黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）是多年生草本植物，为唇形科草本植物黄芩的干燥根茎[1]。我国传统医学药理认为黄芩性苦、寒，归肺、胆、大肠、小肠经，具有清热解毒、止血、安胎等功能作用[2-3]。2020版中国药典一部把黄芩苷作为评价药材黄芩质量的指标性成分，规定黄芩含黄芩苷不得少于9%，黄芩提取物含黄芩苷不得少于85%[1]。大部分药厂在使用黄芩药材生产黄芩苷后，大量的黄芩提取液被直接废弃，不仅污染环境，还造成极大的资源浪费和经济效益损失。废弃的黄芩提取液中含有大量的黄酮类化合物[4-6]，可通过分离纯化工艺，富集得到黄芩提取液中的黄酮（简称“黄芩黄酮”）[7-8]。黄芩黄酮具有良好的抗菌[9]、促生长[10]、抗氧化[11]、提高免疫力[10]、调节肠道微生物[12]等功效。随着“禁抗、限抗、无抗”政策的实施，需要研发及应用绿色、安全、无公害的抗生素替代品[13-14]。黄芩黄酮具有良好的生物活性，可将其开发为饲用中兽药产品，从而开发黄芩的药用价值。特征图谱是指对植物提取物在经过适当的化学前处理后，采用液相色谱或气相色谱等分析方法，选择在各批样品中均有的主要色谱峰作为特征峰，从而获得可以识别该产物来源植物共有组分群体特征的图谱[15]，目前已成为《植物提取物类饲料添加剂申报指南》中识别来源植物及工艺的法定方法。特征图谱作为重要的定性鉴别方法，只需对样品中重要的特征信息进行分析，简单易行，对植物提取物产品的质量评价与控制具有高效、可控的优点，也便于监管部门加强和规范植物提取物的质量管理[16-20]。本研究拟按照《中国兽药典》相关规定，建立黄芩黄酮的有效组分的分析方法，制定了黄芩黄酮的HPLC特征图谱，以期为黄芩黄酮的质量评价提供参考。1材料与方法1.1试验仪器与试剂E2695高效液相色谱仪（沃特世科技（上海）有限公司），Agilent-6530高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用仪（美国安捷伦），数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），色谱柱ZORBAX C18（4.6 mm × 250 mm, 5 µm，安捷伦），ME204E分析天平（Mettler Toledo科技（中国）有限公司），超纯水制造系统（四川优普越纯科技有限公司）。乙腈（色谱纯，默克中国），甲酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）。标准品黄芩素（CAS号491-67-8，≥98%）、汉黄芩素（CAS号4431-47-4，≥98%）、黄芩苷（CAS号21967-41-9，≥98%）、汉黄芩苷（CAS号51059-44-0，≥98%）均购自中国食品药品检定研究院。1.2试验样品16批黄芩黄酮产品样品由诸城市浩天药业有限公司提供，其产品批号见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.T001表116批次黄芩黄酮产品样品编号样品原料产地批号样品原料产地批号S1山西ZHQ210812-6S9甘肃HQ211206-13S2山西ZHQ210822-3S10甘肃HQ211206-14S3山西ZHQ210918-4S11甘肃HQ211207-12S4山西ZHQ210918-5S12甘肃HQ211207-32S5陕西ZHQ211022-4S13河北HQ200908-51S6陕西ZHQ211022-5S14河北HQ211212-22S7陕西HQ211206-11S15河北HQ211212-23S8陕西HQ211206-12S16河北HQ211212-32黄芩黄酮的制备工艺：取一定量的干黄芩药材，加入10倍量的水煮沸提取，每次提取1.0 h，提取两次，合并两次提取液酸析，过滤得沉淀（另置黄芩苷）和酸析液；酸析液加20%碱调pH值至4.5~5.0，过滤，滤液进LX-48树脂柱，加3倍量80%乙醇解析，解析液浓缩干燥制得黄芩黄酮样品。质控样品（QC样品）分别从16批黄芩黄酮样品等比例取一定量混合均匀。1.3溶液配制1.3.1对照品溶液的配制精密称取适量的4个标准品，置于10 mL容量瓶内，加入适量的90%甲醇水溶液，超声至充分溶解，冷却至常温，定容，混合均匀，得到质量浓度分别为666.0、362.0、297.0、137.0 mg/L的对照品溶液，转移至样品瓶中，放入4 ℃冰箱冷藏。1.3.2供试品溶液的配制分别精密称取黄芩黄酮样品及质控（QC）样品各20 mg分别置于10 mL容量瓶中，编号，加入适量70%的乙醇溶液，经超声至样品充分溶解后，冷至常温，定容，混合均匀，转移至样品瓶中，置于4 ℃冰箱冷藏。1.4色谱条件优化参照《中华人民共和国药典》[1]及《中华人民共和国兽药典》[21]中的高效液相色谱法，对QC样品进行检测波长选择，并对流速、柱温、进样量、色谱柱考察。首先对QC样品进行DAD全波长扫描，确定最大吸收波长，且在最大吸收波长下样品检测扫描结果中色谱峰数量及响应程度，分别考察不同流速（0.8、1.0、1.2 mL/min）、不同柱温（25、30、35 ℃）、不同进样量（3、5、10 µL）和不同色谱柱（Agilent ZORBAX C18、Unitary C18、Sunfire C18）对黄芩黄酮中主要有效成分分离的影响。1.5方法学考察按1.3.2方法配制QC样品溶液，参照国家药品监督管理局颁布的《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》[22]，进行精密度考察（对同一样品连续进样6次）、稳定性考察（依次在0、2、4、6、8、10、12、24 h进样）、进行验证（平行配制6份QC样品溶液，分别进样），分别记录每次结果色谱图，以黄芩苷的色谱峰（3号）为S峰，计算各特征峰的相对保留时间及相对峰面积RSD值。1.6液相质谱色谱条件根据刘秀斌[23]的色谱质谱条件，并根据实际条件进行优化。色谱柱为华谱X-aqua C18（150 mm × 2.1 mm，5.0 μm）。洗脱体系：水相（A）0.1%甲酸水，有机相（B）0.1%甲酸乙腈。梯度洗脱程序：0~5 min，5%~13% B；5~15 min，13%~18% B；15~25 min，18%~20% B；25~35 min，20%~22% B；35~45 min，22%~25% B；45~46 min，25%~35% B；46~50 min，35%~38% B；50~55 min，38%~50% B；55~65 min，50%~95% B；65~70 min，95% B；70~70.1 min，95%~5% B；70.1~77 min，5% B。柱温设置30 ℃，流速为0.3 mL/min，进样量为4 μL，检测波长为280 nm。质谱条件：安捷伦DualAJSESI源，使用负离子全扫描模式。质子数/电荷数（m/z）100~1 000，鞘气温度为350 ℃，鞘气流速为11.0 L/min，干燥气温度为300℃，干燥气压力为35 psi，干燥气流速为8 L/min，毛细管电压为3 500 V，碎裂电压为175 V。数据采集软件：Agilent Mass Hunter acquisition Work station Software（B.08.00）。高分辨二级质谱数据采用Target MS/MS模式采集，根据标准品的分子量大小和结构稳定性在10~40 eV范围内选择合适的碰撞能量。使用参考溶液连续校准飞行时间质谱仪，以获得高精度质量测量（负离子模式的m/z为112.985 5、966.000 7）。2结果与分析2.1色谱条件优化结果2.1.1检测波长的选择（见图1）由图1可知，出峰后，对样品色谱图采用全波长扫描，结果显示大多数色谱峰的最大吸收波长在280 nm，因此选择280 nm作为数据采集波长。图1波长优化结果10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F1a110.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F1a22.1.2流速的考察结果（见图2）由图2可知，1.2 mL/min的流速条件下导致了一些组分还未被完全分离，0.8 mL/min的流速分离效果与1.0 mL/min相似，但整个分离过程相对较长，故确定最佳流速为1.0 mL/min。图2流速优化结果10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F2a110.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F2a210.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F2a32.1.3柱温的考察（见图3）由图3可知，色谱柱温度对黄芩黄酮中主要有效成分的分离差别并不大，但柱温为30 ℃时色谱峰响应及峰形最佳，最终选择柱温30 ℃。图3柱温优化结果10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F3a110.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F3a210.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F3a32.1.4进样量的考察（见图4）由图4可知，3 µL进样量太少以至于其特征峰响应低，10 µL进样量太大，则造成色谱峰展宽过大、分离不彻底，故选择5 µL作为本试验方法的进样量。图4柱温优化结果10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F4a110.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F4a210.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F4a32.1.5色谱柱的考察（见图5）由图5可知，不同色谱柱对色谱峰分离效果影响差别较大，其中Agilent色谱柱对黄芩黄酮有效成分分离效果最佳，响应度最高，故综合考虑选择Agilent ZORBAX色谱柱。图5柱温优化结果10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F5a110.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F5a210.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F5a3最终优化得到的色谱条件为色谱柱Agilent ZORBAX C18（4.6 mm × 250 mm，5 μm），柱温30 ℃，DAD全扫描最佳的检测紫外波长为280 nm，流动相乙腈（A）-0.1%甲酸水（B），流速1.0 mL/min，进样量5 μL。梯度洗脱程序见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.T002表2梯度洗脱程序时间/min乙腈（A）/%0.1%甲酸水溶液（B）/%090103802087723207525257030305050355555405952.2方法学考察结果（见表3~表8）使用优化后的色谱条件对QC样品进行测试分析，以黄芩苷色谱峰（3号）为S峰。由表3~表8可知，各特征峰和S峰之间相对保留时间的RSD3%，相对峰面积RSD5%，所有方法学结果均符合要求[22,24]。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.T003表3精密度相对保留时间样品编号相对保留时间RSD/%精密度1精密度2精密度3精密度4精密度5精密度610.5060.5060.5090.5070.5060.5060.23920.5640.5690.5690.5690.5690.5690.35931.0001.0001.0001.0001.0001.0000.00041.2631.2631.2651.2631.2641.2620.08251.4751.4751.4491.4761.4781.4760.75361.5981.5981.6041.5991.6011.5980.15171.8721.8761.8731.8791.8771.8770.14282.0942.1132.1142.1132.1112.1140.37110.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.T004表4精密度相对峰面积样品编号相对峰面积RSD/%精密度1精密度2精密度3精密度4精密度5精密度617.6147.3667.8537.6927.6677.6112.07326.0086.4166.2976.276.2646.2022.01631.0001.0001.0001.0001.0001.0000.00043.6503.5903.5753.5823.5363.4401.97150.5590.5770.5540.5460.5660.5661.92461.6091.6671.7571.6921.6781.6882.83070.1960.1860.1740.1880.1810.1843.96780.0280.0280.0270.0260.0260.0283.61910.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.T005表5稳定性相对保留时间样品编号相对保留时间RSD/%稳定性1稳定性2稳定性3稳定性4稳定性5稳定性610.5120.5100.5070.5110.5090.5060.45520.5650.5630.5670.5680.5610.5650.45431.0001.0001.0001.0001.0001.0000.00041.2671.2631.2671.2671.2671.2670.12951.4431.4441.4421.4741.4411.4440.88361.5881.5871.5831.5961.5911.5900.27471.8711.8781.8741.8661.8811.8730.28182.0792.1142.1142.1142.0952.0960.68810.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.T006表6稳定性相对峰面积样品编号相对峰面积RSD/%稳定性1稳定性2稳定性3稳定性4稳定性5稳定性610.2380.2520.2410.2410.2430.2411.99626.0086.4166.2976.2706.2646.2022.16031.0001.0001.0001.0001.0001.0000.00043.6503.5903.5753.5823.5363.4401.97150.5590.5770.5540.5460.5660.5661.92461.6091.6671.7571.6921.6781.6882.83070.1860.1860.1740.1880.1810.1842.77180.0280.0280.0270.0260.0260.0283.61910.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.T007表7重复性相对保留时间样品编号相对保留时间RSD/%重复性1重复性2重复性3重复性4重复性5重复性610.5100.5090.5100.5100.5100.5100.08020.5650.5650.5650.5660.5650.5660.09131.0001.0001.0001.0001.0001.0000.00041.2681.2681.2681.2681.2671.2680.03251.4461.4461.4441.4451.4451.4450.05261.5931.5931.5931.5941.5941.5920.04771.8751.8761.8771.8771.8771.8760.04482.1142.0842.1132.0782.1102.0790.84410.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.T008表8重复性相对峰面积样品编号相对峰面积RSD/%重复性1重复性2重复性3重复性4重复性5重复性610.2400.2380.2400.2410.2350.2421.04620.2050.2030.2050.2050.2010.2060.89931.0001.0001.0001.0001.0001.0000.00040.3600.3600.3590.3590.3590.3600.15250.3160.3160.3160.3230.3230.3231.20061.4281.4271.4261.4281.4271.4280.05770.2260.2250.2240.2260.2260.2240.43780.0270.0260.0280.0250.0260.0284.5412.3特征峰的指认与参照峰选择黄芩中主要含有黄芩苷、黄芩素、白杨素6-C-阿拉伯糖苷-8-C-葡萄糖苷、白杨素6-C-阿拉伯糖苷-8-C-葡萄糖苷体、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷、白杨素-6-C葡萄糖苷、汉黄芩苷和汉黄芩素等化学成分[25-27]。采用优化后的色谱条件分别对QC样和对照品溶液进行HPLC分析，得到对照品色谱图，见图6。将对照品色谱图与QC样品色谱图进行定性比对，见图7。确认各特征峰所对应的具体物质，指认了4个特征峰，分别为黄芩苷（3号峰，相对保留时间（Rt）=16.916 min）、汉黄芩苷（6号峰，Rt=27.011 min）、黄芩素（7号峰，Rt=31.661 min）和汉黄芩素（8号峰，Rt=35.582 min）。为使黄芩黄酮主要成分信息更全面，对剩余无法用标准品指认的1、2、4、5号特征峰，采用了HPLC-Q-TOF-MS技术手段，获得了黄芩黄酮特征图谱中8个特征峰的一级和二级质谱碎片信息，检测结果见图8和表9。根据图8和表9结果，并结合已有文献报道[25-28]，初步确定了剩余4个峰对应的化合物分别为白杨素6-C-阿拉伯糖苷-8-C-葡萄糖苷（1号峰）、白杨素6-C-阿拉伯糖苷-8-C-葡萄糖苷（2号峰）、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷（4号峰）和白杨素-6-C葡萄糖苷（5号峰）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F006图6对照品色谱图注：3为黄芩苷，6为汉黄芩苷，7为黄芩素，8为汉黄芩素。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F007图7对照与供试品叠加图谱注：S1为对照品，S2为QC样品。图8黄芩黄酮负离子质谱和色谱图10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F8a1（a）负离子质谱10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F8a2（b）负离子色谱10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.T009表9黄芩黄酮的HPLC-Q-TOF-MS/MS分析结果编号出峰时间/min相对分子质量［M-H］质荷比化学式误差/(mg/kg)二级离子碎片［M-H］质荷比名称实测值理论值114.092547.146 4547.145 2C26H28O132.2457.115 4、427.104 8、367.084 6、337.073 6白杨素6-C-阿拉伯糖苷-8-C-葡萄糖苷216.367547.153 1547.145 2C26H28O1314.4457.153 1、427.110 4、367.081 0、337.078 0白杨素6-C-阿拉伯糖苷-8-C-葡萄糖苷327.911445.079 5445.076 5C21H18O116.7269.049 6、175.023 2、113.027 6黄芩苷433.254429.083 9429.082 2C21H18O104.0283.052 5、175.026 6、113.026 9白杨素7-O-葡萄糖醛酸苷537.275415.105 4415.102 3C21H20O97.5337.074 2、325.074 9、307.064 6、295.064 6白杨素6-C-葡萄糖苷643.302459.105 0459.092 8C22H18O117.0283.070 6、268.046 3、175.031 4、113.029 8汉黄芩苷750.032269.043 7269.045 0C15H10O58.5251.041 2、241.051 6、223.045 3、195.052 5黄芩素854.749283.063 4283.060 7C16H12O59.5268.042 5、163.007 7汉黄芩素鉴于药典中将黄芩苷设为药材黄芩的指标成分，根据特征图谱制定过程中可选择提取物中一个主要有效成分或主要指标成分的特征峰作为S峰。本研究中，黄芩苷不但峰响应强度较高，而且出峰时间适中，所以将黄芩苷的峰设定为HPLC特征图谱的S峰。2.416批次黄芩黄酮特征图谱特征峰的相对保留时间（见表10）取制备好的各批次黄芩黄酮供试品溶液，按优化后的色谱条件检测分析，使用软件（Empower）导出各批次样品色谱峰表，获得各特征峰的保留时间，以S峰的保留时间为参照标准，计算各批次黄芩黄酮样品特征峰的相对保留时间。由表10可知，黄芩黄酮各批次样品特征峰的相对保留时间RSD均小于3%，8个共有峰相对保留时间的平均值分别为0.513、0.569、1.000、1.267、1.446、1.597、1.872、2.104，并以此平均值确定了各特征峰相对保持时间的规范水平。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.T010表1016批次黄芩黄酮特征图谱特征峰的相对保留时间项目样品编号12345678ZHQ210812-60.5090.5641.0001.2681.4451.5921.8732.094ZHQ210822-30.5140.5691.0001.2681.4461.5981.8712.113ZHQ210918-50.5130.5691.0001.2671.4471.5981.8712.114ZHQ211022-40.5130.5691.0001.2671.4461.5981.8712.113ZHQ211022-50.5130.5691.0001.2681.4461.5971.8692.111ZHQ210918-40.5140.5691.0001.2671.4461.5971.8692.114HQ211206-110.5150.5711.0001.2681.4481.6021.8782.084HQ211206-120.5140.5701.0001.2661.4441.5971.8712.113HQ211206-130.5140.5701.0001.2671.4461.5981.8732.078HQ211206-140.5130.5691.0001.2671.4451.5951.8682.110HQ211207-120.5140.5701.0001.2671.4461.5981.8732.079HQ211207-320.5140.5701.0001.2671.4461.5981.8722.114HQ211212-220.5140.5701.0001.2671.4471.5991.8712.114HQ211212-320.5130.5691.0001.2671.4471.6011.8722.114HQ211212-230.5080.5631.0001.2661.4431.5911.8732.095HQ200908-510.5100.5651.0001.2681.4441.5911.8742.096平均值0.5130.5691.0001.2671.4461.5971.8722.104RSD/%0.3900.41000.0500.0900.2000.1300.6502.5特征图谱的生成使用软件（Empower）对16批次样品色谱图叠加，选择各批次样品色谱图中共有且响应度、分离度较好的8个色谱峰标定为特征峰，再将色谱原始数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012年版）》软件，多点校正，再次确定所选定的8个特征峰在所有批次样本中均能被鉴别，见图9。自动匹配后，建立黄芩黄酮特征图谱的对照图谱（R），见图10。根据上述两种方式检验，在最终确认有8个共有特征峰后，依其出峰顺序标记为1~8号峰。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F009图916批黄芩黄酮色谱峰的叠加图谱10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.021.F010图10黄芩黄酮对照特征图谱2.6特征图谱的结果评判按照优化后的色谱条件对质控样品测定的HPLC图谱，与2.5生成黄芩黄酮对照特征图谱进行比较，测定质控样品的HPLC图谱与对照特征图谱具有相同轮廓和特征峰，且测定质控样品的HPLC图谱中峰1~峰8与S峰的相对保留时间分别为0.514、0.569、1.000、1.268、1.446、1.598、1.871、2.113，与规定值的偏差分别为0.194%、0、0、0.079%、0、0.062%、0.053%、0.428%，均小于3%，符合结果判定要求。3讨论3.1色谱条件优化分析HPLC特征图谱的研究分析受到许多因素如不同仪器、洗脱梯度、流动相流速、色谱柱的温度、检测波长和样品进样量等条件的影响。本试验为了使样品中各物质得到更好的保留与分离，通过优化检测波长、流动相流速、色谱柱柱温、样品进样量等因素以期得到稳定可靠的色谱条件。考察对有机相乙腈-0.1%甲酸水和甲醇-0.1%甲酸水、乙腈-0.2%磷酸水等不同的流动相对黄芩黄酮化学成分洗脱的影响，结果发信啊，在乙腈-0.1%甲酸水的梯度洗脱下，出峰情况好、分离度高，最终选择乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）为流动相。3.2特征峰的指认结果分析特征峰的指认一般认为通过对照品进行比对即可，对于某些特征峰无法从市场上获得其对应的标准品的情况。因此认为通过液相色谱质谱或气相色谱质谱技术对该特征峰进行初步指认值得推荐。特征图谱作为在指纹图谱基础上发展起来的能方便有效地辨识植物提取物产品特征及其来源的技术手段，具体是通过产品的特征成分来辨别产品是天然来源还是化学合成[29]。对于特征峰的数量要求，根据现有《中国药典》和《中国兽药典》中已有植物提取物的特征图谱情况，结合植物提取物特征图谱研究经验，一般认为标定4个特征峰便可反映植物提取物的内在质量，实现产品的质量可控，但基于在一定范围内增加质控指标可增强产品质量控制的共识，若在技术条件允许的情况下，可以指认更多的特征峰以增强产品的质量可控属性。本研究通过对照品比对已指认黄芩黄酮特征图谱中3号峰、6号峰、7号峰、8号峰。对剩余无法用标准品指认的1、2、4、5号特征峰，采用HPLC-Q-TOF-MS技术方法，获得了黄芩黄酮特征图谱中8个特征峰的一级和二级质谱碎片信息，结果发现，已指认的4个特征峰的归属完全正确；对于未指认的4个特征峰，根据质谱检测得到的碎片信息，结合已有文献报道[25-28]，初步确定了1、2、4和5号特征峰的归属。因此，黄芩黄酮特征图谱以8个特征峰为指标进行实际产品的质量控制。3.3特征图谱的建立与验证分析本试验通过对HPLC色谱条件考察、特征色谱峰指认等研究，根据《中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范》要求，将cdf格式原始数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012年版）》软件，进行时间窗设置、Mark峰匹配、多点校正，对已经指认的特征峰进一步标记和识别，对已建立的特征图谱得到验证。本研究中16批次的黄芩黄酮色谱图相对保留时间RSD均小于3%，因此该特征图谱可实现黄芩黄酮质量的稳定可控。4结论本研究通过高效液相色谱法测定分析了16批黄芩黄酮样品，建立了黄芩黄酮HPLC特征图谱，指定了8个共有特征峰，通过对照品比对指认了4个特征成分，分别为黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素。基于质谱分析结果和文献报道初步指认另外4个特征峰，分别为为白杨素6-C-阿拉伯糖苷-8-C-葡萄糖苷、白杨素6-C-阿拉伯糖苷-8-C-葡萄糖苷、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷和白杨素-6-C葡萄糖苷。将黄芩苷（3号）峰设为S峰，计算8个特征峰的相对保留时间，得出黄芩黄酮各特征峰相对保留时间的规定值，分别为0.513、0.569、1.000、1.267、1.446、1.597、1.872、2.104，建立的黄芩黄酮HPLC特征图谱可以实现对黄芩黄酮的质量评价。本研究中黄芩黄酮特征图谱制定方法的精密度、重复性、稳定性均符合条件要求，并可用于对黄芩黄酮的质量控制，可为黄芩药用资源综合开发与利用提供参考。