随着水产养殖业不断发展，饲料原料鱼粉的需求量逐渐增加，甚至供不应求[1-2]。因此，亟须寻找鱼粉的替代品。黑水虻具有世代间隔短、生长速度快、繁殖能力强等优点，可以分解畜禽粪便，转化人类的餐厨垃圾[3-4]。黑水虻幼虫蛋白含量高，氨基酸组成平衡[5]，富含必需氨基酸[6]，是较好的蛋白原料替代物。刘兴等[7]发现，饲料中使用50%黑水虻幼虫粉替代鱼粉对锦鲤的成活率、增重率均无显著影响。胡俊茹等[8]发现，10%~50%的黑水虻幼虫粉组鲈鱼的末重、增重率、特定生长率、饲料系数与对照组相比均无显著差异。还有研究发现，使用25%和50%的黑水虻幼虫粉替代鱼粉对虹鳟的腹脂率、肌肉脂肪酸组成均无显著影响[9]。韩星星等[10]研究发现，使用40%的黑水虻幼虫粉替代鱼粉可以显著降低大黄鱼肝脏丙二醛（MDA）含量，显著提高增重率和蛋白效率。使用低于30%的黑水虻幼虫粉饲喂凡纳滨对虾，能够促进凡纳滨对虾生长；使用15%~20%黑水虻幼虫粉替代鱼粉可提高凡纳滨对虾血清总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）活性[11]。使用50%黑水虻幼虫粉替代鱼粉可以提高拟穴青蟹的成活率、平均壳增加率、平均体重绝对增重率[12]。使用16%黑水虻幼虫粉替代鱼粉可以显著提高暗纹东方鲀增重率以及鱼体C14∶0和n-6脂肪酸含量[13]。但目前关于黑水虻幼虫粉替代鱼粉在黄颡鱼生产中的添加量不完全一致[14-15]。因此，本试验研究不同比例黑水虻幼虫粉替代鱼粉对黄颡鱼生长性能、血清生化指标、鱼肉营养成分等影响，为黑水虻蛋白原料在黄颡鱼生产中的有效利用提供参考。1材料与方法1.1试验材料黑水虻幼虫粉购自生物源生物技术股份有限公司，其常规营养成分见表1。试验用黄颡鱼苗购自嵊州某水产养殖公司。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.010.T001表1黑水虻幼虫粉常规营养成分（干物质基础）项目干物质粗蛋白粗脂肪粗灰分含水量含量28567108%1.2试验设计及饲养管理试验开始前，所有鱼苗于水泥池中暂养2周，暂养结束后挑选体重约为2 g的黄颡鱼800尾，随机分为5组，每组4个重复，每个重复40尾，各重复饲养于350 L玻璃缸内。对照组（G0组）黄颡鱼饲喂基础饲料，G1组、G2组、G3组、G4组分别以15%、30%、45%、60%的黑水虻幼虫粉替代基础饲料中的鱼粉。试验饲料组成及营养水平见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.010.T002表2试验饲料组成及营养水平（干物质基础）项目G0组G1组G2组G3组G4组原料组成黑水虻幼虫粉04.208.4012.6016.80鱼粉28.0023.8019.615.411.20豆粕19.6219.6219.6219.6219.62菜籽粕9.509.509.509.509.50玉米蛋白粉5.485.485.485.485.48面粉22.3422.3422.3422.3422.34鱼油2.302.302.302.302.30豆油2.462.462.462.462.46维生素预混料0.850.850.850.850.85矿物质预混料0.900.900.900.900.90磷酸二氢钙0.950.950.950.950.95大豆卵磷脂1.251.251.251.251.25赖氨酸0.300.300.300.300.30蛋氨酸0.850.850.850.850.85氯化胆碱0.500.500.500.500.50纤维素4.704.704.704.704.70合计100.00100.00100.00100.00100.00营养水平粗蛋白质44.2344.0244.3144.1644.27粗脂肪8.869.128.968.899.15粗灰分9.8910.2310.1510.189.97水分8.899.279.459.6710.24注：1每千克维生素预混料为饲料提供：VA 3 150 000 IU、VB 13.8 g、VB 27.6 g、VB 65.2 g、VB1 185 mg、VD3 1 600 000 IU、VE 15 g、VK 3.9 g、泛酸钙 15.6 g、叶酸 1.35 g、烟酸26.8 g、肌醇1.35 g、生物素 62.5 mg。2.每千克矿物质预混料为饲料提供：MgSO4·H2O 9.5g、Ca(IO3)2 8.5 g、KCl 38 g、Met-Cu 1.86 g、ZnSO4·H2O 9.7 g、FeSO4·H2O 1.2 g、Met-Co 248 mg、NaSeO 29.85 mg。3.营养水平均为实测值。%试验期间每天定点投喂饲料2次（8：00、18：00），投喂量按照鱼体重的3%，每2 d换水一次，每次换水量为缸容积的1/3，水温控制在27~32 ℃，溶氧量大于6 mg/L，pH值控制在7~8。每天观察鱼的健康及死亡情况，出现死鱼及时捞出，并做好记录。试验期8 w。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能试验结束时，黄颡鱼饥饿24 h，按照重复称重，记录每个重复黄颡鱼的尾数和总质量；计算增重率、特定生长率、饲料效率。每个重复中随机挑选3尾黄颡鱼处死，测定体长、体重，破肚后分离内脏和肠系膜脂肪，称重，计算肝体比、脏体比和肥满度。增重率=(末重-初重)/初重×100%(1)特定生长率=(ln末重-ln初重)/饲养天数×100%(2)饲料系数=(总末重-总初重)/(投喂总量×饲料干物质含量)(3)肝体比=肝脏总重/试验鱼重×100%(4)脏体比=内脏团重/试验鱼重×100%(5)成活率=试验结束活鱼数/试验开始活鱼数×100%(6)肥满度=试验鱼体重/试验鱼体长3 (7)1.3.2血清生化指标试验结束时，每个重复随机取15尾鱼，麻醉后尾静脉采血1 mL，静置，待血凝固后，置于低温冷冻离心机4 000 r/min离心10 min，吸取上清液于无菌无酶EP管中，置于超低温冰箱冻存。使用罗氏C701全自动生化分析仪测定血清碱性磷酸酶（ALP）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）活性及总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、葡萄糖（GLU）、胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）的含量。1.3.3肌肉品质、肌肉常规养分和氨基酸含量1.3.3.1肌肉品质试验结束时，每个重复随机选6尾鱼，取背侧肌肉，用于测定肌肉品质、肌肉常规养分和氨基酸组成及含量。采用手持pH计（Testo，德国）测定pH值。取2 cm × 2 cm × 3 cm的鱼肉，称重，记为M1，使用铁丝悬挂于一次性塑料杯中置于4 ℃冰箱中冷藏24 h，使用滤纸吸干表面水滴，称重记为M2，计算滴水损失。滴水损失率=(M1-M2)/M1×100%(8)准确称量约5 g鱼肉，记为m1，置于-20 ℃低温冰箱中冷冻24 h，取出自然解冻至鱼肉中心温度为2~3 ℃时，室温静置30 min，使用滤纸吸干表面水滴，称量，记为m2，计算冷冻渗出率。冷冻渗出率=(m1-m2)/m1×100%(9)取鱼肉约10 g，记为Z1，将肉块置于90 ℃恒温水浴锅中煮10 min，冷却晾干，称量后，记为Z2，计算蒸煮损失率。蒸煮损失率=(Z1-Z2)/Z1×100%(10)1.3.3.2肌肉常规养分试验采用凯氏定氮法（GB 5009.5—2016）测定鱼肉中粗蛋白含量，索氏抽提法（GB 5009.6—2016）测定粗脂肪含量，采用高温（550 ℃）灼烧法（GB 5009.4—2016）测定粗灰分含量，采用烘干（105 ℃）法测定含水量。1.3.3.3氨基酸含量将黄颡鱼背侧肌肉冻干后粉碎，采用浓盐酸水解法在waters 510高效液相色谱仪上测定氨基酸组成及含量[15]。1.4数据统计与分析采用Excel整理数据，SPSS 25.0进行单因素方差分析，当方差分析差异显著时，采用Bonferroni法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1黑水虻幼虫粉替代鱼粉对黄颡鱼生长性能的影响（见表3）由表3可知，与G0组相比，各试验组黄颡鱼的肥满度随着黑水虻幼虫粉替代量的增加呈上升趋势。与G0组相比，G3组、G4组黄颡鱼的肥满度、肝体比显著升高（P0.05），饲料系数显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.010.T003表3黑水虻幼虫粉替代鱼粉对黄颡鱼生长性能的影响组别初重/g末重/g特定生长率/(%/d)增重率/%饲料系数肥满度/(g/cm3)肝体比/%脏体比/%存活率/%G0组2.05±0.0320.35±0.574.10±0.08892.68±42.351.21±0.07a1.45±0.06c1.48±0.08b7.89±0.2597.50±0.38G1组1.98±0.0219.67±0.484.10±0.06893.43±42.151.19±0.06a1.52±0.05bc1.51±0.06b7.82±0.3596.25±0.48G2组2.01±0.0319.56±0.384.10±0.08873.13±43.251.18±0.06a1.54±0.03bc1.58±0.08b7.67±0.2996.88±0.37G3组1.99±0.0119.34±0.494.06±0.09871.86±43.371.15±0.40b1.61±0.05ab1.68±0.07a7.69±0.3196.25±0.39G4组2.02±0.0219.15±0.474.02±0.07848.02±46.121.14±0.03b1.64±0.04a1.72±0.05a7.59±0.4295.63±0.41注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表4、表5与此同。2.2黑水虻幼虫粉替代鱼粉对黄颡鱼血清生化指标的影响（见表4）由表4可知，与G0组相比，各试验组黄颡鱼血清BUN含量、AST活性均随着黑水虻幼虫粉替代量增加逐渐下降；G3组、G4组黄颡鱼血清BUN含量、AST活性显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.010.T004表4黑水虻幼虫粉替代鱼粉对黄颡鱼血清生化指标的影响组别TP/(g/L)ALB/(g/L)BUN/(mmol/L)ALP/(U/L)ALT/(U/L)AST/(U/L)GLU/(mg/L)TC/(mmol/L)TG/(mmol/L)G0组34.05±0.5812.05±0.580.78±0.08a63.15±4.2318.96±2.34558.26±20.18a38.1±3.8A5.36±0.258.21±0.85AG1组34.52±0.3711.89±0.480.75±0.05ab62.85±4.5218.85±2.38548.96±21.03ab36.7±3.4A5.26±0.788.18±0.78AG2组34.28±0.4111.98±0.450.65±0.06abc63.01±4.1916.24±2.69530.28±22.38ab35.8±3.1A5.34±0.567.89±0.56ABG3组34.31±0.3812.06±0.520.62±0.07bc63.15±4.5815.27±1.98526.31±20.59b21.5±2.9B5.21±0.756.34±0.75BG4组34.31±0.3812.06±0.520.62±0.07c63.15±4.5815.27±1.98526.31±20.59b20.6±2.6B5.21±0.756.26±0.69B与G0组相比，各试验组黄颡鱼血清GLU、TG的含量随着黑水虻幼虫粉替代量增加而降低，G3组、G4组黄颡鱼血清的GLU和TG的含量极显著低于G0组（P0.01）。2.3黑水虻幼虫粉替代鱼粉对黄颡鱼肉品质的影响（见表5）由表5可知，随着黑水虻幼虫粉替代量的增加，各组黄颡鱼肉粗蛋白的含量呈现升高趋势，G3组、G4组黄颡鱼肉粗蛋白含量显著高于G0组（P0.05）。而黑水虻幼虫粉对其他肉品质指标无影响。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.010.T005表5黑水虻幼虫粉替代鱼粉对黄颡鱼肉品质的影响组别pH值滴水损失率/%冷冻损失率/%蒸煮损失率/%粗蛋白质/%粗脂肪/%粗灰分/%含水量/%G0组6.35±0.124.30±0.233.65±0.3510.58±1.2416.98±0.25c2.57±0.031.21±0.0580.25±0.24G1组6.34±0.154.28±0.313.56±0.2910.48±1.3217.12±0.26bc2.49±0.051.18±0.0680.38±0.24G2组6.31±0.164.25±0.263.49±0.3410.34±1.2617.56±0.34b2.56±0.071.16±0.0879.89±0.31G3组6.28±0.184.29±0.193.46±0.3610.25±1.2918.69±0.21a2.54±0.061.19±0.0479.68±0.29G4组6.28±0.184.29±0.193.46±0.3610.25±1.2918.98±0.29a2.58±0.051.20±0.0580.13±0.432.4黑水虻幼虫粉替代鱼粉对黄颡鱼肉必需氨基酸含量的影响（见表6）由表6可知，与G0组相比，G2组、G3组和G4组黄颡鱼肉的精氨酸含量均极显著降低（P0.01），组氨酸含量极显著升高（P0.01）。随着黑水虻幼虫粉替代鱼粉量增加，各试验组黄颡鱼肉中非必需氨基酸天冬氨酸和谷氨酸含量均高于G0组；其中G4组鱼肉中天冬氨酸含量显著高于G0组（P0.05），各试验组鱼肉丙氨酸含量均极显著低于G0组（P0.01）。G3组、G4组黄颡鱼肉中总呈味氨基酸含量均极显著高于G0组（P0.01），G4组黄颡鱼肉的总非必需氨基酸含量显著高于G0组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.010.T006表6黑水虻幼虫粉替代鱼粉对黄颡鱼肉氨基酸组成的影响项目G0组G1组G2组G3组G4组必需氨基酸（EAA）色氨酸（Try）7.12±0.157.15±0.167.21±0.197.24±0.217.19±0.23精氨酸（Arg）5.40±0.05A5.34±0.04A5.12±0.03B4.26±0.06C4.18±0.08C组氨酸（His）1.55±0.03C1.62±0.05C1.75±0.06B1.82±0.08AB1.94±0.04A缬氨酸（Val）3.51±0.06D3.67±0.05C3.82±0.04B4.15±0.03A4.16±0.08A异亮氨酸（Ile）3.45±0.043.42±0.053.48±0.033.41±0.043.50±0.05亮氨酸（Leu）6.31±0.086.29±0.076.30±0.096.27±0.066.28±0.08苏氨酸（Thr）3.68±0.053.61±0.063.59±0.083.58±0.043.56±0.09甲硫氨酸（Met）1.98±0.111.86±0.121.85±0.161.92±0.211.87±0.19苯丙氨酸（Phe）3.34±0.053.27±0.053.26±0.063.19±0.093.21±0.08非必需氨基酸（NEAA）天冬氨酸（Asp）6.75±0.24b6.87±0.31ab6.85±0.34ab7.15±0.29ab7.34±0.27a丙氨酸（Ala）4.15±0.06A4.02±0.02B3.82±0.06C3.67±0.04D3.59±0.07D甘氨酸（Gly）3.38±0.083.29±0.093.27±0.083.31±0.073.34±0.04谷氨酸（Glu）10.21±0.25D10.56±0.31CD10.95±0.29BC11.49±0.27AB12.06±0.24A脯氨酸（Pro）2.31±0.032.34±0.042.29±0.052.27±0.062.26±0.05酪氨酸（Tyr）2.67±0.052.69±0.062.71±0.072.73±0.052.65±0.08丝氨酸（Ser）2.94±0.102.87±0.112.86±0.132.91±0.092.88±0.15总呈味氨基酸（TFAA）30.50±0.15C30.7±0.17C30.86±0.11C31.54±0.21B32.19±0.19A总必需氨基酸（TEAA）36.34±0.5936.23±0.6136.38±0.5735.84±0.6235.89±0.58总非必需氨基酸（TNEAA）32.41±0.78b32.64±0.82b32.75±0.69b33.53±0.71ab34.12±0.74a注：1.呈味氨基酸包括天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、甘氨酸和酪氨酸。2.同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。%3讨论3.1黑水虻幼虫粉替代鱼粉对黄颡鱼生长性能的影响生长速率和饲料系数是评价水产动物生长性能的主要指标[16]。本研究发现，使用15%~60%黑水虻幼虫粉替代鱼粉对黄颡鱼的末重、特定增长率、增重率、饲料系数均无显著影响。陈晓瑛等[15]研究发现，使用10%~50%黑水虻幼虫粉替代鱼粉对饲料系数无显著影响，与本研究结果一致；但在黑水虻幼虫粉替代鱼粉比例为40%、50%时，可显著降低黄颡鱼的末重和特定生长率，与本研究结果不一致。原因可能是使用的幼虫粉的营养成分存在差异。形体指标是评估动物机体健康的关键指标[17]。一般认为，肝体比、脏体比和肥满度过高机体可能出现炎症或者脂肪堆积，炎症或脂肪堆积会严重影响内脏功能和养分的消化吸收[18]。本研究发现，当黑水虻幼虫粉替代量为45%和60%时，黄颡鱼的肝体比、肥满度显著高于其他组，原因可能是黑水虻幼虫粉中存在某些抗营养因子（几丁质）[19]。因此，在黄颡鱼中使用的黑水虻幼虫粉替代鱼粉的比例不应高于30%。彭凯等[20]在加州鲈中发现黑水虻幼虫替代比例不应高于30%，在半滑舌鳎[21]、西伯利亚鲟[22]等鱼类中同样发现黑水虻幼虫粉替代鱼粉的比例不应高于30%，与本研究结果一致。3.2黑水虻幼虫粉替代鱼粉对黄颡鱼血清生化指标的影响AST、ALP、BUN、GLU、TG、TC、TP、ALB等血清生化指标可以判断动物机体的健康情况[23]，其中BUN含量与机体蛋白质和氨基酸利用呈负相关[24]。本研究发现，使用黑水虻幼虫粉部分替代鱼粉显著降低了黄颡鱼血清BUN含量、AST活性，极显著降低了GLU和TG的含量。有研究发现，使用蝇蛆粉替代鱼粉降低黄颡鱼血清中AST活性[25-26]，与本研究结果一致。AST活性升高表明肝脏可能已经受到损伤。本研究发现，各试验组黄颡鱼血清AST活性均低于对照组，原因可能是机体维持正常的生理功能而提高了机体的代谢效率。谢雨桐等[27]研究发现，使用2%、4%的黑水虻虫浆可显著降低杂交鳢血清TG含量。王国霞等[14]发现，使用20%、40%和60%的黑水虻幼虫粉替代可显著降低黄颡鱼血清TG和TC含量。Li等[28]研究发现，使用黑水虻幼虫粉替代部分鱼粉，幼建鲤血浆TC含量显著降低。上述结果鱼血清中TG含量降低与本研究结果一致，但是TC含量降低与本研究结果不一致，可能是鱼粉的使用量不一致造成。TG含量降低表明机体脂质代谢旺盛，GLU和TG含量的降低可能因为机体对脂质的吸收能力增强，这也可能是肥满度升高的原因。3.3黑水虻幼虫粉替代鱼粉对黄颡鱼肉品质的影响鱼肉品质由鱼肉的鱼肉理化特性（pH值、滴水损失率）、加工特性（蒸煮损失率、冷冻损失率）[29]、常规养分和氨基酸组成决定，粗蛋白含量越高、各种氨基酸比例均衡、必需氨基酸含量越高表明肉品质越高[30]。本研究发现，使用不同比例的黑水虻幼虫粉替代鱼粉对于黄颡鱼的理化特性及加工特性均无显著影响，可以为黑水虻幼虫粉在黄颡鱼中的应用提供参考。本研究发现，黑水虻幼虫粉替代45%、60%的鱼粉可显著提高鱼肉中的粗蛋白含量，而对粗脂肪含量、含水量无影响。有研究发现，使用黑水虻幼虫粉替代鱼粉对花鲈[31]、黄颡鱼[14]的体成分中的粗蛋白、粗脂肪的含量及含水量无显著影响。陈晓瑛等[15]研究发现，10%~50%的黑水虻幼虫粉替代鱼粉对于黄颡鱼的粗脂肪、粗灰分的含量和含水量无显著影响。以上研究中鱼肉中粗脂肪含量、含水量与本研究结果一致，粗蛋白含量与本研究结果不同，可能是黑水虻幼虫粉中的粗蛋白含量存在差异（本试验56%、花鲈65.9%、黄颡鱼55.4%）。李雪婷[21]发现，与对照组相比，在半滑舌鳎中使用黑水虻幼虫粉替代25%的鱼粉可使其粗蛋白含量上升，与本研究结果相同。氨基酸的组成、含量及必需氨基酸含量是衡量肉营养价值的关键指标[32]。味道是影响消费者对肉类选择的关键。呈味氨基酸中甘氨酸和丙氨酸呈甘味，谷氨酸和天冬氨酸呈鲜味[21]。本研究发现，黑水虻幼虫粉替代45%和60%的鱼粉后极显著降低了鱼肉中精氨酸含量，极显著升高了组氨酸和缬氨酸的含量；提高了天冬氨酸含量，极显著降低了谷氨酸含量，极显著升高了丙氨酸含量。本试验中，随着黑水虻幼虫粉替代鱼粉量升高，鱼肉中总呈味氨基酸含量和总非必需氨基酸升高。呈味氨基酸含量升高表明黑水虻幼虫粉中的某些成分能够诱导天门冬氨酸等呈味氨基酸的生成，但诱导的分子机制还有待更进一步研究。陈晓瑛等[15]发现，使用黑水虻幼虫粉替代鱼粉对黄颡鱼肉谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、天冬氨酸及总呈味氨基酸含量无显著影响，与本研究结果不同，原因可能是黑水虻幼虫粉的替代量不同。4结论本试验发现，黑水虻幼虫粉替代鱼粉的比例高于30%可以改善黄颡鱼部分血清指标，提高鱼肉中粗蛋白含量，对非必需氨基酸和呈味氨基酸具有积极作用。综合考虑，黑水虻幼虫粉替代鱼粉的适宜比例为30%。