益生活菌制剂是一类活性微生物，有利于维持人和动物肠道健康[1]。益生菌包括乳酸菌类、芽孢菌类、酵母菌类等。鼠李糖乳杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus）属于乳酸菌类，具有很强的肠道黏附和定植能力，能够耐受动物胃肠道环境，发酵产生L-乳酸及其他代谢产物。近年来，鼠李糖乳杆菌已经在禽养殖中应用。王斌等[2]发现，鼠李糖乳杆菌能够显著提高SPF鸡的平均日增重和屠宰率。彭富强[3]发现，在日粮中添加鼠李糖乳杆菌能够显著提高1~21日龄肉鸡的生长性能，显著降低肉鸡料重比。彭晓培等[4]研究发现，在蛋鸡生产中应用鼠李糖乳杆菌与地衣芽孢杆菌复合制剂可显著提高蛋鸡产蛋率、产蛋量、平均蛋重。目前，有关鼠李糖乳杆菌在蛋鸡应用研究的报道较少。因此，本试验旨在研究鼠李糖乳杆菌对产蛋高峰期罗曼粉蛋鸡生产性能、蛋品质、血清指标的影响，以期为鼠李糖乳杆菌在蛋鸡生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料鼠李糖乳杆菌（播恩集团股份有限公司自主分离保藏菌种，编号L69），通过液体深层发酵制备而成的干粉制剂，活菌含量为1×1010 CFU/g。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.012.T001表1基础日粮及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.0玉米62.0代谢能/(MJ/kg)10.9843%豆粕25.0粗蛋白/%15.59石粉9.0钙/%3.59磷酸氢钙1.0总磷/%0.55预混料3.0有效磷/%0.28蛋氨酸/%0.26赖氨酸/%0.72苏氨酸/%0.65注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 10 000 IU、VD3 3 000 IU、VE 30 IU、VK 1 mg、VB1 1.5 mg、VB2 4 mg、VB6 1.5 mg、VB12 0.02 mg、烟酸30 mg、泛酸10 mg、叶酸0.55 mg、生物素0.16 mg、Fe 120 mg、Cu 8 mg、Mn 100 mg、Zn 60 mg、I 2 mg、Se 0.3 mg、Co 1 mg。2.营养水平均为计算值。1.2饲养管理本试验在肇庆播恩生态养殖有限公司开展。试验采用四层阶段式笼养，机械通风与自然通风相结合，采用人工光照的方法逐渐加光。蛋鸡自由采食、饮水，免疫程序和日常饲养管理严格按照养殖场的规定进行。1.3试验设计选取280日龄、体重相近的罗曼粉蛋鸡1 200只，随机分为5组，每组6个重复，每个重复40只鸡。预试期7 d，正式试验期35 d。对照组蛋鸡饲喂基础日粮，试验R1组、R2组、R3组、R4组分别在基础日粮中添加100、200、300、500 mg/kg鼠李糖乳杆菌制剂。1.4测定指标及方法1.4.1生产性能试验期间，每天13：30记录每组蛋鸡采食及产蛋情况，每日查看蛋鸡排便情况。产蛋率=总产蛋数量/试验鸡数×100%(1)破蛋率=破损蛋数量/总产蛋数量×100%(2)料蛋比=饲料总消耗量/鸡蛋总产量(3)1.4.2蛋品质试验结束时，每组选取鸡蛋120枚，一共600枚，进行蛋品检测。蛋白高度检测采用YN-25L快速精准蛋品检测仪测定；蛋壳强度采用SF-50-L蛋壳硬度检测仪测定；蛋壳厚度测定选取蛋的钝端、蛋壳的尖端和蛋壳的中间位置，进行厚度测量，取平均值，精确至0.01 mm。哈夫单位=100×lg(H+7.57-1.7×W 0.37)(4)式中：H为蛋白高度（mm）；W为蛋重（g）。1.4.3血清抗氧化及免疫指标试验结束后，各组随机选7只鸡进行翅静脉采血，4 000 r/min离心10 min取上清液，置于-20 ℃冰箱保藏。抗氧化指标包括：超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px），使用南京建成生物工程研究所试剂盒测定。免疫指标包括：免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）采用ELISA试剂盒（上海酶联生物科技有限公司）测定。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel 2019软件进行整理，SPSS 22.0软件进行单因素方差分析，LSD法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1鼠李糖乳杆菌对罗曼粉蛋鸡生产性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，R1组、R2组、R3组蛋鸡产蛋率、平均日产蛋量均显著提高（P0.05），破蛋率略有下降（P0.05），各试验组蛋鸡平均蛋重均显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.012.T002表2鼠李糖乳杆菌对罗曼粉蛋鸡生产性能的影响组别产蛋率/%破蛋率/%平均蛋重/(g/枚)平均日产蛋重/[g/(只·d)]平均日采食量/[g/(只·d)]料蛋比对照组89.58±0.32b0.62±0.0762.26±0.11b56.47±0.21c115.98±0.752.05±0.02R1组90.89±0.20a0.51±0.0562.60±0.07a57.42±0.13ab116.21±0.952.02±0.02R2组91.31±0.24a0.51±0.1162.64±0.07a57.78±0.23a116.34±0.742.01±0.02R3组91.16±0.31a0.49±0.0862.60±0.08a57.47±0.29ab116.63±0.632.03±0.02R4组89.90±0.29b0.61±0.0862.63±0.11a57.02±0.22bc116.18±0.702.04±0.02注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2鼠李糖乳杆菌对罗曼粉蛋鸡蛋品质的影响（见表3）由表3可知，日粮中添加鼠李糖乳杆菌对鸡蛋的蛋壳强度、蛋白高度、蛋形指数、哈夫单位、蛋黄颜色均无显著影响（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.012.T003表3鼠李糖乳杆菌对罗曼粉蛋鸡蛋品质的影响组别蛋壳强度/(kg/cm2)蛋壳厚度/mm蛋壳重量/g蛋白高度/mm蛋黄颜色蛋形指数哈夫单位对照组5.05±0.880.377±0.020b6.82±0.58b8.60±1.2311.53±0.511.30±0.0491.61±6.68R1组5.38±0.890.389±0.030a7.09±0.54a8.65±1.2711.63±0.561.31±0.0492.03±6.14R2组5.57±0.940.387±0.030a7.22±0.62a8.86±1.1911.60±0.621.31±0.0493.00±6.16R3组5.24±0.800.390±0.030a7.22±0.58a8.76±1.4511.63±0.561.31±0.0491.57±6.20R4组5.23±1.020.377±0.020b6.99±0.44ab8.78±1.1311.66±0.481.30±0.0492.93±5.50与对照组相比，R1组、R2组、R3组蛋鸡蛋壳厚度、蛋壳重量均显著提高（P0.05）。2.3鼠李糖乳杆菌对罗曼粉蛋鸡血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，添加鼠李糖乳杆菌对罗曼粉蛋鸡血清中SOD和MDA指标无显著影响（P0.05）。R3组蛋鸡血清中GSH-Px活性显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.012.T004表4鼠李糖乳杆菌对罗曼粉蛋鸡血清抗氧化指标的影响组别SOD/(U/mL)MDA(μmol/L)GSH-Px/(U/mL)对照组867.14±54.904.58±0.341 799.00±126.49bR1组919.25±30.734.81±0.572 120.00±118.24abR2组878.00±69.254.17±0.502 150.29±101.30abR3组993.86±28.274.18±0.332 341.14±132.36aR4组934.57±40.355.50±0.982 108.57±175.95ab2.4鼠李糖乳杆菌对罗曼粉蛋鸡血清免疫指标的影响（见表5）由表5可知，R1组、R2组、R3组蛋鸡血清中IgA和IgM显著高于对照组（P0.05）。R1组蛋鸡血清中IgG显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.012.T005表5鼠李糖乳杆菌对罗曼粉蛋鸡血清免疫指标的影响组别IgAIgMIgG对照组188.86±21.21b236.29±40.73b1 048.43±177.23bR1组278.75±7.66a430.88±35.48a1 468.38±120.22aR2组267.43±12.20a339.00±29.68a1 242.86±122.22abR3组269.00±12.71a418.29±27.42a1 358.57±112.15abR4组237.86±8.51ab328.86±27.14ab1 166.86±83.09abmg/L3讨论3.1鼠李糖乳杆菌对罗曼粉蛋鸡生产性能的影响鼠李糖乳杆菌具有较强的耐受性，能够耐受动物胃肠道环境，定植于动物肠道，提高动物生产性能[5]。蛋鸡养殖采用微生态制剂改善蛋鸡生产性能的研究较多，但关于鼠李糖乳杆菌在蛋鸡养殖中应用的报道较少。陈继发等[6]在蛋鸡基础日粮中添加一定量枯草芽孢杆菌，发现蛋鸡产蛋率和日产蛋量明显提高。郭军蕊等[7]发现，在日粮中添加枯草芽孢杆菌可以降低蛋鸡料蛋比，提高蛋鸡产蛋率和蛋黄颜色。植石全等[8]研究发现，嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌复合制剂能够明显提高罗曼粉蛋鸡的产蛋率。李昊等[9]在蛋鸡日粮中添加副干酪乳杆菌微生态制剂，发现蛋鸡日产蛋率显著提高。李进春等[10]发现，添加400 mg/kg凝结芽孢杆菌能够明显提高蛋鸡产蛋率和蛋壳重，明显降低料蛋比。本试验中，在280日龄罗曼粉蛋鸡日粮中添加100~300 mg/kg鼠李糖乳杆菌，蛋鸡产蛋率、平均蛋重及平均日产蛋量均有提高，料蛋比呈下降的趋势，与上述研究结果一致。本试验中，当鼠李糖乳杆菌添加量为500 mg/kg时，蛋鸡产蛋率无明显提高，与对照组差异不显著，蛋鸡产蛋率比其他试验组下降，破蛋率升高，说明不同浓度鼠李糖乳杆菌添加到罗曼粉蛋鸡饲粮中对蛋鸡的生产性能有一定影响，100~300 mg/kg添加量对蛋鸡生产性能效果较佳，高剂量添加会造成负面效果，与李昊等[9]研究结果一致。添加高浓度乳酸菌时，蛋鸡产蛋率和产蛋重均显示出下降的趋势，可能是鼠李糖乳杆菌属于乳酸菌类微生态制剂，较高的添加剂量会使血清中胆固醇、甘油三酯等含量明显降低，蛋黄中沉积的胆固醇含量下降，蛋黄形成受阻，进而引起蛋鸡产蛋率下降。3.2鼠李糖乳杆菌对罗曼粉蛋鸡蛋品质的影响蛋壳质量、蛋黄颜色等指标是衡量蛋品质的重要标准，尤其在鸡蛋运输和销售过程中，良好的蛋品质是提高经济收益的关键[11-12]。研究表明，在蛋鸡日粮中使用微生态制剂，蛋壳厚度、蛋壳重有明显提高，能够降低蛋鸡破蛋率，改善蛋壳质量[13]。白子金等[14]发现，在蛋鸡饲粮中添加复合微生态制剂可改善蛋壳厚度。王源昊等[15]研究发现，在蛋鸡饲粮中添加500 mg/kg 枯草芽孢杆菌制剂不影响产蛋性能，可改善蛋品质，加深蛋黄颜色，提高蛋清浓稠度。赵娜等[16]发现，在饲粮中添加凝结芽孢杆菌制剂可提高鸡蛋蛋壳强度和蛋壳厚度，改善蛋黄颜色。雷凯[17]研究表明，蛋鸡日粮中添加地衣芽孢杆菌可以改善蛋鸡蛋壳质量、蛋白高度和蛋黄颜色。刘爱君等[18]报道，蛋鸡日粮中添加乳酸菌制剂，可明显提高蛋壳质量和哈夫单位，蛋黄颜色略有提高。本试验中，添加鼠李糖乳杆菌对蛋鸡蛋壳的强度、蛋白高度、蛋形指数、哈夫单位和蛋黄的颜色均无明显作用。鼠李糖乳杆菌能够改善蛋壳厚度、蛋壳重量的原因可能是鼠李糖乳杆菌在肠道内代谢产生乳酸，有效地提高了肠道内酸度，促进钙的消化利用，使蛋壳脆性、厚度等性状的血清钙水平提高；也可能是鼠李糖乳杆菌能够代谢多种有机酸，促进钙和磷等矿物质的吸收，提高蛋白质等营养素消化吸收能力，提高蛋壳质量、蛋黄色泽。3.3鼠李糖乳杆菌对罗曼粉蛋鸡血清抗氧化及免疫指标的影响血液抗氧化指标能够反映蛋鸡自身抗氧化能力[19]。本试验中，添加鼠李糖乳杆菌对罗曼粉蛋鸡血清SOD和MDA指标均无显著影响，但SOD活性有增加的趋势。GSH-Px作为机体内清除自由基和抗氧化的重要指标，是机体抗氧化能力的重要体现[20-21]。本试验中，添加300 mg/kg鼠李糖乳杆菌时，蛋鸡血清GSH-Px活性显著提高。彭豫东等[22]用枯草芽孢杆菌饲喂土鸡，发现总超氧化物歧化酶（T-SOD）和GSH-Px活性明显提高。范雪[23]发现，使用丁酸梭菌饲喂肉鹅可以显著提高肉鹅抗氧化能力。体内免疫球蛋白可以反映动物的免疫情况，球蛋白是血清中主要的蛋白[24]。有研究证实，在蛋鸡饲粮中加入地衣芽孢杆菌能够明显提高血清中IgA和IgG含量[25-26]。于明等[27]发现，使用微生物菌剂饲喂肉鸡可明显提高血清中IgG含量，与本试验结果一致。本试验中，添加鼠李糖乳杆菌均有效提高蛋鸡血清IgA、IgM和IgG含量，当鼠李糖乳杆菌添加量为100~300 mg/kg时，蛋鸡血清中IgA、IgM、IgG均显著提高。原因可能是乳酸菌细胞壁具有一定的免疫活性[28]；也可能是鼠李糖乳杆菌产生有机酸，抑制有害菌生长，有效调节了肠道菌群平衡，有利于激活和促进淋巴细胞的形成，从而提高蛋鸡免疫力。4结论在罗曼粉蛋鸡日粮中添加100~300 mg/kg鼠李糖乳杆菌，可显著提高蛋鸡生产性能，改善蛋品质，提高蛋鸡机体抗氧化功能及免疫力。