糜子（Panicum miliaceum L.）是禾本科黍属一年生禾谷类作物，是我国干旱、半干旱地区的主要粮食作物[1]，也是抗旱救灾、以秋补夏的小杂粮作物之一[2]。糜子营养价值丰富，含有丰富的脂肪、淀粉、蛋白质、活性物质、维生素和微量元素等[3]。中医学认为，糜子及其籽粒、皮壳、茎、叶和根均可入药，其味甘性寒，内服具有清热解毒、消暑利水、抗炎消肿、保肝明目、止泄泻、胃痛、美容、抗衰老等功效[4]，外用可治疗创伤、烧伤、疮疖痈疽等症[5]。研究发现，糜子中含有丰富的天然活性物质，如酚类物质、植酸等，这些活性物质具有降血糖、降血脂、抗氧化等功能[6-8]。糜子麸皮（俗称小米糠）是糜子加工中的副产品，约占糜子果实质量的20%，含有丰富的天然活性成分，如多酚类活性成分[9-11]、膳食纤维、矿物质和维生素等。目前国内对糜草秸秆中的活性成分鲜有报道。王振等[8]研究认为，糜子皮含有较为丰富的多酚，具有较强的抗氧化活性。谷糜草品质优良，可以作为粮饲兼用的多用途作物[12-13]。张嘉宾等[14]、王洋等[15]报道，添加不同植物乳酸菌均能够使苜蓿中黄酮提取率显著提高。关亚农[16]研究表明，糜草是马属动物和牛较好的饲草。为了充分利用糜草资源，提高糜草资源利用效率，本试验研究纤维素酶、乳酸菌等发酵后对糜草微贮营养成分、发酵品质及活性成分的影响，旨在为挖掘糜草利用潜力，提高糜草饲草品质。1材料与方法1.1试验材料糜草为市场销售的糜子收获种子后秸秆部分，自然晒干。添加剂：纤维素酶Ⅱ（酶活≥5 000 U/g），粉末状，购自沧州夏盛酶生物技术有限公司；青干贮专用复合酶，主要成分为纤维素酶（酶活≥5 000 U/g）、木聚糖酶（酶活≥50 000 U/g）、β-葡聚糖酶（酶活≥25 000 U/g）、酸性蛋白酶、中温α-淀粉酶、糖化酶、果胶酶、α-半乳糖苷酶、甘露聚糖酶等，购自沧州夏盛酶生物技术有限公司；复合乳酸菌（植物乳杆菌≥1.6×1010 CFU/g、布氏乳杆菌≥4×109 CFU/g）购自河南瑞森生物科技有限公司；瑞森青贮宝，主要由粪肠球菌、乳酸片球菌、植物乳杆菌、布氏乳杆菌等复合乳酸菌、纤维素酶、半纤维素酶、细菌促生长因子等组成，购自河南瑞森生物科技有限公司。1.2试验设计试验设计7组，每组3个重复，分别为青干贮专用复合酶组（FG，3 g/kg）、瑞森复合乳酸菌组（FR，3 g/kg）、纤维素酶组（XM，3 g/kg）、纤维素酶+复合乳酸菌组（XMR，纤维素酶3 g/kg+复合乳酸菌1 g/kg）、瑞森青贮宝组（MQ，3 g/kg）、青干贮专用复合酶+复合乳酸菌组（FGQ，复合酶3 g/kg、复合乳酸菌1 g/kg）、对照组（MCK）不添加任何菌剂。1.3糜草发酵方法将干糜草粉碎至2~4 cm，按照重量加入自来水，调节水分含量达到65%~70%，静置1 h，待秸秆完全浸湿。添加剂按产品推荐用量和方法，准确称量，用100 mL 40 ℃左右温水充分溶解，加入5 g红糖复活30 min，均匀撒在糜草原料上，搅拌均匀后装入广口瓶内，边装边压实，封口，编号。室温下放置60 d，采样进行测定分析。1.4测定指标及方法1.4.1活性成分多酚氧化酶活力值、总黄酮含量的检测由宁夏国检检测中心参考LS/T 6124—2017、DB 64/T 1082—2015方法进行检测。1.4.2水分、pH、有机酸pH值以及乳酸、有机酸（乙酸、丙酸、丁酸等）、氨态氮、总氮的含量的测定由宁夏昊标检测研究院依据相关方法协助完成，发酵品质评价参考刘建新等[17-18]的方法。1.4.3营养成分糜草原样和发酵糜草干物质（DM）、粗蛋白（CP）、粗纤维（CF）、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）、粗灰分（Ash）、粗脂肪（EE）等由宁夏农林科学院农产品质量检测中心依据相关方法协助完成。相对饲用价值（RFV）评价，参考张俊丽等[19]、李聚才等[20]方法进行。RFV=DMI(%BW)×DDM(%DM)/1.29(1)式中：DMI为干物质采食量（kg/d）；DDM为可消化干物质含量（%）。DMI(%BW)=120/NDF(%DM)(2)DDM(%DM)=88.9－0.779ADF(%DM)(3)1.4.4饲草能量饲料总能（GE）参考熊本海等[21]方法计算：GE(MJ/kg DM)=(4 153+56EE+15CP-44Ash)×0.004 186 8(4)消化能（DE）参考刁其玉[22]方法计算：DE(MJ/kg DM)=17.211-0.135NDF(5)代谢能（ME）参考冯仰廉[23]、刘海燕等[24]方法计算：ME(MJ/kg DM)=0.820 DE(6)增重净能（NEg）参考冯仰廉[23]方法计算：NEg=(0.38ME/GE+0.337)×ME(7)产奶净能（NEl）参考冯仰廉[23]方法计算：NEl=0.703ME-0.19(8)维持净能（NEm）参考冯仰廉[23]方法计算：NEm=1.37ME-0.138ME2+0.010ME3-1.12(9)1.5数据统计与分析数据采用SPSS 20.0单因素方差分析，Duncan's法多重比较，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1糜子不同部位活性成分检测结果（见表1）由表1可知，糜草、糜谷壳中多酚氧化酶活力显著高于黄米（P0.05），糜草中黄酮含量显著高于黄米（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.023.T001表1糜子不同部位活性成分检测结果组别多酚氧化酶/U总黄酮/(g/100 g)糜草300.14±2.21c0.55±0.02b糜谷壳142.50±0.15b0.23±0.01ab黄米11.61±0.05a0.21±0.01a注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2不同处理糜草秸秆活性成分检测结果（见表2）由表2可知，各组间多酚氧化酶活力、总黄酮含量差异极显著（P0.01），其中对照组多酚氧化酶活力、总黄酮含量极显著高于其他组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.023.T002表2不同处理糜草秸秆活性成分检测结果组别多酚氧化酶/U总黄酮/(g/100 g)FG组81.93±0.04Ff2.81±0.00FfFR组62.66±0.04Dd2.68±0.00EeXM组57.81±0.95Cc2.61±0.00DdXMR组52.28±0.05Bb2.35±0.01BbMQ组48.30±0.01Aa1.95±0.01AaFGQ组65.13±0.49Ee2.57±0.00CcMCK组86.60±0.01Gg2.91±0.00Gg2.3不同处理对糜草感官评价的影响（见表3）由表3可知，各组糜草秸秆发酵后质地评分差异不显著（P0.05）。XM组、MQ组糜草秸秆发酵后pH值评分极显著高于对照组、FGQ组、FR组（P0.01）。XM组糜草秸秆发酵后气味评分极显著高于FGQ组（P0.01），与对照组差异不显著（P0.05）。XM组、FG组糜草秸秆发酵后色泽得分显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.023.T003表3不同处理对糜草感官评价的影响组别pH值/分水分/分气味/分色泽/分质地/分总分等级FG组0.00±0.00Aa20.00±0.0017.00±1.41ABabc17.50±0.71b7.50±0.7162.00±0.58良好FR组6.00±0.00Bc20.00±0.0018.50±2.12ABbc16.00±2.83ab9.50±0.7170.00±1.29良好XM组12.00±2.83CDde20.00±0.0021.00±1.41Bc19.50±0.71b9.50±0.7182.00±1.00优等XMR组10.00±0.00Cd20.00±0.0016.00±2.83ABabc15.50±3.54ab8.00±0.7169.50±1.57良好MQ组14.00±0.00De20.00±0.0013.00±5.66ABab16.50±2.12ab9.50±0.7173.00±2.52优等FGQ组3.00±0.00Bb20.00±0.0010.00±2.83Aa14.00±2.83ab8.00±1.4155.00±1.35良好MCK组0.00±0.00Aa20.00±0.0016.00±0.00ABabc11.00±2.83a7.00±1.4154.00±1.35良好2.4不同处理对糜草营养成分及饲用价值的影响（见表4）由表4可知，糜草原样中粗灰分含量极显著低于对照组、FGQ组、XM组、FG组（P0.01）。XMR组糜草秸秆发酵后粗蛋白含量显著高于FG组和FGQ组（P0.05）。XMR组糜草秸秆发酵后粗纤维含量最低，极显著低于其他各组（P0.01）。XM组、XMR组糜草秸秆发酵后中性洗涤纤维含量极显著低于对照组、糜草原样、FG组和FR组（P0.01）。XM组、XMR组糜草秸秆发酵后酸性洗涤纤维含量极显著低于对照组及原样（P0.01）。研究表明，用纤维素酶、纤维素酶+复合乳酸菌发酵后，糜草秸秆粗蛋白含量明显提高，粗纤维、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维均明显降低，营养价值有显著改善。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.023.T004表4不同处理对糜草营养成分及饲用价值的影响组别干物质/%粗灰分/%DM粗蛋白/%DM粗脂肪/%DM粗纤维/%DM中性洗涤纤维/%DM酸性洗涤纤维/%DMRFVFG组35.50±0.20BCbc6.90±0.00Bbc4.73±0.06Aa1.80±0.00Dd36.28±0.58Dab72.54±0.59CDe42.90±0.20Cd71.15FR组35.20±0.20BCbc6.50±0.20ABab5.18±0.05Ccd1.80±0.00Dd38.56±1.25Eb71.04±2.57Ccde41.26±1.02BCbcd74.32XM组36.00±0.10Cc6.90±0.20Bbc5.10±0.10Ccd1.60±0.00Cc33.30±1.44BCab68.90±0.52ABab38.93±1.90ABa79.08XMR组34.85±0.85ABb6.80±0.60ABbc5.20±0.02Cd1.60±0.00Cc30.57±0.20Aa67.82±0.45Aa37.92±0.54Aa81.42MQ组33.95±0.10Aa6.85±0.10ABbc5.19±0.02Ccd1.40±0.00Bb33.10±1.46Bab69.56±1.46ABCabc41.18±0.89BCbc75.99FGQ组37.15±0.10Dd7.05±0.50Bbc4.98±0.08Bb1.75±0.10Dd35.39±0.23CDab70.32±1.21ABCbcd40.72±0.92BCb75.64MCK组42.20±1.00Ee7.10±0.40Bc5.09±0.06Cc1.55±0.10Cc34.06±0.29BCDab72.12±0.45CDde42.94±0.88Cd71.52糜草原样91.90±0.346.00±0.31Aa5.12±0.12Ccd0.75±0.06Aa34.29±0.56BCDb74.44±1.23Df42.46±0.67Ccd69.76注：因糜草原样本身为风干样品，而其余各组糜草发酵后为鲜样，固糜草原样不参与干物质的差异显著性比较。2.5不同处理对糜草能量的影响（见表5）由表5可知，FR组糜草秸秆发酵后总能极显著高于对照组、原样和MQ组（P0.01）。XMR组糜草秸秆发酵后消化能、代谢能、产奶净能、维持净能均极显著高于对照组、原样和FG组（P0.01），说明用纤维素酶+复合乳酸菌联合处理后明显提升糜草秸秆的饲料能值及糜草秸秆的营养利用价值。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.023.T005表5不同处理对糜草能量的影响（干物质基础）组别GEDEMENEgNElNEmFG组16.84±0.42AB7.42±0.00AB6.08±0.00AB0.47±0.014.09±0.01AB4.36±0.01ABFR组16.94±1.82B7.62±0.02BC6.25±0.00ABCD0.48±0.004.20±0.01BC4.49±0.56BCXM组16.81±0.37AB7.91±0.04CD6.49±0.03CD0.48±0.004.37±0.01CD4.69±1.05CDXMR组16.84±0.32AB8.06±0.01D6.61±0.01D0.49±0.004.45±0.01D4.79±0.30DMQ组16.79±1.03A7.82±0.02BCD6.41±0.01BCD0.48±0.004.32±0.03BCD4.63±0.49BCDFGQ组16.83±0.86AB7.72±0.02BCD6.33±0.02BCD0.48±0.004.26±0.02BCD4.56±0.51BCDMCK组16.77±0.32A7.47±0.02AB6.13±0.02ABC0.48±0.004.12±0.01AB4.40±0.48AB糜草原样16.78±0.03A7.16±0.04A5.87±0.04A0.47±0.023.94±0.05A4.19±0.43AMJ/kg2.6不同处理对糜草pH值和有机酸含量的影响（见表6）由表6可知，MQ组糜草秸秆发酵后乳酸含量极显著高于其他各组（P0.01）。FGQ组、XMR组糜草秸秆发酵后乙酸含量极显著高于其他各组（P0.01）。FG组糜草秸秆发酵后丙酸含量极显著高于对照组、XM组、XMR组、MQ组、FGQ组（P0.01）。各处理组糜草秸秆发酵后丁酸含量均极显著低于对照组（P0.01），说明对照组发酵质量较差，有明显臭味。FR组糜草秸秆发酵后戊酸含量极显著高于对照组、XMR组、MQ组、FGQ组（P0.01）。MQ组、XM组糜草秸秆发酵后pH值极显著低于其他各组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.023.T006表6不同处理对糜草pH值、有机酸含量的影响组别乳酸/(g/kg)乙酸/(g/kg)丙酸/(g/kg)异丁酸/(g/kg)丁酸/(g/kg)异戊酸/(g/kg)戊酸/(g/kg)pH值FG组0.49±0.01Aa8.31±0.75Aa9.40±0.45De4.44±0.06BCc12.71±0.11Cb2.60±0.27CDd2.80±0.10CDd5.32±0.01FfFR组13.08±0.09Dd9.37±0.05Aa8.54±0.33CDde5.17±0.25Ccd12.58±1.53Cb2.80±0.32Dd3.14±0.40Dd4.66±0.01CcXM组17.13±0.09Ee8.84±0.38Aa7.78±0.41Ccd5.93±0.99Cd9.99±0.28BCb2.84±0.06Dd2.80±0.01CDd4.25±0.01AaXMR组12.50±0.69Dd13.07±0.87Bb7.67±0.19Ccd5.37±0.38Ccd7.08±0.58ABa1.99±0.05Cc2.38±0.02Cc4.31±0.01BbMQ组36.04±0.41Ff8.63±0.25Aa3.43±0.44Aa3.30±0.28ABb11.99±0.95Cb0.92±0.12ABb1.23±0.08Bb4.22±0.01AaFGQ组8.51±0.08Cc12.78±0.05Bb7.46±0.63BCc1.73±0.36Aa5.51±0.93Aa0.40±0.02Aa0.53±0.03Aa4.80±0.01DdMCK组4.57±0.17Bb8.39±0.86Aa6.07±0.30Bb2.63±0.38Aab17.71±2.31Dd1.06±0.14Bb1.43±0.04Bb5.12±0.01Ee2.7不同处理对糜草发酵品质综合评价的影响（见表7）由表7可知，MQ组糜草发酵后有机酸总和、乳酸占比极显著高于其他各组（P0.01）。FGQ组糜草发酵后乙酸占比极显著高于其他各组（P0.01），但从评价标准看，乙酸比例在20%以下得分较高，因此MQ组、XM组、FR组乙酸占比较合适。FGQ、MQ、XMR、XM组糜草发酵后丁酸占比极显著低于对照组、FG组（P0.01），表明这几组糜草发酵后气味较好，无臭味。试验各组氨态氮/总氮比值极显著低于对照组（P0.01)。FR组、XM组、XMR组、MQ组、FG组发酵后得分在60~80分之间，综合评价为良好。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.023.T007表7不同处理对糜草发酵品质综合评价的影响组别有机酸总和/(g/kg)乳酸占总酸比/%乙酸占总酸比/%丁酸占总酸比/%氨态氮/总氮综合得分综合评价FG组40.74±0.63Bb1.19±0.01Aa20.40±1.53Bc31.20±0.76Cc8.85±0.25dC59.00可FR组54.67±0.26Dd23.92±0.05Ccd17.13±0.18ABbc23.01±2.68Bb6.73±0.21bA67.50良XM组55.32±2.05Dd30.97±1.30De15.98±0.10ABab18.06±0.17aABb7.99±0.02cB69.50良XMR组50.07±0.66Cc24.98±0.06Cd26.10±2.70Cd14.14±4.14Aa10.44±0.10cC61.00良MQ组65.54±1.37Ee54.99±1.43Ef13.17±0.16Aa18.30±0.05ABab5.35±0.42aC75.50良FGQ组36.93±0.80Aa23.03±1.18Cc34.60±0.51De14.93±1.26Aa9.70±0.08eC63.50良MCK组41.86±0.73Bb10.91±0.28Bb20.03±0.62Bc42.32±2.19Dd11.53±0.13fD54.00可3讨论3.1纤维素酶、乳酸菌等发酵对糜草活性成分的影响糜子皮多酚作为植物多酚之一，具有抗氧化、抗衰老、降血脂、降血压、调节免疫功能等多种生理和药理活性[11]。本试验结果表明，黄米、糜子壳、糜草中均含有一定量的多酚氧化物和黄酮，糜草中多酚氧化酶活力、黄酮含量明显高于黄米和米壳中含量，与李清华等[25]发现的稻米糠中黄酮含量极显著高于精米的结果一致。发酵后糜草中多酚氧化酶活力明显降低，黄酮含量明显升高，与刘秋瑾等[26]用益生菌固态发酵中草药会增加有效成分含量的结果相似。但糜草发酵后的抗氧化性需要进一步研究。3.2纤维素酶、乳酸菌等对糜草发酵营养成分的影响及饲用价值评价本试验中，糜草CP含量为5.12%，CF含量为34.2%，NDF含量为74.44%，ADF含量为42.64%，表明糜草有一定的营养价值。本试验利用纤维素酶、青干贮复合酶、复合乳酸菌等处理糜草后，CP含量升高，NDF、ADF的含量显著降低，营养价值有明显提升，与Okeke等[27]研究结果相似。纤维素含量高是影响动物对秸秆资源高效利用的最主要因素，饲草的相对饲用价值与其NDF、ADF含量有关，饲草中NDF、ADF含量越低，其饲用价值越大。本试验结果表明，纤维素酶、纤维素酶+复合乳酸菌剂、瑞森青贮宝发酵后，糜草中CF、NDF、ADF含量显著低于未发酵糜草，相对饲喂价值明显提高。能量是动物维持生命活动、生长发育和生产产品的基本要素[28]，纤维素酶+复合乳酸菌联合处理后糜草的消化能、代谢能、产奶净能、维持净能均有不同程度的升高，进一步表明采用纤维素酶等发酵可提高糜草的营养和饲用价值。3.3纤维素酶、乳酸菌等对糜草发酵品质的影响乳酸菌是饲草发酵过程中最重要的微生物，通过合成乳酸、抑制细菌、真菌或植物酶的活性以及减少微生物多样性来降低pH值，从而达到长期保存的目的。纤维素酶通过将植物细胞壁的结构性多糖降解为双糖和单糖，促进乳酸菌增殖和底物发酵，从而改善饲草发酵品质[29-30]。为了充分利用糜草，使用纤维素酶、乳酸菌等进行发酵是提高其资源利用率的有效方式。pH值的降低可有效抑制腐败菌的繁殖生长，乳酸、乙酸含量的升高有助于提高糜草的适口性。本研究结果表明，除青干贮复合酶组外，添加乳酸菌、纤维素酶等组的pH值均不同程度地降低，试验各组氨态氮/总氮比值显著降低，乳酸、乙酸含量升高，纤维素酶+复合乳酸菌组、青干贮复合酶+复合乳酸菌组丁酸含量显著降低，与张嘉宾等[14的研究结果一致，与任伟忠等[31]、田祖光等[32]结果相似。研究表明，添加乳酸菌、纤维素酶及纤维素酶和乳酸菌联合处理后，糜草中有机酸总量显著增加，乳酸菌等有益菌增加，抑制了有害菌的生长，减少了蛋白质分解。同时，纤维素酶的加入破坏了糜草细胞壁结构，将饲料中的植物性纤维素分解，为乳酸菌发酵提供底物，从而提高糜草乳酸的含量，使糜草发酵品质得到改善。4结论在干糜草中添加纤维素酶、复合乳酸菌及纤维素酶+复合乳酸菌联合发酵后，糜草总黄酮含量明显升高，可以显著改善糜草的营养价值和饲用价值。