柠条锦鸡儿（Caragana korshinskii）是豆科锦鸡儿属（Caragana）的多年生灌木，具有优良的生态恢复功能[1]，宁夏全区柠条种植面积达44.6×104 hm2[2]。柠条的养分含量高于普通秸秆，是极具发展潜力的非常规饲草资源[3-4]。但柠条锦鸡儿纤维含量较高[5]，导致其适口性及消化率较差，严重制约其作为饲料资源的开发与利用[6]。青贮技术可以很好保存饲料养分[7]，但由于柠条锦鸡儿可溶性碳水化合物含量低，单独青贮不易发酵成功[7]。青贮时添加青贮添加剂可以提高青贮成功率。张欢等[8]研究表明，添加米糠和乳酸菌制剂可以减少柠条锦鸡儿青贮饲料中的纤维含量，提高青贮品质。玉米粉是青贮中常见的添加剂，其淀粉含量高，在青贮发酵过程中可以很好地促进乳酸菌发酵[9]。周迪等[10]研究发现，全株油菜青贮过程中添加玉米粉与菌剂，能够有效保存油菜养分含量，提高瘤胃降解率。酶制剂是青贮中一类重要的添加剂，可以将饲草中复杂的碳水化合物降解为可以被乳酸菌利用的可溶性碳水化合物，从而提高青贮饲料的发酵品质[11]。李莉等[12]研究发现，添加纤维素酶能够改善象草的青贮品质及微生物多样性。本试验旨在研究玉米粉和纤维复合酶对柠条锦鸡儿青贮养分含量和发酵品质的影响，为调制优质柠条锦鸡儿青贮饲料、扩大粗饲料来源提供参考。1材料与方法1.1试验材料柠条锦鸡儿为种植于宁夏盐池县（107° E，37° N）的人工柠条林，选用4年以上的盛花期柠条锦鸡儿，于2021年5月6日采摘。在田间随机选取3个样点，使用枝剪采收柠条锦鸡儿材料，留茬高度为10 cm。将新鲜的柠条材料处理成长度小于2 cm的薄片，经揉丝加工，带回实验室进行青贮调制。玉米粉购自市场；纤维复合酶由木聚糖酶、纤维素酶、淀粉酶、β-葡聚糖酶和载体（大麦芽粉、统糠）组成，且木聚糖酶活力≥2×103 U/g、纤维素酶活力≥6×104 U/g、淀粉酶活力≥3×105 U/g、β-葡聚糖酶活力≥3×105 U/g，购自广东溢多利生物科技股份有限公司。1.2试验设计试验共设4组，分别为无添加的对照组（CK组）、添加10%玉米粉组（C组）、添加0.05%纤维复合酶组（F组）及添加10%玉米粉+0.05%纤维复合酶组（CF组），添加量均以鲜重为基础，每组设置6个重复。添加水将青贮原料水分含量调至60%左右，各组将添加剂与柠条锦鸡儿充分混匀，称取500 g左右调制好的原料装入30 cm × 20 cm的青贮袋中，使用真空封口机封口，25 ℃避光发酵60 d，测定青贮饲料的养分含量和发酵品质。1.3测定指标及方法1.3.1营养成分将柠条锦鸡儿新鲜原料及青贮材料于65 ℃的恒温烘箱中烘干到恒重，粉碎，过1.0 mm筛网。粗蛋白质（CP）使用K-340凯氏定氮仪（中国上海布吉试验设备贸易有限公司测定；粗脂肪（EE）采用ANKOMX T15i脂肪分析仪测定；可溶性碳水化合物（WSC）使用蒽酮-硫酸法测定，使用UV-1800紫外分光光度计在620 nm进行（上海玛帕达仪器有限公司）测定[13]。使用A2000 ANKOM（安科姆科技，美国纽约）自动纤维分析仪测定中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）含量。计算总可消化养分（TDN）[14]和相对饲喂价值（RFV，以绵羊为基础）[15]。TDN=88.9-ADF×0.779(1)RFV=DMI(%BW)×DDM(%DM)/1.29(2)DMI=120/NDF(%DM)(3)DDM=88.9-0.779×ADF(%DM)(4)式中：DMI为粗饲料干物质采食量（%BW）；DDM为可消化的干物质（%DM）。1.3.2发酵品质准确称取20 g青贮样品与180 mL蒸馏水混合，放入榨汁机中高速搅碎30 s，使用4层纱布过滤后获得浸提液，取适量的浸提液测定雷磁PSH-3C精密pH计（上海精密科学仪器有限公司）测定pH值。另取上述浸提液适量用0.22 μm的滤膜过滤，按照Tian等[16]的方法，采用高效液相色谱法测定乙酸（AA）、丙酸（PA）及丁酸（BA）含量。色谱条件：色谱柱为Shodex Rspak KC-811；流动相为3 mmol/L高氯酸，流速为1 mL/min；柱温为50 ℃，进样量为5 μL，检测器为DAD检测器。乳酸（LA）含量按照南京建成生物工程研究所A019-2-1乳酸测试盒进行操作，测定方法为乳酸脱氢酶法。氨态氮/总氮（NH3-N/TN）含量按照文献[17]描述的方法，使用UV-1800紫外分光光度计（上海玛帕达仪器有限公司）测定。根据《粗饲料品质评价手册》V-Score评分标准和所测青贮饲料中NH3-N/TN、AA、PA和BA含量，评价青贮饲料品质，该体系以NH3-N/TN及挥发性脂肪酸含量为评价指标，总评分为NH3-N/TN、AA、PA、BA的得分之和，满分100分；将青贮饲料划分为3个等级，分别为良好（80分）、尚可（60~80分）、不良（60分）3个级别[18]。V-Score评分标准见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.022.T001表1V-Score评分标准氨态氮/总氮乙酸+丙酸丁酸总评分等级含量/%得分含量/%得分含量/%得分≤550≤0.2100~0.540-80XB81~100良好5~1060-2XN0.2~1.5（150-100XA）/130.5060~80尚可10~2080-4XN≥1.5060不良200注：XN、XA、XB分别表示氨态氮/总氮、乙酸+丙酸、丁酸的含量。1.3.3微生物数量柠条锦鸡儿原料和青贮饲料中的乳酸菌、酵母菌及霉菌数量采用稀释涂布平板法测定，取5 g柠条锦鸡儿青贮样品加入45 mL无菌水，在恒温摇床中进行2 h摇匀处理，用无菌水依次稀释成10-1~10-5浓度的菌液，取100 μL适宜稀释度的菌液放入固体平板中涂布均匀，乳酸菌使用MRS固体培养基，37 ℃厌氧培养48 h后计数；酵母菌和霉菌使用马铃薯琼脂固体培养基（PDA），30 ℃有氧培养72 h计数[19]，以lgCFU/g表示计数单位。1.4数据统计与分析数据采用Excel 2010进行初步的整合，SPSS 25.0统计软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示数据差异显著。2结果与分析2.1柠条锦鸡儿原料的养分及微生物数量（见表2）由表2可知，柠条锦鸡儿虽然WSC含量低、NDF、ADF含量高，但其DM和CP含量较高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.022.T002表2柠条锦鸡儿原料的养分及微生物数量项目干物质(DM)/%FWCP/%DMWSC/%DMEE/%DMNDF/%DMADF/%DM乳酸菌/lgCFU/g FW酵母菌/lgCFU/g FW霉菌/lgCFU/g FW含量61.8514.201.342.3068.6355.096.336.046.222.2玉米粉和纤维复合酶对柠条锦鸡儿青贮营养成分的影响（见表3）由表3可知，C组和F组青贮饲料的DM含量显著高于CK组（P0.05）；C组青贮饲料CP、WSC含量显著高于其他组（P0.05）；C组和F组青贮饲料的NDF含量显著低于CK组（P0.05）；C组、F组和CF组青贮饲料的ADF含量均显著低于CK组，RFV显著高于CK组（P0.05）；C组和CF组青贮饲料的TDN含量均显著高于CK组（P0.05）。各组青贮饲料中EE含量差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.022.T003表3玉米粉和纤维复合酶对柠条锦鸡儿青贮营养成分的影响项目DM/%FWCP/%DMWSC/%DMEE/%DMNDF/%DMADF/%DMTDN/%RFVP值0.040.010.030.130.010.010.010.01CK组52.53±2.52b14.22±0.18b1.43±0.02b1.79±0.1762.78±2.86a48.02±1.28a51.12±1.31b76.21±5.15bC组57.71±0.31a15.19±0.05a1.51±0.02a1.11±0.1052.64±1.93b37.64±0.72b59.58±0.56a107.19±4.06aF组57.08±0.47a14.58±0.09b1.44±0.02b1.67±0.1654.41±0.86b41.85±0.60b56.30±0.47ab96.32±2.36aCF组56.42±0.22ab14.48±0.27b1.44±0.02b1.50±0.2856.11±0.45ab40.18±1.96b58.49±1.75a97.03±3.57a注：同列数据肩标相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05），不同字母表示差异显著（P0.05）；下表同。2.3玉米粉和纤维复合酶对柠条锦鸡儿青贮发酵品质的影响（见表4）由表4可知，F组、CF组青贮饲料的pH值显著低于CK组（P0.05），LA含量显著高于CK组（P0.05）；C组、F组、CF组青贮饲料的NH3-N/TN、PA含量显著低于CK组（P0.05），乳酸菌的数量显著高于CK组（P0.05），酵母菌数量显著低于CK组（P0.05）；所有处理组中均未检测到BA和霉菌。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.022.T004表4玉米粉和纤维复合酶对柠条锦鸡儿青贮发酵品质的影响项目pH值NH3-N/TN/%LA/%DMAA/%DMPA/%DMBA/%DM乳酸菌/lgCFU/g FW酵母菌/lgCFU/g FW霉菌/lgCFU/g FWP值0.010.010.010.860.01—0.010.01—CK组4.84±0.02a1.85±0.03a5.91±0.15c0.75±0.051.16±0.10aND5.60±0.21b5.60±0.02aNDC组4.82±0.01a1.38±0.03b6.42±0.23bc0.76±0.050.14±0.01bND6.38±0.01a5.13±0.11bNDF组4.75±0.01b1.39±0.03b7.44±0.13ab0.76±0.030.15±0.01bND6.36±0.03a4.85±0.08bNDCF组4.74±0.03b1.47±0.04b8.03±0.58a0.72±0.030.20±0.06bND6.34±0.03a5.19±0.15bND2.4玉米粉和纤维复合酶柠条锦鸡儿青贮V-Score得分（见表5）由表5可知，各组青贮饲料的V-Score评分均在90分以上，评价等级均为良好。其中，CK组青贮饲料的总得分最低，为90分；C组青贮饲料的总得分最高，为94.62分。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.15.022.T005表5玉米粉和纤维复合酶柠条锦鸡儿青贮V-Score得分组别氨态氮/总氮乙酸+丙酸丁酸总得分等级含量/%得分含量/%得分含量/%得分CK组1.85501.91004090.00良好C组1.38500.904.6204094.62良好F组1.39500.914.5404094.54良好CF组1.47500.924.4604094.46良好3讨论3.1玉米粉和纤维复合酶对柠条锦鸡儿青贮营养成分的影响DM含量在青贮发酵过程中发挥重要作用[20]。李国栋等[21]认为，青贮原料的DM含量达到20% FW以上时，青贮发酵才能正常进行。本试验选用的柠条锦鸡儿青贮原料DM含量为61.85%，远高于正常发酵的最低水平，C组和F组青贮饲料的DM含量显著高于CK组，说明玉米粉和纤维复合酶单独添加均能减少柠条锦鸡儿青贮饲料DM损失，可能是由于玉米粉和纤维复合酶单独添加均促进了乳酸菌发酵，抑制了有害微生物的活动，从而减少了DM的损失，与王鸿泽等[22]和Zhao等[23]研究结果相似。但本试验中CF组青贮饲料的DM含量与CK组差异不显著，表明玉米粉与纤维复合酶同时添加时减少DM损失的效果不明显，可能是由于二者在柠条锦鸡儿青贮DM保存方面没有发挥协同作用，具体机制需进一步研究。WSC含量是保证青贮饲料发酵品质的关键指标，充足的WSC可以保证乳酸菌发酵产生大量乳酸，降低青贮环境的pH值，抑制有害微生物的活动，进而提高青贮发酵品质[24]。本试验中，C组青贮饲料的WSC含量显著高于CK组。王福成等[25]发现，玉米粉能够显著提高燕麦青贮中WSC的含量，原因是柠条锦鸡儿的WSC含量较低，而玉米粉属于糖类营养性添加剂，因此玉米粉对提高柠条锦鸡儿青贮中WSC含量有积极作用。但本试验中F组、CF组青贮饲料的WSC含量与CK组间差异不显著，说明纤维复合酶在提高柠条锦鸡儿WSC含量方面效果不明显，与吴永杰等[26]在水稻秸秆青贮中添加酶制剂所得的结果不同，可能是由于酶制剂活性及发酵底物不同等原因所致。CP是饲料中含氮化合物的总称，是评价饲料饲用价值的重要指标[27]。Zhao等[28]研究发现，象草青贮时添加纤维素酶会减少CP的含量。吕文竹等[29]研究发现，在杂交构树全株干粉发酵饲料中添加玉米粉可以提高CP的含量。本试验结果显示，C组青贮饲料的CP含量均显著高于CK组，可能是添加玉米粉能减少微生物作用及植物蛋白酶对CP的降解，添加纤维复合酶或二者同时添加会因为纤维复合酶添加增加了蛋白质的水解活性，因此不如单独添加玉米粉效果好[30]。NDF和ADF含量直接影响家畜对饲料的采食量和消化率，NDF和ADF的含量越低，青贮饲料的品质越好。王安[31]研究发现，在玉米秸秆中添加0.10%纤维复合酶后，可显著降低青黄贮玉米秸秆中的ADF、纤维素及半纤维素含量。本试验中，除CF组的NDF含量与CK组无显著差异外，其他组的柠条锦鸡儿青贮饲料中的NDF和ADF含量均显著低于CK组，说明玉米粉和纤维复合酶对降低柠条锦鸡儿青贮饲料中NDF和ADF含量具有积极作用，可能是因为玉米粉能促进微生物快速利用底物并产生具有溶解纤维活性的微生物酶，而纤维复合酶可促进柠条锦鸡儿细胞壁纤维成分降解[32]。TDN是衡量饲料整体养分品质好坏及饲料采食量的标准，含量越高说明饲料营养成分越全面[32]。本试验中，C组、F组及CF组的柠条锦鸡儿青贮饲料中的TDN含量均极显著高于CK组，这是因为玉米粉和纤维复合酶降低了柠条锦鸡儿青贮饲料的纤维含量，从而提高了柠条锦鸡儿青贮饲料的营养价值。RFV是一种粗饲料质量评价指数[33]，RFV数值越高表明饲料的营养价值越高。本试验中，C组青贮饲料的RFV显著高于CK组，表明玉米粉能很好地改善柠条锦鸡儿青贮饲料的饲喂价值，原因与降低青贮饲料的纤维含量有很大的关系[34]。3.2玉米粉和纤维复合酶对柠条锦鸡儿青贮发酵品质的影响LA含量能够加速pH值的降低，较低的pH值能够抑制梭状芽孢杆菌和大肠杆菌等有害微生物的生长及代谢，进而保证青贮饲料的发酵品质，减少营养成分的损失[35]。本试验显示，F组和CF组青贮饲料的pH值均显著低于CK组，LA含量显著高于CK组，而C组青贮饲料的pH值和LA含量均与CK组差异不显著。可能是纤维复合酶添加促进了WSC转化为LA，降低了青贮环境的pH值，而玉米粉中的WSC含量虽高，但未被快速有效地转化为LA。NH3-N/TN含量反映了青贮饲料中蛋白质和氨基酸的降解程度，NH3-N/TN含量越高说明蛋白质和氨基酸分解越多，导致青贮饲料的品质越差[36]。本试验中，C组、F组及CF组的青贮饲料的NH3-N/TN含量均显著低于CK组，表明玉米粉和纤维复合酶的添加能够减少柠条锦鸡儿青贮饲料中蛋白质的降解程度，与丁浩等[37]在象草青贮中添加纤维素酶所得到的结果相似。一般认为，青贮发酵品质会随LA或AA含量的增加而提高，LA和AA可以提高青贮环境的酸度。本试验中，C组、F组及CF组青贮饲料的AA含量与CK组差异不显著，与He等[38]研究桑叶青贮时添加纤维素酶得出的结果有所差异，但与吕文竹等[29]研究全株构树干粉青贮时添加玉米粉得出的结论相似，可能是发酵底物不同及酶来源不同造成的。青贮饲料中乳酸菌数量直接影响青贮发酵品质，对青贮发酵起关键作用[39]。酵母菌和霉菌均属于真菌类，酵母菌对青贮的作用比较复杂，霉菌会降低青贮饲料的饲喂价值和适口性，分泌的霉菌毒素会对家畜和人类健康造成危害。本试验中，C组、F组及CF组的柠条锦鸡儿青贮饲料中乳酸菌的数量均显著高于CK组，而酵母菌数量均显著低于CK组，且4组中均未检测到霉菌。这是因为玉米粉和纤维复合酶可以为LAB生长提供更多底物，从而增加了柠条锦鸡儿青贮饲料中乳酸菌的数量，而抑制了酵母菌和霉菌的生长[40]。V-Score评分体系是一种重要的青贮饲料发酵品质评价方法。本试验中，各组的V-Score评分等级均为良好，其中C组得分最高，为94.62分。4结论从营养成分角度分析，添加玉米粉和纤维复合酶可以显著提高柠条锦鸡儿青贮的干物质含量，降低纤维含量，粗蛋白质和可溶性碳水化合物的含量具有一定的提高趋势。从发酵品质分析，玉米粉和纤维复合酶可以显著提高柠条锦鸡儿青贮乳酸含量，降低pH值和氨态氮含量，增加乳酸菌的数量，减少不良微生物数量。各组柠条锦鸡儿青贮的V-Score评分等级均为良好，且添加10%玉米粉对柠条锦鸡儿的青贮发酵品质的改善效果最好。