我国已经全面禁止饲用抗生素类添加剂（中药类除外），因此寻找抗生素替代物成为研究重点。研究发现，中草药在抗氧化和促生长等方面具有明显优势[1-2]。中草药经传统的水煎提取法提取有效成分后的药渣含有大量水分，容易污染土壤和水资源[3]，结合微生物发酵技术能够将中草药中的有效成分尽可能地分解出来，提高中草药的利用率。研究表明，发酵富锗中药能够提高育肥猪的养分表观消化率、生长性能和屠宰率[3]。本试验旨在评估日粮中添加发酵中草药副产物对松辽黑猪生长性能、血清生化指标及免疫功能的影响，为推广发酵中草药副产物在畜牧养殖业中的应用提供参考。1材料与方法1.1发酵中草药副产物的制备将人参茎叶、刺五加茶渣、玉竹、猪苓、甘草、黄芪、灵芝子实体等7种中草药副产物按照1.8∶1.4∶1.4∶0.9∶0.5∶2.7∶1.4比例混合，粉碎过40目筛，加入蒸馏水，使中草药含水量控制在50%，接入植物乳杆菌（108 CFU/g）和酶制剂（纤维素酶活力≥10 000 U/g、木聚糖酶活力≥800 000 U/g、β-葡聚糖酶活力≥50 000 U/g、淀粉酶活力≥150 000 U/g）（植物乳杆菌和酶制剂由吉林省农业科学院动物营养与饲料研究所提供），装入发酵袋，置于37 ℃温箱发酵48 h，65 ℃烘干。1.2试验设计选取50头体重（93.85±4.11）kg育肥后期松辽黑猪，随机分为5组，每组5个重复，每个重复2头猪。对照组松辽黑猪饲喂基础日粮，试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组、试验Ⅳ组分别在基础日粮中添加1%发酵中草药、1%未发酵中草药、3%发酵中草药、3%未发酵中草药。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.14.004.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.0玉米74.0消化能/(MJ/kg)13.65豆粕17.0粗蛋白质/%15.06麦麸5.0粗纤维/%3.29豆油1.0中性洗涤纤维/%14.78磷酸氢钙1.0酸性洗涤纤维/%4.07石粉0.5钙/%0.63食盐0.3总磷/%0.42氯化胆碱0.2预混料1.0注：1.预混料为每千克日粮提供：铜5 mg、铁100 mg、锰10 mg、锌100 mg、硒0.3 mg、VA 3 000 IU、VD3 500 IU、VE 15 IU、VK3 5 mg、VB1 10 mg、VB2≥15 mg、VB6 10 mg、VB12 0.02 mg、烟酸20 mg、泛酸24 mg。2.营养水平中消化能和粗蛋白为计算值，其余均为实测值。1.3饲养管理试验期60 d，其中预试期6 d，正式试验期54 d，于吉林省农业科学院畜牧兽医研究所试验基地进行。试验期间，试验猪在同一饲养环境下饲养，自由采食和饮水，严格按照猪场管理方式进行消毒和免疫。1.4样品采集试验最后1 d，对试验猪颈静脉穿刺采集血液，常温静置30 min，4 ℃、3 500 r/min离心15 min，血清分装至1.5 mL EP管中，置于-20 ℃保存。1.5测定指标及方法1.5.1生长性能正式试验第1 d和最后1 d，对试验猪进行称重，记录初重（IW）和末重（FW）数据，记录每天的饲料添加量和剩余量，计算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。ADG=(FW-IW)/试验天数(1)ADFI=(总添加量-总剩余量)/试验天数(2)F/G=ADFI/ADG(3)1.5.2血清免疫及生化指标免疫指标包括：免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）；生长激素指标包括：胰岛素生长因子-1（IGF-1）、生长激素（GH）、胰岛素（INS）、生长抑制素（SS）、三碘甲腺原氨酸（T3）和四碘甲腺原氨酸（T4），均采用上海泛柯实业有限公司试剂盒进行测定。血清生化指标包括：总蛋白（TP）、球蛋白（GLB）、白蛋白（ALB）、白蛋白/球蛋白（A/G）、尿素氮（BUN）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、血糖（GLU），使用中生北控生物科技有限公司试剂盒进行检测。抗氧化指标包括：过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px），使用南京建成生物工程研究所试剂盒，采用PUS-2018半自动生化分析仪（北京普朗新科技有限公司）和Multiskan FC酶标仪（赛默飞世尔中国）进行测定。1.6数据统计与分析试验数据采用Excel 2016和SPSS 26.0统计软件进行方差分析，LSD法进行组间差异显著性检验。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1发酵中草药副产物对松辽黑猪生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，试验Ⅰ组、试验Ⅲ组松辽黑猪的ADG分别提高了17.42%、24.69%（P0.05）。试验Ⅲ组松辽黑猪的ADG分别比试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅳ组提高了6.19%、20.43%、9.70%（P0.05）。与对照组相比，试验Ⅰ组、试验Ⅲ组松辽黑猪的F/G分别降低了5.05%、10.33%（P0.05），试验Ⅲ组松辽黑猪的F/G分别比试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅳ组降低了5.56%（P0.05）、14.64%（P0.05）、6.64%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.14.004.T002表2发酵中草药副产物对松辽黑猪生长性能的影响组别IW/(kg/头)FW/(kg/头)ADG/[g/(头·d)]ADFI/[kg/(头·d)]F/G对照组91.83±4.65121.77±4.38554.45±6.37c2.52±0.104.55±0.05ab试验Ⅰ组92.33±5.51127.49±4.39651.08±21.98b2.37±0.284.32±0.14cd试验Ⅱ组96.17±4.31127.17±5.01574.07±16.04bc2.74±0.034.78±0.13a试验Ⅲ组92.33±4.04129.67±4.38691.36±7.01a2.48±0.144.08±0.04d试验Ⅳ组96.57±2.76130.60±4.27630.25±21.98b2.75±0.044.37±0.22bc注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表3、表4、表6与此同。2.2发酵中草药副产物对松辽黑猪血清免疫指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，试验Ⅲ组和试验Ⅰ组松辽黑猪血清IgA含量分别增加了5.30%、13.49%，试验Ⅲ组松辽黑猪血清IgM含量增加了7.43%（P0.05）。试验Ⅳ组松辽黑猪血清IgM含量显著低于对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅲ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.14.004.T003表3发酵中草药副产物对松辽黑猪血清免疫指标的影响组别IgA/(mg/L)IgG/(g/L)IgM/(g/L)对照组106.43±4.43ab3.78±0.182.69±0.20ab试验Ⅰ组120.79±7.35a3.64±0.742.52±0.20ab试验Ⅱ组66.84±5.19b2.63±0.302.28±0.01bc试验Ⅲ组112.07±44.59ab2.97±0.182.89±0.40a试验Ⅳ组83.50±9.25ab2.43±0.961.77±0.05c2.3发酵中草药副产物对松辽黑猪血清生长激素的影响（见表4）由表4可知，试验Ⅲ组松辽黑猪血清IGF-1含量分别比对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅳ组增加了14.00%、13.45%、25.11%、24.04%（P0.05）；试验Ⅰ组和试验Ⅲ组松辽黑猪血清T3含量分别比对照组增加了22.83%（P0.05）、38.19%（P0.05）；且试验Ⅲ组T3含量显著高于试验Ⅱ组和试验Ⅳ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.14.004.T004表4发酵中草药副产物对松辽黑猪血清生长激素分泌的影响组别GH/(μg/L)INS/(mIU/L)IGF-1/(μg/L)SS/(μg/L)T3/(μg/L)T4/(μg/L)对照组3.06±1.596.57±1.20145.60±4.65b4.17±0.625.08±0.03bc106.55±19.37试验Ⅰ组3.75±0.556.20±0.09146.31±10.18b4.39±0.026.24±0.80ab139.05±2.40试验Ⅱ组5.22±2.205.37±0.14132.68±7.60b4.16±0.874.65±0.77bc123.77±12.75试验Ⅲ组3.82±0.135.40±0.47165.99±6.10a4.75±1.897.02±0.53a136.03±28.41试验Ⅳ组3.68±0.155.98±0.47133.82±2.99b3.35±1.144.05±0.96c98.00±15.632.4发酵中草药副产物对松辽黑猪血清生化指标的影响（见表5）由表5可知，试验Ⅱ组松辽黑猪血清BUN含量显著高于其他组（P0.05）。与对照组相比，试验Ⅲ组中松辽黑猪血清TP、GLU含量均有上升趋势（P0.05），分别增加了15.05%、19.49%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.14.004.T005表5发酵中草药副产物对松辽黑猪血清生化指标的影响项目对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组试验Ⅲ组试验Ⅳ组ALT/(μmol/L)129.61±4.74127.44±2.93126.99±1.76128.23±10.54123.78±6.85AST/(μmol/L)79.64±4.9987.16±7.5187.46±9.7377.65±7.2487.40±12.38ALP/(mmol/L)4.05±2.213.15±0.443.64±0.073.49±0.193.61±0.46TP/(g/L)37.22±8.2242.59±0.8143.20±2.4842.81±6.8344.81±5.70ALB/(g/L)39.77±4.1935.28±0.5938.89±3.0834.40±4.0837.01±4.70GLB/(g/L)10.69±5.8313.20±2.1416.30±5.1313.28±0.3419.80±11.03A/G5.07±3.762.72±0.482.26±0.572.59±0.282.86±0.22BUN/(g/L)0.46±0.04b0.55±0.09b0.80±0.05a0.41±0.07b0.45±0.12bGLU/(g/L)1.18±0.261.26±0.031.21±0.371.41±0.401.21±0.24TC/(mmol/L)2.08±0.022.08±0.352.34±0.132.14±0.412.59±0.61TG/(g/L)0.35±0.030.46±0.040.45±0.040.39±0.070.43±0.13HDL-C/(g/L)2.27±0.212.33±0.052.85±0.532.59±0.413.05±0.06LDL-C/(g/L)1.39±0.671.64±0.101.73±0.002.80±1.883.06±1.20注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。2.5发酵中草药副产物对松辽黑猪血清抗氧化能力的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，试验Ⅲ组松辽黑猪血清MDA含量降低了50.76%（P0.05），试验Ⅲ组松辽黑猪血清MDA显著低于其他组（P0.05），试验Ⅲ组松辽黑猪血清GSH-Px活性比对照组提高了14.07%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.14.004.T006表6发酵中草药副产物对松辽黑猪血清抗氧化能力的影响组别T-AOC/(mmol/L)SOD/(U/mL)MDA/(μmol/L)GSH-Px/(U/mL)CAT/(mmol/L)对照组0.07±0.0233.59±2.931.32±0.20a135.39±28.518.90±0.45试验Ⅰ组0.05±0.0136.16±1.451.00±0.08a137.79±9.408.63±0.56试验Ⅱ组0.05±0.0137.68±3.851.07±0.10a82.25±94.298.68±0.51试验Ⅲ组0.06±0.0332.97±8.040.65±0.01b154.45±51.589.48±1.62试验Ⅳ组0.05±0.0139.17±5.031.11±0.16a81.05±40.919.38±0.553讨论3.1发酵中草药副产物对松辽黑猪生长性能的影响生长性能是生猪养殖生产的重要指标之一，与经济效益密切相关。矫松君等[4]研究表明，添加啤酒酵母菌发酵中草药，育肥猪的ADG比对照组提高了6.52%。王坤丽[5]研究发现，利用益生菌发酵清瘟败毒散可提高仔猪的ADFI和ADG。本试验表明，发酵中草药副产物能够显著提高育肥期松辽黑猪的ADG，降低了F/G，3%添加量对育肥猪生长性能的改善更明显，与Song等[6]关于在日粮中添加发酵的平菇副产物提高了育肥期巴克夏猪的ADG和饲料转化率的研究结论一致。中草药副产物中含有大量可改善动物生长性能和提高免疫力的生物活性物质，如总黄酮、粗多糖、皂苷及生物碱等，利用发酵技术能够充分利用中草药中的有效成分，从而改善动物的生产性能、免疫力及抗氧化的能力[7-8]。研究表明，发酵饲料口感芳香，适口性强，可促进猪对营养物质的吸收和消化[9]，从而提高育肥猪的生长性能。3.2发酵中草药副产物对松辽黑猪免疫指标的影响血清免疫球蛋白在体液免疫中具有重要作用，其含量可判断机体对病原体侵袭的抵抗力[10]。机体血液中含有较多IgG、IgA、IgM，具有结合抗原发挥免疫作用、调节机体免疫力的功能。武洪志等[11]发现，发酵复方中草药能够大幅提升仔猪血清中免疫球蛋白的含量。郭建来等[12]发现，使用1.0%发酵复方党参可以提高断奶仔猪血清IgA的含量。本试验表明，与对照组相比，添加发酵中草药副产物组松辽黑猪血清IgA含量均有提高，其中3%添加量对IgM也有提升效果。赵彧等[13]研究发现，复方4味组方药材（人参、黄芪、黄精、枸杞）提取物可显著提高小鼠血清IgA、IgM和溶血素的含量。姚莉媛[14]研究报道，在基础日粮中添加400 mg/kg的人参复合多糖可显著提高母猪泌乳第3 d的IgA的表达水平。本试验发酵中草药副产物包含人参茎叶，推测人参中含有提升机体免疫水平的有效成分，其机制有待进一步研究。3.3发酵中草药副产物对松辽黑猪生长激素的影响IGF-1是一种与胰岛素原结构高度同源的多肽，在细胞的分化、增殖及个体的生长发育中具有重要作用[15]。T3能够结合甲状腺激素核受体，调节基因的表达，维持细胞正常生长、分化和代谢[16]。杨濛等[17]发现，0.5%富锗发酵中药制剂能够大幅度提升育肥猪血清中TP、IGF-1、T3、IgM、IgA的含量。张泰等[18]将3种不同的益生菌与中药制剂一起应用于断奶仔猪的饲养中，发现断奶仔猪血清T3含量远高于对照组。本试验表明，在日粮中添加发酵的中草药副产物能够显著提高育肥期松辽黑猪IGF-1和T3的分泌水平，3%添加量的提升效果更为显著。王丹晖等[19]研究表明，日粮中添加甘草多糖显著提高了肉鸡IGF-1基因的相对表达量。曹礼静等[20]研究发现，自拟中药复方（黄芪等）显著提高了仔兔血清中T3和T4的含量。甘草多糖是从豆科甘草属甘草[21]根与茎中提取的一种α-D-吡喃多糖[22]。因此在日粮中添加发酵的中草药副产物能够有效提升机体激素的分泌水平。3.4发酵中草药副产物对松辽黑猪血清生化指标的影响血清中各种酶和蛋白含量能够反映动物机体的健康。如可通过测定犊牛的血清TP含量判断被动免疫建立的情况[23]。BUN是机体蛋白质代谢终产物，与机体肾功能的健康状况密切相关[24]。李园园等[25]研究表明，日粮中添加发酵苹果渣和中草药显著提升了鹌鹑血清TP含量。邹志恒等[26]发现，0.4%复方中草药可显著减少断奶仔猪血清中的BUN含量。本试验表明，与对照组相比试验Ⅲ组（3%添加量）中松辽黑猪TP、GLU含量均有上升趋势，分别提高了15.05%、19.49%。王国贵等[27]研究报道，添加2%中草药的试验组山羊的平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白含量等均出现显著变化，当添加量达到3%时，出现显著变化的血常规指标增多，表明发酵产物的添加量也是影响机体健康的一个重要因素。3.5发酵中草药副产物对松辽黑猪血清抗氧化能力的影响动物生长发育过程中，应激反应是影响机体健康和生产性能的重要因素之一，会破坏机体氧化还原系统的平衡，引起应激损伤[28]。MDA能够破坏脂质和蛋白质原有的结构和功能，导致细胞突变或死亡，其水平反映了膜脂和机体氧化的程度[29]。GSH-Px是清除体内有机氢过氧化物的关键酶，能够有效抑制有机氢过氧化物对动物机体的伤害[30]。何维敏等[31]发现，枯草芽孢杆菌发酵中草药可显著降低断奶仔猪血清MDA的含量。本试验表明，添加发酵中草药副产物能够显著降低育肥期松辽黑猪体内MDA含量，与1%添加量相比，3%添加量对MDA的影响更明显，同时3%添加量组松辽黑猪血清GSH-Px活性上升了14.07%。中草药提高动物机体的抗氧化功能主要是由于其富含多糖、黄酮、多酚等具有抗氧化功能的活性物质，动物采食后，调节了机体的氧化还原系统，增强了机体的抗氧化能力。4结论本研究结果表明，在松辽黑猪育肥期日粮中添加3%以人参茎叶、玉竹、刺五加茶渣、灵芝子实体、黄芪、猪苓和甘草为原料的发酵中草药副产物，能够提高机体抗氧化能力和免疫水平，促进生长类激素的分泌水平，提高育肥猪的生长性能。