植物精油是植物次生代谢的混合物，通常采用蒸馏、萃取等方式获得的挥发性芳香物质[1]。植物精油具有促进动物生长、抗氧化、抗应激等功能[2]，安全性较高，可以作为抗生素替代品在水产动物生产中应用[3-4]。近年来，关于植物精油作为鱼类安全饲料添加剂的研究较多[5-7]。植物精油作为功能性膳食补充剂可以促进鱼类生长[8-9]。王猛强等[10]研究发现，饲料中添加0.02%的植物精油能够提高凡纳滨对虾的生长性能。刘明阳[11]发现，在饲料中添加茶树精油降低了罗氏沼虾血液中谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性，提高了总蛋白、白蛋白水平和超氧化物歧化酶活性。钱希逸等[12]研究发现，丁酸钠植物精油复合制剂可以降低南美白对虾的饲料系数，提高对虾的存活率，抑制病原菌，增强对虾非特异性免疫力，降低对虾病害的发生率。鲤鱼是重要的养殖鱼类之一[13]。我国北方地区养殖鲤鱼多采取池塘养殖模式[14-15]。但集约化饲养条件下会导致各种应激产生，直接影响鱼类的生长速度和健康状况[16]。目前，关于植物精油对鲤鱼生长和免疫的研究报道较少。因此，本试验探讨饲料中添加复合植物精油对鲤鱼生长、免疫功能的影响，为复合植物精油在鱼类养殖中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验用鲤鱼由辽宁营口杨屯孙传利养鱼场提供。复合植物精油由辽宁菲迪饲料科技有限公司提供，为混合型饲料添加剂，主要成分为香芹酚、百里香氛、丁香酚、肉桂醛。其中，香芹酚≥5.0%，百里香氛≥5.0%，丁香酚≥2.5%，肉桂醛≥5.0%，水分≤10.0%。1.2试验设计试验选取360尾体重（182.61±3.01）g、体长（21.90±0.60）cm的健康鲤鱼，随机分为4组，每组3个重复，每个重复30尾鲤鱼。对照组、试验1组、试验2组和试验3组鲤鱼分别饲喂含有0、100、200、400 mg/kg复合植物精油的配合饲料。饲料为通威股份有限公司沈阳分公司生产的鲤鱼膨化配合饲料。基础饲料组成及营养水平见表1。预试期14 d，正式试验期45 d。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.14.010.T001表1基础饲料组成及营养水平原料组成含量营养水平合计100.00豆粕（43%）33.00粗蛋白36.90米糠20.00粗脂肪8.50面粉16.67粗灰分1.50玉米DDGS10.00粗纤维6.20鱼粉5.00水分8.50鸡肉粉5.00钙1.00玉米蛋白粉4.00总磷1.80豆油2.50赖氨酸1.77磷酸二氢钙2.00蛋氨酸0.65食盐0.30氯化胆碱（60%）0.20预混料1.00L-赖氨酸盐酸盐0.20DL-蛋氨酸0.10乙氧基喹啉粉剂0.03注：1.每千克预混料为饲料提供：Fe 50 g、Cu 3 g、Co 0.01 g、Mn 20 g、Zn 30 g、I 0.1 g、Se 0.01 g、VA 100 000 IU、VE 10 000 IU、VK 200 mg、VB1 400 mg、VB2 400 mg、VB3 2 000 mg、VB6 400 mg、叶酸100 mg、VC 4 000 mg、VB12 0.4 mg、泛酸1 000 mg、生物素2 mg。2.营养水平均为实测值。%1.3饲养管理试验前，为适应试验饲料及水域环境，对试验鲤鱼进行14 d的集中驯化。试验开始时，将鱼称重分组，调整鱼体质量至各组间无显著差异（P0.05）。鲤鱼分别饲养于12个网箱，每个网箱放置30尾，共360尾。网箱置于水深3 m左右的池塘内。分别于每日8：00、16：00进行投喂。投喂时少量缓慢投放饲料，保证饲料吃完再投放剩余饲料，减少饲料漂浮时间，每日投喂量为鱼体重的2%~3%。观察并记录试验鱼的摄食和活动情况。试验期间增氧机24 h充氧，保证溶氧量大于5 mg/L，pH值为6.5~7.0，温度为22~26 ℃，氨氮含量不超过0.5 mg/L，亚硝酸含量小于0.1 mg/L。在试验过程中，不定期清洗网箱，以消除外界因素对试验结果的干扰。1.4样品采集养殖试验结束后，将试验鱼饥饿24 h，称每笼试验鱼的总重量并计数。每网箱随机捞取5尾鱼，进行采样。每组测量5尾鲤鱼的体重、体长。用纱布包裹鱼体拭干表面水分，1 mL注射器从尾静脉采血，解剖，分离肝胰脏和内脏，称重。采集的血液于4 ℃冰箱中凝血12 h，收集血清。将每个重复的5尾鲤鱼的血清组合成1个样品，平均分成3个离心管，置于-20 ℃冰箱中，检测相关免疫指标。1.5测定指标及方法1.5.1生长性能增重率(WGR)=(末重-初重)/初重×100% (1)特定生长率(SGR)=(ln末重-ln初重)/试验天数×100%(2)饲料系数(FCR)=摄食量/(末重-初重)(3)肥满度(CF)=体重/体长3×100(4)肝体比(HSI)=肝脏重/鱼体重×100%(5)脏体比(VSI)=内脏重/鱼体重×100%(6)存活率(SR)＝(初始鱼尾数-终末鱼尾数)/初始鱼尾数×100%(7)1.5.2非特异性免疫指标采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定血清中的总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）含量以及总超氧化物歧化酶（T-SOD）、溶菌酶（LZM）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）、谷草转氨酶（AST）活性。试验操作严格按照说明书进行。1.6数据统计与分析数据使用Excel软件进行统计，SPSS 26软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1复合植物精油对鲤鱼生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，各试验组鲤鱼的终末体长、末重、WGR和SGR显著提高（P0.05），饲料系数显著降低（P0.05）。试验2组和试验3组鲤鱼肝脏重显著高于试验1组与对照组（P0.05），内脏重显著高于对照组（P0.05）。各组鲤鱼CF随着饲料中复合植物精油添加剂量增加呈现上升趋势（P0.05）。饲料中复合植物精油水平对鲤鱼成活率无显著影响（P0.05），均为100%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.14.010.T002表2复合植物精油对鲤鱼生长性能的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组初重/g182.36±2.87183.05±3.18182.73±3.44182.64±3.01初始体长/cm21.83±0.4921.82±0.6821.91±0.5522.40±0.69终末体长/cm23.92±0.32a24.78±0.43b26.31±0.94c28.08±0.60d末重/g236.52±11.61a266.81±14.16b321.70±13.14c401.57±27.48d肝脏重/g8.31±1.18a8.39±2.06a11.15±1.16b14.33±1.57c内脏重/g15.07±1.50a16.01±2.96ab18.07±2.19b25.62±3.73cWGR/%29.72±6.87a45.81±8.39b76.45±6.41c119.85±15.71dSGR/(%/d)0.57±0.11a0.83±0.13b1.26±0.08c1.75±0.16dFCR/%2.18±0.55c2.01±0.51b1.86±0.19a1.87±0.29aHSI/%3.52±0.533.15±0.763.47±0.323.57±0.33VSI/%6.38±0.695.99±1.035.61±0.606.38±0.82CF/(g/cm3)1.73±0.051.75±0.031.77±0.211.81±0.02SR/%100100100100注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。2.2复合植物精油对鲤鱼免疫指标的影响（见表3）由表3可知，试验3组鲤鱼血清中TP含量最高，显著高于对照组（P0.05）。随着复合植物精油含量的增加，血清中ALB含量呈现逐渐升高的趋势，试验2组鲤鱼血清中ALB含量显著高于对照组（P0.05），试验3组血清中ALB含量显著高于其他组（P0.05）。试验2组鲤鱼血清LZM活性最高，比对照组高14.28%。试验3组鲤鱼血清AKP和AST活性显著高于对照组（P0.05）。各组鲤鱼血清中ACP活性随着复合植物精油水平的增高呈现先下降后上升的趋势（P0.05）。鲤鱼血清T-SOD活性随着饲料中植物精油水平的增高呈现先增高后降低的趋势，试验2组鲤鱼血清T-SOD活性显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.14.010.T003表3复合植物精油对鲤鱼免疫指标的影响组别TP/(g/L)ALB/(g/L)LZM/(U/mL)AKP/(金氏单位/100 mL)ACP/(金氏单位/100 mL)AST/(U/L)T-SOD/(U/mL)对照组32.13±4.55a10.33±0.17a116.67±14.431.89±0.13a368.83±73.996.01±2.03a305.17±54.69a试验1组33.85±2.72ab11.07±0.64ab116.67±28.871.97±0.26a333.65±131.476.37±1.79a373.85±49.99ab试验2组36.26±2.58ab12.03±0.92b133.33±14.432.30±0.37ab247.82±93.126.62±0.30a402.19±17.94b试验3组39.83±1.98b13.45±0.79c116.67±38.192.73±0.29b282.99±203.4511.15±1.79b362.05±34.37ab注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。3讨论3.1复合植物精油对鲤鱼生长性能的影响水生动物摄食主要依赖其灵敏的味觉系统和嗅觉系统。在饲料中添加植物精油会散发出强烈的香气，有利于增强水生动物的摄食行为[17]，也可以通过增加蛋白质合成促进消化酶的分泌，提高消化功能[1]，抑制动物肠道病原菌生长，提高胃肠道消化酶的活性，增加机体对营养物质的吸收和利用[18]。Hassaan等[19]研究发现，添加茴香精油和大蒜精油可以提高尼罗罗非鱼的存活率、体增重和SGR。Salem等[20]研究发现，饲料中添加白芥子油，虹鳟鱼幼鱼的末重、增重和SGR均显著提高。Zaminhan-Hassemer等[21]发现，添加3.3 g/kg香芬芹+百里香酚+肉桂醛酸复合精油尼罗罗非鱼幼鱼的生长性能显著高于对照组。Magouz等[22]研究表明，添加0.22%~0.30%薄荷精油可提高尼罗罗非鱼的生长性能、蛋白酶活性、免疫力、抗氧化和抗氨暴露能力。Nguyen等[23]在鲤鱼饲料中添加8%山苍子叶粉末，饲喂21 d，发现鲤鱼体重增加88.2%，特定生长率由0.56%升至0.99%，饲料系数由4.70降至2.48。本试验发现，试验各组鲤鱼的末重、WGR和SGR均显著高于对照组，FCR显著降低，其中试验3组鲤鱼WGR和SGR增加最大。3.2复合植物精油对鲤鱼免疫功能的影响血清生化指标可以反映动物机体营养水平、代谢状况、健康状况、生长发育水平和速度[24]。植物提取物富含酚类、多酚类、生物碱、醌、萜类、凝集素和多肽化合物等，可作为调节免疫反应的免疫增强剂预防和控制鱼类疾病[25]。免疫增强剂可通过增强非特异性防御机制中物质的活性，加强体液和细胞防御机制增强对传染病的抵抗力[26]。Yousefi等[27]研究发现，迷迭香叶粉组鲤鱼的血浆总蛋白、白蛋白、球蛋白、溶菌酶指标显著升高，过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性显著高于对照组；口服迷迭香叶粉可以提高抗氧化和免疫功能，减轻拥挤胁迫对鲤鱼幼鱼的负面影响。Ebrahimi等[28]研究发现，在饲料中添加0.01%、0.10%和1.00%的迷迭香精油，大鲟鱼幼鱼血清中总蛋白和白蛋白含量均显著升高，葡萄糖、肝酶和血红蛋白含量均显著降低。Zhang等[29]研究表明，添加牛至精油可提高鲤鱼LZM和SOD活性，增强鲤鱼抗病性。本试验发现，随着饲料中复合植物精油含量增加，鲤鱼血清中TP、ALB含量及AKP、AST活性显著升高，T-SOD活性呈先增高后降低的趋势，试验2组LZM活性最高，与上述研究结果一致。4结论本试验发现，随着饲料中复合植物精油含量的增加，鲤鱼血清中TP、ALB含量显著升高，T-SOD活性呈现出先增高后降低的趋势。饲料中添加400 mg/kg植物精油时，AKP和AST活性增高，表明出现肝损伤。因此，饲料中添加200 mg/kg复合植物精油能够提高鲤鱼生长性能，改善血液参数，增强抗氧化能力和免疫能力。