随着经济发展，宠物行业发展速度加快，宠主对宠物食品安全与营养也愈发重视[1]。研发美味、营养、健康的宠物粮有利于宠物的健康发育和成长。幼猫消化系统尚不健全，吸收能力较弱，营养需求也与成猫存在差异，成年猫粮配方多不适合幼猫，可能导致食用后消化不良、吸收差等。因此，研发适应幼猫体质特点的幼猫专用粮具有广阔前景。黄芪、山药和山楂均为我国传统的药食同源植物。黄芪中的主要活性成分为多糖类、皂苷类、黄酮类和氨基酸类[2-3]。山药中含山药素（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ）、盐酸山药碱、多酚氧化酶等多种活性成分[4-5]。山楂中含有丰富的黄酮与多酚类物质[6-7]。黄芪、山药、山楂中的活性成分具有抗炎、抗氧化、调节免疫力和肠道菌群的功效[8-10]。有研究表明，中草药添加剂能够通过改善外周循环，提高动物生长性能，改善皮毛质量[11-12]。但关于猫粮中添加黄芪、山药和山楂对幼猫生长、毛发质量、抗氧化、免疫能力以及肠道菌群的影响尚无报道。因此，本试验在基础幼猫粮中添加黄芪、山药和山楂，研究其对生长性能、毛发检测、粪便性状、抗氧化、免疫指标的影响，为黄芪、山药和山楂在幼猫粮中应用提供参考。1材料与方法1.1试验设计及饲养管理试验在华南农业大学宠物医学研究中心完成。选用体重相近、健康的45~60日龄断奶田园幼猫18只，随机分为3组，每组6个重复，每个重复1只猫。空白对照组（H组）幼猫粮由广东某科技有限公司提供，主要原料为鲜鸡肉、脱水牛肉、脱水鸡肉、豌豆、木薯淀粉红薯干等；试验对照组（R组）幼猫粮为法国某热门品牌，主要原料为鸭肉粉、鸡肉粉、碎米、小麦蛋白粉、鸡油等；试验组（T组）猫粮在H组基础幼猫粮中添加0.2%黄芪、0.2%山药、0.2%山楂。各组猫粮营养水平见表1。正式试验期30 d，每日定时喂食两次，幼猫自由饮水，已于预试期进行疫苗免疫与驱虫。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.026.T001表1各组猫粮营养水平营养水平H组R组T组粗蛋白40.0034.0040.00粗脂肪15.8016.0015.80水分11.0011.0011.00粗纤维9.005.409.00粗灰分10.0010.0010.00钙1.001.001.00总磷0.800.890.80水溶性氯化物0.300.560.30牛磺酸0.230.180.23注：营养水平均为计算值。%1.2测定指标及方法1.2.1生长性能试验第1、30 d，幼猫禁食2 h，称重，记录每日进食量，计算平均日采食量、平均日增重和料重比。平均日采食量=(日投粮量-日余粮量)/试验天数(1)平均日增重=(末重-初重)/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.2.2毛发电镜检查试验第30 d收集每只幼猫背部毛发，利用扫描电子显微镜对猫毛样本进行观察，观察每只幼猫毛鳞片厚度和毛鳞片贴合度，各组样本由同一专业人员进行评估。1.2.3血清抗氧化指标和免疫指标试验第30 d采集每只幼猫的血液样本，分离血清。WCT-1法测定超氧化物歧化酶（SOD），TBA法测定丙二醛（MDA），比色法测定总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px），试剂盒均购自南京建成生物科技有限公司。采用试剂盒（英国Abcam公司）测定免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG），操作严格按照试剂盒说明书进行。1.2.4粪便性状评分及粪便16S rRNA测序试验第24~30 d，每日对粪便的质量进行评分，评分过程由同一专业人员评估，按照1~5分制，粪便评分标准见表2。试验第30 d采集每只幼猫的新鲜粪便样本，利用16S rRNA基因高通量测序技术进行测序并分析。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.026.T002表2粪便评分标准粪便评分评分标准（粪便性状）1粪便呈可流动水状，可从容器中倒出2粪便稀软、形状不规则3粪便湿软，勉强成型4粪便成型，均匀柔软5粪便形状良好，坚硬且干燥1.3数据统计与分析试验数据采用GraphPad Prism 8软件进行单因素方差分析，LSD法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”结果，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1黄芪、山药和山楂对幼猫生长性能的影响（见表3）由表3可知，T组幼猫平均日增重高于其他两组，料重比低于H组，但差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.026.T003表3黄芪、山药和山楂对幼猫生长性能的影响组别初重/(g/只)末重/(g/只)平均日采食量/[g/(只·d)]平均日增重/[g/(只·d)]料重比H组801.250±180.9871 403.333±254.35543.220±11.72219.798±3.0392.264±0.835R组625.250±188.9151 250.000±298.10539.906±11.28720.113±4.1441.961±0.165T组818.333±186.4851 419.167±372.37640.512±10.85921.043±2.0371.969±0.6812.2黄芪、山药和山楂对幼猫毛发的影响（见图1、图2）由图1可知，H组、R组幼猫部分毛发样本毛鳞片厚度略小于T组，且存在游离缘翘起的情况。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.026.F001图1幼猫毛鳞片厚度由图2可知，T组幼猫毛发总体毛鳞片贴服度高，游离缘较平滑，轮廓纹理清晰。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.026.F002图2幼猫毛鳞片贴服度2.3黄芪、山药和山楂对幼猫抗氧化及免疫指标的影响（见表4、表5）由表4可知，T组和H组幼猫血清GSH-Px活性显著高于R组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.026.T004表4黄芪、山药和山楂对幼猫抗氧化指标的影响组别SOD/(U/mL)T-AOC/(U/mL)MDA/(μmol/L)GSH-Px/(U/mL)H组5.951±1.0503.248±2.1075.103±0.632404.811±18.553aR组6.449±2.0651.994±1.4525.172±0.717272.228±86.040bT组8.253±1.9494.625±1.5555.276±0.918424.795±18.650a注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。由表5可知，各组幼猫血清IgA、IgM、IgG含量差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.026.T005表5黄芪、山药和山楂对幼猫免疫指标的影响组别IgAIgMIgGＨ组128.389±107.396361.663±65.8401 408.586±55.318R组216.211±47.546287.597±51.8001 374.846±10.643Ｔ组236.517±57.738383.343±76.2361 451.228±53.373103 μg/L2.4黄芪、山药和山楂对幼猫粪便性状及肠道菌群的影响2.4.1黄芪、山药和山楂对粪便性状的影响（见表6）由表6可知，T组幼猫粪便性状评分分别比H组和R组高出0.254、0.205分（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.026.T006表6黄芪、山药和山楂对幼猫粪便性状的影响组别H组R组T组粪便性状评分4.071±0.0714.120±0.5524.325±0.274分2.4.2黄芪、山药和山楂对幼猫肠道菌群组成的影响2.4.2.1粪便菌群OTU的Venn图（见图3）本试验共检出14门29纲50目83科145属69种细菌。由图3可知，3组幼猫所共享的OTU有245个；每个分组均具有独有的肠道菌群OTU，其中H组148个、R组138个、T组160个。研究表明，添加黄芪、山药和山楂后，幼猫肠道中特有的OTU数量增多。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.026.F003图3粪便菌群OTU的Venn图2.4.2.2黄芪、山药和山楂对幼猫粪便菌群门水平相对丰度的影响（见图4）由图4可知，以门为分类水平，各组幼猫粪便菌群中占比位列前五的细菌门类分别是厚壁菌门（Firmicutes）、放线菌门（Actinobacteria）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、变形菌门（Proteobacteria）、梭杆菌门（Fusobacteria）。H组幼猫粪便菌群厚壁菌门、放线菌门、拟杆菌门的相对丰度为65.21%、28.14%、4.41%，R组厚壁菌门、放线菌门、拟杆菌门的相对丰度为67.26%、28.83%、1.65%，T组厚壁菌门、放线菌门、拟杆菌门的相对丰度为71.91%、25.13%、1.12%。T组幼猫粪便菌群厚壁菌门相对丰度高于H组和R组，放线菌门和拟杆菌门相对丰度均低于H组和R组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.026.F004图4黄芪、山药和山楂对幼猫粪便菌群门水平相对丰度的影响2.4.2.3黄芪、山药和山楂对幼猫粪便菌群属水平相对丰度的影响（见图5）由图5可知，各组幼猫粪便肠道菌群中排名前5个属分别是柯林斯菌属（Collinsella）、消化梭菌属（Peptoclostridium）、乳杆菌属（Lactobacillus）、布劳特氏菌属（Blautia）和双歧杆菌属（Bifidobacterium），5个属约占总相对丰度的70%。H组、R组和T组幼猫粪便双歧杆菌属相对丰度分别为4.89%、5.82%和1.87%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.026.F005图5黄芪、山药和山楂对幼猫粪便菌群属水平相对丰度的影响2.4.2.4黄芪、山药和山楂对幼猫粪便菌群科水平相对丰度的影响（见图6）由图6可知，H组、R组和T组幼猫粪便双歧杆菌科（Bifidobacteriaceae）的相对丰度为4.94%、5.82%和1.88%；丹毒科细菌（Erysipelotrichaceae）的相对丰度分别为2.43%、4.85%、4.95%；普雷沃菌（Prevotellaceae）的相对丰度分别为2.70%、0.77%和0.72%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.026.F006图6黄芪、山药和山楂对幼猫粪便菌群科水平相对丰度的影响2.4.3黄芪、山药和山楂对幼猫肠道菌群α-多样性指数的影响（见表7）由表7可知，T组幼猫Sobs指数、Shannon指数、Chao1指数和Ace指数均高于其他两组，表明肠道菌群物种丰度和多样性更高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.026.T007表7黄芪、山药和山楂对幼猫肠道菌群α-多样性指数的影响组别Sobs指数Shannon指数Simpson指数Chao1指数Ace指数H组454.64.170.87492.6507.7R组409.03.510.81449.3460.8T组482.64.370.87533.1546.12.4.4黄芪、山药和山楂对幼猫肠道菌群β-多样性指数的影响（见图7）PCoA分析平面上样本分布越近，表示样本菌群结构越相似。由图7可知，与H组和R组相比，T组幼猫肠道样品间更加聚拢，提示T组幼猫之间菌群结构更相似。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.026.F007图7黄芪、山药和山楂对幼猫肠道菌群β-多样性指数的影响3讨论3.1黄芪、山药和山楂对幼猫生长性能的影响幼龄期是猫关键的生命阶段，幼猫生长发育迅速、代谢旺盛，但消化系统尚不健全、免疫功能不完善，抗病能力弱[1]。因此，制定营养全面、易于吸收的幼猫专属营养粮具有重要意义。李璐璐等[13]发现，饲喂黄芪茎叶粉可显著降低肉鸡的料重比。山药和山楂对肉鸡、仔猪等动物的生长性能均具有积极作用[6,14]。本试验发现，添加黄芪、山药和山楂可以提高幼猫的平均日采食量、平均日增重，降低料重比，表明在基础幼猫粮中添加黄芪、山药和山楂能够有效提高其生长性能。3.2黄芪、山药和山楂对幼猫毛发质量的影响宠物主人比较注重宠物毛发质量[15]。猫的毛发源于皮肤生发层，具有抵抗外界侵害、保持体温、保护身体等作用。充足的营养供应是幼猫毛发光亮柔顺的重要基础。中草药添加剂具有纯天然、绿色和健康等优点，可促进能量吸收和转化，均衡动物营养，从而使毛发自然油润亮泽。有研究表明，中草药添加剂能够改善外周循环，调节机体代谢水平，改善生长性能和皮毛质量[12]。也有研究表明，中草药添加剂能够提高无机铁的生物吸收利用率，改善表皮细胞营养供给，进而使猪的皮毛光亮[11]。但关于中草药添加剂对幼猫毛发的影响尚未见报道。本试验中，添加黄芪、山药和山楂，幼猫的毛鳞片厚度和贴服度更好，提示幼猫粮添加黄芪、山药和山楂有益于营养毛发。3.3黄芪、山药和山楂对幼猫血清抗氧化能力、免疫能力的影响中草药中的生物活性物质具有抗病潜能[16-17]。山药中的活性成分包括皂苷、多巴胺、麦角甾醇、尿囊素等多种有机化合物[5,18]。黄芪、山药和山楂中的活性成分具有抗炎、抗氧化、调节免疫等多种功能[8,19]。研究表明，山药中的山药多糖、多酚类物质、薯蓣皂苷等可抵御氧化应激，通过清除自由基，实现抗氧化功效[5,20]。山楂具有消食导滞、行气散瘀的功效，还有抗衰老、降血脂、抗氧化等药理作用[6,21]。山楂的抗氧化活性源自其含有的黄酮与多酚类物质，其含量与抗氧化活性之间存在显著正相关[22]。此外，中草药添加剂对动物免疫力的影响也已有广泛研究。黄芪可以显著增加断奶仔兔血清IgA和IgG含量[23]。也有研究表明，山药多糖和山楂黄酮可显著提高仔猪血清IgA、IgM和IgG含量[6,24]。由此可推测在幼猫基础粮中添加黄芪、山药和山楂，可一定程度上提高幼猫的抗氧化能力和免疫能力。研究发现，T组幼猫血清SOD、GSH-Px、T-AOC、MDA水平均高于其他组，IgA、IgM和IgG含量高于其他组，但差异不显著，表明幼猫粮中添加黄芪、山药和山楂具有抗氧化、增强免疫力等功效。3.4黄芪、山药和山楂对幼猫肠道菌群的影响肠道菌群可以影响机体的免疫功能。菌群的组成和功能与机体消化和代谢息息相关。饮食、年龄、腹泻和其他疾病等因素可能影响肠道菌群的组成[25]。研究表明，正常猫肠道菌群似乎并不受性别、年龄或绝育状态影响[26-28]。还有研究表明，厚壁菌门与拟杆菌门的比例降低和双歧杆菌属丰度的增加可能提示猫肥胖[29]。此外，肠道菌群α-多样性更高，表明肠道菌群复杂性更高，通常提示更稳固的肠道菌群状态，反之则可能提示肠道菌群失调[29]；丹毒菌科细菌的降低可能与肥胖有关，而普雷沃菌科细菌的升高可能也不是一个良好的趋势。研究表明，普雷沃菌科通过TLR4和mTOR信号通路促进宿主慢性炎症、肠道通透性、脂肪生成和累积等[30]。黄芪、山药和山楂中的成分可通过调节肠道菌群维护肠道屏障完整性，改善胃肠功能，并可在多种疾病的治疗中发挥作用[2,9,31]。本试验发现，T组幼猫的粪便性状评分更高，且16S rRNA测序分析结果显示，T组幼猫中肠道菌群独有的OTU更多，肠道菌群种类更加丰富，菌群结构优于其他两组。此外，T组内各幼猫间粪便样本中的菌群结构更相近，提示T组猫粮成分更稳定，幼猫消化道适应性更好。4结论本试验研究表明，饲喂添加黄芪、山药和山楂的幼猫粮，幼猫生长性能、毛发质量和粪便性状更好，抗氧化和免疫能力更高，且肠道菌群更丰富、更健康。