近年来，抗生素污染问题愈发严重[1]，人们开始使用中草药替换抗生素[2]。中草药主要由植物药（根、茎、叶、果）、动物药（内脏、皮、骨、器官等）和矿物药组成，含有多糖、挥发油、生物碱、甙类等化合物，调节机体的免疫力[3]。近年来，中草药在养殖动物的疾病预防工作中取得不错的进展，包括在牛[4]、鸡[5]、猪[6]养殖中的应用。青黛复方制剂“黛青粉”含有4味中药：青黛、大青叶、黄芪、板蓝根，添加于日粮中可刺激香猪的天然免疫和特异性免疫系统的应答，促进抗原诱导的干扰素-α（IFN-α）、干扰素-γ（IFN-γ）表达[7]。4种组分单独应用时，青黛可促进白细胞介素-10（IL-10）和白细胞介素-22（IL-22）的释放[8]。大青叶可刺激Con A活化T淋巴细胞分泌白细胞介素-2（IL-2），促进辅助T细胞的增殖和分化[9]。黄芪具有抗菌消炎、调节免疫、解毒等功效[10]。板蓝根对病毒感染性疾病具有良好的效果，同时还具有免疫调节作用[11]。然而，青黛复方制剂的活性成分、作用靶点及其作用机制不清楚。本研究基于网络药理学和分子对接技术，利用TCMSP、Unioprt、GeneCards、Drugbank、AutoDock、PyMol等软件，挖掘青黛复方制剂提高育肥猪免疫力的分子机制，为中草药在畜牧养殖行业中的应用提供参考。1材料与方法1.1青黛复方制剂中的活性成分筛选利用Tcmsp数据库（http://tcmspw.com/），检索青黛复方制剂中所有药物组分的活性成分，并根据口服生物利用度（oralbioavailability，OB）及类药性（drug like，DL）为指标进一步筛选各药物中的有效活性成分。从Tcmsp数据库和tcmid数据库（http://www.megabionet.org/tcmid/）中检索并下载青黛复方制剂的靶点蛋白。基于Uniport数据库（https://www.uniprot.org/）获得青黛复方制剂靶蛋白对应的靶基因。1.2“成分-靶基因”网络的构建与分析为进一步确定青黛复方制剂增强免疫力的分子机制，将上述获得的有效活性成分及其对应的靶基因进行关联。使用Cytoscape 3.9.1[12]生成子活性成分-靶基因途径网络（图中以“节点”代表基因和活性成分，以“边”代表活性成分-靶基因的相互作用），根据活性化合物对应的基因数量（Degree值）筛选出药物的主要活性成分。1.3免疫力相关靶基因数据构建以“immunity”为关键词，从数据库GeneCards（https://www.genecards.org/）、Drugbank[13]（https://www.drugbank.ca/）、Omim（https://www.omim.org/）收集人免疫相关的所有受体和基因信息。通过Gprofiler（https://biit.cs.ut.ee/gprofiler/orth）平台进行人-猪同源基因转换，获得猪的免疫力相关基因。将免疫相关基因与药物的靶基因取交集，绘制韦恩图，获得药物作用的免疫相关靶基因。1.4“免疫-成分”共同靶基因的PPI网络分析利用String数据库针对上述筛选的青黛复方制剂作用的免疫力基因构建PPI网络。将参数设为中等置信值（0.400），将String数据库的PPI网络导入Cytoscape中，进行可视化。1.5“免疫-成分”共同靶基因GO分析与KEGG分析为探究药物靶点蛋白的信号转导途径与功能，从生物学过程、细胞成分、分子功能和关键信号通路等方面揭示潜在作用机制，以P0.05筛选GO[14]功能条目，将筛选得到的青黛复方制剂与免疫相关的靶基因导入David（http://david.abcc.ncifcrf.gov/）数据库，通过输入靶基因名称列表，选择限定物种为猪，进行GO分析和KEGG信号通路富集分析，利用R软件选取P0.05以及Count≥2的条目，进行后续的可视化分析。1.6“核心靶基因-成分-通路”网络分析将10个有效活性成分、核心靶基因及其相关通路，使用Cytoscape 3.9.1[12]生成“活性成分-核心靶基因-信号通路”网络，通过网络图分析青黛复方制剂作用的主要免疫通路。1.7分子对接验证将青黛复方制剂10个有效活性成分中排名前5位的有效活性成分与PPI蛋白网络中得到的核心蛋白进行分子对接验证，从Pdb（https://www.rcsb.org/）数据库中下载蛋白质的pdb文件，从Pubchem数据库下载活性成分的sdf文件。用PyMol 2.5.4软件将活性成分的sdf文件转化为pdb文件，并对蛋白质进行初步的去水、加氢、去配体。用AutoDock计算活性成分与靶点蛋白的结合能，据得分筛选出最优的结合模式，将结果保存为pdbqt文件，通过PyMol软件对分析结果进行可视化。2结果与分析2.1青黛复方制剂活性成分的筛选通过Tcmsp数据库，得出青黛复方制剂共包含330个药物活性成分，其中青黛29个、大青叶45个、黄芪87个、板蓝根169个。以OB值≥30%，DL值≥0.18为阈值，去重后筛选出有效成分62个，其中青黛9个、大青叶10个、黄芪20个、板蓝根39个。青黛复方制剂有效活性成分信息见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.011.T001表1青黛复方制剂有效活性成分信息序号Mol ID分子名称分子质量（MW）OB/%DL1MOL002322isovitexin432.4131.290.722MOL011105indican295.3234.900.233MOL000358beta-sitosterol414.7936.910.754MOL001781indigo262.2838.200.265MOL0018106-(3-oxoindolin-2-ylidene) indolo [2, 1-b]quinazolin-12-one363.3945.280.896MOL002309indirubin262.2848.590.267MOL01133210H-indolo, [3, 2-b], quinoline218.2754.570.228MOL011335isoindigo262.2894.300.269MOL001771poriferast-5-en-3beta-ol414.7936.910.7510MOL002308indicaxanthin308.3231.790.2211MOL002311glycyrol366.3990.780.6712MOL002318C05837448.5266.020.4813MOL002320γ-sitosterol414.7936.910.7514MOL000211mairin456.7855.380.7815MOL000239jaranol314.3150.830.2916MOL000296hederagenin414.7936.910.7517MOL000033(3S, 8S, 9S, 10R, 13R, 14S, 17R)-10, 13-dimethyl-17-[(2R, 5S)-5-propan-2-yloctan-2-yl]-2, 3, 4, 7, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 16, 17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol428.8236.230.7818MOL000354isorhamnetin316.2849.600.3119MOL0003713, 9-di-O-methylnissolin314.3653.740.4820MOL0003787-O-methylisomucronulatol316.3874.690.321MOL0003799, 10-dimethoxypterocarpan-3-O-β-D-glucoside462.4936.740.9222MOL000380(6aR, 11aR)-9, 10-dimethoxy-6a, 11a-dihydro-6H-benzofurano[3, 2-c]chromen-3-ol300.3364.260.4223MOL000387bifendate418.3831.100.6724MOL000392formononetin268.2869.670.2125MOL000417calycosin284.2847.750.2426MOL000422kaempferol286.2541.880.2427MOL000433FA441.4568.960.7128MOL000439isomucronulatol-7, 2'-di-O-glucosiole626.6749.280.6229MOL0004421, 7-Dihydroxy-3, 9-dimethoxy pterocarpene314.3139.050.4830MOL000098quercetin302.2546.430.2831MOL001689acacetin284.2834.970.2432MOL001721isaindigodione326.3860.120.4133MOL0017222-O-beta-D-glucopyranosyl-2H-1, 4-benzoxazin-3(4H)-one327.3243.620.3134MOL001726pinoresinol-4-O-beta-D-apiosyl-beta-D-glucopyranoside618.7436.450.5135MOL0017283-[2'-(5'-hydroxymethyl) furyl]-1(2H)-isoquinolinone-7-O-beta-D-glucoside_qt257.2651.740.1836MOL001733eupatorin344.3430.230.3737MOL0017343-[[(2R, 3R, 5R, 6S)-3, 5-dihydroxy-6-(1H-indol-3-yloxy)-4-oxooxan-2-yl]methoxy]-3-oxopropanoic acid379.3585.870.4738MOL001735dinatin300.2830.970.2739MOL001736(-)-taxifolin304.2760.510.2740MOL001749ZINC03860434390.6243.590.3541MOL001750glucobrassicin448.5266.020.4842MOL00175524-ethylcholest-4-en-3-one412.7736.080.7643MOL001756quindoline218.2733.170.22续表1　青黛复方制剂有效活性成分信息10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.011.T002序号Mol ID分子名称分子质量（MW）OB/%DL44MOL001767hydroxyindirubin278.2863.370.3045MOL001774ineketone318.5037.140.3046MOL001779sinoacutine327.4149.110.4647MOL001782(2Z)-2-(2-oxoindolin-3-ylidene)indolin-3-one262.2848.400.2648MOL0017832-(9-((3-methyl-2-oxopent-3-en-1-yl)oxy)-2-oxo-1, 2, 8, 9-tetrahydrofuro[2, 3-h]quinolin-8-yl)propan-2-yl acetate399.4864.000.5749MOL001790linarin592.6039.840.7150MOL001792DFV256.2732.760.1851MOL001793(E)-2-[(3-indole)cyanomethylene-]-3-indolinone300.3654.590.3252MOL001798neohesperidin_qt302.3071.170.2753MOL001800rosasterol414.7935.870.7554MOL001803sinensetin372.4050.560.4555MOL001804stigmasta-5, 22-diene-3beta, 7alpha-diol440.8343.040.8256MOL001814(E)-3-(3, 5-dimethoxy-4-hydroxy-benzylidene)-2-indolinone297.3357.180.2557MOL001820(E)-3-(3, 5-dimethoxy-4-hydroxyb-enzylidene)-2-indolinone299.3565.170.2558MOL0018283-[(3, 5-dimethoxy-4-oxo-1-cyclohexa-2, 5-dienylidene)methyl]-2, 4-dihydro-1H-pyrrolo[2, 1-b]quinazolin-9-one350.4051.840.5659MOL001833glucobrassicin-1-Sulfonate_qt365.4242.520.2460MOL000359sitosterol414.7936.910.7561MOL000449stigmasterol412.7743.830.7662MOL000953CLR386.7337.870.682.2“成分-靶基因”网络经Tcmsp和Tcmid数据库分析，得到74个青黛复方制剂的有效活性成分的相关潜在靶蛋白，运用Uniport数据库获得这些靶蛋白对应的靶基因集（74个）。为筛选青黛复方制剂主要的有效活性成分，将有效化合物及其对应的靶基因导入Cytoscape 3.9.1进行可视化，生成90个节点、275条边的“活性成分-靶基因”相互作用网络（见图1）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.011.F001图1青黛复方制剂“活性成分-靶基因”网络以网络图的Degree值≥15为条件，筛选出10个主要的活性化合物：β-谷甾醇、豆甾醇、常春藤皂苷元、山柰酚、异牡荆素、9, 10-二甲氧基-6a, 11a-二氢-6H-苯并呋喃[3, 2-c]噻吩-3-醇、高车前素、尼森香豌豆紫檀酚、槲皮素、7-O-甲基-异微凸剑叶莎醇（见表2）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.011.T003表2青黛复方制剂的主要活性化合物活性化合物英文名称Degree值Betweenness值Closeness值来源β-谷甾醇beta-sitosterol151 731.3500.405青黛/大青叶/板蓝根豆甾醇stigmasterol121 672.0360.400板蓝根常春藤皂苷元hederagenin111 237.0700.330黄芪山柰酚kaempferol15975.9780.418黄芪异牡荆素isovitexin6816.2530.359青黛/大青叶/板蓝根9, 10-二甲氧基-6a, 11a-二氢-6H-苯并呋喃［3, 2-c］噻吩-3-醇（6aR, 11aR）-9, 10-dimethoxy-6a，11a-dihydro-6H-benzofurano［3, 2-c］chromen-3-ol15777.5240.395黄芪高车前素Dinatin16759.8490.407板蓝根尼森香豌豆紫檀酚3, 9-di-O-methylnissolin14735.5090.393黄芪槲皮素quercetin16702.9510.413黄芪7-O-甲基-异微凸剑叶莎醇7-O-methylisomucronulatol15676.1280.395黄芪2.3免疫力相关靶基因数据构建以“immunity”为关键词，从GeneCards数据库得到17 634个免疫相关基因[15]，自Omim数据库得到免疫相关基因106个，Drugbank数据库筛选出免疫相关基因28个。去重后得到14 001个与人免疫力相关的潜在靶基因，再通过Gprofiler（https://biit.cs.ut.ee/gprofiler/orth）数据库进行人-猪基因同源转换，获得猪免疫力相关基因14 065个。将表1中收集的青黛复方制剂的活性成分作用的靶基因（74个）与猪免疫力相关基因（14 065个）取交集并绘制Veen图，得到青黛复方制剂活性成分靶向的猪免疫基因64个（见图2）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.011.F002图2“免疫-成分”共同靶基因Venn图2.4活性成分靶向的猪免疫基因的PPI网络分析将64个活性成分靶向的猪免疫基因导入String数据库（https://www.string-db.org/），构建蛋白互作PPI网络，并分析主要目标网络。靶点蛋白互作的PPI网络见图3。PPI网络中的节点越大、颜色越红，此节点蛋白与其他节点蛋白的作用关系越丰富，重要性就越高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.011.F003图3靶点蛋白互作的PPI网络将String数据库生成的文件导入Cytoscape，生成相应的网络图，进一步利用CytoCNA内置模块生成主要目标网络，通过拓扑分析得到核心网络，筛选出药物作用的20个核心靶点蛋白（Degree18），包括TNF、ESR1、NOS3、HSP90AA1、PTGS2、PPARG、AR、HSP90AB1、SLC6A4、RELA、MAPK14、PGR、PRKACA、GSK3B、ESR2、IKBKB、NOS2、MET、CDK2、ADRB2（见图4）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.011.F004图4据Degree值筛选的核心靶点蛋白2.5靶基因的GO与KEGG通路分析将青黛复方制剂活性成分靶向的64个猪免疫基因导入David数据库，选择物种“Sus scrofa”进行GO分析。以P0.05为筛选条件，GO分析得到1 404条生物学过程（BP）、260条分子功能（MF）、87条细胞成分（CC）。与免疫相关的GO条目共41条，主要涉及参与炎症反应的细胞因子产生（cytokine production involved in inflammatory response）、细胞凋亡过程（apoptotic process）、白细胞介素-1介导的信号通路（interleukin-1-mediated signaling pathway）等（见表3）。以P＜0.05为筛选条件，KEGG富集分析获得103条信号通路，富集程度较高的免疫相关通路为：IL-17信号通路（IL-17 signaling pathway）、TNF信号传导途径（TNF signaling pathway）、NOD样受体信号传导途径（NOD-like receptor signaling pathway）以及C型凝集素受体信号传导途径（C-type lectin receptor signaling pathway）等（见表4）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.011.T004表3“免疫-成分”靶基因GO功能富集分析描述P值基因调节炎症反应中细胞因子的产生1.330×10-5ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001556ENSSSCG00000013252；ENSSSCG00000017755炎症反应的调节5.810×10-5ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001556ENSSSCG00000012981；ENSSSCG00000013252程序性细胞死亡7.890×10-5ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001701ENSSSCG00000002535；ENSSSCG00000004361防御反应的调节1.030×10-4ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001556ENSSSCG00000001701；ENSSSCG00000002535细胞凋亡过程2.240×10-4ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001701ENSSSCG00000002535；ENSSSCG00000004361对急性炎症反应的积极调节1.180×10-3ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000015579白细胞介素-1介导的信号通路0.003ENSSSCG00000007030；ENSSSCG00000012981对细胞因子产生的积极调节0.003ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001556ENSSSCG00000002535；ENSSSCG00000010629ENSSSCG00000012981；ENSSSCG00000017755对免疫系统过程的积极调节0.007ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001556ENSSSCG00000002535；ENSSSCG00000012981对细胞因子的反应0.007ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001556ENSSSCG00000001701；ENSSSCG00000007030白细胞介素-12的产生0.013ENSSSCG00000001556；ENSSSCG00000012981细胞因子介导的信号通路0.016ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001701ENSSSCG00000007030；ENSSSCG00000012981调节免疫系统过程0.017ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001556ENSSSCG00000001701；ENSSSCG00000002535ENSSSCG00000012981；ENSSSCG00000015770细胞对干扰素-γ的反应0.025ENSSSCG00000001701；ENSSSCG00000017755先天免疫反应0.026ENSSSCG00000001701；ENSSSCG00000002535；ENSSSCG00000012981；ENSSSCG00000017755激活先天免疫反应0.027ENSSSCG00000002535；ENSSSCG00000012981ENSSSCG00000025777对白细胞介素-6产生的正向调节0.029ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000017755凋亡信号通路0.035ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000011889ENSSSCG00000012371；ENSSSCG00000012981对活性氧反应的程序性细胞死亡0.038ENSSSCG00000024351先天免疫反应的积极调节0.047ENSSSCG00000002535；ENSSSCG00000012981ENSSSCG00000025777调节MAP激酶的活性0.048ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000010629ENSSSCG0000002727210.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.011.T005表4“免疫-成分”靶基因KEGG通路富集分析通路P值通路ID基因IL-17信号通路1.790×10-7ko04657ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001556ENSSSCG00000001701；ENSSSCG00000002535TNF信号通路1.390×10-4ko04668ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001556ENSSSCG00000007030；ENSSSCG00000012981NOD样受体信号通路6.140×10-4ko04621ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001556ENSSSCG00000001701；ENSSSCG00000002535C型凝集素受体信号通路1.100×10-3ko04625ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001556ENSSSCG00000007030；ENSSSCG00000012981RIG-I 样受体信号通路1.380×10-3ko04622ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001556ENSSSCG00000007030；ENSSSCG00000012981腺苷酸活化蛋白激酶信号通路3.560×10-3ko04010ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001556ENSSSCG00000007030；ENSSSCG00000012981T细胞受体信号通路3.740×10-3ko04660ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001556ENSSSCG00000007030；ENSSSCG00000011889NF-kappa B信号通路4.070×10-3ko04064ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000007030ENSSSCG00000010312；ENSSSCG00000012981Toll样受体信号通路5.320×10-3ko04620ENSSSCG00000001404；ENSSSCG00000001556ENSSSCG00000007030；ENSSSCG00000012981趋化因子信号通路6.460×10-3ko04062ENSSSCG00000007030；ENSSSCG00000011889ENSSSCG00000012981；ENSSSCG00000013771B细胞受体信号通路0.022ko04662ENSSSCG00000007030；ENSSSCG00000011889补体和凝血级联反应通路0.024ko04610ENSSSCG00000009558；ENSSSCG00000010312ENSSSCG00000013252；ENSSSCG000000295032.6“成分-靶点-通路”网络将20个核心靶基因及10个主要活性成分与免疫相关通路导入Cytoscape 3.9.1软件，得到“主要活性成分-核心靶基因-信号通路”网络（见图5）。由图5可知，从通路角度分析，连接度较高的通路为IL-17信号通路（ko04657）、NOD样受体信号通路（ko04621）、TNF信号通路（ko04668）等。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.011.F005图5青黛复方制剂“活性成分-靶基因-通路”网络注：菱形节点代表活性成分，六边形代表核心靶基因，圆形代表免疫通路。2.7分子对接的验证分析为验证靶点与活性成分间是否能有效结合，选择20个核心靶点中Degree值排名前五的靶点与其对应的主要活性成分进行分子对接结果见表5。结合能小于0说明配体与受体可以自发结合，结合能越小，结合能力越强[16]。由表5可知，各活性成分与靶蛋白的结合能均小于-4.45 kJ/mol，且均有氢键形成，表明蛋白靶点与对应活性成分具有较好的亲和力。将所有对接结果利用PyMOL软件进行可视化分析，结果见图6。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.011.T006表5主要活性成分与相关靶蛋白的分子对接结果活性成分中文名靶点结合能/(kJ/mol)氢键数目isovitexin异牡荆素TNF-6.7105beta-sitosterolβ-谷甾醇HSP90AA1-5.2301hederagenin常春藤皂苷元PGR-7.4802Stigmasterol豆甾醇PGR-8.6001Kaempferol山柰酚NOS3-7.4003isovitexin异牡荆素RELA-4.4502图6青黛复方制剂活性成分与靶点蛋白的最优结合模式10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.011.F6a110.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.011.F6a210.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.011.F6a33讨论抗生素广泛应用于人类和畜牧、水产等养殖业领域[17]，抗生素大量使用造成其在环境中不断残留累积，给自然环境和人类健康造成较大的威胁[18]。目前，中草药替代抗生素在养殖业中的应用是研究的热门方向[19]。本研究从青黛复方制剂中筛选出62个有助于提升猪免疫力的活性物质和64个该制剂靶向的猪免疫相关基因[20]。该复方制剂由4种药物组成（青黛、大青叶、黄芪、板蓝根），所有药物共有的成分有4个，分别是异牡荆素、β-谷甾醇、靛蓝、6-（3-氧代吲哚啉-2-亚基）吲哚[2,1-b]喹唑啉-12-酮）。靛玉红是青黛和大青叶的共有成分，慢性疾病的治疗中有重要作用，具有抗白血病、抗增殖和保护肝脏等作用，也是一种强效抗炎剂[21-22]。利用Cytoscape 3.9.1[23]分析活性成分-靶点相互作用网络，从中筛选出青黛复方制剂的主要活性化合物10个，其中β-谷甾醇来自青黛等草本植物，参与多个信号通路，如细胞周期、凋亡、增殖、抗炎、抗癌等[24]，甚至在治疗焦虑方面具有巨大潜力[25]，可应用于多种疾病的治疗[26]。豆甾醇可抑制软骨细胞中促炎因子以及细胞基质的降解[26]。常春藤皂苷元是抑癌剂，可干扰肺癌细胞的自噬、增强紫杉醇等抗癌药物的细胞毒性作用[27]。蛋白-蛋白互作（PPI）网络分析发现，TNF、ESR1、NOS3、HSP90AA1、PTGS2、PPARG、AR、HSP90AB1、SLC6A4、RELA、MAPK14、PGR、PRKACA、GSK3B、ESR2、IKBKB、NOS2、MET、CDK2、ADRB2等可能是青黛复方制剂发挥免疫作用的核心靶点[28]。“成分-靶点-通路”网络图结果表明，青黛复方制剂增强育肥猪免疫力的主要作用通路是IL-17信号通路（IL-17 signaling pathway）[29]、TNF信号传导途径（TNF signaling pathway）[30]以及NOD样受体信号传导途径（NOD-like receptor signaling pathway）[31]。研究表明，青黛复方制剂饲喂能降低香猪血清中细胞因子IL-2、IL-4、IFN-α的表达，但能够增强育肥猪免疫应答，提高抗原诱导的IFN-α、IFN-γ水平[7]。本研究应用网络药理学方法，得出青黛复方制剂中的β-谷甾醇、异牡荆素等活性物质可降低IL-2、IFN-α的表达，减少急性炎症对猪的机体损伤[32]，同时提高抗原诱导的IFN-α[33]、IFN-γ[34]表达量。由本文网络药理学和分子对接结果可知，来自青黛、大青叶、黄芪、板蓝根的10个主要活性成分与靶点HSP90、异牡荆素与靶点TNF和RELA均能够有效结合[35]。巨噬细胞/单核细胞产生的TNF是哺乳动物免疫反应的关键介质和调节因子[36]，也是主要的促炎症因子[37]；RELA是NF-κB家族的重要成员，NF-κB是调节炎症反应、影响先天性和适应性免疫反应的最重要的转录因子之一[38]。推测青黛复方制剂提高香猪对抗原的免疫应答可能是通过其中所含的β-谷甾醇、异牡荆素等有效成分，增强育肥猪的天然免疫和特异性免疫应答[39-40]。上述研究表明，青黛复方制剂借助多种有效活性成分，调节免疫相关基因表达，改善香猪免疫系统的功能。4结论本研究基于网络药理学原理构建青黛复方制剂的“成分-靶基因”网络图、蛋白-蛋白互作（PPI）网络关系，得出青黛复方制剂可能通过β-谷甾醇、豆甾醇、常春藤皂苷元、山柰酚、异牡荆素等活性物质作用于SLC6A4、ESR1、TNF、HSP90、RELA等核心靶基因，通过IL-17信号通路、TNF信号传导途径、NOD样受体信号传导途径、C型凝集素受体信号传导途径等调节细胞因子的表达，降低炎症对机体的损害作用，提高猪对病原的免疫应答能力。分子对接分析表明，青黛复方制剂的活性成分与靶蛋白能有效结合。上述研究结果可为中药增强机体免疫力的物质基础和作用机制等研究提供参考。