广西地区拥有丰富的茉莉花资源,在日常生产中也会产生大量的茉莉花渣。茉莉花渣的粗蛋白、粗脂肪和粗纤维含量极高,还含有丰富的多糖类和黄酮类活性物质[1]。目前,茉莉花渣的再利用是畜牧行业中研究的热点。陈笑寒等[2]发现,利用茉莉花渣饲喂水牛可以显著提高育成期水牛的增重,降低血液总胆固醇含量。黄艳娜等[3]研究表明,利用茉莉花渣饲喂鸵鸟可以维持鸵鸟的正常生长,降低饲养成本。但目前关于茉莉花渣在山羊生产中的研究较少。本研究以努比亚山羊和隆林山羊二代杂交山羊为试验动物,在日粮中添加10%的茉莉花渣,研究茉莉花渣对山羊生长性能、激素及脂肪相关基因表达量的影响,为提高茉莉花渣在反刍动物生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料与试验日粮试验所用山羊由广西大学农牧产业发展研究院的合作的种羊场提供,挑选体重相近、精神状态良好、无疾病的4月龄阉割公羊进行试验。试验所用的茉莉花渣由广西横州市合作企业提供,其营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.13.003.T001表1茉莉花渣营养水平项目粗蛋白脂肪灰分中性洗涤不溶蛋白酸性洗涤不溶蛋白中性洗涤纤维酸性洗涤纤维木质素钙磷含量24.205.9012.685.101.5019.426.136.401.840.42%DM试验参照《肉羊饲养标准》(NY/T 816—2004),利用茉莉花渣、玉米、豆粕、发酵草料、麦麸、木薯酒精渣等制作全价颗粒日粮。试验日粮组成及营养水平见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.13.003.T002表2试验日粮组成及营养水平(干物质基础)项目对照组试验组原料组成/%牧草发酵料25.0025.00木薯酒精渣32.0032.00玉米20.0014.00豆粕9.005.00麦麸2.502.50大麦4.004.00茉莉花渣010.00食盐0.750.75磷酸氢钙0.500.50预混料5.005.00石粉1.001.00小苏打0.250.25合计100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)9.889.25粗蛋白/%18.9018.00粗脂肪/%2.802.70中性洗涤纤维/%40.2343.19酸性洗涤纤维/%23.6028.40钙/%1.261.25磷/%0.440.54木质素/%2.002.80注:1.预混料购自广西南宁鑫牧生物科技有限公司,主要成分为枯草芽孢杆菌(≥1.50×107 CFU/g)、地衣芽孢杆菌(≥3.00×107 CFU/g)、酿酒酵母(≥3.50×107 CFU/g)、复合多维、复合酶氨基酸、微量元素、淀粉酶、NSP酶等。2.营养水平均为实测值。1.2试验设计与饲养管理试验选取24只山羊,随机分为2组,每组12个重复,每个重复1只羊。对照组和试验组山羊分别饲喂普通颗粒日粮和添加10%茉莉花渣的颗粒日粮。预试期1 w,正式试验期6 w。本研究在广西武鸣绿世界生态农业投资有限公司墨羊养殖基地进行。所有试验羊均为单栏饲养(2.0 m × 1.5 m)。试验开始前对养殖环境消毒,对所有试验羊进行驱虫、免疫。山羊每天饲喂2次(9:00、16:00),根据试验羊的采食情况调整每日饲喂量,确保10%左右的剩余日粮。每4 w对环境进行消毒1次。1.3测定指标及方法1.3.1样品采集试验结束后,所有试验山羊颈动脉放血处死,处死前12 h停止饲喂,2 h停止饮水。每组随机选取8只试验山羊收集样品,用于后续分析。试验山羊处死后,记录胴体重,采集背腰最长肌,检测相关屠宰指标;采集适量肌肉样品经液氮处理,-80 ℃冰箱中保存。1.3.2生长性能试验开始和结束时,称量试验山羊的体重,记为初重和末重。正式试验期内每天记录采食量,计算平均日增重、平均日采食量、料重比。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.3.3屠宰性能屠宰率=胴体重/屠宰活重×100% (4)背腰最长肌比重=背腰最长肌重/屠宰活重×100%(5)眼肌面积为倒数第一、二胸椎间之间背腰最长肌的横断面面积。眼肌面积=眼肌高×眼肌宽×0.7(6)1.3.4血清激素指标试验结束后,所有试验山羊使用一次性采血器采集静脉血10 mL,室温静止5 min,4 ℃、3 000 r/min离心15 min,取上清液置于-80 ℃保存。血清中生长激素(GH)、类胰岛素生长因子(IGF-1)和皮质酮(CORT)含量委托九邦生物科技有限公司检测。1.3.5肌纤维发育相关基因表达量利用NCBI网站查询待测基因的信息和mRNA序列,设计并筛选符合试验要求的引物,引物序列交由擎科基因公司进行合成。引物名称及序列见表3。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.13.003.T003表3引物名称及序列基因引物名称引物序列长度/bpGAPDHGAPDH-F5'-GGGTCATCATCTCTAGCACCT-3'176GAPDH-R5'-GGTCATAAGTCCCTCCACGA-3'SCDSCD-F5'-CCATCGCCTGTGGAGTCAC-3'256SCD-R5'-GTCGGATAAATCTAGCGTAGCA-3'FASFAS-F5'- GCACTACCACAACCCAAACCC-3'161FAS-R5'- CGTTGGAGCCACCGAAGG-3'LPLLPL-F5'-TCCTGGAGTGACGGAATCTGT-3'174LPL-R5'-GACAGCCAGTCCACCACGAT-3'PPARγPPARγ-F5'-AAGCGTCAGGGTTCCACTATG-3'197PPARγ-R5'-GAACCTGATGGCGTTATGAGAC-3'肌肉组织使用冷冻研磨机研磨,使用Trizol法提取RNA,测定RNA浓度及纯度,使用反转录试剂盒将RNA反转录为cDNA,将稀释后的cDNA作为模板,使用SYBR Green qPCR检测试剂进行实时荧光定量PCR试验,qPCR仪器为Bio-Rad CFX96,扩增程序为:热变性95 ℃ 10 min;qPCR循环(40个循环)95 ℃ 15 s,60 ℃ 1 min(荧光信号采集);溶解曲线分析。试验结束后,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因作为内参,使用2-∆∆Ct法进行Ct值分析,对各组间待测基因相对表达量进行计算及分析。1.4数据统计与分析试验数据采用Excel 2021软件和SPSS 20.0软件进行统计分析,t检验分析组间差异,GraphPad Prism 8制作柱状图。结果以“平均值±标准误”表示,P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1日粮中添加茉莉花渣对山羊生长性能的影响(见表4)由表4可知,两组山羊末重、平均日增重、平均日采食量及料重比差异均不显著(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.13.003.T004表4日粮中添加茉莉花渣对山羊生长性能的影响项目初重/(kg/只)末重/(kg/只)平均日增重/[g/(只·d)]平均日采食量/[kg/(只·d)]料重比P值0.930.970.860.240.99对照组26.66±0.9933.31±1.54158.50±15.501.27±0.098.81±1.22试验组26.56±0.3233.38±0.70162.20±13.201.39±0.048.79±0.452.2日粮中添加茉莉花渣对山羊屠宰性能的影响(见表5)由表5可知,与对照组相比,试验组山羊的屠宰率、背腰最长肌比重和眼肌面积均显著升高(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.13.003.T005表5日粮中添加茉莉花渣对山羊屠宰性能的影响项目屠宰活重/kg胴体重/kg屠宰率/%背腰最长肌比重/%眼肌面积/cm2P值0.980.110.010.040.04对照组33.41±0.9015.75±0.4647.19±0.766.92±0.1822.49±0.64试验组33.45±0.7616.68±0.3249.92±0.40*7.46±0.16*24.32±0.57*注:“*”表示与对照组相比差异显著(P0.05)。2.3日粮中添加茉莉花渣对山羊血清激素含量的影响(见表6)由表6可知,两组山羊血清中GH、IGF-1和CORT含量差异均不显著(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.13.003.T006表6日粮中添加茉莉花渣对山羊血清激素含量的影响项目GHIGF-1CORTP值0.920.980.95对照组2.68±0.17284.30±15.1717.51±1.88试验组2.70±0.12283.70±13.9017.74±2.74μg/L2.4日粮中添加茉莉花渣对山羊肌内脂肪相关基因表达量的影响(见图1)由图1可知,试验组山羊的SCD、LPL、FAS的表达量均显著高于对照组(P0.05),PPARγ的表达量差异不显著(P0.05)。图1日粮中添加茉莉花渣对山羊肌内脂肪相关基因表达量的影响注:“*”表示与对照组相比差异显著(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.13.003.F1a110.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.13.003.F1a23讨论3.1日粮中添加茉莉花渣对山羊生长性能的影响山羊的增重受到多方面因素的影响,如蛋白水平、能量水平以及日粮精粗比等。茉莉花渣中含有的粗蛋白、粗脂肪以及粗纤维等营养物质,可代替日粮中的部分玉米和豆粕。胡俊杰等[4]发现,利用茉莉花渣饲喂山羊可以促进山羊对纤维物质的消化,维持山羊的正常生长。胡旭旭[5]研究发现,使用添加茉莉花渣的饲粮对鸵鸟的日增重、采食量及饲料转化率均无影响,与本试验结果一致。本研究发现,在山羊日粮中添加10%的茉莉花渣不会对山羊的生长性能产生负面影响,可维持山羊正常的生长速度、采食量以及饲料转化率。茉莉花渣的性价比高于豆粕和玉米,可以降低山羊的饲料成本,提高经济效益。因此,在日粮中添加10%的茉莉花渣可维持山羊的正常生长性能,降低成本,提高经济效益。3.2日粮中添加茉莉花渣对山羊屠宰性能的影响屠宰率是肉产品产出的最直接指标。眼肌面积与羊的胴体肌肉总量高度相关,也被用作肌肉发育和胴体肉量的衡量指标[6]。本研究发现,茉莉花渣组山羊的屠宰率、背腰最长肌比重及眼肌面积均显著提高;各组山羊的初重和末重均无显著差异,推测可能是试验组山羊的头、蹄、皮、内脏或肠道的重量降低,需要在后续的试验中进一步研究。上述试验结果表明,日粮中添加茉莉花渣可提高山羊的屠宰性能。3.3日粮中添加茉莉花渣对山羊血清激素含量的影响GH在动物肌肉生长中发挥重要作用[7]。GH从垂体前叶释放,以响应各种刺激,包括生长、运动以及睡眠等活动。GH诱导IGF-1的生物合成,而IGF-1对GH的分泌具有负反馈调节作用。IGF-1是一种肽化合物,可作为GH间接作用的介质[8];IGF-1通过旁分泌或自分泌的方式发挥促进机体生长的作用。本研究发现,添加茉莉花渣后,山羊血清中GH和IGF-1含量均无显著变化,与山羊生长速度无变化的结果一致。糖皮质激素是由肾上腺产生的类固醇激素,在应激情况下释放到血液中,而CORT是主要的糖皮质激素[9]。CORT是一种经过充分验证的药理应激源,可诱导试验动物的抑郁行为,抑制下丘脑前核的活动[10],被广泛应用于动物应激抑郁模型建造中。而茉莉花渣中含有大量的黄酮类和多糖类活性物质,具有抗氧化[11]、缓解应激、抗病毒[12]等多种作用。本研究中,在日粮中添加茉莉花渣后,山羊的CORT含量维持在正常水平,表明在日粮中添加茉莉花渣对山羊的血清激素含量无负面影响。3.4日粮中添加茉莉花渣对山羊肌内脂肪相关基因表达的影响肌内脂肪或大理石花纹脂肪对改善肉类的风味和适口性至关重要[13]。通过调节肌内脂肪的沉积改善肉类的风味是目前研究的热点[14],现有的研究将SCD[15]、LPL[16]、FAS、PPARγ[17]等作为肌内脂肪沉积的关键基因。SCD是调节脂肪代谢的重要基因[18],是催化饱和脂肪酸去饱和化的重要酶之一,对调节机体脂质代谢、能量平衡具有十分重要的作用[15]。研究表明,在山羊日粮添加茶皂苷(TS)和大豆油(SO)可调节SCD基因的表达,调节机体血脂水平,进而调控脂肪的合成代谢[19]。LPL是脂质消化及代谢的关键酶,主要催化乳糜颗粒和极低密度脂蛋白中甘油三酯的水解,在机体的脂类代谢中发挥重要作用[20]。张珈溯等[21]研究表明,LPL基因与延边黄牛胴体及肉质性状存在关联性,可作为延边黄牛肉质性状的潜在候选标记。FAS是机体中脂肪酸合成的关键酶之一,组织中脂肪酸合成的最高水平由FAS mRNA表达水平决定[22],组织中脂肪酸合成的最高水平由FAS mRNA表达水平决定。有研究发现,在湖羊羔羊不同部位肌肉中FAS基因对湖羊肌内脂肪沉积起正向调控作用[23]。PPARγ在控制脂肪基因表达方面发挥综合作用,在脂质储存和动员、糖代谢、形态发生和炎症反应中发挥关键作用[24]。研究表明,PPARγ可通过不同的机制阻止脂肪毒性,包括促进脂肪组织扩张,增加外周器官(肝脏、肌肉和胰腺β细胞)的脂质缓冲能力[25]。本试验中,山羊屠宰时处在青年期,正处于肌肉和骨骼的发育高峰期,脂肪沉积缓慢,所以肌肉中脂肪含量的真正变化不易观察,需要在后续试验中进一步研究。但现有结果表明,茉莉花渣处理可促进肌内脂肪相关基因的表达,有助于肌内脂肪的沉积。4结论本研究结果表明,日粮中添加茉莉花渣后对山羊的生长性能无显著影响,但可以提高屠宰性能,促进肌内脂肪相关基因的表达。

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