我国是茶叶生产大国，但在采茶、制茶等生产活动中，大部分未收摘的低档茶叶、茶树上剩余的新鲜老叶及茶叶加工厂在制作中废弃的茶渣等未得到利用[1]，造成茶叶资源浪费。茶叶中含有丰富的营养物质，蛋白质含量约占干物质含量的15%～30%[2]，含有动物体所必需的氨基酸、矿物质和微量元素[3]。未加工提取的废茶或茶粉中含有6%以上的茶多酚[4]，具有清除动物机体自由基，改善畜禽肠道菌群平衡，增强机体抵抗力等功能。茶叶中也含有茶单宁、茶皂素、植酸、生物碱等抗营养因子，其中茶单宁和茶皂素存在适口性差、降低动物养分消化率的负面作用，茶单宁还会导致肝脏和肾脏的毒性。朱飞等[5]研究表明，通过乳酸菌发酵处理可解决茶渣适口性差的问题，还能够提高青贮质量和营养成分含量。徐爱秋等[6]研究表明，添加黑曲霉培养物能够提高Fe、Mn、Cu、Zn的表观消化率。唐艳仪等[7]研究表明，黑曲霉菌液可降低混合青贮样品中的中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）、酸性洗涤木质素（ADL）、纤维素（CEL）含量，改善混合青贮饲料的品质。袁明贵等[8]提出，黑曲霉是适宜的凉茶茶渣发酵菌种，具有良好的抗氧化性，但黑曲霉发酵茶叶渣对青脚麻鸡影响的报道比较少见。本试验探究经黑曲霉菌发酵的茶叶渣对青脚麻鸡生长性能、养分表观消化率、抗氧化能力及血清生化指标的影响，旨在评价黑曲霉菌发酵茶叶的效果及发酵茶叶在青脚麻鸡养殖中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料1.1.1茶叶茶叶于2021年6月在河南省信阳市某茶山采摘，为茶树上剩余的新鲜老茶叶，自然风干，粉碎，过40目筛，密封保存。1.1.2发酵茶叶制备将95%茶叶粉与5%的玉米粉充分混合，加入活化后的黑曲霉菌种（上海鲁微科技有限公司，黑曲霉CMCC（F）98003标准菌株菌种斜面培养物第2代）和适量水，料水比1∶1.4，黑曲霉孢子数1.00×106个/g，37 ℃发酵8 d，避光密封保存。试验前对老茶叶及经发酵后茶叶的营养成分及单宁含量进行测定；水分（MC）参照GB/T 6435—2014测定；粗灰分（Ash）参照GB/T 6438—2007测定；粗脂肪（EE）参照GB/T 6433—2006测定；粗蛋白（CP）参照GB/T 6432—2018测定；钙（Ca）参照GB/T 6436—2018测定；磷（P）参照GB/T 6437—2018测定；茶单宁（TT）采用邻二氮菲分光光度计法。茶叶和发酵茶叶营养成分见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.17.004.T001表1茶叶和发酵茶叶的主要营养成分项目茶叶发酵茶叶MC10.8315.75Ash7.106.00EE14.6518.33CP26.5429.63Ca1.041.07P0.110.12TT5.952.30%1.2试验设计青脚麻鸡购自驻马店市某鸡场。将体重相近、健康、精神状态良好的1日龄青脚麻鸡240只随机分成4组，每组3个重复，每个重复20只鸡。试验期56 d。对照组麻鸡饲喂基础日粮，试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组分别在基础日粮中添加2%、4%和6%的发酵茶叶。基础日粮组成及营养水平见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.17.004.T002表2基础日粮组成及营养水平项目1~28日龄29~56日龄原料组成/%玉米60.0061.67豆粕24.0022.00棉粕2.002.00芝麻粕6.006.00玉米蛋白粉2.002.00豆油1.002.00磷酸氢钙1.501.83钙粉2.001.00预混料1.501.50合计100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)12.3213.04粗蛋白/%20.5019.38粗脂肪/%3.203.27钙/%0.950.87有效磷/%0.490.40蛋氨酸/%0.420.38赖氨酸/%1.21.04蛋氨酸＋胱氨酸/%0.800.69色氨酸/%0.250.23注：1.预混料由河南安能生物科技有限公司提供。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。1.3饲养管理试验开始前严格对饲养环境进行熏蒸杀毒，准备好料筒、水桶、应激药物等。饲养方式为笼养，每天饲喂3次，自由饮水，每2 d喷雾消毒1次，记录每组鸡的死淘数、每日耗料量。每天洗刷料桶和水桶，及时清粪，保证饲料和水质的清洁，以保证鸡处在干燥清洁的饲养环境中。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能饲养期间每日记录每组的耗料量，试验开始和结束时于前1 d 19：00断料断水，次日7：00称重，记录初重和末重，计算平均日增重、平均日采食量和料重比。平均日增重＝(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量＝总耗料量/试验天数(2)料重比＝平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2养分表观代谢率日粮和粪便中的营养成分的测定方法与上述茶叶样品检测方法相同，根据GB/T 23742—2009的方法[9]测定酸不溶性灰分，计算表观代谢率。表观代谢率=100%×[1－(N1×M2)/(N2×M1)](4)式中：N1和N2分别为饲料和粪样中酸不溶性灰分含量（%）；M1和M2分别为饲料和粪样中某养分含量（%）。1.4.3血清抗氧化、生化指标试验结束时，每个重复随机抽选10只体重、体况相近的青脚麻鸡，翅下静脉采血8~10 mL，4 ℃条件下4 000 r/min离心5 min，取血清于-20 ℃保存。根据南京建成生物工程研究所生产的试剂盒说明书的步骤进行总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）检测，其中T-AOC、MDA、T-SOD使用分光光度计比色测定，GSH-Px使用酶标仪比色测定。使用全自动生化分析仪（罗氏Cobas 8000）测定血清谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、血糖（GLU）、甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、钙（Ca）、磷（P）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）等指标，试剂盒由南京建成生物工程研究所生产。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel 2020软件进行整理，SPSS 26.0软件进行单因素方差分析，LSD法多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1发酵茶叶对青脚麻鸡生长性能的影响（见表3）由表4可知，1~28日龄，试验Ⅰ组、试验Ⅱ组青脚麻鸡平均日增重显著高于对照组（P0.05）；随着发酵茶叶添加比例增加，各组青脚麻鸡平均日采食量有下降趋势，试验Ⅰ组高于对照组，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组低于对照组，但各组差异均不显著（P0.05）；各试验组青脚麻鸡料重比均显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.17.004.T003表3发酵茶叶对青脚麻鸡生长性能的影响项目对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组试验Ⅲ组1~28日龄初重/(g/只)40.50±1.0340.80±1.1040.40±1.0540.60±1.2728日龄重/(g/只)464.29±9.74c524.90±8.15a495.57±12.72b482.14±14.48bc平均日增重/[g/(只·d)]15.14±1.84a17.29±1.92c16.26±1.92b15.77±1.57ab平均日采食量/[g/(只·d)]35.73±1.0136.51±2.5634.84±2.4832.95±1.75料重比2.36±0.39a2.11±0.26b2.14±0.31b2.09±0.26b29~56日龄56日龄重/(kg/只)1.58±0.121.75±0.191.65±0.201.62±0.16平均日增重/[g/(只·d)]39.85±1.0743.75±1.7441.23±1.6240.64±2.05平均日采食量/[g/(只·d)]113.19±3.10115.14±4.05116.46±4.18114.05±3.72料重比2.84±0.162.63±0.202.82±0.162.81±0.231~56日龄平均日增重/[g/(只·d)]27.49±1.83b30.52±2.05a28.74±1.94ab28.20±2.07ab平均日采食量/[g/(只·d)]71.75±4.0670.81±3.9572.71±4.5172.76±3.63料重比2.61±0.20a2.32±0.17b2.53±0.13ab2.58±0.26a注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表6与此同。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.17.004.T004表4发酵茶叶对青脚麻鸡表观代谢率的影响组别DMCPEECaP对照组69.64±0.5154.20±0.8472.26±2.01b47.48±0.4345.26±0.69试验Ⅰ组71.35±1.5454.65±1.0273.54±0.31ab48.29±1.4146.39±0.42试验Ⅱ组71.79±1.0255.66±0.1775.77±0.64a49.19±0.6146.52±1.24试验Ⅲ组70.86±0.9254.32±0.9474.36±1.18ab48.64±0.8846.03±0.71注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表5与此同。%1~56日龄，试验Ⅰ组青脚麻鸡的平均日增重显著高于对照组（P0.05），料重比显著低于对照组（P0.05）。2.2发酵茶叶对青脚麻鸡养分表观代谢率的影响（见表4）由表4可知，各组青脚麻鸡对DM、CP、Ca和P的表观代谢率差异均不显著（P0.05）；试验Ⅱ组青脚麻鸡对EE的表观代谢率显著高于对照组（P0.05）。2.3发酵茶叶对青脚麻鸡血清抗氧化指标的影响（见表5）由表5可知，各试验组青脚麻鸡血清中T-AOC及T-SOD、GSH-Px活性均显著高于对照组（P0.05），其中试验Ⅰ组T-AOC最高，试验Ⅱ组T-SOD和GSH-Px活性最高。各组青脚麻鸡血清MDA含量差异不显著（P0.05），试验Ⅰ组最低。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.17.004.T005表5发酵茶叶对青脚麻鸡血清抗氧化指标的影响组别T-AOC/(U/mL)T-SOD/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)MDA/(μmol/L)对照组15.08±3.02b442.96±31.34b1 124.05±197.03b5.24±0.92试验Ⅰ组21.61±0.78a488.96±16.30a1 574.68±222.25a3.81±1.16试验Ⅱ组18.41±2.98a510.85±12.84a1 708.86±171.01a4.56±1.78试验Ⅲ组19.67±6.48a470.78±39.33a1 622.79±88.03a5.17±1.852.4发酵茶叶对青脚麻鸡血清生化指标的影响（见表6）由表6可知，试验Ⅰ组和试验Ⅱ组青脚麻鸡血清中TG和TC含量均显著低于对照组（P0.05）。试验各组青脚麻鸡血清中其他指标差异不显著（P0.05）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.17.004.T006表6发酵茶叶对青脚麻鸡血清生化指标的影响项目对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组试验Ⅲ组AST/(U/L)156.32±4.29153.09±5.03152.17±4.76151.08±4.19ALT/(U/L)12.09±1.1811.83±1.0411.41±1.2711.04±1.31GLU/(mmol/L)11.34±1.0311.04±1.3710.63±1.1210.72±1.29TG/(mmol/L)0.67±0.04a0.54±0.04b0.51±0.06b0.58±0.05abTC/(mmol/L)2.83±0.13a1.89±0.11b1.84±0.14b2.34±0.21abHDL/(mmol/L)1.85±0.121.92±0.151.95±0.201.91±0.31LDL/(mmol/L)0.58±0.060.53±0.050.55±0.040.56±0.05Ca/(mmol/L)2.84±0.212.86±9.262.80±0.172.76±0.36P/(mmol/L)2.12±0.212.16±9.262.20±0.172.26±0.26TP/(g/L)32.67±2.0633.16±2.6533.82±2.8133.06±3.02ALB/(g/L)13.60±1.2113.94±1.5314.05±1.7413.85±2.03BUN/(mmol/L)3.54±0.313.31±0.363.27±0.403.50±0.373讨论3.1黑曲霉菌对茶渣发酵效果的影响唐艳仪等[7]研究表明，在苎麻副产物与水稻秸秆中添加5%、10%、15%、20%的黑曲霉菌液可显著提高CP含量，15%组甚至高达16.62%，同时降低了ADF和NDF含量。崔艺燕等[10]研究表明，黑曲霉组、黑曲霉+地衣芽孢杆菌组、黑曲霉+葡萄芽棒孢酵母组发酵柑橘渣的CP含量显著高于其他组，认为有氧时黑曲霉的生长非常迅速，菌丝体更丰富，使菌体蛋白高于其他组合，同时EE、Ca含量增加。也有其他研究得到了类似结果，表明黑曲霉菌对粗饲料具有很好的发酵效果[11-12]。陈法才[13]研究表明，添加1%黑曲霉的茶叶渣CP含量可由23.60%提高至30.6%，Ca含量由0.74%提高至1.03%，TT含量由6%降低至4.6%。朱飞等[14]利用黑曲霉发酵茶渣，结果表明，茶渣中TT含量由11.63%下降至2.42%，CP含量由31.22%上升至44.56%，EE含量4.06%提高到5.13%，Ca含量由0.75%提高至1.10%。本试验采用黑曲霉菌对茶叶进行发酵处理也得到了相似的结论，CP含量增加了11.64%，EE含量增加了25.12%，Ca含量增加了2.88%，TT含量降低了61.34%。本试验与朱飞等[14]的试验数据差异较大，可能是茶叶品种不一样所致，但趋势相同。茶叶经过黑曲霉发酵处理过程中，茶叶和玉米粉中的碳源和氮源可促进黑曲霉菌代谢和生长，随着黑曲霉菌代谢和生长会产生大量的菌体蛋白和一些促生长因子，使茶叶中CP含量有所增加。曲霉属真菌具有很好的单宁酶合成能力，发酵能力强[15]，导致TT含量下降。3.2发酵茶叶对青脚麻鸡生长性能的影响平均日增重、平均日采食量和料重比是评定畜禽生长性能的主要指标。诸多研究结果均表明，饲料经发酵后可使原料中淀粉、蛋白质等大分子物质降解为小分子物质，减少抗营养因子含量[16]。巫梦佳等[17]在日粮中添加1%、3%的茶叶渣菌酶发酵饲料，结果表明，发酵饲料、茶叶渣菌酶协同发酵饲料均提高了青脚麻鸡的平均日增重和平均日采食量，降低了料重比；且随着茶叶渣比例增高，平均日增重、平均日采食量呈下降趋势，料重比呈上升趋势，5%茶叶渣组平均日增重低于对照组。徐雨晴等[18]研究表明，5%、8%、11%的青贮茶叶均可显著提高黄羽肉鸡的平均日增重，分别比对照组提高了2.71%、5.30%和4.79%，平均日采食量分别比对照组高0.61%、5.10%、6.12%。本试验结论与上述研究结果基本相符，可能是因为茶渣含有茶多酚、茶皂素等多种活性成分，具有抗氧化性、促进免疫功能，可提高生长性能和胴体品质。而黑曲霉发酵茶叶产生的有益微生物，能够有效抑制病菌，提高鸡的抵抗力，进而对生长也产生了一定促进作用。鸡是单胃动物，对粗纤维消化能力有限，随着日粮中发酵茶叶添加量逐渐增加，粗纤维（CF）含量逐渐升高，导致平均日增重和平均日采食量降低，料重比升高，甚至试验Ⅱ组、试验Ⅲ组平均日采食量低于对照组，此结论与巫梦佳等[17]的研究结果相似。3.3发酵茶叶对青脚麻鸡养分表观代谢率的影响养分表观代谢率是肉鸡生长性能重要的影响因素，既可以反映日粮可消化水平，也可以反映鸡对营养物质消化吸收的能力。诸多研究表明，日粮中添加黑曲霉可提高动物的养分表观消化率。徐爱秋等[6]试验表明，在日粮中添加黑曲霉，Fe的表观消化率提高5.53%、Cu的表观消化率提高16.70%、Zn的表观消化率提高8.09%。戈冰洁[19]在肉鸽基础日粮中添加150、300、600 mg/kg的黑曲霉蛋白酶，发现CP的表观代谢率分别比对照组提高17.00%、10.21%、4.35%。金俊奇等[20]在生长育肥猪的日粮中添加不同木聚糖酶组合，结果表明，黑曲霉组DM表观消化率提高3.22%，CP表观消化率提高3.94%，P表观消化率提高20.73%，Ca表观消化率提高6.31%，均为各组中最高。有研究表明，茶叶渣对动物养分表观消化率也具有一定的提升作用。冉雷等[21]在基础日粮中采用茶叶渣替代5%、10%、20%的精料补充料，结果表明，5%、10%组的DM、CP、EE、NDF、ADF表观消化率明显高于对照组。李文杨等[22]在试验中使用茶叶渣等量替代基础日粮，10%添加组DM的表观消化率提高了0.89%，CP表观消化率提高了5.27%。王彬等[23]试验表明，在肉兔日粮中用茶叶渣等量替代麸皮，10%组CP表观消化率得到了一定提升，但差异不显著，其他添加组下降，主要原因是茶叶渣添加量过大，CF阻碍了养分的吸收。目前关于黑曲霉发酵茶叶渣对鸡的表观代谢率影响的报道少见。姜莱等[24]采用黑曲霉发酵以茶叶渣、豆粕和麸皮为底物的饲料替代基础日粮中的豆粕，发现6%组CP表观消化率提高14.18%，EE表观消化率提高5.43%；4%替代组Ca表观消化率提高10.83%，P表观消化率提高7.19%。本试验条件下，4%发酵茶叶添加组的DM、CP、EE、Ca、P的表观消化率均为各组最高，比对照组分别提高5.42%、4.27%、4.86%、6.22%和3.57%，6%组呈下降的趋势，与前人研究结论相一致。宋妍妍等[25]指出，单宁酸易与部分消化酶、蛋白质结合形成不溶性复合物，降低了动物机体对养分的消化率，尤其是CP的消化率。黑曲霉可降低茶叶中单宁的含量，提高了动物表观消化率，而适量的单宁酸对动物生长性能、肠道健康有帮助。添加黑曲霉发酵茶叶渣可促进日粮中CP、EE等表观代谢率提高，可节省饲料成本，缓解粮食资源紧缺问题，还能够促进畜禽体内营养物质沉积，改善肉品质。结合肉鸡生长情况分析发现，黑曲霉发酵的茶叶渣对日粮中CP表观代谢率的改善作用可能也是肉鸡生长性能有所提高的原因之一。舒庆龄等[26]研究表明，肉鸡饲料中添加3%的茶渣效果优于5%，建议肉鸡日粮茶渣添加水平控制在5%以内，选择CF含量低的茶渣饲喂效果比较理想，该结论与本试验4%发酵茶叶效果最佳的结论相似。3.4发酵茶叶对青脚麻鸡血清抗氧化指标的影响茶叶中含有多种抗氧化成分，能够保护细胞不受氧化损伤[27]。孙艳发等[28]研究表明，肉鸡日粮中添加0.5%的茶籽饼粕，可提高T-SOD、GSH-Px的活性和MDA含量、T-AOC，但0.75%组和1.00%组肉鸡血清MDA含量均低于对照组。蒋磊等[29]研究表明，在日粮中添加0.02%、0.04%和0.06%的茶多酚均能够提高肉鸡的T-AOC及T-SOD、GSH-Px的活性；与对照组相比，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组肉鸡T-SOD活性分别提高了8.80%和10.99%，血清MDA的含量有所降低。丁小青等[30]研究表明，茶渣、麸皮、豆粕发酵的生物发酵饲料分别替代仙居鸡日粮中的2%、4%、6%的豆粕，可增强T-SOD、GSH-Px的活力，降低MDA含量，其中6%组T-SOD活性比对照组高5.89%，GSH-Px活性比对照组高4.42%，MDA含量下降47.47%。上述结论与本试验结果基本一致，在本试验中，4%添加组麻鸡血清T-AOC比对照组提高22.08%，T-SOD活性提高15.13%，GSH-Px活性提高52.03%，MDA含量降低了12.98%，表明在日粮中添加经黑曲霉发酵的茶渣可提高青脚麻鸡的抗氧化性能，且效果比较明显。3.5发酵茶叶对青脚麻鸡血清生化指标的影响血清生化指标可间接反映动物机体的健康程度。本试验中，试验Ⅰ组和试验Ⅱ组青脚麻鸡血清TG和TC含量显著低于对照组，表明青脚麻鸡生产中添加2%和4%的发酵茶叶可调节青脚麻鸡机体血脂代谢，促进机体健康。TG和TC含量降低可能是因为茶叶中含有儿茶素，其是一类高活性的类黄酮，具有改善血脂的功能。本试验结果表明，发酵茶叶对青脚麻鸡的蛋白质代谢及肝功能指标未产生负面影响。李文杨等[22]研究发现，添加5%~15%的发酵茶渣对山羊血清生化指标未产生显著影响。曾李等[31]研究发现，添加4%发酵茶籽粕可显著降低蛋鸡血清尿酸含量，并且具有降低血清TG含量的趋势。上述研究结果与本试验结论不完全相同，可能是因为试验动物品种不同、添加剂的有效活性成分含量不同、养殖环境不同等因素导致。目前，发酵茶叶在家禽生产中的应用研究结果并不是很多，尤其是在血清生化参数方面的研究更少，未来需进一步研究发酵茶叶改善血清生化参数的作用机制。4结论本试验条件下，采用黑曲霉发酵茶叶可增加茶叶中CP、EE等营养成分的含量，降低TT含量；日粮中添加适当水平的黑曲霉发酵茶叶可提高青脚麻鸡的生长性能及养分表观代谢率，增强抗氧化能力，但添加量过高时会降低麻鸡的生长性能，因而最佳添加量为2%~4%。