中草药添加剂可提高动物生长性能、免疫功能和抗氧化性能[1]。但中草药的有效成分较复杂，多存在于细胞胞浆中，受到植物细胞壁中纤维素、半纤维素和木质素等致密结构的阻碍，导致中草药活性成分难以提取、有效成分利用率低。利用益生菌发酵产生的纤维素酶、果胶酶降解植物细胞壁，可释放中草药中的多糖、生物碱、皂苷、矿物元素及维生素，从而改善机体健康[2]。近年来，关于发酵中草药的研究多集中于禽和猪上[3]，其在塞北兔的研究较少。本试验研究发酵中草药对塞北兔生长性能、免疫功能及抗氧化功能的影响，为发酵中草药在塞北兔生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料选取干燥、无杂质、无霉变的黄芪、陈皮、白术、蒲公英、党参5味中草药，粉碎，过70目筛，按3∶2∶2∶3∶2比例混匀，加水调制（含水量为50%、pH值为6.0）。将枯草芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌按照1∶1∶1接种于调制液中，接种量为4%，37 ℃发酵24 h。未发酵复方中草药的比例与上述发酵中草药一致。1.2试验设计及饲养管理试验地点为张家口某兔场。选择200只1月龄，体况相近的塞北兔（公、母各半），随机分为5组，每组4个重复，每个重复10只兔。对照Ⅰ组兔饲喂基础日粮，对照Ⅱ组在基础日粮中添加5%未发酵中草药，各试验组分别在基础日粮中添加0.5%、1.0%、1.5%发酵中草药。基础日粮组成及营养水平见表1。试验期间早晚各饲喂1次，饮水充足。按兔场管理方法免疫、杀虫、消毒。试验期30 d。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.015.T001表1基础日粮组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米12.00消化能/(MJ/kg)10.23豆粕10.50粗蛋白/%17.42菜籽粕7.00粗纤维/%15.08大麦15.70钙/%1.24麸皮17.30磷/%0.46玉米皮35.00赖氨酸/%0.82氯化钠0.50蛋氨酸/%0.45石粉1.50预混料0.50注：1.预混料为每千克日粮提供：Cu 15 mg、Fe 110 mg、Zn 95 mg、Mn 50 mg、Se 0.05 mg、Co 0.25 mg、I 1 mg、VA 6 500 IU、VD3 1 100 IU、VE 12 mg、VK3 1.5 mg、VB12 0.005 mg、VB2 2 mg、VB6 1 mg、烟酸15 mg、叶酸0.3 mg、泛酸4 mg。2.营养水平均为计算值。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能试验开始、结束时，分别逐只称取兔空腹初重、末重，每日逐只记录兔日粮的投放量和剩料量。平均日增重=(末重－初重)/(试验天数×兔数量)(1)平均日采食量=全期增重/(试验天数×兔数量)(2)料重比=平均日采食量/平均日增重。(3)1.3.2免疫器官指数各组随机选取10只兔，静脉采血制备血清，-20 ℃保藏。将兔处死后，摘取胸腺、脾脏、圆小囊，去除表面脂肪组织，称取器官重量。免疫器官指数=器官重/活体重(4)1.3.3血清生化指标、免疫指标和抗氧化指标采用试剂盒（南京建成生物工程研究所）测定各组兔血清生化指标，包括总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、生长激素（GH）、促生长因子（IGF-Ⅰ）、尿素氮（BUN）、血糖（GLU）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）。免疫指标包括免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素-6（IL-6）和干扰素-γ（IFN-γ）。抗氧化性指标包括总抗氧化能力（T-AOC）、过氧化氢（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）。测定步骤严格按照试剂盒说明书进行。1.4数据统计与分析试验数据采用Excel软件进行统计，SPSS 22.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1发酵中草药对塞北兔生长性能的影响（见表2）由表2可知，与两个对照组相比，各试验组兔的平均日增重、末重显著升高（P0.05），料重比显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.015.T002表2发酵中草药对塞北兔生长性能的影响组别初重/(g/只)末重/(g/只)平均日采食量/[g/(只·d)]平均日增重/[g/(只·d)]料重比对照Ⅰ组995.46±11.281 690.86±10.21c101.23±1.3923.18±0.19b4.37±0.06a对照Ⅱ组989.42±15.111 704.19±12.01c101.49±1.3223.83±0.84b4.26±0.13a试验Ⅰ组992.26±15.021 742.44±34.68b102.84±1.2825.01±1.49a4.18±0.11b试验Ⅱ组998.16±16.021 795.28±31.45a103.98±1.3526.56±1.23a3.91±0.17c试验Ⅲ组998.69±14.381 801.75±30.51a105.18±1.3426.77±0.92a3.93±0.14c注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表4~表6与此同。2.2发酵中草药对塞北兔血清生化指标的影响（见表3）由表3可知，各试验组兔血清TP、ALB、GH、IGF-Ⅰ含量均显著高于对照Ⅰ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.015.T003表3发酵中草药对塞北兔血清生化指标的影响项目对照Ⅰ组对照Ⅱ组试验Ⅰ组试验Ⅱ组试验Ⅲ组TP/(g/L)64.85±2.10c65.72±1.98c67.13±1.54b69.26±2.07a68.75±2.76aALB/(g/L)35.74±1.80c36.12±1.56c37.21±1.41b38.62±0.85a38.14±1.32aGH/(mg/L)32.56±1.14c35.31±1.57b35.26±2.01b37.69±1.98a37.73±1.62aIGF-Ⅰ/(μg/L)53.61±8.26c58.72±6.53b60.21±7.16b64.83±8.25a63.97±9.14aBUN/(mmol/L)6.24±0.766.72±0.687.10±0.597.76±0.486.97±0.76TC/(mmol/L)2.65±0.24a2.40±0.21a2.26±0.18b2.04±0.23c1.98±0.31cTG/(mmol/L)0.91±0.12a0.89±0.13a0.72±0.17b0.68±0.14b0.64±0.15bHDL/(mmol/L)0.87±0.12c0.90±0.13c0.95±0.10b1.06±0.12a1.05±0.11aLDL/(mmol/L)1.73±0.14a1.70±0.15a1.64±0.17a1.54±0.10b1.49±0.15bGLU/(mmol/L)5.85±0.23a5.82±0.21a5.41±0.17b5.02±0.26c5.09±0.24cALT/(U/L)38.79±2.5639.12±3.0140.05±2.7841.30±3.5641.20±3.40AST/(U/L)64.89±4.5865.71±3.2466.12±4.1767.05±3.8166.93±4.03注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。与两个对照组相比，各试验组兔血清TC、TG、GLU含量显著降低（P0.05），HDL含量显著升高（P0.05）；试验Ⅱ组、试验Ⅲ组兔血清LDL含量显著下降（P0.05）。2.3发酵中草药对塞北兔免疫器官指数的影响（见表4）由表4可知，与对照Ⅰ组比，3个试验组兔脾脏指数分别提高19.9%、32.4%、37.9%（P0.05），胸腺指数分别提高7.3%、12.6%、14.6%（P0.05）；试验Ⅱ组、试验Ⅲ组兔圆小囊指数分别提高了12.7%、10.9%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.015.T004表4发酵中草药对塞北兔免疫器官指数的影响组别脾脏指数胸腺指数圆小囊指数对照Ⅰ组0.568±0.049c1.796±0.067c1.10±0.03b对照Ⅱ组0.604±0.051c1.849±0.064c1.12±0.04b试验Ⅰ组0.681±0.048b1.927±0.071b1.16±0.02b试验Ⅱ组0.752±0.051a2.023±0.068a1.24±0.05a试验Ⅲ组0.783±0.047a2.058±0.072a1.22±0.02ag/kg2.4发酵中草药对塞北兔血清免疫指标的影响（见表5）由表5可知，与对照Ⅰ组比，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组兔血清IgA、IgG含量显著提高（P0.05），各试验组兔血清IgM含量显著提高（P0.05），各试验组及对照Ⅱ组兔血清IL-6、IFN-γ的含量均显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.015.T005表5发酵中草药对塞北兔血清免疫指标的影响组别IgA/(g/L)IgG/(g/L)IgM/(g/L)IL-6/(ng/L)IFN-γ/(ng/L)对照Ⅰ组0.049 0±0.004 8b1.490 0±0.075 0b6.25±0.12c15.59±4.32d371.24±42.16c对照Ⅱ组0.050 0±0.004 7b1.520 0±0.074 3b6.31±0.20c29.08±6.10c390.35±25.87b试验Ⅰ组0.052 0±0.005 1b1.550 0±0.075 1b6.63±0.17b40.19±8.06b401.42±37.65b试验Ⅱ组0.071 0±0.006 1a1.690 0±0.073 8a7.12±0.31a49.46±7.57a423.51±32.18a试验Ⅲ组0.076 0±0.005 2a1.720 0±0.073 5a7.09±0.22a50.35±8.12a419.28±29.17a2.5发酵中草药对塞北兔血清抗氧化指标的影响（见表6）由表6可知，与对照Ⅰ组比，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组兔血清SOD、GSH-Px活性显著提高（P0.05），MDA含量显著降低（P0.05）；各试验组兔血清T-AOC及CAT活性显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.11.015.T006表6发酵中草药对塞北兔血清抗氧化指标的影响组别MDA/(μmol/L)SOD/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)CAT/(U/mL)T-AOC/(mmol/L)对照Ⅰ组3.35±0.15a133.15±14.02c215.12±23.14c3.21±0.45c0.68±0.04c对照Ⅱ组3.31±0.13a135.23±12.31c228.10±24.25b3.80±0.26b0.80±0.06b试验Ⅰ组3.27±0.22a148.25±15.03b237.45±15.16b4.35±0.75b0.92±0.08b试验Ⅱ组3.11±0.19b160.26±10.78a289.36±24.27a5.86±1.14a1.14±0.10a试验Ⅲ组3.08±0.20b162.44±12.03a291.12±27.43a6.01±0.59a1.03±0.12a3讨论3.1发酵中草药对塞北兔生长性能的影响中草药经枯草芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌发酵，其有效成分得到充分释放，蛋白酶、纤维素酶、酰胺酶活性显著增加。发酵中草药可以增加饲料适口性，提高饲料表观消化率，促进动物生长发育。黄芪、党参等中草药经益生菌发酵后，可以增加机体肠道有益菌数量，改善肠道微环境，促进营养物质消化吸收。黄芪、党参能够补中益气、增强免疫力；白术能够燥湿健脾；陈皮能够消食导滞、健脾理气；蒲公英能够清热解毒、杀菌消炎、促进机体生长。李维等[4]发现，日粮添加1%复方中草药添加剂能够显著提高断奶仔兔的平均日采食量和平均日增重，降低腹泻率和料重比。周娟[5]发现，在饲粮中添加中草药添加剂可显著提高獭兔的平均日增重。唐岭田等[6]发现，添加1.0%黄芪党参等中草药添加剂可显著提高幼兔日采食量、日增重、饲料报酬。本研究发现，日粮添加发酵中草药可提高塞北兔日增重，降低料重比。3.2发酵中草药对塞北兔血清生化指标的影响血清TP、ALB是营养物质的载体。本试验中，各试验组兔血清TP、ALB均显著高于对照Ⅰ组，与邱时秀等[7]、左晓磊等[8]结果一致。GH和IGF-Ⅰ是反映动物生长性能的重要指标，两者协同可提高动物生长性能。本试验中，发酵中草药可提高兔血清GH和IGF-Ⅰ含量，与左晓磊等[8]结果一致。本试验中，与对照组相比，各试验组兔血清TC、TG和LDL含量下降，HDL含量升高，与郭志强等[9]结果一致。与对照组相比，试验组兔血清ALT、AST活性增加，表明日粮中添加发酵中草药促进了机体氨基酸的代谢，从而提高了塞北兔的生长性能。3.3发酵中草药对塞北兔免疫功能的影响IL-6能够参与机体免疫应答，刺激T、B淋巴细胞增殖，在免疫中发挥重要作用[10]。IFN-γ能够调节细胞免疫[11-13]。王黎琦等[14]发现，日粮添加复方中草药添加剂显著提高了肉仔鸡血清IgG、IgM和IgA含量。王付平[15]发现，在肉兔日粮中添加黄芪、蒲公英等中草药可改善肉兔的脾脏指数、胸腺指数和圆小囊指数。郑明立等[16]发现，日粮中添加1.0%发酵中草药改善了新西兰肉兔的各项免疫器官指数。尹皑等[17]发现，日粮中添加味乌梅散可显著提高肉兔脾脏指数及血清IgA、IgM含量。解军亮等[18]发现，发酵中草药可提高断奶仔猪血清IgA、IgM、IL-6、TNF-α含量。本试验中，日粮添加发酵中草药可显著提高兔的免疫器官指数及血清IgG、IgM和IgA的含量，与邱时秀等[7]、韩昱等[19]结果一致。本试验结果表明，日粮添加发酵中草药能够提高塞北兔的免疫力。3.4发酵中草药对塞北兔抗氧化性能的影响血清SOD、GSH-Px活性和MDA含量是衡量机体抗氧化能力最直观的指标，在维持机体氧化和抗氧化平衡方面具有重要作用[20]。金顺义等[21]发现，复合益生菌发酵中草药可增强猪血清SOD、GSH-Px活性，降低MDA含量。曹艳霞等[22]发现，日粮添加中草药添加剂可显著提高大鼠SOD活性，降低MDA含量。李荣等[23]研究表明，日粮添加酵母硒与黄芪多糖能够提高断奶仔猪血清T-AOC及SOD、GSH-Px活性。李赵嘉等[24]发现，蒲公英可显著提高蛋鸡的抗氧化能力。本试验表明，日粮添加发酵中草药可以改善机体抗氧化能力。4结论本研究结果显示，日粮添加发酵中草药可提高塞北兔的生长性能，增强免疫能力及抗氧化能力。综合考量，在基础日粮中添加1%的发酵中草药较为适宜。