大口黑鲈又名加州鲈，是一种淡水凶猛肉食性鱼类，原产自美国西部的加利福尼亚州[1]。因大口黑鲈具有高营养价值、适应能力强、肉质鲜嫩、生长周期短等优点，深受消费者青睐，目前已成为我国主要养殖的淡水名贵肉食性鱼类之一[2]。近年来，乳酸菌作为饲料添加剂已被广泛用于水产养殖，具有增强免疫力和抗病力的效果。本试验在循环水智能养殖的基础上，将乳酸菌菌液作为水质改良剂和饲料添加剂应用于大口黑鲈幼苗养殖试验中，研究其对大口黑鲈生长性能、形体指标、血清生化指标、肠道组织健康等的影响，以期为大口黑鲈配合饲料配方优化提供参考。1材料与方法1.1试验饲料试验饲料使用天马集团的大口黑鲈配合饲料，为鱼苗专用开口初乳膨化浮料（0.58~0.84 mm），其营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.17.008.T001表1大口黑鲈基础饲料营养水平（风干基础）项目粗蛋白粗脂肪水分钙赖氨酸粗纤维粗灰分总磷含量50.06.010.04.02.84.016.00.8%1.2试验设计及养殖管理试验选取同一批次大口黑鲈750尾，平均体重为（7.14±0.11） g，随机分为5组，每组3个重复，每个重复50尾鱼。T0组大口黑鲈饲喂基础饲料，T1组在基础饲料中添加1×108 CFU/g植物乳杆菌LP-37，T2组在基础饲料中添加1×107 CFU/g戊糖片球菌PP-23，T3组在基础饲料中添加1×108 CFU/g LP-37和1×107 CFU/g PP-23，T4组在基础饲料中添加1×106 CFU/g乳酸菌。试验期6周。试验地点在济南市渔业示范园的养殖大棚内，选取规格为2 m ×1 m的开口苗培育缸养殖，每天8：00、17：00投喂，表观饱食投喂，每天记录喂料量。养殖试验期间为自然光照，平均水温26~30 ℃、pH值7.5~8.5、氨氮含量小于0.1 mg/L，亚硝酸盐含量小于0.01 mg/L、溶氧≥6 mg/L。试验期间每3 d换一次水，每次换水1/3，保证大口黑鲈的生长环境良好。1.3测定指标及方法1.3.1样本品采集养殖试验结束禁食24 h后，对每桶试验鱼进行计数和称重，计算成活率、增重率和特定生长率，根据饲料总投喂量计算饲料系数。禁食48 h后，每桶随机取5尾鱼，测量体长和体重，计算肥满度。尾部静脉取血，4 ℃冰箱内静置2 h，3 000 r/min离心15 min，取上清液，置于-80 ℃冰箱中，测定血清生化指标。采血结束后，将麻醉后的鱼放置在陶瓷盘上进行解剖，取内脏称重后，分离出头、肾、脾脏放入1.5 mL离心管中，分离出肝脏称重后用解剖剪取一部分放入1.5 mL离心管中，肠道称重后取中肠，用游标卡尺测量中肠截面宽度，测量后剪成两段，一段放于 1.5 mL离心管中，另一段放入4%多聚甲醛固定。所有1.5 mL离心管均置于冰上，采集样品后迅速放入-80 ℃冰箱保存。1.3.2生长性能和形体指标成活率=(试验末鱼总数/试验初鱼总数)×100%（1）增重率=(末重-初重)/养殖天数×100%（2）特定生长率=(1n末重-1n初重)/养殖天数×100%（3）饲料系数=投喂饲料总重/(末重-初重)（4）肥满度=末重/终末体长3×100（5）脏体比=内脏团重/末重（6）肝体比=肝脏重/末重×100%（7）1.3.3血清免疫酶指标血清免疫酶指标采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定，测定指标包括酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）和超氧化物歧化酶（SOD）1.3.4肠道消化酶活性取一段肠道称重剪成两段，一段放入1.5 mL离心管中，按肠道重量（g）∶生理盐水体积（mL）为1∶9的比例加入无菌生理盐水，把1.5 mL离心管置于冰上，研磨，匀浆，置于低温离心机中4 ℃、3 000 r/min离心10 min取上清，采用南京建成生物工程研究所试剂盒对蛋白酶（PRS）、脂肪酶（LIP）、淀粉酶（AMY）活性进行测定。1.4数据统计与分析数据采用Excel 2020软件进行t检验和方差分析。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1乳酸菌制剂对大口黑鲈生长性能的影响（见表2）由表2可知，各试验组大口黑鲈的增重率、特定生长率、摄食量显著高于T0组（P0.05），且T4组显著高于其他试验组（P0.05）；各试验组饲料系数均显著低于T0组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.17.008.T002表2乳酸菌制剂对大口黑鲈生长性能的影响组别初重/g末重/g增重率/%特定生长率/(%/d)饲料系数成活率/%T0组7.00±0.0034.57±1.28d393.86±18.31d3.80±0.09d0.94±0.01a98.00±0.00T1组7.17±0.0447.14±1.36c557.45±18.95c4.48±0.07c0.83±0.02b99.00±1.41T2组7.05±0.0747.04±1.17c567.18±16.53c4.52±0.06c0.81±0.02b100.00±0.00T3组7.25±0.0152.28±1.34b621.16±18.42b4.70±0.06b0.77±0.01c100.00±0.00T4组7.21±0.1356.27±1.55a680.49±21.45a4.89±0.07a0.76±0.01c100.00±0.00注：同列数据肩标相同或无字母表示差异不显著（P0.05），不同字母表示差异显著（P0.05）；下表同。2.2乳酸菌制剂对大口黑鲈形体指标的影响（见表3）由表3可知，各试验组大口黑鲈的肥满度、肝体比、肠宽度显著高于T0组（P0.05），T3组和T4组的脏体比显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.17.008.T003表3乳酸菌制剂对大口黑鲈形体指标的影响组别肥满度/(g/cm3)脏体比/%肝体比/%肠体比/%肠宽度/mmT0组1.33±0.16b12.64±0.30c4.04±0.44c0.98±0.191.53±0.42bT1组1.49±0.19a13.06±0.52c4.94±0.22b1.05±0.131.87±0.26aT2组1.47±0.14a12.99±0.66c5.01±0.25b0.99±0.071.85±0.09aT3组1.46±0.17a13.66±0.48b5.13±0.27b0.95±0.071.96±0.14aT4组1.50±0.11a14.52±0.31a5.39±0.21a0.94±0.121.97±0.33a2.3乳酸菌制剂对大口黑鲈血清免疫酶活性的影响（见表5）由表5可知，各试验组大口黑鲈血清AKP、ACP及SOD的活性均显著高于T0组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.17.008.T004表5乳酸菌制剂对大口黑鲈血清免疫酶活性的影响组别ACP/(U/100 mL)AKP/(U/100 mL)SOD/(U/mL)T0组6.29±0.30c12.56±0.33e42.80±0.57dT1组12.13±0.01b15.88±0.25d46.18±0.03cT2组12.45±0.07b16.42±0.03c46.26±1.61cT3组13.45±0.42a17.10±0.18b49.60±0.91bT4组13.60±0.28a17.75±0.12a55.08±1.87a2.4乳酸菌制剂对大口黑鲈肠道消化酶活性的影响（见表6）由表6可知，试验组大口黑鲈肠道PRS、LIP及AMY的活性均显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.17.008.T005表6乳酸菌制剂对大口黑鲈肠道消化酶活性的影响组别PRS/(U/mg prot)LIP/(U/g prot)AMY/(U/mg prot)T0组1.18±0.07d19.53±2.48c0.21±0.04cT1组1.60±0.02c35.71±1.49b0.34±0.03bT2组1.67±0.06c35.72±2.30b0.33±0.02bT3组2.87±0.24b45.25±2.98a0.50±0.03aT4组3.61±0.11a46.39±3.45a0.52±0.04a3讨论3.1乳酸菌制剂对大口黑鲈生长性能和形体指标的影响乳酸菌在肠道内发酵后产生乳酸和乙酸等，这些有机酸可改善水产动物肠道内环境，降低pH值，抑制病原菌的生长繁殖。乳酸菌素是乳酸菌分泌的一种多肽物质，附着于肠道黏膜上，起到保护肠黏膜不被病原菌侵袭的作用，同时具有抑菌和杀菌作用。乳酸菌产生的多种消化酶可分解大分子蛋白质，降解抗营养因子，提高水产动物的摄食率和营养吸收率。乳酸菌在肠道中占据优势的同时可抑制有害菌的生长和繁殖，改善肠道菌群平衡，提高水产生物生长性能。本试验中，在大口黑鲈饵料中使用1.0%的乳酸菌对大口黑鲈的增重率、特定生长率、肥满度、饲料系数等具有明显的改善作用，提高了生长速度。赵倩等[3]研究乳酸菌对草鱼的影响时发现，乳酸菌可降低饲料系数，促进草鱼生长，增加肥满度。史东杰等[4]研究乳酸菌对锦鲤的影响，发现饲料中添加乳酸菌，锦鲤的增重率与特定生长率均显著增加，且饲料系数显著降低。Son等[5]研究乳酸菌对石斑鱼的影响，发现投喂添加乳酸菌的饲料4周后，石斑鱼的增重率以及蛋白质效率显著提高。符天山等[6]研究乳杆菌对南美白对虾的影响，发现饵料中添加120 g/t的乳杆菌可提高虾增重率。以上试验结果均与本试验结果相似，表明在饲料中添加乳酸菌可以促进大口黑鲈的生长，提高大口黑鲈的成活率，增加肥满度，并降低饲料系数。3.2乳酸菌制剂对大口黑鲈血清免疫酶活性的影响水产动物机体内的氧自由基过量会产生氧化应激，导致细胞中的蛋白质、脂类和核酸等受到损伤，诱发水产动物发病和机体衰退。乳酸菌产生的SOD等抗氧化酶，可以清除机体内的自由基和抗脂质过氧化，降低氧化应激反应。SOD是反映动物健康状况和抗氧化能力的血液生化重要指标之一，具有清除自由基，提高动物免疫力的作用。ACP决定动物机体的免疫水平，是溶酶体酶的重要化合物之一。Saurabh等[7]研究表明，AKP作为水解酶，主要水解有机化合物中的磷酸盐，维持细胞正常代谢，维护机体健康。研究发现，乳酸菌可提高仿刺参（Apostichopus japonicus）体腔液中SOD的活性[8]。王永胜[9]研究发现，乳酸菌可使凡纳滨对虾血清中SOD、AKP的活性显著提高。关素华等[10]研究表明，乳酸菌可提高黄河鲤SOD活性，降低MDA含量。曾庆辉等[11]研究表明，乳酸菌可提高黄河鲤皮肤黏液中AKP、SOD等活性，显著降低MDA含量。郑玉[12]研究发现，乳酸菌可提高棕点石斑鱼和凡纳滨对虾体内ACP和AKP的活性。本试验中，饲料中添加乳酸菌提高了大口黑鲈血清中ACP、AKP和SOD的活性，与上述研究结果类似。3.3乳酸菌制剂对大口黑鲈肠道消化酶活性的影响乳酸菌代谢后产生短链脂肪酸，改善肠道pH值后增加肠道的酸性环境，激活胃蛋白酶原，增强胃蛋白酶的活性。乳酸菌产生的乳酸是糖代谢的中间产物，在有氧的情况下可进入三羧酸循环氧化供能，增强小肠内消化酶活性。PRS、AMY、LIP是鱼体肠道消化过程中的重要消化酶，其活性的强弱反映了机体的消化能力。其中LIP和AMY分别代表了鱼体对脂肪及糖类的消化利用能力。王颖等[13]研究表明，乳酸菌可显著提高草鱼肠道中的PRS、LIP和AMY活性，并且可以丰富肠道菌群种类，提高有益菌数量。林艾影等[14]研究发现，乳酸菌可显著提高军曹鱼幼鱼肠道内α-AMY及LIP的活性。本试验结果表明，饲料中添加乳酸菌能够改善大口黑鲈肠道的PRS、LIP和AMY等消化酶的活性。4结论本试验结果表明，饲料中添加乳酸菌可在一定程度上提高大口黑鲈的生长性能，提高血清免疫酶和肠道中消化酶的活性，改善大口黑鲈的非特异性免疫力。