日粮中添加发酵中药可以提高动物机体生产性能及免疫力[1-2]。黄芪具有独特的药效，含有氨基酸、多糖、有机酸、生物碱、黄酮、皂苷类等成分[3-4]，具有增强免疫力、保护心血管、抗肿瘤、抗氧化、抗炎等生物学功能[5]。有研究发现，黄芪药渣可提高动物机体的免疫力[5-6]。李荣等[7]研究表明，日粮中添加酵母硒、黄芪多糖能够提高断奶仔猪的生长性能、免疫水平及抗氧化能力。石芳权等[8]研究表明，日粮中添加黄芪对肉鸡免疫器官发育具有促进作用。有研究表明，黄芪发酵物对碘缺乏大鼠的抗氧化功能具有保护作用[9]。宗庆华等[10]研究发现，黄芪发酵物可显著提升小鼠脾脏指数和胸腺指数，提升小鼠的免疫能力。本试验在羔羊日粮中添加乳酸菌发酵的黄芪提取物，研究发酵黄芪提取物对羔羊生长性能、血清免疫指标及抗氧化指标的影响，以期为发酵黄芪在羔羊生产中的应用开发提供参考。1材料与方法1.1试验设计相同饲养条件下，选取60只体况相近的无角陶赛特羔羊。试验采用单因子随机分组设计，分为4组，分别为对照组、乳酸菌组（试验Ⅰ组）、未发酵黄芪组（试验Ⅱ组）、发酵黄芪组（试验Ⅲ组），每组15只羊，每组3个重复，每个重复5只羊。对照组羔羊饲喂基础日粮、试验Ⅰ组羔羊饲喂基础日粮+1%乳酸菌、试验Ⅱ组羔羊饲喂基础日粮+1%黄芪水提物、试验Ⅲ组羔羊饲喂基础日粮+1%乳酸菌发酵黄芪提取物。预试期15 d，正式试验期60 d。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.006.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00苜蓿16.00消化能/(MJ/kg)14.55棉粕8.00粗蛋白/%15.22花生秧3.00钙/%1.68玉米21.00磷/%0.41豆粕8.00中性洗涤纤维/%21.23混合干草25.00酸性洗涤纤维/%17.37麸皮10.00粗灰分/%8.15预混料5.00蛋氨酸0.50青草1.70次粉0.50小苏打1.00食盐0.30注：1.预混料购自北京优利保生物技术有限责任公司。2.营养水平中消化能为计算值，其余均为实测值。1.2试验仪器与试剂流式细胞仪（美国BD公司），全自动血液分析仪（日本SYSMEX公司），MP1100B精准电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司），常温离心机（赛默飞世尔科技有限公司）。谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）抗氧化指标检测试剂盒均购自南京建成生物工程公司；免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）ELISA试剂盒均购自河南比根生物科技有限公司；植物乳酸菌（2.3×108 CFU/mL）、黄芪均由郑州市益生菌发酵中药重点实验室提供。1.3黄芪水提液及发酵黄芪水提液的制备黄芪水提物制备：将5 kg黄芪用5倍体积的煮沸蒸馏水提取3次，每次提取40 min。总粗提液浓缩至1 g/mL，8 000 r/min离心10 min，上清液即为黄芪水提液（0.005 mL/g黄芪多糖）。发酵黄芪水提物制备：将2 L黄芪粗提液在121 ℃高压灭菌30 min，冷却至室温，按0.1%接种量接种植物杆菌，37 ℃培养48 h，8 000 r/min离心10 min，上清液即为发酵黄芪水提液（0.005 mL/g黄芪多糖）。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能指标试验第1、60 d，对羔羊进行空腹称重，记录饲料的消耗量。计算平均日增重、平均日采食量和料重比。平均日增重=(末重－初重)/试验天数(1)平均日采食量=耗料量/试验天数(2)料重比=耗料量/增重(3)1.4.2免疫和抗氧化指标试验第60 d，羔羊静脉采血，1 500 r/min离心5 min，分离血清，采用流式细胞仪检测各组羔羊血清中CD2+-T淋巴细胞（CD2+）、CD4+-T淋巴细胞（CD4+）、CD14+-T淋巴细胞（CD14+）细胞百分率。IgA、IgM、T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT及MDA指标测定按照试剂盒说明书进行。1.5数据统计与分析试验数据采用SPSS 19软件进行单因素方差分析，组间数据采用LSD法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1发酵黄芪对羔羊生长性能的影响（见表2）由表2可知，试验Ⅲ组羔羊末重显著高于其他组（P0.05）。与对照组相比，各试验组羔羊平均日增重显著升高（P0.05）；试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组羔羊平均日采食量分别提高6.93%、4.95%、8.91%（P0.05），试验Ⅱ组、试验Ⅲ组料重比分别降低14.72%、21.29%（P0.05）。试验Ⅲ组羔羊平均日增重显著高于试验Ⅰ组、试验Ⅱ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.006.T002表2发酵黄芪对羔羊生长性能的影响组别初重/(kg/只)末重/(kg/只)平均日增重/[g/(只·d)]平均日采食量/[kg/(只·d)]料重比对照组29.59±0.1145.26±3.40b261.17±54.83c2.02±1.508.97±0.13aⅠ组27.85±1.7244.94±2.37b284.83±10.83b2.16±1.597.81±0.14abⅡ组28.75±0.4446.69±1.20b299.00±12.67b2.12±0.817.65±0.06bⅢ组29.73±2.5849.00±3.17a312.17±9.83a2.20±0.947.06±0.03b注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2发酵黄芪对羔羊血清免疫指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组羔羊血清中CD2+、CD4+细胞百分率显著升高（P0.05），血清IgA、IgM含量极显著升高（P0.01）。试验Ⅲ组羔羊血清IgG含量显著高于对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组（P0.05）。结果表明，乳酸菌、乳酸菌发酵黄芪水提物、黄芪水提物均能提升羔羊血清中的免疫指标，乳酸发酵黄芪水提物效果较佳。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.006.T003表3发酵黄芪对羔羊血清免疫指标的影响组别CD2+/%CD4+/%CD14+/%IgA/(mg/L)IgM/(mg/L)IgG/(mg/L)对照组16.05±0.67c32.85±0.46c32.98±0.85b83.58±0.63Cbc13.69±0.28Cd13.09±0.11cⅠ组16.60±0.42bc33.90±0.75bc32.56±1.17b84.66±0.65Cbc14.48±0.40Cc13.78±0.27cⅡ组16.81±0.17b34.73±0.84b33.25±1.35ab85.54±0.92Bb15.89±0.39Bb14.33±0.78bⅢ组17.64±0.32a36.40±0.60a35.00±1.00a90.37±0.53Aa18.34±0.49Aa15.45±0.38a2.3发酵黄芪对羔羊血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，试验Ⅱ组羔羊血清GSH-Px活性显著高于对照组、试验Ⅰ组（P0.05）。试验Ⅲ组羔羊血清GSH-Px活性极显著高于其他各组（P0.01）。与对照组相比，试验Ⅱ组和试验Ⅲ组羔羊血清中T-AOC极显著增强（P0.01）；试验Ⅱ组羔羊血清SOD活性显著升高（P0.05）。试验Ⅲ组羔羊血清SOD、CAT活性极显著高于其他组（P0.01）。与对照组相比，试验Ⅲ组羔羊血清MDA含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.006.T004表4发酵黄芪对羔羊血清抗氧化指标的影响组别GSH-Px/(U/mL)T-AOC/(U/mL)SOD/(U/mL)CAT/(U/mL)MDA/(μmol/L)对照组98.36±0.36Bc12.83±0.23C96.22±0.25Bc9.33±0.17B2.70±0.23aⅠ组98.51±0.45Bc12.99±0.27C96.51±0.51Bbc9.49±0.24B2.28±0.86aⅡ组99.16±0.33Bb15.01±0.35B97.08±0.19Bb9.78±0.27B2.36±0.26aⅢ组104.04±0.27Aa18.70±0.64A98.76±0.27Aa10.53±0.31A1.43±0.33b3讨论3.1发酵黄芪对羔羊生长性能的影响研究表明，黄芪多糖可提高动物的采食量。传统的煎煮法提取黄芪多糖效率低，发酵可提高黄芪有效成分含量。石建存等[11]研究表明，饲喂雏鸡发酵中药可显著提高雏鸡的日采食量、平均日增重，极显著降低料重比。丁亚伟等[12]研究表明，饲喂羔羊复合益生菌发酵饲料可以显著提高羔羊的末重、平均日增重。姚春晓等[13]研究表明，饲喂羔羊板芪发酵液可以显著提高羔羊的平均日增重。本试验结果显示，发酵黄芪可显著提高羔羊末重、平均日增重，降低料重比。原因可能是益生菌发酵黄芪，增加了黄芪多糖利用率，提高了羔羊采食量，从而提高了羔羊的生产性能。3.2发酵黄芪对羔羊血清免疫指标的影响CD2+和CD4+可以评估T细胞活性[14]，CD14+可以评估单核巨噬细胞的免疫活性[15]。IgA、IgM和IgG是体液的免疫分子[16]。有研究表明，黄芪可提高奶山羊血清IgA、IgM、IgG含量[17-18]。彭勤等[19]研究表明，小鼠连续7 d灌胃黄芪多糖可显著提高胸腺指数和脾脏指数。侯良绢等[20]研究表明，黄芪可有效提高大鼠血清中干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-β（TNF-β）的水平，提高大鼠免疫功能。有研究表明，黄芪经过益生菌发酵能够增强药效[21]。本试验结果显示，发酵黄芪能够显著提高羔羊血清CD2+、CD4+、CD14+细胞百分率，极显著提高羔羊血清IgA、IgM、IgG的含量，且发酵黄芪对羔羊血清免疫指标的影响优于未发酵黄芪及益生菌，表明单纯益生菌、单一的黄芪在提高动物免疫方面效果低于益生菌发酵黄芪。原因是益生菌发酵可以提高黄芪多糖含量，进而提高羔羊免疫力。3.3发酵黄芪对羔羊血清抗氧化指标的影响刘莹等[22]研究表明，黄芪多糖可显著提高血清中T-AOC、SOD、CAT的活性，降低MDA含量。全男等[23]研究结果表明，黄芪与当归提取物可极显著提高育肥猪T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT的活性。乔宏兴等[24]研究结果表明，基础日粮中添加发酵黄芪可促进鸡生长，显著提高鸡血清T-AOC、GSH-Px、T-SOD、CAT的活性。本试验结果显示，发酵黄芪能够提高羔羊血清中T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT的活性，降低羔羊血清MDA含量，提高了羔羊的抗氧化能力。原因可能是发酵使黄芪中的黄芪多糖释放量增加，减少了自由基生成，进而起到抗氧化作用。4结论本研究结果表明，乳酸菌、黄芪、发酵黄芪均可改善无角陶塞特羔羊生长性能、血清免疫指标及抗氧化能力，且以发酵黄芪效果较佳。