我国已于2020年7月禁止在饲料中添加抗生素，近些年抗生素的替代品的研究成为饲料及养殖行业的重点内容，寻找安全、高效、绿色、无污染的饲料添加剂对养殖业的健康发展及畜产品安全至关重要。目前，微生态制剂类在饲料中的作用效果比较理想[1]。凝结芽孢杆菌于2013被列入我国农业农村部《饲料添加剂品种目录》[2]，具有较高的耐热性、抑菌性、安全性[3-4]。凝结芽孢杆菌作为饲料添加剂应用于动物生产中，可以提高机体抗热应激能力，缓解热应激对生长性能产生的不利影响[5]。凝结芽孢杆菌在断奶仔猪生产中应用，可以降低腹泻率，改善肠道健康，促进仔猪生长，具有显著的替抗效果[6]。为进一步促进凝结芽孢杆菌在断奶仔猪养殖生产中的应用，本试验以断奶仔猪为研究对象，探究不同剂量凝结芽孢杆菌对仔猪生长性能、机体免疫性能及肠道菌群的影响，为凝结芽孢杆菌高效地应用于断奶仔猪养殖生产中提供参考。1材料与方法1.1凝结芽孢杆菌凝结芽孢杆菌购自苏州某股份有限公司，含量为1.0×1010 CFU/g。1.2试验设计试验选择160头21日龄断奶、体重约为7.20 kg的仔猪，采用单因素试验设计，随机分为4组，每组4个重复，每个重复10头仔猪。对照组仔猪饲喂基础日粮，试验1组仔猪饲喂基础日粮+1.0×107 CFU/g的凝结芽孢杆菌，试验2组仔猪饲喂基础日粮+1.5×107 CFU/g的凝结芽孢杆菌，试验3组仔猪饲喂基础日粮+3.0×107 CFU/g的凝结芽孢杆菌。试验期28 d。试验仔猪的基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.007.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米63.94消化能/(MJ/kg)13.42豆粕20.00粗蛋白/%18.59麸皮5.50钙/%0.84玉米胚芽粕4.50总磷/%0.63鱼粉2.00有效磷/%0.42豆油0.50蛋氨酸/%0.46食盐0.30赖氨酸/%1.23DL-蛋氨酸0.24苏氨酸/%0.80L-赖氨酸（98%）0.38磷酸氢钙1.36石粉0.28预混料1.00注：1.预混料购自费县海瑞达饲料有限公司。2.营养水平均为计算值。1.3饲养管理所有仔猪在试验期间自由采食、自由饮水。免疫及驱虫程序按照养殖场日管理规范进行。所有仔猪饲养在同一猪舍内，保证养殖环境一致，由专人饲养，每日观察各组仔猪的健康状况。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能饲养开始、结束时称量仔猪的空腹体重（禁食12 h），准确记录各组仔猪的采食量及腹泻情况，试验结束计算各组仔猪的平均日增重、平均日采食量、料重比、腹泻率。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)腹泻率=(腹泻头数×腹泻天数)/(试验天数×试验头数)×100%(4)1.4.2免疫指标试验结束，仔猪称量体重后，从每组中选择12头体重与组内均重相近的仔猪采集颈静脉血液10 mL，3 500r/min离心10 min，取上层血清-20 ℃冻藏，用于检测血清免疫指标。检测血清免疫指标主要包括免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、免疫球蛋白G，白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、补体C3、补体C4等，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.4.3肠道菌群试验结束每组选择4头仔猪屠宰，采集空肠和盲肠食糜，-80 ℃冻藏，用于检测肠道中菌群数量。空肠和盲肠中的大肠杆菌、乳酸杆菌、凝结芽孢杆菌数量采用平板计数法测定[7]。1.4.4肠道形态试验结束取4头仔猪屠宰取空肠、回肠约1 cm，使用0.9% NaCl清洗干净，4%甲醛中固定，苏木精-伊红染色，显微镜观察。麦克奥迪数字切片管理系统拍照。MoticImages Plus 2.0显微镜成像软件测量空肠和回肠的绒毛高度和隐窝深度。1.5数据统计与分析试验数据采用SPSS 28进行单因素方差分析，LSD法进行多重比较，结果以平均值和标准误（SEM）表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同剂量的凝结芽孢杆菌对仔猪生长性能及腹泻率的影响（见表2）由表2可知，饲喂凝结芽孢杆菌的仔猪的末重、料重比及腹泻率均得到明显改善（P0.05）。试验组仔猪末重比对照组分别提高4.74%、5.26%、5.19%（P0.05）；料重比分别降低了8.1%、9.05%、9.52%（P0.05）；腹泻率分别降低21.82%、65.95%、73.22%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.007.T002表2不同剂量的凝结芽孢杆菌对仔猪生长性能及腹泻率的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组SEMP值初重/(kg/头)7.087.137.107.060.410.851末重/(kg/头)13.50b14.14a14.21a14.20a1.960.038平均日增重/[g/(头·d)]229.29250.36253.93255.007.050.077平均日采食量/[g/(头·d)]480.54482.02484.50483.8016.310.934料重比2.10a1.93b1.91b1.90b0.130.017腹泻率/%6.05a4.73b2.06c1.62c0.210.006注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2不同剂量的凝结芽孢杆菌对仔猪免疫指标的影响（见表3）由表3可知，试验2组和试验3组仔猪血清中免疫球蛋白A含量显著高于对照组（P0.05）。试验组仔猪血清中的免疫球蛋白G含量均显著高于对照组（P0.05）。试验2组和试验3组仔猪血清的白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α含量显著降低（P0.05）。试验组仔猪血清中的白细胞介素-10含量均显著高于对照组（P0.05）。试验2组和试验3组仔猪血清中的补体C3含量显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.007.T003表3不同剂量的凝结芽孢杆菌对仔猪免疫指标的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组SEMP值免疫球蛋白A/(g/L)1.400b2.030ab2.710a2.800a0.1800.012免疫球蛋白G/(g/L)3.170b3.850a4.320a4.640a0.2100.030免疫球蛋白M/(g/L)0.3100.3600.3900.4400.0500.085白细胞介素-2/(ng/L)152.920158.400163.130169.04014.1900.516白细胞介素-6/(ng/L)55.400a50.390ab46.100b43.270b2.9400.016白细胞介素-10/(ng/L)117.370b132.480a143.060a151.930a6.0300.015肿瘤坏死因子-α/(ng/L)221.630a204.050ab169.300b171.180b7.2600.024补体C3/(g/L)0.240b0.330ab0.390a0.460a0.0300.041补体C4/(g/L)0.0350.0380.0420.0430.0100.2182.3不同剂量的凝结芽孢杆菌对仔猪肠道菌群的影响（见表4）由表4可知，凝结芽孢杆菌组仔猪空肠和盲肠中的乳酸杆菌和凝结芽孢杆菌数量均高于对照组（P0.05），大肠杆菌数量均低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.007.T004表4不同剂量的凝结芽孢杆菌对仔猪肠道菌群的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组SEMP值空肠乳酸菌6.52c6.96b7.55a7.86a0.430.032大肠杆菌4.85a4.31b4.02b3.71c0.210.026凝结芽孢杆菌4.87c5.48b5.93a6.31a0.330.011盲肠乳酸菌7.59c8.32b8.73a8.92a0.470.028大肠杆菌6.27a5.66b5.02c4.74c0.380.018凝结芽孢杆菌5.04c5.61b6.14a6.52a0.410.014lgCFU/g2.4凝结芽孢杆菌对仔猪肠道形态的影响（见表5）由表5可知，试验2组和试验3组仔猪的空肠和回肠中的绒毛高度显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.007.T005表5凝结芽孢杆菌对仔猪肠道形态的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组SEMP值空肠绒毛高度/μm340.31b352.04ab375.20a376.18a5.280.018隐窝深度/μm164.03166.24168.31170.323.410.218绒毛高度/隐窝深度2.072.122.232.210.150.164回肠绒毛高度/μm432.93b454.10ab479.21a482.18a7.040.013隐窝深度/μm212.40216.04217.41219.435.040.415绒毛高度/隐窝深度2.042.102.202.200.120.3153讨论3.1凝结芽孢杆菌对仔猪生长性能及腹泻率的影响本试验结果表明，饲喂凝结芽孢杆菌的仔猪的试验末重、料重比及腹泻率均得到改善。黄遵锡等[6]研究发现，使用不同剂量的凝结芽孢杆菌对仔猪生长性能及肠道健康的影响均优于抗生素。朱明明等[8]研究发现，在仔猪饲料中使用1×106 CFU/g的凝结芽孢杆菌可以显著提高仔猪的日增重、降低仔猪腹泻率，提高机体对粗蛋白、粗脂肪的消化率，改善十二指肠的肠道形态。崔锦等[9]研究发现，在仔猪生产中凝结芽孢杆菌可以促进仔猪肠道细胞的成熟，改善机体对日粮中养分的消化吸收。柳成东等[10]研究表明，使用凝结芽孢杆菌可显著调节肠道菌群结构，降低肠道炎症，促进机体生长发育。本研究结果与以上研究结果类似，表明凝结芽孢杆菌可以调节肠道菌群结构，改善肠道健康，促进机体对养分的消化吸收，提高仔猪的生长性能。3.2凝结芽孢杆菌对仔猪免疫指标的影响本试验研究结果表明，在仔猪养殖生产中添加1.5×107、3.0×107 CFU/g的凝结芽孢杆菌对仔猪机体免疫力的改善效果较明显。翟振亚等[11]研究发现，仔猪生产中使用凝结芽孢杆菌可以显著提高仔猪血清中免疫球蛋白M的含量。陈琴等[12]研究表明，在黔北麻羊生产中使用凝结芽孢杆菌可以显著提高麻羊血清中免疫球蛋白A和免疫球蛋白G含量，降低促炎因子（肿瘤坏死因子-α、IL-6、IL-1β）的含量。赵娜等[13]研究发现，在肉鸡生产中使用凝结芽孢杆菌可以降低肠道有害菌的数量，促进免疫器官的生长发育。凝结芽孢杆菌增强畜禽机体的免疫功能的原因可能是其改善了肠道健康，促进了机体对营养物质的消化吸收，增强了机体免疫力。3.3凝结芽孢杆菌对仔猪肠道菌群的影响肠道菌群的平衡有利于机体对日粮中养分的消化吸收[14-15]。本试验发现，仔猪采食凝结芽孢杆菌后可以有效降低肠道中大肠杆菌的数量，提高乳酸杆菌的数量，表明凝结芽孢杆菌有效改善了肠道健康。柳成东等[10]研究表明，凝结芽孢杆菌可以显著提高仔猪肠道中乳酸杆菌及凝结芽孢杆菌数量，降低大肠杆菌的数量。在肉鸡生产中使用芽孢杆菌提高了肠道中乳酸菌数量，降低了大肠杆菌数量[16]。邢冠润[17]研究发现，适量的凝结芽孢杆菌可以有效增加产蛋后期蛋鸡盲肠中菌群的丰富度和多样性，降低螺旋体门和肠球菌科等有害菌的数量。蒲俊宁[18]研究表明，适量的凝结芽孢杆菌可以有效改善被产肠毒素大肠杆菌攻毒的仔猪肠道菌群紊乱的情况，可以提高芽孢杆菌的数量，降低大肠杆菌的数量。以上研究结果表明，在畜禽生产中使用适量的凝结芽孢杆菌可以改善肠道菌群紊乱的情况，维持肠道菌群的平衡。3.4凝结芽孢杆菌对仔猪肠道形态的影响动物小肠的绒毛高度和隐窝深度代表肠道发育的状态，反映了吸收营养的能力。本试验中，在仔猪生产中使用1.5×107 CFU/g和3.0×107 CFU/g的凝结芽孢杆菌可以有效提高仔猪空肠和回肠的绒毛高度，表明适量的凝结芽孢杆菌可以促进仔猪肠道发育。张越[19]研究发现，仔猪日粮中添加凝结芽孢杆菌提高了回肠的绒毛高度以及空肠的绒隐比。刘婷婷等[20]研究表明，在断奶仔猪饲料中添加适量的丁酸梭菌，可以提高回肠和空肠的绒毛高度，降低隐窝深度。上述研究表明适量的益生菌可以促进小肠细胞的成熟，保障肠道功能的完整性，提高饲料的利用率。4结论本研究表明，在仔猪生产中使用凝结芽孢杆菌可以提高仔猪的生长性能，增强机体免疫力，改善肠道菌群健康，促进肠道发育。结合成本效益，凝结芽孢杆菌的适宜添加量为1.5×107 CFU/g。