随着人们生活水平的提升，对畜禽产品质量安全问题愈发重视[1]。抗生素滥用引起的细菌耐药性和环境污染等问题，对畜禽及人类的健康产生了负面影响[2-3]。我国已经在2020年禁止在饲料中添加抗生素，因此需要寻找抗生素的替代品[4]。研究表明，益生菌可以调节机体免疫[5]，调整肠道菌群结构[6]，维护肠道结构与功能的完整性[7-8]，可作为饲用抗生素替代品在畜禽生产中应用[9]。在日粮中添加干酪乳杆菌可以提高动物的生长性能和畜产品品质。龙小文[10]研究表明，在日粮中添加90 mg/kg干酪乳杆菌可以显著提高蛋鸡生产性能、抗氧化能力，改善肠道健康。郑颖辉[11]研究发现，在饮水中添加2×106 CFU/mL的干酪乳杆菌可以增强AA肉鸡肠道中消化酶活性。本研究在白羽肉鸡日粮中添加不同水平干酪乳杆菌，观察其对肉鸡生长性能、肠道微生物结构、血清免疫指标、抗氧化指标和养殖经济效益的影响，为干酪乳杆菌在家禽中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料及地点干酪乳杆菌购自山西睿智生物科技有限公司，活菌数为1×1010 CFU/g。白羽肉鸡购自海丰养殖专业合作社。试验在本校动物养殖基地进行。1.2试验设计及饲养管理选取2 400只1日龄白羽肉鸡，随机分为4组，每组6个重复，每个重复100只鸡。对照组肉鸡饲喂基础日粮，各试验组分别在基础日粮中添加100、200、400 mg/kg干酪乳杆菌。试验期42 d。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.14.008.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成/%1~21 d22~42 d营养水平1~21 d22~42 d合计100.00100.00玉米58.4262.45代谢能/(MJ/kg)13.5314.14豆粕24.9720.81粗蛋白质/%20.4718.83玉米蛋白粉1.391.24钙/%0.930.92大豆油2.462.68有效磷/%0.480.46米糠粕2.252.47赖氨酸/%1.271.24麸皮8.378.25蛋氨酸+半胱氨酸/%0.970.94石粉0.210.21食盐0.340.34L-赖氨酸盐酸盐0.280.27DL-蛋氨酸0.310.28预混料1.001.00注：1.预混料为每千克日粮提供：VD3 2 150 IU、VA 8 550 IU、VK3 1.38 mg、VE 10 IU、生物素0.13 mg、VB1 4.51 mg、VB2 3.64 mg、铜5.42 mg、铁61.16 mg、锌38.73 mg、锰20.48 mg、碘0.30 g、硒0.10 mg。2.营养水平均为计算值。试验前7 d，对鸡舍进行熏蒸消毒，通过笼养方式（2只/笼）进行饲喂。试验期间，保证试验鸡自由采食和饮水，每天7：00统计前1 d饲料采食情况并记录。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能统计每个重复肉鸡1、21、42日龄体重和1~21、22~42、1~42 d阶段的总采食量，计算各阶段肉鸡的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）、料重比（F/G）。ADG=(末重-初重)/(试验天数×试验鸡数)(1)ADFI=总采食量/(试验天数×试验鸡数)(2)F/G=ADFI/ADG(3)1.3.2肠道微生物数量各重复选择1只接近该组平均体重的试验鸡，放血致死，使用灭菌剪刀剪取2 cm盲肠，置于无菌离心管中。参考孟翠红等[12]的方法，在EMB、MRS、SS培养基分别培养大肠杆菌、乳酸杆菌、沙门氏菌，并计数，以lgCFU/g计。1.3.3血清指标血清指标使用酶联免疫吸附法（ELISA）进行测定，试剂盒购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司。具体操作步骤参考试剂盒说明。血清免疫指标包括：免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）。血清抗氧化指标包括：总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）。1.3.4经济效益统计每只肉鸡在试验过程中消耗的饲料成本、干酪乳杆菌使用成本及肉鸡增重收入。其中，基础日粮的价格为3.632元/kg，干酪乳杆菌价格260元/kg，肉鸡销售价格约为12.31元/kg。饲料成本=试验期间采食量×饲料单价/试验鸡数量(4)酪乳杆菌使用成本=干酪乳杆菌用量×外源蛋白酶价格/试验鸡数量(5)增重收入=试验阶段增重×肉鸡销售单价/试验鸡数量(6)利润=增重收入-(试验阶段饲料成本+干酪乳杆菌使用成本)(7)1.4数据统计与分析采用Excel软件对数据进行初步整理，SAS 8.2软件中进行单因素方差分析，LSD法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1干酪乳杆菌对肉鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，400 mg/kg组肉鸡21 d体重显著高于对照组（P0.05）。100 mg/kg组、200 mg/kg组和400 mg/kg组肉鸡1~21 d ADG显著高于对照组（P0.05），200 mg/kg组和400 mg/kg组1~42 d ADG显著高于对照组，F/G显著低于对照组（P0.05），400 mg/kg组肉鸡22~42 d阶段ADG高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.14.008.T002表2干酪乳杆菌对肉鸡生长性能的影响项目对照组100 mg/kg组200 mg/kg组400 mg/kg组体重/(g/只)1 d43.68±1.2343.58±0.9843.51±1.1043.46±0.7421 d800.57±25.43b824.18±18.76ab848.63±30.17ab867.19±28.64a42 d2 428.08±80.372 479.37±72.432 507.38±85.632 560.75±100.57ADG/[g/(只·d)]1~21 d36.04±0.45c37.17±0.73b38.34±0.62ab39.23±0.84a22~42 d77.50±1.38b78.82±1.67ab78.99±1.45ab80.65±1.40a1~42 d56.77±0.67b58.00±0.89ab58.66±0.82a59.94±1.13aADFI/[g/(只·d)]1~21 d50.10±2.4350.55±1.6851.37±1.5752.17±3.1022~42 d151.90±6.47152.12±5.83151.66±4.75154.03±3.961~42 d101.00±3.87101.34±2.67101.52±2.85103.10±3.33F/G1~21 d1.39±0.03a1.36±0.02ab1.34±0.01b1.33±0.01b22~42 d1.96±0.061.93±0.031.92±0.021.91±0.021~42 d1.78±0.03a1.75±0.02ab1.73±0.02bc1.72±0.01c注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。2.2干酪乳杆菌对肉鸡肠道微生物菌群数量的影响（见表3）由表3可知，400 mg/kg组肉鸡肠道中沙门氏菌数量显著低于对照组（P0.05）。100 mg/kg组、200 mg/kg组和400 mg/kg组肉鸡肠道中大肠杆菌数量显著低于对照组（P0.05）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.14.008.T003表3干酪乳杆菌对肉鸡肠道菌群数量的影响组别大肠杆菌乳酸杆菌沙门氏菌对照组7.34±0.34a7.26±0.282.98±0.19a100 mg/kg组6.52±0.42b7.38±0.332.81±0.32ab200 mg/kg组5.81±0.25c7.43±0.342.63±0.23ab400 mg/kg组4.97±0.24d7.50±0.262.57±0.18b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。lgCFU/g2.3干酪乳杆菌对肉鸡血清免疫指标的影响（见表4）由表4可知，各试验组肉鸡血清中IgG含量显著高于对照组（P0.05），TNF-α含量显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.14.008.T004表4干酪乳杆菌对肉鸡免疫指标的影响组别IgG/(g/L)IgA/(g/L)IgM/(g/L)IL-1β/(ng/L)IL-6/(ng/L)TNF-α/(ng/L)对照组1.87±0.09c1.07±0.060.89±0.0423.42±4.3619.47±3.47a89.43±8.43a100 mg/kg组2.32±0.18b1.03±0.040.92±0.0521.76±2.4114.32±2.12b62.80±6.78b200 mg/kg组2.89±0.21a1.11±0.070.89±0.0621.54±2.8613.69±1.95b50.39±7.43b400 mg/kg组3.15±0.33a1.08±0.040.95±0.0420.96±1.9713.08±2.07b32.45±4.07c2.4干酪乳杆菌对肉鸡血清抗氧化指标的影响（见表5）由表5可知，200 mg/kg组和400 mg/kg组肉鸡血清T-AOC显著高于对照组（P0.05）。与对照组相比，各试验组肉鸡血清GSH-Px活性显著提高（P0.05），MDA含量显著下降（P0.05）。400 mg/kg组肉鸡血清SOD活性显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.14.008.T005表5不同干酪乳杆菌对肉鸡血清抗氧化指标的影响组别T-AOC/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)SOD/(U/mL)MDA/(μmol/L)对照组2.62±0.13b227.31±15.27b98.13±9.76b5.88±0.45a100 mg/kg组2.73±0.15ab367.35±28.62a105.24±10.14ab4.57±0.39b200 mg/kg组3.04±0.21a373.14±32.02a112.48±11.52ab4.37±0.34b400 mg/kg组3.11±0.26a384.44±26.75a123.49±12.30a4.16±0.24b2.5干酪乳杆菌对肉鸡养殖经济效益的影响（见表6）由表6可知，对照组、100 mg/kg组、200 mg/kg组、400 mg/kg组肉鸡在试验阶段的养殖利润分别为13.94、14.42、14.62、14.81元/只。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.14.008.T006表6干酪乳杆菌对肉鸡养殖经济效益的影响组别总采食量/（g/只）饲料成本/（元/只）干酪乳杆菌用量/（mg/只）干酪乳杆菌成本/（元/只）总增重/（g/只）增重收入/（元/只）利润/（元/只）对照组4 242.0015.41002 384.4029.3513.94100 mg/kg组4 256.1315.46425.610.112 435.7929.9814.42200 mg/kg组4 263.6615.49852.730.222 463.8730.3314.62400 mg/kg组4 330.2615.731 732.100.452 517.2930.9914.813讨论3.1干酪乳杆菌对肉鸡生长性能的影响干酪乳杆菌可以通过影响动物肠道结构与功能，从而提高动物营养物质消化利用率，提高动物的生长性能[13-15]。张利环等[16]在肉鸡饮水中添加1%的干酪乳杆菌，饲喂42 d后发现，肉鸡ADG提高了约11.11%。该研究认为，干酪乳杆菌是通过增强淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等内源酶活性而提高肉鸡生长性能。李阳等[17]分别在肉鸡基础日粮中添加120 mg/kg壳寡糖、2×106 CFU/g干酪乳杆菌、120 mg/kg壳寡糖+2×106 CFU/g干酪乳杆菌进行饲喂试验，结果表明，单独添加干酪乳杆菌或联合添加干酪乳杆菌与壳寡糖分别使肉鸡ADG提高7.90%和7.05%。本研究结果显示，日粮中添加适量的干酪乳杆菌可以提高白羽肉鸡平均日增重，降低料重比，与上述研究结果基本一致。3.2干酪乳杆菌对肉鸡肠道微生物的影响日粮中添加干酪乳杆菌可以通过抑制肠道病原微生物增殖调节肠道微生物菌群结构[18-19]。龙小文[10]研究认为，日粮中添加60~90 mg/kg干酪乳杆菌可以降低盲肠中大肠杆菌数量，而添加30~90 mg/kg干酪乳杆菌可以显著提高乳酸杆菌数量，减少肠道中沙门氏菌数量。目前，干酪乳杆菌对肉鸡肠道菌群的影响机制的研究偏少，但在其他动物生产中的研究较多。王四新等[18]研究表明，日粮中添加2×109 CFU/kg的干酪乳杆菌可以显著提高育肥猪肠道厚壁菌门和链球菌属微生物相对丰度，而干酪乳杆菌组育肥猪变形菌门、埃希氏菌属-志贺氏菌属等微生物相对丰度显著降低。曾献春等[20]在小鼠便秘模型的研究中发现，干酪乳杆菌能够抑制致病菌普雷沃氏菌属的增殖，促进肠道中乳杆菌属、另枝菌属生长，从而改善肠道菌群。本研究结果表明，日粮中添加适量干酪乳杆菌可以显著抑制肉鸡大肠杆菌和沙门氏菌的增殖，表明干酪乳杆菌可以影响肉鸡肠道微生物结构，与上述研究结果一致。3.3干酪乳杆菌对肉鸡血清免疫功能的影响血清免疫球蛋白含量与机体主动免疫密切相关；细胞因子含量反映体内免疫功能，两项指标均可以反映机体免疫能力[21]。龙小文[10]研究表明，日粮中添加90 mg/kg干酪乳杆菌可以显著提升蛋鸡血清中IgG含量。王秋珍等[22]利用沙门氏菌感染雏鸡构建肠道炎症模型，使用干酪乳杆菌治疗后发现，日粮中添加108 CFU/g干酪乳杆菌可以使感染沙门氏菌肠道黏膜促炎因子白细胞介素-17（IL-17）、TNF-α、干扰素-γ（IFN-γ）等基因表达量显著下降，显著上调抗炎因子白细胞介素-10（IL-10）表达量。郭元晟等[23]发现，在肉鸡饮水中添加2×105~2×106 CFU/mL干酪乳杆菌可以显著提高肉鸡血清IgG、IgM含量，降低血清中TNF-α含量。本研究发现，添加干酪乳杆菌肉鸡血清中IgG含量上升，且促炎因子IL-6、TNF-α含量显著下降，表明干酪乳杆菌具有调节家禽体内免疫机能作用，这可能与干酪乳杆菌能够分泌活性肽刺激免疫细胞激活、增殖等机制有关[24]。3.4干酪乳杆菌对肉鸡血清抗氧化功能的影响家禽机体抗氧化能力也是衡量群体健康程度的重要指标之一[25-26]，较强的抗氧化能力可以有效避免机体代谢过程中产生的氧化损伤[27-28]。龙小文[10]研究表明，日粮中添加90 mg/kg干酪乳杆菌可以显著提高GSH-Px、SOD活性及T-AOC。李阳等[17]研究发现，单独添加干酪乳杆菌或者联合添加干酪乳杆菌与壳寡糖可以显著提高血浆与鸡肉中SOD活性和T-AOC。本研究表明，适量添加干酪乳杆菌可以显著提高肉鸡血清T-AOC、GSH-Px和SOD活性，减少MDA含量，与上述研究结果基本一致，表明干酪乳杆菌具有提升家禽体内抗氧化能力的功能。3.5干酪乳杆菌对肉鸡养殖经济效益的影响养殖利润是评价干酪乳杆菌用于家禽饲料生产可行性的重要指标[29]。本试验发现，添加干酪乳杆菌会额外增加使用成本，且提升采食量后导致饲料成本整体上升。但由于肉鸡生长性能的提高，增重后带来的增重收入远超过成本的增长量。因此，添加干酪乳杆菌可以提高肉鸡的养殖利润，这与其他研究的结论基本一致[10-11,17]。4结论本研究认为，日粮中添加干酪乳杆菌有助于提高肉鸡的生长性能，增强机体免疫与抗氧化能力，影响肠道微生物结构，提高养殖利润。建议在肉鸡日粮中添加400 mg/kg干酪乳杆菌。