够促进动物采食，具有抗氧化[5-7]、抗菌消炎[8-9]、免疫调节[10-11]等功能，已广泛应用于畜禽疾病预防和治疗[12]。研究表明，大蒜精油可治疗由各种细菌、病毒和肠道寄生虫引起的疾病[13]。王建华等[14]研究发现，全程使用大蒜精油的肉鸡未出现黄白痢、球虫、肠毒综合征等疾病。但柯淇匀等[15]使用大蒜素治疗肉鸡球虫时，发现10 g/kg大蒜素对减少球虫卵囊效果并不明显。徐静等[16]发现，在0~4周龄蛋雏鸡饮水中添加大蒜精油能够有效改善十二指肠环境，促进肠道对营养物质的吸收，提高蛋雏鸡生产性能。王文利等[17]指出，在产蛋鸡饲粮中添加不同水平的大蒜素能够增加机体抗氧化能力，提高机体的免疫力。目前，天然大蒜精油在蛋雏鸡中的应用较少，尤其是用于防治蛋雏鸡肠道寄生虫病鲜有报道。本试验研究饮水中添加不同剂量天然大蒜精油对蛋雏鸡感染球虫后免疫指标的影响，以期为使用天然大蒜精油防治蛋鸡球虫病提供参考。1材料与方法1.1试验材料柔嫩艾美耳球虫卵囊由河北农业大学寄生虫教研室保存；天然大蒜精油（大蒜素含量为7.5%）由达农威生物发酵工程技术（深圳）有限公司提供；地克珠利（20170504023）由合肥中龙神力动物药业有限公司生产。1日龄农大3号节粮蛋雏鸡450只。饲养蛋雏鸡前，鸡舍经甲醛、高锰酸钾熏蒸消毒24 h，通风3 d。所用饲粮应为全价雏鸡饲粮，且不含抗球虫药物，基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.08.009.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米58.70代谢能/(MJ/kg)12.10豆粕28.40粗蛋白质/%20.03玉米蛋白粉4.00钙/%1.03次粉2.55有效磷/%0.42大豆油1.10总磷/%0.63石粉1.50蛋氨酸＋半胱氨酸/%0.84磷酸氢钙1.60赖氨酸/%1.23氯化钠0.30蛋氨酸/%0.49DL-蛋氨酸0.15赖氨酸0.60氯化胆碱0.10预混料1.00注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 10 000 IU、VD 34 000 IU、VE 28 mg、VK 33 mg、VB1 4 mg、VB2 10 mg、VB6 6 mg、VB12 0.08 mg、泛酸18 mg、吡哆醇8 mg、叶酸1.0 mg、生物素0.3 mg、氯化胆碱600 mg、Cu 10 mg、Fe 60 mg、Zn 80 mg、Mn 90 mg、I 1 mg、Se 0.3 mg。2.营养水平均为计算值。1.2试验设计选择健康状况良好、体重相近的1日龄蛋雏鸡400只，随机分为5组，每组4个重复，每个重复20只，即健康对照组（HC组）、感染组（IN组）以及天然大蒜精油低（L组）、中（M组）、高剂量组（H组），大蒜精油组分别在饮水中添加0.04、0.06、0.08 mL/L大蒜精油，雏鸡饲养至23日龄。16日龄时，经粪便检查确认无球虫感染后，除健康对照组外，其他各组分别口服柔嫩艾美尔球虫卵囊5×104个/只。攻毒期为7 d（16~22日龄），试验期共23 d（1~23日龄）。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能分别于雏鸡16日龄和23日龄8：00，试验鸡空腹称重，计算各组平日增重和相对增重率。平均增重=平均末重-平均初重(1)相对增重率=各组鸡平均日增重/健康对照组鸡平均增重×100%(2)1.3.2粪便卵囊计数于雏鸡20、21、22日龄收集粪便，按照McMaster's法计算卵囊数，以每克粪便卵囊数为单位。每天随机取5个时间点收集新鲜粪便，搅拌均匀，进行卵囊计数，取2 g粪便，加58 mL饱和食盐水搅拌均匀，使用60目铜筛过滤。滤液稀释至60 mL，使用麦氏计数板计数，求平均值，平均值即为当天卵囊数。1.3.3免疫器官指数分别于雏鸡20、23日龄，每组随机选取5只鸡翅下静脉采血，3 500 r/min分离血清，-20 ℃冷冻保存。雏鸡采血后屠宰，剥离免疫器官（胸腺、脾脏和法氏囊），使用滤纸吸除血液，剥离脂肪，称重记录，计算免疫器官指数。免疫器官指数=免疫器官重/活体重×100%(2)1.3.4血清生化指标使用酶标仪测定血清免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）、尿酸（UA）、总胆固醇（TC）、白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量。所有检测指标均参照试剂盒（南京建成生物工程研究所）说明书。1.4数据统计与分析数据采用Excel 2019软件进行初步整理，SPSS 21.0统计软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1天然大蒜精油对蛋雏鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，HC组、M组蛋雏鸡的末重显著高于IN组、L组和H组（P0.05）。HC组蛋雏鸡的平均增重显著高于其他组（P0.05），M组蛋雏鸡的平均增重显著高于IN组、L组和H组（P0.05）。HC组蛋雏鸡的相对增重率最高，L组最低。结果表明，饮水中添加0.06 mL/L天然大蒜精油能够缓解球虫病给鸡带来的食欲不振等症状，减少生长性能的降低。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.08.009.T002表2天然大蒜精油对蛋雏鸡生长性能的影响组别初重/(g/只)末重/(g/只)平均增重/(g/只)相对增重率/%HC组116.58±1.55186.68±8.85a70.11±7.33a100.00IN组116.68±3.11156.16±10.35b39.48±7.40c56.31L组116.15±2.51153.36±6.84b37.21±5.81c53.07M组116.38±3.08176.37±9.63a59.99±6.57b85.57H组116.98±4.09161.20±8.53b44.22±5.63c63.07注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表3、表4与此同。2.2天然大蒜精油对蛋雏鸡球虫卵囊排出的影响（见表3）由表3可知，20~22日龄，HC组均未检出卵囊。20日龄时，HC组、M组和H组克卵囊数均显著低于IN组和L组（P0.05），L组显著低于IN组（P0.05）。21日龄时，HC组克卵囊数显著低于IN组、L组、M组和H组（P0.05），M组显著低于IN组（P0.05）。22日龄时，HC组、M组和H组克卵囊数均显著低于IN组和L组（P0.05）；HC组显著低于M组（P0.05）。HC组、L组、M组和H组卵囊总数均显著低于IN组（P0.05），HC组、M组和H组均显著低于L组（P0.05），HC组、M组均显著低于H组（P0.05），HC组显著低于M组（P0.05）。IN组和L组卵囊值最高，均为40；HC组卵囊值最低，为0。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.08.009.T003表3天然大蒜精油对蛋雏鸡球虫卵囊排出的影响组别克卵囊数/(×106)卵囊比值卵囊值（0~40）20日龄21日龄22日龄合计HC组0.00±0.00c0.00±0.00c0.00±0.00c0.00±0.00e00IN组3.00±0.82a1.02±0.32a1.16±0.14a5.17±0.73a100.0040L组2.13±0.72b0.98±0.17ab1.09±0.18a4.20±0.51b81.2440M组0.06±0.03c0.73±0.17b0.33±0.06b1.12±0.24d21.665H组0.56±0.14c0.90±0.18ab0.70±0.18b2.16±0.20c41.7810结果表明，饮水中添加0.06 mL/L天然大蒜精油能够减少球虫卵囊的排出。2.3天然大蒜精油对蛋雏鸡免疫器官指数的影响（见表4）由表4可知，20日龄时，M组蛋雏鸡胸腺指数显著高于HC组、IN组、L组和H组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.08.009.T004表4天然大蒜精油对蛋雏鸡免疫器官指数的影响组别20日龄23日龄脾脏指数法氏囊指数胸腺指数脾脏指数法氏囊指数胸腺指数HC组1.44±0.434.41±0.622.84±0.16b1.68±0.334.47±0.263.13±0.84IN组0.96±0.213.41±0.532.63±0.37b1.62±0.233.45±1.242.31±0.63L组1.17±0.393.81±0.942.74±0.23b1.68±0.673.74±0.442.41±2.27M组1.39±0.604.47±0.633.51±0.33a1.98±0.164.41±1.073.09±1.06H组1.29±0.314.11±0.132.83±0.90b1.75±0.313.99±0.452.65±0.83%2.4天然大蒜精油对蛋雏鸡血清生化指标的影响（见表5）由表5可知，20日龄时，M组蛋雏鸡血清IgM含量显著高于其他组（P0.05），H组血清IgM显著高于HC组、IN组和L组（P0.05）；H组蛋雏鸡血清IgA含量显著高于其他组（P0.05），L组和M组显著高于HC和IN组（P0.05）；M组蛋雏鸡血清IgG含量显著高于其他组（P0.05），L组和H组显著高于HC和IN组（P0.05）；IN组、L组蛋雏鸡血清UA含量显著高于HC组（P0.05）；HC组和M组蛋雏鸡血清ALB含量显著高于IN和L组（P0.05）。HC组、L组、M组和H组蛋雏鸡血清TP含量显著高于IN组（P0.05）；HC和H组蛋雏鸡血清LDL-C含量显著低于IN组、L组和M组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.08.009.T005表5天然大蒜精油对蛋雏鸡血清生化指标的影响项目HC组IN组L组M组H组20日龄IgM/(mg/L)556.63±50.61c759.28±7.06c757.07±30.89c1 015.45±50.28a851.68±98.41bIgA/(mg/L)154.92±33.79c158.93±31.52c167.39±24.84b203.47±25.45b251.81±16.82aIgG/(mg/L)930.36±67.97c1 239.96±50.61c1 872.08±97.72b2 475.79±96.01a1 866.23±158.75bUA/(μmol/L)164.16±10.31b231.41±31.32a239.67±48.40a213.23±48.09ab214.88±17.20abTC/(mmol/L)4.37±1.044.16±1.274.30±0.804.73±0.515.07±0.37ALB/(g/L)135.03±3.36a91.31±6.92b98.98±3.65b129.00±8.26a120.20±8.14abTP/(g/L)165.03±3.80a127.71±1.82b137.94±3.11a161.21±4.09a136.37±5.32aHDL-C/(mmol/L)3.16±0.412.78±0.422.94±0.463.05±0.582.68±0.11LDL-C/(mmol/L)0.14±0.02b0.26±0.02a0.29±0.06a0.25±0.04a0.13±0.01b23日龄IgM/(mg/L)410.02±86.12536.68±64.65492.55±118.26525.14±86.39491.68±89.92IgA/(mg/L)144.00±31.55b141.17±14.39b171.44±28.63b230.14±25.26a164.72±30.06bIgG/(mg/L)1 543.13±229.411 598.47±310.121 761.22±289.171 884.28±218.881 822.75±270.06UA/(μmol/L)355.37±29.90229.75±66.20338.85±130.94195.04±60.83238.02±109.24TC/(mmol/L)3.68±0.975.25±2.244.26±0.863.74±0.524.48±2.01ALB/(g/L)119.32±13.1791.00±23.99106.19±14.94107.01±15.73108.87±4.61TP/(g/L)146.15±30.25118.60±9.84120.29±26.27156.15±24.87131.76±23.71HDL-C/(mmol/L)2.47±0.612.09±0.291.80±0.152.08±0.032.01±0.18LDL-C/(mmol/L)0.18±0.100.25±0.060.21±0.090.18±0.080.19±0.06注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。23日龄时，M组蛋雏鸡血清IgA含量显著高于其他组（P0.05）。结果表明，0.06 mL/L天然大蒜精油组蛋雏鸡血清IgM、IgG和IgA含量均较高，具有提高机体免疫力的趋势。3讨论3.1天然大蒜精油对蛋雏鸡生长性能的影响精神萎靡、食欲不振等是蛋雏鸡感染球虫后的典型症状，导致蛋雏鸡营养不良、体重下降。大蒜精油由于气味特殊，能够诱导蛋雏鸡进食，有效调节肠道功能，促进营养物质的消化吸收，改善患病蛋雏鸡的体况[18]。本试验结果显示，健康对照组和0.06 mL/L天然大蒜精油组蛋雏鸡的平均末重和平均增重均显著高于其他各组，表明0.06 mL/L天然大蒜精油能够缓解球虫病引起的蛋雏鸡食欲不振。3.2天然大蒜精油对蛋雏鸡球虫卵囊排出的影响El-Latif等[19]使用1×104个艾美耳球虫卵囊/只感染肉仔鸡，在饮水中添加不同水平的大蒜素，14 d后发现与其他组相比，10 g/L的大蒜素添加组卵囊总数明显降低。本试验结果显示，与感染组相比，各组卵囊总数均极显著降低，且以0.06 mL/L天然大蒜精油组卵囊总数最低，表明饮水中添加不同浓度的天然大蒜精油能够减少球虫卵囊的排出，与上述试验结果一致。可能是由于大蒜精油能够通过渗透到卵囊壁，对球虫卵囊产生抑制或杀灭作用[20]，从而减少卵囊的排出量。3.3天然大蒜精油对蛋雏鸡免疫器官指数的影响脾脏、法氏囊和胸腺是蛋雏鸡重要的免疫器官，是T、B淋巴细胞产生、发育和成熟的场所，因此免疫器官的发育状况直接影响蛋雏鸡的免疫能力。研究表明，禽类免疫器官指数与机体免疫机能呈正相关关系[21]。夏伦斌等[22]指出，大蒜素可提高肉仔鸡的免疫器官指数。本试验结果显示，天然大蒜精油不同剂量组免疫器官指数均高于感染组，表明天然大蒜精油具有提高蛋雏鸡免疫机能的趋势。3.4天然大蒜精油对蛋雏鸡血清免疫球蛋白含量的影响血清中免疫球蛋白含量反映了蛋雏鸡机体的抗病力，其中IgM、IgA和IgG在免疫过程中发挥主要作用[23]。王文利等[17]发现，大蒜素能够使畜禽机体免疫力增强，降低发病率。本试验结果显示，20日龄时，与感染组相比，添加0.06、0.08 mL/L天然大蒜精油组蛋雏鸡血清IgM、IgG和IgA含量均显著升高；23日龄时，各组蛋雏鸡血清IgM、IgG含量差异不显著，0.06 mL/L天然大蒜精油组IgA含量显著高于其他组。本试验结果表明，0.06 mL/L天然大蒜精油能使蛋雏鸡机体特异性抗体含量升高，提高蛋雏鸡免疫力。3.5天然大蒜精油对蛋雏鸡血清生化指标的影响UA含量反映了蛋雏鸡对蛋白质吸收利用的状况，UA含量较低时，鸡体内环境相对稳定[24]，UA含量升高则与肾小管功能障碍有关[25]。蛋雏鸡感染球虫后，由于肾小管功能出现障碍，尿酸含量也随之发生变化。蛋雏鸡感染1×105个球虫卵囊后第4~6 d，UA有明显升高，在感染第７ d尿酸值回归正常[26]。本试验发现，20日龄时，感染组、0.04 mL/L天然大蒜精油组蛋雏鸡尿酸含量显著升高；23日龄时，各组UA含量差异均不显著，与上述研究结果相似。赵瑞平[27]使用复方中草药（青蒿、常山、仙鹤草、白头翁、肉桂）治疗雏鸡柔嫩艾美耳球虫病，发现感染第8 d，各组雏鸡血清ALB和TP含量有显著差异。但本试验表明，20日龄时，添加0.06、0.08 mL/L天然大蒜精油组蛋雏鸡血清ALB和TP含量高于感染组，23日龄时，各组ALB和TP含量差异均不显著，推测可能是由于选用雏鸡品种及药物不同所致。蛋雏鸡感染球虫后血清ALB和TP含量下降，由于病鸡肠道功能受阻，从而引起肝脏蛋白质合成量降低。因此，本试验表明天然大蒜精油能够在一定程度上修复肝脏、肾脏受损功能。4结论本研究表明，饮水中添加0.06 mL/L天然大蒜精油能够有效减少卵囊排出量，具有抗球虫效果；促进了免疫球蛋白的分泌和蛋白质的产生及利用，提高了蛋雏鸡免疫能力。