水产养殖中存在饲料原料匮乏的情况，非传统原料虽然种类繁多，但生物利用率普遍较低[1]。如果将单细胞蛋白应用于食品和饲料行业，将会缓解饲料资源紧缺的问题，因此单细胞蛋白成为饲料行业的研究热点[2-5]。崔敏等[6]研究了产朊假丝酵母（Candida utilis）发酵淀粉废渣生产的饲料酵母替代鱼粉对大菱鲆幼鱼生长及免疫功能的影响，发现用饲料酵母替代饲料中17%左右的鱼粉时，大菱鲆的生长指标和免疫功能均优于其他各组，可减少鱼粉的使用量，降低生产成本。何玉等[7]发现，凡纳滨对虾饲料中添加1.0×1010 CFU/kg的海洋红酵母（Marine Rhodotorula）菌体，提高了对虾的免疫酶活性及对副溶血弧菌的抵抗力，而且虾的各项生长指标也较对照组有显著提高。郭静文等[8]研究发现，饲料中添加0.3%海洋红酵母菌体，宝石鲈的增重率、肥满度、肝脏总抗氧化力（T-AOC）及还原型谷胱甘肽（GSH）、过氧化氢酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）活性均高于其他试验组。本课题研究的产油红酵母菌PR61富含油脂、蛋白以及类胡萝卜素等营养物质。为探究产油红酵母PR61干菌体作为饲料添加剂的可行性，本试验研究添加该酵母菌干菌体及酵母的破壁处理对红鲫鱼生长性能、体色及抗氧化能力的影响，为产油红酵母作为鱼类饲料应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料红鲫鱼苗购自沈阳市水产市场，选择规格基本一致（平均体重为4~5 g，平均体长6~7 cm）、体质健壮、无伤病、活动敏捷、摄食良好的鱼苗。试验饲料由福建省晋江市奇美礼品宠物工业有限公司生产，产品为肉红色颗粒。饲料风干后含有27.0%粗蛋白、2.0%粗脂肪、5.0%粗纤维、9.0%粗灰分及多种维生素和矿物质。菌株PR61为实验室保藏的高效产油红色酵母菌，红酵母PR61在28 ℃恒温振荡培养24 h，发酵液4 ℃、5 000 r/min离心5 min，蒸馏水洗涤2次，得到的湿菌体于60 ℃烘干密封保存，即得到未破壁红酵母干菌体。将离心、洗涤后得到的红酵母PR61湿菌体置于-20 ℃冷冻6 h后，取出融化，通过反复冻融3次完成破壁，于60 ℃烘干密封保存，即得到破壁红酵母干菌体[9]。1.2主要试剂甜菜碱盐酸盐、甲基红、溴甲酚绿（均为分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司），五水硫酸铜（分析纯，天津市志远化学试剂有限公司），硫酸钾、硫酸铵、硫酸、盐酸（分析纯，河南万邦化工有限公司），硼酸（分析纯，茂名市雄大化工有限公司），氢氧化钠（分析纯，国药集团化学试剂品有限公司），无水乙醚、无水乙醇（分析纯，天津市恒兴化学试剂品有限公司）。SOD、CAT、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、T-AOC、丙二醛（MDA）试剂盒（酶联生物科技有限公司）。1.3主要仪器HZP-150型全温振荡培养箱（上海精宏试验设备有限公司），LDZX-50KBS型立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂），CT18RT型高速冷冻离心机（上海驭诺实业公司），202-2型电热恒温干燥箱（上海阳光试验仪器有限公司），BS-124S型分析天平（南京赛多斯仪器有限公司），PHS-300型pH计（上海天达仪器有限公司），WEF.M45/16型马弗炉（河南文迈科教仪器设备有限公司），NB9830型定氮仪（郑州市南北仪器设备有限公司），LA8080型高速氨基酸分析仪（日本日立公司），CM-25cG型色差仪（深圳市华瑞昌科技有限公司），DR-3518F型酶标检测仪（无锡华卫德朗仪器有限公司）。1.4产油红酵母菌株PR61干菌体营养成分及含量测定采用凯氏定氮法[10]测定蛋白质含量，采用索氏提取法[11]测定油脂含量，采用干重法[12]测定水分含量，采用酸碱洗涤法[13]测定粗纤维含量，采用灰化法[14]测定粗灰分含量，采用高效液相色谱法[15]测定类胡萝卜素含量。采用酸解法测定氨基酸组成及含量：取酵母干菌体10 mg，加入6 mol/L HCl于110 ℃水解24 h，测定氨基酸组成及含量[16]。1.5饲养试验1.5.1试验设计试验在15个面积0.15 m2、水深30 cm的鱼缸中进行，试验用水为曝气消毒自来水。选用驯养好的红鲫鱼苗375条，随机分5组，每组3个重复，每个重复25条鱼。试验设计见表1。日投喂量为鱼体重的3%~4%，每天9：00—10：00和16：00—17：00各投喂1次，每个重复投喂总量均为115 g。每天中午吸污1次，视水质好坏适当换水，每次大约换1/2水。每天记录死亡的红鲫鱼数量。试验期28 d。试验设计见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.008.T001表1试验设计（风干基础）组别饲料组成空白对照组100%基础饲料阳性对照组100%基础饲料+0.25%甜菜碱盐酸盐T1组99.5%基础饲料+0.5%未破壁红酵母T2组99.5%基础饲料+0.5%破壁红酵母T3组99.0%基础饲料+1.0%破壁红酵母1.5.2测定指标及方法1.5.2.1生长性能及鱼体颜色28 d后结束饲喂，分别测定每组鱼的体重、体长和鱼背部皮肤的红度（a*）、黄度（b*）、亮度（L*），计算存活率、体重增长率、体长增长率及饲料系数。成活率=Rt-R0R0×100%(1)体长增长率=Lt-L0L0×100%(2)增重率=Wt-W0W0×100%(3)饲料系数=(W0-Wt)/消耗饲料量(4)式中：R0为试验前鱼的尾数；Rt为试验后鱼的尾数；L0为试验前鱼的平均体长（cm）；Lt为试验后鱼的平均体长（cm）；W0为试验前鱼的平均体重（g）；Wt为试验后鱼的平均体重（g）。1.5.2.2血清抗氧化指标每个重复随机抽取5条鱼，尾静脉采血法获取血样，2 500 r/min离心15 min，获得上清液，-80 ℃保存，用于测定抗氧化能力。根据试剂盒说明书所述方法进行具体操作。血清抗氧化指标包括T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT、MDA。1.6数据统计与分析试验数据采用SPSS 17.0软件进行单因素方差分析，采用Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1产油红酵母菌株PR61干菌体营养成分的分析结果（见表2、表3）由表2、表3可知，产油红酵母菌株PR61干菌体营养丰富，蛋白质含量高达45.20%、油脂含量高达38.93%，还含有类胡萝卜素等多种营养物质。该酵母菌干菌体中检出天门冬氨酸、丝氨酸等17种氨基酸，包含多种鱼类必需氨基酸，氨基酸总量为44.32%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.008.T002表2产油红酵母菌株PR61干菌体营养成分项目蛋白质油脂水分粗纤维粗灰分类胡萝卜素含量45.2038.938.944.792.140.10%10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.008.T003表3产油红酵母菌株PR61干菌体氨基酸的组成及含量项目含量项目含量天门冬氨酸2.80异亮氨酸1.33苏氨酸1.38亮氨酸2.57丝氨酸2.64酪氨酸0.71谷氨酸5.80苯丙氨酸1.62甘氨酸7.66赖氨酸1.39丙氨酸3.57脯氨酸5.27胱氨酸0.68组氨酸0.41缬氨酸2.10精氨酸3.59蛋氨酸0.72%2.2产油红酵母菌株PR61干菌体对红鲫鱼生长性能的影响（见表4）由表4可知，各组红鲫鱼初重、末重、初体长和末体长差异均不显著（P0.05）。T2组和T3组红鲫鱼成活率为100%，显著高于空白对照组和阳性对照组（P0.05）；T3组红鲫鱼的体重增长率显著高于其他组（P0.05），体长增长率显著高于空白对照组、阳性对照组和T1组（P0.05），饲料系数显著低于其他组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.008.T004表4产油红酵母菌株PR61干菌体对红鲫鱼生长性能的影响组别初重/g末重/g初体长/cm末体长/cm成活率/%体重增长率/%体长增长率/%饲料系数空白对照组4.41±0.135.95±0.266.84±0.227.19±0.2788.00±6.92c34.92±3.06b5.12±0.67b3.11±0.09c阳性对照组4.24±0.285.74±0.366.68±0.327.04±0.1992.00±4.00bc35.38±1.21b5.38±1.03b3.48±0.10aT1组4.24±0.165.34±0.236.64±0.246.96±0.2896.00±0.00ab25.94±3.45c4.82±0.94b3.28±0.10bT2组4.17±0.175.68±0.356.74±0.267.16±0.31100.00±0.00a36.21±2.97b6.23±0.35ab3.04±0.08cT3组4.02±0.185.57±0.266.60±0.257.05±0.27100.00±0.00a38.56±0.07a6.82±0.32a2.81±0.06d注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。结果表明，饲料中添加破壁产油红酵母菌株PR61干菌体能够增强红鲫鱼的饲喂效果。2.3产油红酵母菌株PR61干菌体对红鲫鱼背部皮肤色度值的影响（见图1、表5）由表5可知，T3组红鲫鱼背部皮肤的a*值、L*值显著高于其他试验组（P0.05），与图1显示的结果一致，表明饲料中添加破壁红酵母能使鱼体颜色更鲜艳。在添加量为1.0%以内，添加量越大鱼体色越鲜艳。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.008.T005表5产油红酵母菌株PR61干菌体对红鲫鱼背部皮肤色度值的影响组别a*值b*值L*值空白对照组23.49±0.40bc44.48±0.7757.36±0.92c阳性对照组23.97±0.55b44.81±0.2859.48±0.94bT1组22.66±0.59c44.35±0.6455.24±0.74dT2组23.71±0.44bc44.51±0.5657.47±1.17cT3组25.37±0.83a43.91±0.6662.51±1.16a10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.008.F001图1空白对照组和T3组鱼体颜色对比注：上为对照组，下为T3组。2.4产油红酵母菌株PR61干菌体对红鲫鱼血清抗氧化指标的影响（见表6）由表6可知，T2组和T3组红鲫鱼血清的SOD和GSH-Px活性显著高于其他组（P0.05），MDA含量显著低于其他组（P0.05）。T3组的CAT活性显著高于空白对照组、阳性对照组和T1组（P0.05）。结果表明，饲料中添加破壁红酵母能够提高红鲫鱼的抗氧化能力，且添加量在0.5%以内时，红鲫鱼的抗氧化能力与添加量呈正相关。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.008.T006表6产油红酵母菌株PR61干菌体对红鲫鱼血清抗氧化指标的影响组别T-AOC/(U/mL)SOD/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)CAT/(U/mL)MDA/(μmol/L)空白对照组0.83±0.1290.57±3.85b197.02±11.23c6.89±0.65c8.75±0.77a阳性对照组0.81±0.1194.81±6.72b214.66±13.28bc7.43±0.58bc8.24±0.49aT1组0.87±0.0793.25±4.56b232.47±14.56b7.12±0.43c8.08±0.36aT2组0.94±0.15106.51±5.61a273.29±12.82a8.74±0.84ab6.14±0.63bT3组0.97±0.09113.91±6.68a292.33±13.46a9.69±1.04a5.87±0.78b3讨论3.1产油红酵母菌株PR61干菌体营养成分分析产油红酵母菌株PR61干菌体含有蛋白质、油脂、纤维素、矿物质和类胡萝卜素等营养物质。蛋白质是水产饲料配方最重要的组成部分，是水产动物生长和繁殖的基础，能够增强机体免疫力及维持健康状态。目前，鱼饲料大多采用植物源蛋白和鱼粉等作为蛋白来源，其中植物源蛋白普遍缺乏赖氨酸、精氨酸和蛋氨酸等鱼类必需氨基酸。鱼粉等动物源蛋白价格贵、成本高，因此开发新型蛋白质来源成为饲料研究的热点之一。酵母菌PR61干菌体的蛋白质含量高达45.20%，且富含鱼类必需氨基酸，可满足水产动物对蛋白质需求。此外，该菌体油脂含量高达38.93%，还富含具有促进水产动物抗体产生、提高抗氧化能力、增进体色的类胡萝卜素。本试验研究结果与吴康等[17]对海洋红酵母营养成分的研究结果类似。因此，产油红酵母菌菌株PR61应用于饲料行业有望缓解中国饲料资源紧缺问题。3.2产油红酵母菌株PR61干菌体对红鲫鱼成活率的影响本研究发现，在普通饲料中添加破壁红酵母有利于红鲫鱼的生长和发育，其成活率显著高于其他试验组。黄开森[18]研究发现，红酵母中所含类胡萝卜素能够促进抗体产生，从而增强宿主免疫能力，且红酵母菌体中富含的不饱和脂肪酸能够有效促进水产动物幼体变态发育；若红酵母油脂中的不饱和脂肪酸被鱼体吸收，可提高鱼体营养价值。本试验结果表明，饲料中添加破壁红酵母可达到与鱼粉同等的饲喂效果，能够提高红鲫鱼成活率。3.3产油红酵母菌株PR61干菌体对红鲫鱼体重、体长增长率的影响本研究发现，添加1.0%破壁红酵母饲喂组红鲫鱼的体重和体长增长率均显著高于其他试验组，表明饲料中添加破壁红酵母可提高红鲫鱼的生长速度和生产性能。原因是红酵母菌体富含蛋白质、肝糖、高级不饱和脂肪酸、类胡萝卜素及天然生长激素等营养物质，能够有效促进个体生长[19]。此外，红酵母产生的多种消化酶类、生长因子可有效促进各种水产动物的消化吸收，提高其对饲料的利用率[20]。添加未破壁红酵母的T1组红鲫鱼生长效果不理想，原因可能是酵母菌细胞壁比较厚，当红酵母菌体进入鱼体内后，胞内营养物质不易释放，鱼体无法充分消化吸收，红酵母细胞只起到饲料蛋白的作用。3.4产油红酵母菌株PR61干菌体对红鲫鱼饲料系数的影响目前，饲料配方中广泛使用动物源蛋白和植物源蛋白替换鱼粉，但替换鱼粉的新原料中含有一些抗营养因子，水生动物采食后出现肠道壁损伤、肠道功能完整性降低等现象，导致饲料消化吸收效果下降，饲喂效果不理想，所以开发微生物源蛋白成为饲料研究热点[19]。在饲料生产中，根据鱼的种类不同，可用酵母饲料替换不同比例鱼粉，且对水生动物的生长和生产性能无显著影响，大幅降低了鱼粉在饲料中的使用比例[21]。本试验中，添加1.0%破壁红酵母试验组红鲫鱼饲料系数显著低于对照组，表明破壁红酵母可替换一定比例的鱼粉，且能提高红鲫鱼的饲喂效果。3.5产油红酵母菌株PR61干菌体对红鲫鱼体色的影响水产动物体内不能合成色素，只能从饲料中获得，它们从食物中吸收的类胡萝卜素可直接沉积或转化为自身所需的类胡萝卜素，在体内沉积而呈现固有的体色和肉色[22-23]。虾青素是1种酮基式类胡萝卜素。王新等[24]研究发现，饲料中添加150~200 mg/kg虾青素可有效改善高体鳑鲏体色。姜巨峰等[25]研究发现，天然虾青素添加量为150 mg/kg时，棘颊雀鲷a*值显著高于其他各组，表明在饲料中添加天然虾青素可改善棘颊雀鲷的体色。本试验菌株富含类胡萝卜素，添加1.0%破壁红酵母组红鲫鱼a*值和L*值显著高于其他试验组，表明在饲料中添加破壁红酵母可使鱼体颜色更鲜艳，提高其食用营养价值与经济价值。3.6产油红酵母菌株PR61干菌体对红鲫鱼抗氧化能力的影响动物体内抗氧化系统主要由抗氧化酶组成，主要包括SOD、GSH-Px及CAT等，具有清除自由基、保护细胞膜结构和功能完整的作用[26]。MDA含量通常可反映机体内脂质过氧化的程度，并间接地反映细胞损伤的程度[27]。王纯[28]研究发现，鲑鳟鱼饲料中添加芽孢杆菌V4和胶红酵母制备的复合菌剂，其血清中SOD、GSH-Px、CAT的活性及T-AOC显著高于对照组，MDA含量显著低于对照组。本研究发现，饲料中添加破壁红酵母PR61干菌体可显著提高红鲫鱼血清抗氧化酶活性，降低MDA含量，与前人研究结果相似。原因可能是红酵母PR61干菌体富含的类胡萝卜素具有消除自由基、维护细胞膜稳定性和提高免疫力的作用[29-30]，有助于提高鱼类抗氧化能力，从而提高鱼类的增重率、成活率等。4结论本研究结果表明，产油红酵母菌株PR61干菌体富含蛋白质、油脂和类胡萝卜素等营养物质，且富含17种氨基酸，具有较高的营养价值。饲料中添加破壁产油红酵母PR61干菌体能够提高鱼苗成活率和增重率，降低饲料系数。当破壁红酵母添加量为1.0%时，鱼苗的生长指标结果最佳，鱼体颜色更鲜艳。但破壁红酵母添加量为0.5%时可达到最佳的抗氧化效果。