中草药饲料添加剂具有独特的生物学功能及低残留等优势，可作为抗生素替代品在畜禽生产中应用，有着广阔的市场前景[1]。目前，筛选具有抗炎免疫促进作用的中草药已成为重要的研究方向。蒲公英具有抑菌消炎、调节血糖、抗衰老、增强免疫力、抑制肿瘤等效[2]；黄芩具有清热、抗病毒、消炎和抗氧化等作用[3]；板蓝根具有抗菌、清热解毒、凉散风热等功效[4]；金银花具有清热解毒等功效[5]；穿心莲具有抗炎、抗菌、抗肿瘤、抗病毒、保护心血管、降糖、抑制血小板聚集、保肝等功效[6]；大青叶具有抗病原微生物、抗内毒素、抗炎、增强免疫功能、解热等作用[7]；连翘具有抗炎、抑菌、抗病毒、抗氧化、保肝、抗肿瘤、免疫调节等作用[8]。因此，本研究选取蒲公英、黄芩、板蓝根、金银花、穿心莲、大青叶、连翘组成中草药饲料添加剂，研究其对肉仔鸡生长性能、免疫功能和肠道菌群的影响，为其在肉鸡养殖中的应用提供参考。1材料与方法1.1材料1.1.1试验动物及日粮1日龄爱拔益加（AA）肉仔鸡由锦州鸿强牧业有限公司提供。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.16.008.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成/%1~21 d22~42 d营养水平1~21 d22~42 d合计100.00100.00玉米52.5058.80代谢能/(MJ/kg)12.4312.63豆粕40.0033.80粗蛋白/%20.0015.50豆油3.003.00粗纤维/%6.008.00磷酸氢钙1.901.80粗灰分/%8.009.00石粉1.081.22钙/%1.201.20食盐0.370.37总磷/%0.550.45氯化胆碱0.110.11赖氨酸/%1.340.15预混料0.800.80蛋氨酸/%0.550.40L-赖氨酸盐酸盐（98%）0.050.03胱氨酸/%0.400.36DL-蛋氨酸（98%）0.190.07注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 6 141.5 IU、VD3 1 789.2 IU、VE 7.99 mg、VK 1.82 mg、VB1 0.65 mg、VB2 3.93 mg、VB6 2.08 mg、VB12 0.01 mg、泛酸钙 6.65 mg、叶酸0.59 mg、生物素0.07 mg、胆碱332.28 mg、铁60.91 mg、铜6.01 mg、锌65.75 mg、锰62.30 mg、碘0.90 mg、硒0.21 mg。2.营养水平中粗蛋白为实测值，其余均为计算值。1.1.2药品及试剂蒲公英（满洲里）、黄芩（热河）、板蓝根（民乐县）、金银花（平邑）、穿心莲（临泉县）、大青叶（佛山）和连翘（沭阳）购自辽西国药店。盐酸左旋咪唑购自四川省飞天动物药业有限公司。白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-4（IL-4）、干扰素-γ（IFN-γ）和白细胞介素-10（IL-10）ELISA试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.2试验方法1.2.1中草药药液的配制参考杨梅梅[9]的方法，将蒲公英、黄芩、板蓝根、金银花、穿心莲、大青叶和连翘按照4∶2∶2∶2∶1∶1∶1质量比配伍，用10倍的水浸泡24 h，先用武火将水煮沸，再用文火煎煮2 h，倒出将药液，向药渣中加入10倍质量的水，武火煮沸，文火煎煮2 h，过滤去除药渣，收集两次的药液。文火将药液浓缩至1 g/mL。按照比例用蒸馏水将1 g/mL的药液配制成0.5、1.0、2.0 g/L的质量浓度，4 ℃冰箱保存，最多存放5 d。1.2.2试验设计选用1日龄肉仔鸡300只，随机分成5组，每组3个重复，每个重复20只。空白对照组肉仔鸡饮水中不加药，阳性对照组在饮水中添加0.1 g/L盐酸左旋咪唑，各试验组在饮水中分别添加0.5、1.0、2.0 g/L中草药。试验期42 d。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能根据Hao等[10]方法，计算肉仔鸡的平均日增重、平均日采食量和料重比。平均日增重=(末重－初重)/试验天数(1)平均日采食量=试验期间总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.3.2免疫功能1.3.2.1免疫器官指数试验42 d，每个重复随机选取3只鸡。称宰前活重，屠宰摘取胸腺、脾和法氏囊并称重，计算免疫器官指数[11]。免疫器官指数=免疫器官重(g)/体重(kg)(4)1.3.2.2脾组织切片试验42 d，每个重复各选择3只肉仔鸡，屠宰摘取脾，用10%的甲醛溶液固定，石蜡切片，苏木精伊红染色，用倒置显微镜观察[12]。1.3.2.3血清细胞因子试验第42 d，每个重复各取3只肉仔鸡，每只鸡翅下静脉采血5 mL，分离血清。使用ELISA试剂盒测定血清中IL-2、IL-4、IFN-γ和IL-10含量[13]。1.3.3肠道大肠杆和乳酸菌数量试验第42 d，每个重复各取3只肉仔鸡，空腹解剖取空肠和盲肠内容物，在麦康凯琼脂培养基和MRS固体培养基上培养，检测大肠杆菌和乳酸菌浓度[14]。1.4数据统计与分析采用SPSS 17.0软件进行单因素方差分析，LSD法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1中草药对肉仔鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，1~21 d，与空白对照组相比，中草药0.5 g/L组和1.0 g/L组肉仔鸡末重和平均日增重极显著提高（P0.01）；各中草药组肉仔鸡平均日采食量极显著提高（P0.01）；中草药1.0 g/L组料重比极显著降低（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.16.008.T002表2中草药对肉仔鸡生长性能的影响项目空白对照组阳性对照组中草药0.5 g/L组中草药1.0 g/L组中草药2.0 g/L组1~21 d1日龄重/(g/只)41.15±0.5239.46±1.5643.84±3.5642.19±2.7141.26±5.3621日龄重/(g/只)536.17±14.80Cc771.77±43.70Aab650.87±26.05ABb781.13±53.15Aa590.07±14.42BCbc平均日增重/[g/(只·d)]23.57±0.72Cc34.87±2.12Aa28.91±1.14Bb35.19±2.47Aa26.13±0.65BCbc平均日采食量/[g/(只·d)]50.11±1.81Cc63.18±2.24Aa59.01±2.62ABb57.72±1.93ABb56.69±3.04Bb料重比1.86±0.11Aa1.82±0.07Bb2.04±0.10ABa1.65±0.08Bc2.17±0.08Aa22~42 d42日龄重/(g/只)1 906.67±105.04Cd2 590.00±70.89Aab2 475.00±31.22Ab2 611.67±75.88Aa2 117.00±5.20Bc平均日增重/[g/(只·d)]65.26±5.66Cc86.58±1.30Aa86.86±0.26Aa87.17±1.48Aa72.71±0.75Bb平均日采食量/[g/(只·d)]140.86±1.81ABb145.25±2.14Aa136.70±1.89Bc133.93±1.93Bc141.33±2.61ABb料重比2.17±0.17Aa1.68±0.02Cc1.57±0.02Cc1.54±0.03Cc1.94±0.05Bb1~42 d平均日增重/[g/(只·d)]45.50±2.55Cd62.21±1.73Aab59.30±0.70Ab62.67±1.80Aa50.63±0.06Bc平均日采食量/[g/(只·d)]95.48±5.81Bb99.51±2.24Aa97.70±4.62Bb95.83±2.93Bb99.01±5.61ABb料重比2.10±0.12Aa1.60±0.03Bb1.65±0.07Bb1.53±0.04Bb1.96±0.11Aa注：同行数据肩标不同大写字母表示差异极显著（P0.01），不同小写字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。22~42 d，与空白对照组相比，各中草药组肉仔鸡末重和平均日增重极显著提高（P0.01），料重比均极显著降低（P0.01）；中草药0.5 g/L组和1.0 g/L组肉仔鸡平均日采食量显著降低（P0.05）。1~42 d，与空白对照组相比，各中草药组肉仔鸡的平均日增重极显著提高（P0.01）；中草药0.5 g/L组和中草药1.0 g/L组肉仔鸡的料重比极显著降低（P0.01）。2.2中草药对肉仔鸡免疫功能的影响2.2.1中草药对肉仔鸡免疫器官指数的影响（见表3）由表3可知，与空白对照组相比，各中草药组肉仔鸡胸腺、法氏囊和脾指数均极显著提高（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.16.008.T003表3中草药对肉仔鸡免疫器官指数的影响组别胸腺指数法氏囊指数脾脏指数空白对照组2.35±0.24Cc3.29±0.16Dd1.17±0.26Bc阳性对照组2.95±0.17ABb3.70±0.12BCbc2.58±0.15Aab中草药0.5 g/L组2.92±0.12ABb3.79±0.14Bb2.57±0.12Aab中草药1.0 g/L组3.16±0.19Aa4.25±0.15Aa2.72±0.14Aa中草药2.0 g/L组2.84±0.25Bb3.61±0.13Cc2.54±0.15Ab注：同列数据肩标不同大写字母表示差异极显著（P0.01），不同小写字母表示差异显著（P0.05），相同字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。g/kg2.2.2中草药对肉仔鸡脾组织结构的影响（见图1~图5）由图1~图5可知，中草药各浓度组肉仔鸡脾小结体积增大，脾小结与边缘区界线清晰，白髓和红髓中的淋巴细胞体积增大，数量增多。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.16.008.F001图1空白对照组肉仔鸡脾组织结构（400×）注：组织切片长为20 μm；下图同。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.16.008.F002图2阳性对照组肉仔鸡脾组织结构（400×）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.16.008.F003图3中草药0.5 g/L组肉仔鸡脾组织结构（400×）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.16.008.F004图4中草药1.0 g/L组肉仔鸡脾组织结构（400×）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.16.008.F005图5中草药2.0 g/L组肉仔鸡脾组织结构（400×）2.2.3中草药对肉仔鸡血清细胞因子的影响（见表4）由表4可知，与空白对照组相比，各中草药组肉仔鸡血清中IL-2、IL-4和IFN-γ含量均极显著提高（P0.01）；中草药1.0 g/L组肉仔鸡血清中IL-10含量极显著提高（P0.01），中草药0.5 g/L组和中草药2.0 g/L组均显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.16.008.T004表4中草药对肉仔鸡血清细胞因子的影响组别IL-2IL-4IFN-γIL-10空白对照组42.07±2.81Bb33.74±1.41Cc33.59±1.19Cc41.23±3.13Bb阳性对照组49.51±2.38Aa42.61±1.49Bb41.32±1.54Bb55.87±5.49Aa中草药0.5 g/L组48.34±2.27Aa40.46±3.21Bb41.30±1.70Bb53.26±6.79ABa中草药1.0 g/L组49.38±0.72Aa47.72±1.66Aa46.32±1.12Aa56.82±4.23Aa中草药2.0 g/L组47.20±2.88Aa39.20±1.31Bb40.25±1.85Bb53.86±5.47ABang/L2.3中草药对肉仔鸡肠道大肠杆菌和乳酸菌数量的影响（见表5）由表5可知，与空白对照组相比，各中草药组肉仔鸡空肠大肠杆菌数均极显著降低（P0.01）；中草药1.0 g/L组肉仔鸡盲肠大肠杆菌数极显著降低（P0.01），中草药0.5 g/L组和中草药2.0 g/L组显著降低（P0.05）；中草药1.0 g/L组肉仔鸡空肠乳酸菌数极显著提高（P0.01），中草药0.5 g/L组和中草药2.0 g/L组显著提高（P0.05）；各中草药组肉仔鸡盲肠乳酸菌数均极显著提高（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.16.008.T005表5中草药对肉仔鸡肠道大肠杆菌和乳酸菌数量的影响组别空肠大肠杆菌数盲肠大肠杆菌数空肠乳酸菌数盲肠乳酸菌数空白对照组7.63±0.31Aa8.48±0.44Aa6.45±0.46Bc8.38±0.45Bb阳性对照组6.19±0.39Bbc7.81±0.17Ab7.58±0.34ABb9.21±0.71Aa中草药0.5 g/L组6.04±0.48Bbc7.65±0.39ABb7.65±0.63ABab9.08±0.71Aa中草药1.0 g/L组5.30±0.86Bc6.82±0.35Bc8.44±0.30Aa9.84±0.59Aa中草药2.0 g/L组6.22±0.16Bb7.75±0.26Ab7.42±0.49ABb9.03±0.61AalgCFU/g3讨论3.1中草药对肉仔鸡生长性能的影响动物的生长性能对养殖经济效益具有重要作用[15]。杨玄等[16]通过Meta分析研究中草药饲料添加剂对断奶仔猪和生长育肥猪生长性能的影响，发现各类型中草药饲料添加剂总体上极显著提高了断奶仔猪和生长育肥猪平均日增重，极显著降低断奶仔猪料重比、腹泻率以及生长育肥猪料重比。奴尔古扎力·艾热提等[17]研究发现，利用黄芪多糖、枸杞多糖和姬松茸多糖组方显著降低了肉鸡的料重比。李金凤等[18]研究发现，甘草、淫羊藿、银杏、党参和黄芪中药组方能够极显著提高肉鸡的末重和平均日增重，降低料重比。梁光哲等[19]研究发现，丁香和槐角提取物显著提高了三黄鸡的平均日采食量、平均日增重，降低了料重比。本研究中，草药0.5 g/L组和中草药1.0 g/L组各日龄段的肉仔鸡末重和平均日增重均极显著提高，中草药1.0 g/L组料重比极显著降低，与上述研究结果相一致。原因可能是中草药中含有糖类物质，作为能量物质能够促进动物生长发育，同时中草药能够提高肉仔鸡的免疫功能，保证肠道健康，从而促进生长发育。3.2中草药对肉仔鸡免疫功能的影响机体的免疫功能是通过免疫器官、免疫细胞和免疫分子实现的。免疫器官指数在一定程度上可反映器官功能；淋巴细胞是免疫活性细胞，只有接受抗原刺激后才能分化增殖，产生特异性免疫应答，参与机体体液免疫和细胞免疫应答。陈志炫等[14]研究发现，三辛酸甘油酯、桃金娘烯醇、肉豆蔻酸异丙酯、薄荷醇和樟脑为主要成分的中草药提取复合物能够提高乳鸽的免疫器官指数。李金凤等[20]研究发现，甘草、淫羊藿、银杏、党参和黄芪组方能够提高肉鸡脾指数，诱导脾淋巴细胞增殖，刺激脾淋巴细胞IFN-γ和IL-4的分泌，上调脾淋巴细胞IFN-γ和IL-4 mRNA表达水平。华诗卉等[21]研究发现，黄芪、紫锥菊、当归等中药组方能够提高鸡新城疫病毒（NDV）抗体效价，提高免疫器官指数，刺激脾淋巴细胞增殖，诱导淋巴细胞因子TNF-α和IL-4的分泌。靳二辉等[22]研究发现，黄芪、枸杞、金银花等组方能够提高鸡法氏囊指数，提高NDV抗体效价，提高血清中IgG、IgM、IL-2、IL-4和IFN-γ含量。本研究中，不同水平中草药能够极显著提高肉仔鸡胸腺、法氏囊和脾指数，极显著提高血清中IL-2、IL-4和IFN-γ含量；脾组织结构中的淋巴细胞体积增大，数量增多。研究表明，本研究所用的中草药能够激活淋巴细胞，激活的淋巴细胞分裂增殖，提高免疫器官质量，从而提高免疫器官指数。激活的淋巴细胞分泌抗体和细胞因子，从而提高机体的免疫功能。3.3中草药对肉仔鸡肠道菌群数量的影响提高肠道中有益菌群浓度，抑制有害致病菌的生长，调节肠道菌群丰富度和多样性，平衡肠道内微生态环境能够维持机体健康。梁光哲等[19]研究发现，丁香和槐角提取物对三黄鸡肠道细菌在门和属水平均有改善趋势，对菌群的调节具有积极作用。郑翠玲[23]研究发现，五倍子提取物可以显著降低猪肠道大肠杆菌、沙门菌数量，提高乳酸杆菌、芽孢杆菌数量。本研究中，不同水平中草药均显著或极显著抑制肠内有害菌大肠杆菌的生长，增加有益菌乳酸菌的数量，从而维持肠道的微生态平衡，减少肠道疾病的发生。原因是中草药的多糖是肠道菌群的重要营养来源，可以诱导肠道菌群结构改变，改善代谢功能，对肠道内菌群产生影响。4结论本试验条件下，中草药能够提高肉仔鸡生长性能，提高免疫功能，改善肠道环境，以中草药1.0 g/L组效果较好。