随着我国畜禽养殖业集约化、规模化快速发展以及全面禁止饲料中添加抗生素，寻求安全、高效、绿色的饲料添加剂成为畜牧业的研究热点，其中饲用酶制剂的应用备受关注[1]。玉米-豆粕型配合日粮的组成成分复杂[2]，含有纤维素、阿拉伯木聚糖、β-葡聚糖、β-甘露聚糖等大量抗营养因子，阻碍了动物对饲料中养分的消化吸收，影响畜禽的生长[3]。幼龄禽类消化器官尚未发育完全，机体内分泌的内源消化酶活性较低，对日粮中抗营养因子（如非淀粉多糖）的降解能力有限，进而降低饲料转化率，影响生长发育[4]。研究表明，添加外源酶制剂可降低日粮中的抗营养成分，提高原料中的矿物质和蛋白质的利用率，增强机体免疫力，促进内源性酶产生，改善畜禽的屠宰性能，提高养殖经济效益[5]。目前，纤维素酶、木聚糖酶以及内源消化酶等是饲用酶制剂领域研究的重点[6-8]。本试验研究日粮中添加不同剂量复合酶制剂对低蛋白水平日粮饲养的肉鸡的生长性能、血清生化指标、肠道形态结构和免疫器官指数的影响，为复合酶制剂在肉鸡低蛋白日粮中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验设计试验选取400只健康的1日龄爱拔益加（AA）肉鸡，随机分成4组，每组5个重复，每重复20只鸡（公、母各半）。正对照组肉鸡饲喂玉米-豆粕型基础日粮，负对照组肉鸡饲喂低蛋白日粮，复合酶1组和复合酶2组分别在负对照组基础上添加100、200 g/t复合酶制剂。试验期共42 d。复合酶制剂由武汉新华扬生物股份有限公司提供，主要酶种为木聚糖酶≥25 000 U/g、甘露聚糖酶≥1 000 U/g、果胶酶≥1 000 U/g、纤维素酶≥800 U/g、蛋白酶≥3 000 U/g。基础日粮配方参考《产蛋后备鸡、产蛋鸡、肉用仔鸡配合饲料》（GB/T 5916—2008）设计，日粮组成及营养水平见表1。试验日粮为粉料，不添加任何抗生素。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.009.T001表1日粮组成及营养水平（风干基础）项目基础日粮低蛋白日粮0~21日龄22~42日龄0~21日龄22~42日龄原料组成/%玉米53.0054.0056.5056.75豆粕36.0034.2532.0028.00菜籽粕02.0002.00进口鱼粉3.0002.000豆油4.006.003.505.50石粉1.201.301.201.30磷酸氢钙1.401.301.401.30赖氨酸0.300.220.300.22蛋氨酸0.200.150.200.15食盐0.300.300.300.30氯化胆碱0.100.100.100.10米糠0.170.052.174.05维生素预混料0.030.030.030.03微量元素预混料0.300.300.300.30合计100.00100.00100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)12.6813.1812.6813.18粗蛋白/%22.0020.0020.0018.00总磷/%0.690.600.690.60有效磷/%0.450.350.450.35钙/%1.000.881.000.88赖氨酸/%1.451.201.321.20蛋氨酸/%0.550.450.520.45蛋氨酸+胱氨酸/%0.880.780.830.78苏氨酸/%0.920.840.830.84色氨酸/%0.280.250.250.25精氨酸/%1.201.121.201.12注：1.维生素预混料为每千克日粮提供：VA 6 000~12 000 IU、VD3 2 400~6 000 IU、α-生育酚乙酸酯≥30 mg、甲萘醌≥2.88 mg、硝酸硫胺≥2.4 mg、VB2≥7.2 mg、VB6≥4.2 mg、氰钴胺≥0.014 mg、烟酰胺≥36 mg、D-生物素≥0.09 mg、D-泛酸钙≥9.6 mg、叶酸≥1.14 mg。2.微量元素预混料为每千克日粮提供：Cu 7.2~21.6 mg、Fe 36~180 mg、Mn 72~150 mg、Zn 60~120 mg、I 0.48~1.08 mg、Se 0.18~0.36 mg。3.营养水平均为计算值。1.2饲养管理肉鸡采用网栏平养。整个试验期间鸡舍内保持良好的通风环境，1~7日龄进行育雏，室温维持在31~35 ℃，育雏结束后将室温逐渐降低至25 ℃左右，后续试验期间将温度维持在20~25 ℃，湿度保持在65%~75%。试验期间各组肉鸡自由采食和饮水，采用自然光照+人工光照，按照正常的免疫程序和驱虫程序对肉鸡进行免疫接种和驱虫。定期观察和记录鸡的采食、饮水和健康状况。1.3样品采集试验第21、42 d的20：00点停止供料，试验第22、43 d的7：00断水1 h后，以重复为单位称取并记录各组肉鸡体重，每个重复中随机取1只鸡称重，左侧翅静脉采血4 mL，室温下静置10 min，3 500 r/min离心15 min，分离上层血清，于-20 ℃保存，用于检测血清生化指标。采血后将肉鸡放血处死，打开腹腔，分离胰腺和脾脏等器官，剔除脏器表面的脂肪和结缔组织，吸干组织表面的血水，用分析天平称取其重量（精确到0.001 g）；分离十二指肠、空肠和回肠，取各肠段中段约2 cm置于装有8 mL甲醛固定液的10 mL离心管中，室温放置，用于制作组织切片。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验期间记录每日各重复肉鸡的日粮投喂量及剩余料量，计算各组肉鸡的平均日采食量、平均体重、平均日增重、料重比。平均日采食量=Σ[(每天投料量-每天剩料量)/当天饲养量]/试验天数(1)平均日增重=(末重-初重)/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2血清生化指标采用南京建成生物工程研究所的生化试剂盒测定血清中总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）、胆固醇（TC）、尿酸（UA），操作方法参考试剂盒说明书。1.4.3肠道组织结构取出甲醛固定液中的十二指肠、空肠和回肠肠段，液体石蜡进行包埋，采用伊红-美蓝对切片（5 mm）染色，在光镜下对切片进行观察和拍照。从每张切片染色图片中随机选取15根绒毛，分别测定绒毛高度和隐窝深度。绒毛高度是指绒毛顶端到隐窝入口处的长度，隐窝深度是指绒毛基部到黏膜下层的距离，计算绒毛高度与隐窝深度的比值。1.4.4免疫器官指数根据肉仔鸡活体重和各免疫器官重量计算免疫器官指数。免疫器官指数＝免疫器官重量/肉鸡活体重(4)1.5数据统计与分析数据采用Excel 2019软件进行整理，SPSS 16.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同添加量复合酶制剂对肉鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，与正对照组相比，负对照组1~21日龄肉鸡平均日采食量和平均日增重显著降低（P0.05），料重比显著提高（P0.05）；1~42日龄肉鸡平均日采食量和平均日增重显著降低（P0.05）。与负对照组相比，复合酶1组和复合酶2组肉鸡各阶段采食量和平均日增重显著提高（P0.05），料重比显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.009.T002表2不同添加量复合酶制剂对肉鸡生长性能的影响项目正对照组负对照组复合酶1组复合酶2组1~21日龄1日龄重/(g/只)48.05±0.1948.00±0.2747.92±0.4047.78±0.2821日龄重/(g/只)609.27±11.03b510.00±7.30c638.00±16.81a671.79±3.92a平均日采食量/[g/(只·d)]40.93±0.88b38.48±0.96c41.38±0.95b42.75±0.34a平均日增重/[g/(只·d)]26.69±0.48c22.00±0.35d28.10±0.80b30.55±0.45a料重比1.53±0.05b1.75±0.02a1.47±0.07c1.40±0.02d22~42日龄42日龄重/(g/只)1 321.28±33.79b1 197.43±56.48c1 669.15±38.11a1 713.03±27.54a平均日采食量/[g/(只·d)]100.37±7.04ab93.21±5.99b107.45±6.29a107.96±8.34a平均日增重/[g/(只·d)]35.27±2.67b32.73±2.45b49.10±1.79a49.98±1.80a料重比2.86±0.27a2.86±0.29a2.19±0.07b2.16±0.20b1~42日龄平均日采食量/[g/(只·d)]70.65±3.63b65.85±2.98c74.41±2.75ab75.35±4.17a平均日增重/[g/(只·d)]30.98±1.35c27.37±1.34d38.60±0.91b40.26±0.97a料重比2.28±0.14a2.41±0.15a1.93±0.03b1.87±0.12b注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2不同添加量复合酶制剂对肉鸡血清生化指标的影响（见表3）由表3可知，与正对照组相比，负对照组21日龄肉鸡血清TG含量显著提高（P0.05）；与负对照组相比，复合酶1组21日龄TC含量显著降低（P0.05），复合酶1组和复合酶2组21日龄TG含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.009.T003表3不同添加量复合酶制剂对肉鸡血清生化指标的影响项目正对照组负对照组复合酶1组复合酶2组21日龄TP/(g/L)31.85±2.3831.30±1.7930.79±1.2531.86±1.35ALB/(g/L)17.39±0.97a17.61±0.98a16.59±0.81ab17.76±0.73aTC/(mmol/L)4.54±0.55ab4.98±0.38a3.99±0.46b4.80±0.65aTG/(mmol/L)0.97±0.09b1.08±0.12a0.94±0.10b0.87±0.07bGLU/(mmol/L)12.42±0.8011.67±0.5211.84±0.9411.78±1.16UA/(μmol/L)246.97±50.22a206.02±36.82ab181.73±53.96b178.34±20.82b42日龄TP/(g/L)41.38±4.8136.56±4.6140.16±5.7439.48±3.04ALB/(g/L)17.62±1.3216.28±1.6517.47±0.8117.67±1.14TC/(mmol/L)4.08±0.794.10±0.633.82±0.434.01±0.44TG/(mmol/L)0.99±0.14a0.90±0.19ab0.75±0.12b0.95±0.14abGLU/(mmol/L)13.96±1.9613.40±1.6712.57±0.6813.44±1.20UA/(μmol/L)296.50±46.55293.79±42.49225.99±65.18223.63±63.672.3不同添加量复合酶制剂对肉鸡肠道形态结构的影响（见表4、表5）由表4、表5可知，与正对照组相比，负对照组21日龄和42日龄肉鸡肠道形态结构数据差异不显著（P0.05）。与负对照组相比，复合酶1组和复合酶2组21日龄肉鸡十二指肠隐窝深度显著降低（P0.05），复合酶2组空肠绒毛高度与隐窝深度比值显著增加（P0.05），复合酶1组回肠绒毛高度显著增加（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.009.T004表4不同添加量复合酶制剂对21日龄肉鸡肠道形态结构的影响项目正对照组负对照组复合酶1组复合酶2组十二指肠绒毛高度/mm1.30±0.301.16±0.291.16±0.101.43±0.04隐窝深度/mm0.19±0.01ab0.20±0.02a0.17±0.02b0.17±0.01b绒毛高度/隐窝深度6.79±1.45ab5.81±1.36b7.02±1.17ab8.60±0.52a空肠绒毛高度/mm0.99±0.101.03±0.070.93±0.151.14±0.18隐窝深度/mm0.21±0.050.18±0.030.18±0.030.20±0.04绒毛高度/隐窝深度4.95±1.215.68±1.055.21±0.394.83±1.09回肠绒毛高度/mm0.80±0.08ab0.75±0.11b0.92±0.13a0.85±0.09ab隐窝深度/mm0.20±0.030.18±0.030.20±0.030.19±0.05绒毛高度/隐窝深度4.13±0.744.16±0.664.75±1.094.84±1.1510.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.009.T005表5不同添加量复合酶制剂对42日龄肉鸡肠道形态结构的影响项目正对照组负对照组复合酶1组复合酶2组十二指肠绒毛高度/mm1.68±0.27bc1.44±0.22c1.79±0.10ab1.97±0.15a隐窝深度/mm0.22±0.03b0.25±0.04ab0.29±0.04a0.24±0.04ab绒毛高度/隐窝深度7.63±1.19ab5.95±1.27b6.36±1.15b8.29±1.39a空肠绒毛高度/mm1.28±0.05ab1.24±0.17b1.49±0.36ab1.57±0.33ab隐窝深度/mm0.21±0.040.24±0.050.28±0.060.22±0.03绒毛高度/隐窝深度6.34±1.595.39±1.045.36±1.026.96±0.58回肠绒毛高度/mm1.09±0.081.09±0.131.17±0.151.19±0.13隐窝深度/mm0.22±0.020.21±0.040.20±0.040.20±0.02绒毛高度/隐窝深度4.90±0.455.44±1.416.08±1.706.02±1.25与负对照组相比，复合酶1组和复合酶2组42日龄肉鸡的十二指肠绒毛高度显著增加（P0.05），复合酶2组肉鸡的十二指肠绒毛高度比隐窝深度比值显著增加（P0.05）。2.4不同添加量复合酶制剂对肉鸡免疫器官指数的影响（见表6）由表6可知，与正对照组相比，负对照组21日龄肉鸡法氏囊指数显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.009.T006表6不同添加量复合酶制剂对肉鸡免疫器官指数的影响项目正对照组负对照组复合酶1组复合酶2组21日龄脾脏指数0.08±0.020.06±0.010.07±0.010.08±0.03胰腺指数0.28±0.040.27±0.030.27±0.030.28±0.04法氏囊指数0.27±0.06a0.18±0.05b0.20±0.04b0.20±0.01b42日龄脾脏指数0.07±0.020.06±0.010.06±0.020.07±0.02胰腺指数0.16±0.010.16±0.040.16±0.020.17±0.023讨论3.1不同添加量复合酶制剂对肉鸡生长性能的影响近年来，玉米和豆粕价格持续上涨，如何进一步提高饲料利用率和降低养殖成本成为饲料行业的热点话题。分析玉米及豆粕细胞壁结构组成成分可知，复合酶制剂在玉米-豆粕型日粮中具有很大的应用潜力。生长性能可直观反映复合酶制剂在肉鸡饲粮中的作用效果以及肉鸡的营养效果[9]，在日粮中添加复合酶制剂能够提高肉鸡消化能力，改善肉鸡生长性能。Pack等[10]研究结果表明，在玉米-豆粕型日粮中添加以木聚糖酶和β-葡聚糖酶为主的复合酶后，肉仔鸡的平均日采食量、平均日增重和成活率均显著提高，料重比降低。Amerah等[11]研究显示，日粮中添加蛋白酶、淀粉酶及纤维素酶组成的复合酶制剂可显著降低肉鸡的料重比。Zanella等[12]研究发现，在低能量玉米-豆粕日粮中添加含木聚糖酶和β-葡聚糖酶的酶制剂提高了饲料中粗蛋白质及多种氨基酸的消化率。段俊辉[13]研究表明，玉米-豆粕型日粮中添加含α-淀粉酶、β-葡聚糖酶、纤维素酶的复合酶制剂显著提高了肉仔鸡采食量及增重，显著降低料重比，与本试验结果基本一致。本研究结果显示，日粮中添加木聚糖酶、甘露聚糖酶、果胶酶、纤维素酶和蛋白酶组成的复合酶制剂，能够提高肉鸡平均日增重和采食量，降低料重比，其中复合酶2组效果较好。有研究表明，降低日粮蛋白水平对肉鸡日增重及饲料利用率存在不利影响[14-15]。本研究结果表明，与正对照组相比，负对照组肉鸡采食量和平均日增重显著降低，料重比显著提高，与上述结果一致；而添加复合酶的低蛋白日粮组中采食量和平均日增重显著提高，料重比降低，表明添加该复合酶制剂对低蛋白日粮造成的动物生长性能下降具有缓解作用，为后续低蛋白日粮中复合酶制剂的使用提供了一定参考。3.2不同添加量复合酶制剂对肉鸡血清生化指标的影响血清TP主要包括ALB和球蛋白（GLB），在维持血浆的渗透压、机体营养物质的转运以及维持组织蛋白的动态平衡等方面发挥重要作用[16]。扈添琴[17]研究显示，在日粮中添加酶制剂对奶牛血清TP和GLB含量无显著影响。本试验结果表明，21日龄和42日龄各组肉鸡血清TP、ALB含量均无显著变化，与上述研究结果类似。TG作为动物体内最大的储能物质，能够为机体内脏器官提供缓冲和保护作用。在正常生理条件下动物体内血清TG含量保持动态平衡。TC是衡量机体脂代谢的重要指标。本试验结果显示，各添加酶制剂组肉鸡血清TC含量均低于负对照组，但未达到显著水平，而21日龄肉鸡血清TG含量显著低于负对照组，与龚俊勇等[18]研究结果类似，表明在日粮中添加酶制剂对肉鸡体内TC含量具有一定改善作用。血液中的葡萄糖是动物机体主要的能量来源，主要来自肠道吸收以及肝糖原分解。有许多研究表明，在饲料中添加酶制剂可提高淀粉的消化率，分解产生更多的葡萄糖吸收进入血液，从而提高血糖浓度[19]。罗定媛[20]研究发现，在雏鸡小麦日粮中添加含木聚糖酶的复合酶制剂对肉鸡GLU含量无显著影响。本试验结果表明，添加复合酶制剂对肉鸡血糖含量无显著影响，与上述结果类似，可能是由于本试验基础日粮中的能量水平已能够满足肉鸡的生长需要，多余的葡萄糖并未被机体吸收。UA是机体蛋白的最终代谢产物之一，是衡量机体蛋白质分解代谢的重要指标，而UA排出量是评价日粮蛋白质品质的重要指标之一[21]。有研究结果表明，添加酶制剂可使21、42日龄肉鸡血液UA含量极显著降低[22]。高峰[23]研究结果表明，在麦类日粮中添加NSP酶可显著降低肉鸡血液UA含量。本试验结果表明，与负对照组相比，添加复合酶制剂可显著降低21、42日龄肉鸡血清中UA含量，与上述研究结果一致，且酶制剂用量越大效果越明显，提示该酶制剂可能对日粮中蛋白质、氨基酸的利用率具有一定改善作用，能够提高肉鸡体内蛋白质沉积，与本试验使用酶制剂提高肉鸡的平均日增重、降低料重比的结果一致。3.3不同添加量复合酶制剂对肉鸡肠道形态结构的影响肠道是动物最主要的消化器官，肠道的完整性和健康程度与动物的生长性能密切相关[24]。动物机体吸收营养物质的主要部位是小肠绒毛，小肠的正常功能与形态结构完整性是动物正常生长和养分消化吸收的生物学基础，而小肠的绒毛高度、隐窝深度及绒毛表面积是衡量小肠消化吸收功能的重要指标[25]。绒毛高度增加表明肠上皮细胞数量变多，机体对营养物质的吸收能力增加；隐窝深度与肠道内细胞的生成率有关，隐窝深度越小表明肠道分泌功能越高，机体吸收能力越好；而绒毛高度与隐窝深度比值能够直接反映小肠的功能状况，该比值增高则表明机体消化吸收功能增强[26]。丁雪梅等[27]研究结果表明，在小麦豆粕日粮中添加木聚糖酶能够显著改善肉鸡肠道固有层厚度，改善肉鸡肠道形态。雷丽[28]研究结果显示，小麦基础日粮中添加木聚糖酶能降低肉鸡十二指肠肠壁厚度，提高回肠绒毛高度，但对空肠形态结构无改善作用。仵天培[29]研究发现，日粮中添加果寡糖、非淀粉多糖酶和枯草芽孢杆菌对广西三黄鸡的肠道形态结构均具有改善作用，可在一定程度上提高小肠绒毛的高度以及绒毛高度与隐窝深度比值，降低肠壁厚度。杜红方等[24]研究结果显示，日粮中添加复合酶具有提高肉鸡十二指肠、空肠、回肠绒毛高度及绒毛高度与隐窝深度比值的趋势，但差异不显著。本试验结果表明，低蛋白日粮中添加复合酶制剂对肉鸡肠道形态结构具有一定改善效果，可促进机体对饲料中养分的消化吸收，进而改善肉鸡的生长性能。3.4不同添加量复合酶制剂对免疫器官指数的影响免疫器官是免疫细胞发育、增殖和分化的场所，免疫器官的发育情况及功能强弱对禽类的免疫水平起到决定性作用[30]。禽类的免疫器官主要包括脾脏、胸腺和法氏囊，其相应的免疫器官指数是衡量机体免疫水平的指标之一[31]。胸腺是细胞免疫的中枢器官，法氏囊是禽类特有的体液免疫器官，胸腺指数和法氏囊指数增大，表明机体的免疫功能增强。法氏囊在雏鸡阶段是机体的主要免疫器官，而随着日龄增长，脾脏逐渐发育成熟，逐步取代法氏囊的位置。研究表明，日粮中添加β-甘露聚糖酶可增加肉鸡免疫器官指数[32]。林谦等[33]研究表明，在日粮中添加益生菌、酶制剂及抗生素对肉鸡免疫器官指数均无较大影响，但添加复合酶制剂较其他各处理组更具有改善免疫器官指数的趋势。本试验结果显示，在低蛋白日粮中添加该复合酶制显著提高21日粮肉鸡的法氏囊指数，且添加复合酶制剂组脾脏指数均大于负对照组，表明添加该复合酶制剂对肉鸡的免疫性能具有一定的改善作用。4结论本试验条件下，在低蛋白日粮中添加复合酶制剂可改善肉鸡血清生化指标、小肠绒毛结构，提高肉鸡生长性能，且以低蛋白日粮中添加200 g/t复合酶制剂的效果较好。