三七是常见的中药材，研究者多关注三七的开发利用，而其副产物三七茎叶常作为废弃物丢弃，利用率极低，因此开发利用三七茎叶具有重要意义[1]。三七茎叶性温味辛，治跌打、消瘀散血、敷毒疮、治痰火、止血。三七茎叶主要活性成分是三七茎叶皂苷[2]，还含有黄酮类、多酚类等多种活性成分以及丰富的维生素C、维生素B2、维生素B5、维生素B12、维生素K1、叶酸、生物素、钙、铁、锌、酮、锰、镁、钠等矿物质元素及蛋白质、氨基酸等营养成分[3-5]。现代药理学研究表明，三七茎叶具有改善睡眠、抗抑郁、预防治疗心血管疾病、抗氧化、保肝等作用[1]。西畴乌骨鸡是云南省优良的肉蛋兼用型地方禽种，遗传性能稳定，耐粗饲，肉质好，并且肉中各种氨基酸、维生素等营养物质的含量均较高[6]。但关于三七茎叶应用于动物生产中的文献报道较为鲜见。因此，本试验在饲粮中添加三七茎叶粉，研究其对西畴乌骨鸡血清生化指标、免疫功能以及肌肉品质的影响，为三七茎叶饲料化应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料三七茎叶采自三七种植基地，经清洗晾晒干后粉碎过40目，制成三七茎叶粉，其营养成分及有效活性成分含量见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.008.T001表1三七茎叶粉营养成分及有效活性成分含量（干物质基础）项目粗灰分粗蛋白质粗脂肪淀粉粗纤维酸性洗涤纤维中性洗涤纤维粗多糖总黄酮总皂苷含量11.6009.4702.3000.70026.40027.80047.1003.0000.1900.321%1.2试验设计及饲养管理选取42日龄健康、体重相近的西畴乌骨鸡270只，随机分成3组，每组3个重复，每个重复30只鸡，公、母各半。对照组乌骨鸡饲喂基饲粮，试验Ⅰ组、Ⅱ组分别使用4%、8%三七茎叶粉替代基础饲粮。基础饲粮为参照《鸡饲养标准》（NY/T 33—2004）配制的粉状配合饲料，基础饲粮组成及营养水平见表2。各试验组饲粮营养成分见表3。试验期90 d。试验前对鸡舍进行清扫消毒，饲喂期间鸡自由采食、饮水，所有试验鸡的饲养环境一致，免疫、卫生消毒等程序按照标准养殖制度进行。饲喂期间观察试验动物采食、排粪、发病以及是否有中毒或异常反应等，记录死亡情况。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.008.T002表2基础饲粮组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米69.30代谢能/(MJ/kg)13.51豆粕14.20粗蛋白质/%15.93膨化全脂大豆5.90粗脂肪/%3.50猪油5.20粗灰分/%0.60食盐0.30钙/%0.92石粉2.30总磷/%0.60碳酸氢钙0.80蛋氨酸/%0.85预混料2.00赖氨酸/%0.34注：1.预混料为每千克饲粮提供：VA 11 000 IU、VD3 2 000 IU、VE 30 IU、VK3 1.5 mg、VB1 2.60 mg、VB2 6.75 mg、泛酸20 mg、烟酸31 mg、VB6 5.25 mg、生物素0.30 mg、叶酸1.55 mg、VB12 0.027 mg、胆碱600 mg、铜10.8 mg、锰87 mg、锌70 mg、铁80 mg、硒0.27 mg、碘0.50 mg、钴0.1 mg。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.008.T003表3试验日粮营养水平（干物质基础）项目对照组Ⅰ组Ⅱ组粗灰分0.600.640.63粗蛋白质15.9316.1216.20粗脂肪3.503.503.70淀粉39.8039.4039.20粗纤维4.004.104.10酸性洗涤纤维4.004.304.50中性洗涤纤维13.5013.9014.00%1.3测定指标及方法1.3.1血清生化指标试验结束后，每个重复随机抽取4只鸡（公、母各半）采血，3 000 r/min离心10 min，吸取上层血清于4 ℃保存，通过BS-180全自动生化分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）检测血清中总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、碱性磷酸酶（ALP）、γ-谷氨酰基转移酶（GGT）、乳酸脱氢酶（LDH）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、肌酐（CRE）、尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、血糖（GLU）。1.3.2免疫功能试验第45 d，每个重复随机抽取4只鸡（公、母各半）采血，离心后吸取上层血清于4 ℃保存，采用BS-180全自动生化分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）检测免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量。采血后再取2只鸡（公、母各半）称重后解剖，取法氏囊、胸腺和脾脏用滤纸擦干称重，计算免疫器官脏器指数。免疫器官脏器指数=免疫器官重/体重(1)1.3.3肌肉营养成分试验结束后，选择采血后的西畴乌骨鸡解剖采集胸肌和腿肌切碎后测定水分，真空冷冻干燥机干燥后保存。参照GB 5009.4—2016测定粗灰分（Ash）含量，参照GB 5009.5—2016测定粗蛋白质（CP）含量，参照GB 5009.6—2016测定粗脂肪（EE）含量，参照GB 5009.268—2016测定钙（Ca）含量，参照GB 5009.268—2016测定磷（P）含量。1.3.4肌肉氨基酸含量肌肉样品采集处理同1.3.3。参照GB 5009.124—2016检测苏氨酸（Thr）、缬氨酸（Val）蛋氨酸（Met）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、苯丙氨酸（Phe）、赖氨酸（Lys）、天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、甘氨酸（Gly）、丙氨酸（Ala）、丝氨酸（Ser）、脯氨酸（Pro）、酪氨酸（Tyr）、组氨酸（His）、精氨酸（Arg）含量，计算必需氨基酸总量（EAA）、非必需氨基酸总量（NEAA）、氨基酸总量（TAA）。1.3.5肌肉脂肪酸含量肌肉样品采集处理同1.3.3。参照GB 5009.168—2016检测月桂酸（C12∶0）、豆蔻酸（C14∶0）、棕榈酸（C16∶0）、棕榈油酸（C16∶1）、硬脂酸（C18∶0）、油酸（C18∶1n9c）、亚油酸（C18∶2n6c）、γ-亚麻酸（C18∶3n6）、α-亚麻酸（C18∶3n3）、花生一烯酸（C20∶1）、花生二烯酸（C20∶2）、花生四烯酸（C20∶4n6）、EPA-二十碳五烯酸（C20∶5n3）、DHA-二十二碳六烯酸（C22∶6n3）的含量并计算脂肪酸总量。1.4数据统计与分析试验数据采用SPSS 22.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1饲粮中添加三七茎叶粉对西畴乌骨鸡血清生化指标的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，Ⅰ组、Ⅱ组乌骨鸡血清中球蛋白含量显著升高（P0.05），ALP活性、BUN含量显著降低（P0.05），Ⅱ组乌骨鸡血清中TP含量显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.008.T004表4饲粮中添加三七茎叶粉对西畴乌骨鸡血清生化指标的影响项目对照组Ⅰ组Ⅱ组TP/(g/L)43.67±3.06b45.00±0.65b48.67±1.53aALB/(g/L)9.01±0.469.28±0.509.67±0.16GLB/(g/L)33.92±0.30c35.20±0.21b38.45±0.48aALT/(U/L)5.36±0.335.38±0.445.44±0.38AST/(U/L)223.67±6.02225.00±11.00224.33±7.64TBIL/(μmol/L)2.57±0.042.53±0.062.49±0.01ALP/(U/L)674.33±11.54a642.00±7.00b649.33±6.66bGGT/(U/L)20.48±0.9520.14±1.0321.41±0.66LDH/(U/L)1 934.33±32.961 926.65±19.041 921.98±98.16TG/(mmol/L)4.46±0.074.50±0.034.51±0.05TC/(mmol/L)0.84±0.010.83±0.030.87±0.02BUN/(mmol/L)0.96±0.02a0.90±0.01b0.89±0.02bCRE/(μmol/L)8.36±0.048.36±0.078.34±0.11UA/(μmol/L)138.67±2.51138.33±2.08137.98±6.51GLU/(mmol/L)11.69±0.3611.61±0.3811.56±0.28注：同行数据肩标相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05），不同字母表示差异显著（P0.05）；表8、表9与此同。2.2饲粮中添加三七茎叶粉对乌骨鸡免疫功能的影响（见表5、表6）由表5可知，与对照组相比，Ⅰ组、Ⅱ组乌骨鸡的法氏囊指数、脾脏指数均显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.008.T005表5饲粮中添加三七茎叶粉对乌骨鸡免疫器官指数的影响组别法氏囊指数胸腺指数脾脏指数对照组5.43±0.23b18.36±0.82b11.33±0.31cⅠ组9.77±0.22a34.04±0.93a26.41±0.57aⅡ组8.71±0.00a19.63±0.14b18.19±0.73b注：同列数据肩标相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05），不同字母表示差异显著（P0.05）；表6、表7与此同。%由表6可知，与对照组相比，Ⅰ组乌骨鸡血清中IgG的含量显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.008.T006表6饲粮中添加三七茎叶粉对西畴乌骨鸡血清免疫指标的影响组别IgA/(g/L)IgG/(g/L)IgM/(g/L)IL-1β/(ng/L)IL-6/(ng/L)TNF-α/(ng/L)对照组0.68±0.0102.67±0.025b0.210±0.00239.56±0.2148.25±0.3096.82±0.25Ⅰ组0.66±0.0113.13±0.191a0.200±0.00540.02±0.0548.65±0.1597.01±0.58Ⅱ组0.68±0.0622.76±0.231b0.200±0.00239.80±0.1448.40±0.2496.97±0.132.3饲粮中添加三七茎叶粉对西畴乌骨鸡肌肉营养成分的影响（见表7）由表7可知，与对照组相比，Ⅰ组、Ⅱ组乌骨鸡肌肉中的粗脂肪含量显著降低（P0.05），且随着三七茎叶粉添加的比例增加，肌肉中粗脂肪含量越少。各组其余各营养成分的含量差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.008.T007表7饲粮中添加三七茎叶粉对西畴乌骨鸡肌肉营养成分的影响组别水分/%粗灰分/%蛋白质/%粗脂肪/%钙/(mg/kg)磷/(mg/kg)对照组75.51±0.261.07±0.0624.20±0.302.73±0.14a51.57±0.912 620.67±4.04Ⅰ组75.77±0.251.00±0.0524.60±0.362.50±0.04b52.44±0.602 610.01±8.00Ⅱ组75.97±0.211.00±0.0325.33±0.452.40±0.08b52.33±0.492 624.05±7.812.4饲粮中添加三七茎叶粉对西畴乌骨鸡肌肉氨基酸含量的影响（见表8）由表8可知，各组乌骨鸡肌肉中均检测出了16种氨基酸。与对照组相比，Ⅰ组、Ⅱ组乌骨鸡肌肉中苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、谷氨酸以及必需氨基酸总量均显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.008.T008表8饲粮中添加三七茎叶粉对西畴乌骨鸡肌肉氨基酸含量的影响项目对照组Ⅰ组Ⅱ组苏氨酸*0.95±0.01b1.03±0.03a1.00±0.01a缬氨酸*1.00±0.02b1.10±0.02a1.12±0.02a蛋氨酸*0.37±0.01b0.44±0.02a0.40±0.02b异亮氨酸*1.00±0.01b1.09±0.01a1.07±0.01a亮氨酸*1.68±0.081.80±0.021.77±0.01苯丙氨酸*1.06±0.08b1.08±0.00a1.07±0.01a赖氨酸*1.91±0.03b2.05±0.01a2.04±0.01a天冬氨酸1.97±0.01b2.10±0.03a2.06±0.03b谷氨酸3.24±0.02c3.44±0.03a3.34±0.04b甘氨酸0.97±0.02b1.04±0.05a1.00±0.02b丙氨酸1.25±0.031.34±0.051.30±0.06丝氨酸0.82±0.030.83±0.010.82±0.04脯氨酸0.88±0.040.90±0.030.87±0.09酪氨酸0.64±0.030.67±0.080.65±0.02组氨酸0.65±0.060.70±0.050.69±0.03精氨酸1.36±0.01b1.44±0.03a1.40±0.02b必需氨基酸总量7.91±0.09b8.59±0.03a8.41±0.04a非必需氨基酸总量11.81±0.09b12.44±0.12a12.10±0.09a16种氨基酸总量20.40±0.25b21.05±0.15a20.51±0.08b注：“*”为必需氨基酸。%2.5饲粮中添加三七茎叶粉对西畴乌骨鸡肌肉脂肪酸含量的影响（见表9）由表9可知，各组乌骨鸡肌肉均检测出13种脂肪酸。与对照组相比，Ⅰ组、Ⅱ组西畴乌骨鸡肌肉中豆蔻酸、硬脂酸的含量显著降低（P0.05），棕榈油酸、油酸、γ-亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸的含量显著提高（P0.05）；Ⅰ组西畴乌骨鸡肌肉中亚油酸、α-亚麻酸、花生四烯酸的含量显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.008.T009表9饲粮中添加三七茎叶粉对西畴乌骨鸡肌肉脂肪酸含量的影响项目对照组Ⅰ组Ⅱ组月桂酸———豆蔻酸0.005 32±0.000 02a0.004 88±0.000 08b0.004 89±0.000 04b棕榈酸0.714 00±0.005 000.717 00±0.055 000.720 00±0.010 00硬脂酸0.220 00±0.002 00a0.135 00±0.001 00b0.134 00±0.003 00b棕榈油酸0.015 60±0.000 50b0.022 50±0.000 10a0.022 00±0.000 40a油酸0.220 00±0.003 00c0.249 00±0.002 00b0.278 00±0.003 00a花生一烯酸0.002 84±0.000 300.002 90±0.000 300.002 78±0.000 03亚油酸▲0.198 00±0.002 00b0.211 00±0.004 00a0.199 00±0.002 00bγ-亚麻酸0.005 63±0.000 02b0.005 77±0.000 03a0.005 80±0.000 80aα-亚麻酸▲0.030 80±0.000 30b0.034 80±0.000 30a0.035 90±0.000 40a花生二烯酸0.003 48±0.000 07b0.003 98±0.000 04a0.003 49±0.000 02b花生四烯酸0.081 00±0.004 00b0.106 00±0.006 00a0.085 00±0.004 00b二十碳五烯酸0.015 60±0.000 30b0.022 50±0.000 20a0.021 30±0.001 30a二十二碳六烯酸0.005 23±0.000 10b0.005 61±0.000 10a0.005 75±0.000 10a饱和脂肪酸总量0.939 32±0.002 90a0.856 54±0.002 80b0.858 89±0.006 90b单不饱和脂肪酸总量0.238 60±0.002 40c0.274 40±0.001 90b0.302 80±0.003 40a多不饱和脂肪酸总量0.339 72±0.001 80a0.389 73±0.002 40b0.352 73±0.006 70b必需脂肪酸总量0.228 80±0.001 70a0.245 80±0.003 70b0.231 10±0.001 80a13种脂肪酸总量1.517 70±0.007 601.514 30±0.004 201.514 40±0.010 20注：“▲”为必需脂肪酸；“—”表示未检出。%3讨论三七作属于我国大宗药材之一，其根和根茎被广泛用于药物的部分，但是其副产物如茎叶利用率较低。目前，关于三七茎叶的研究主要集中在化学成分、药理作用以及作为食品开发利用[1]，在动物生产中的应用鲜见文献报道。但是，由于三七茎叶富含皂苷、多糖、黄酮等活性成分，且产量巨大，具有作为饲料资源开发利用的潜力。因此，本试验将三七茎叶晒干打粉后替代部分日粮饲喂西畴乌骨鸡探究其饲料化应用的可行性。3.1饲粮中添加三七茎叶粉对西畴乌骨鸡血清生化指标的影响血清生化指标是反映动物机体物质代谢和某些组织器官机能变化的重要指标[7]。其中丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、γ-谷氨酰胺转移酶、总胆红素的数值升高表示肝功能出现损伤[8-11]，总蛋白含量高表明机体代谢旺盛，进而促进动物生长发育[12]，球蛋白数值升高说明家禽机体免疫能力得到增强[13]。尿素氮含量是肾功能的重要指标，尿素氮含量降低表明提高了饲料中蛋白质的利用率[14]。尿酸含量升高超过机体新陈代谢能力会引发机体痛风[15]，而含量保持在较低的水平表明对蛋白质的消化吸收利用较好，生理功能稳定[16-17]。甘油三酯含量过高会削弱肝脏自身功能，造成肝细胞损伤，引起机体出现炎症反应和应激反应[18]。Xing等[19]研究发现，三七茎叶中含有的人参皂苷Rb3对小鼠的肾功能损伤有保护作用。本研究发现，饲粮中添加4%~8%的三七茎叶粉后，西畴乌骨鸡血清中的尿素氮含量明显降低，表明乌骨鸡肾功能不受三七茎叶粉的影响，蛋白质的利用率明显提高，以此可以解释乌骨鸡血清中总蛋白含量的升高的原因，与上述研究结果一致。研究表明，三七茎叶样品不会对大鼠的生长发育产生毒副作用[20]。本研究发现，在饲粮中添加4%~8%的三七茎叶未对西畴乌骨鸡血清中的谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、γ-谷氨酰胺转移酶活性以及总胆红素、尿酸含量产生影响，表明其未对西畴乌骨鸡产生毒副作用。3.2饲粮中添加三七茎叶粉对西畴乌骨鸡免疫功能的影响胸腺、法氏囊和脾是禽重要的免疫器官，免疫器官的发育情况与禽自身的免疫水平相关，免疫器官指数提高表明机体的体液免疫机能和细胞免疫机能整体得到增强[21]。机体产生的免疫球蛋白能与抗原发生特异性结合，当机体受到感染时，免疫球蛋白含量升高清除病原微生物及抗原，溶解细菌，中和病毒，因此免疫球蛋白含量能够反映机体免疫功能[22-24]。本研究结果显示，在饲粮中添加4%~8%三七茎叶粉能够明显增加乌骨鸡的法氏囊、胸腺和脾脏的重量，提高免疫器官指数，且血清中免疫球蛋白G的含量也明显升高，这可能与三七茎叶中富含三七皂苷和三七多糖有关。Zhao等[25]研究发现，三七叶总皂苷具有免疫调节活性，能够改善机体免疫功能。有研究显示，三七多糖可以提高小鼠的细胞免疫和体液免疫功能[26-27]，与本研究的结果一致。本试验中，饲粮中添加8%的三七茎叶粉的乌骨鸡的法氏囊指数、胸腺指数和脾脏指数以及免疫球蛋白G低于添加4%三七茎叶粉，推测可能与三七茎叶中三七素含量相关，高浓度的三七素对神经细胞具有损伤作用[28]，与细胞免疫功能产生拮抗作用。3.3饲粮中添加三七茎叶粉对西畴乌骨鸡肌肉品质的影响水分、粗灰分、粗蛋白质和粗脂肪是肉中的营养物质代表性指标[29]。研究表明，肌内脂肪含量为2%~3%时，肉质风味最佳；脂肪含量低于2%会使肉的嫩度降低，影响口感；脂肪含量超过3%时，肉的口感肥腻[30]。本研究显示，在饲粮中添加4%~8%的三七茎叶粉会使乌骨鸡肌肉中的脂肪含量明显降低，但是脂肪含量均处于2%~3%之间，不影响鸡肉口感。添加三七茎叶粉后肌肉脂肪含量降低的原因可能是与三七茎叶中含有黄酮类化合物有关，黄酮类化合物能够调控动物脂肪代谢，从而影响脂肪合成和分解的速率，减少了机体脂肪沉积[31]。肌肉中氨基酸和脂肪酸是评价肌肉营养品质的重要指标，也影响肉的品质和风味[32]，其中必需氨基酸和必需脂肪酸决定动物产品营养价值[33-34]。必需氨基酸含量可以衡量蛋白质质量[35]，必需脂肪酸具有预防心血管疾病、改善血液循环的作用[36]。本研究显示，在饲粮中添加4%~8%的三七茎叶粉能够显著提高乌骨鸡肌肉中必需氨基酸和必需脂肪酸的含量，明显提高肌肉品质和营养价值。而肌肉的风味主要受不饱和脂肪酸影响，不饱和脂肪酸比饱和脂肪酸更容易发生氧化，其含量越高，肌肉风味越浓郁[37]。当不饱和脂肪酸发生氧化反应，产生氢过氧化物后，可继续发生反应生成醛、酮、烃等挥发性风味物质[38]。本研究显示，添加三七茎叶粉后，鸡肉中脂肪含量降低，脂肪酸含量也随之降低，但是不饱和脂肪酸含量却明显升高，表明三七茎叶粉能够明显改善肌肉的风味，其机制可能与三七茎叶中富含氨基酸有关，三七茎叶中含有的三七素具有抗脂解、促进脂肪合成的功效[28]，在一定程度上影响脂肪酸的富集和合成。4结论本研究结果表明，饲粮中添加三七茎叶可改善西畴乌骨鸡血清生化指标，调节机体代谢功能，提升免疫力，改善肌肉品质。综合分析，添加4%的三七茎叶较为适宜。