猪流行性腹泻（PED）是由冠状病毒属的猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的一种高度接触性传染病[1]，主要通过粪口途径传播[2]，尤其是7日龄内仔猪易感染。感染仔猪的症状主要表现为腹泻、呕吐、脱水等症状[3]，给养猪业造成了极大的经济损失[4]。目前，针对PED的治疗方式主要包括返饲、卵黄抗体、抗生素治疗及中草药治疗。返饲虽然能够降低仔猪的腹泻率，但易引发猪场其他疫病。Liu等[5]将鸡免疫后制得的卵黄抗体（IgY）用于治疗PEDV感染，疗效显著，但制备工艺复杂，成本较高。抗生素虽能缓解仔猪腹泻，但易产生残留及耐药性等问题[6]。中草药制剂及其提取物对治疗猪流行性腹泻具有显著效果[7-8]。莽草酸（shikimic acid，SA）是一种重要的生理活性物质，也是磷酸奥司他韦（达菲）的主要合成原料，口服达菲能够有效预防甲型H1N1流感病毒或禽流感病毒[9]。Liu等[10]研究发现，莽草酸对石斑鱼虹彩病毒具有明显抑制作用。Yan等[11]研究发现，莽草酸可以通过上调免疫调节性细胞因子及部分细胞间黏附因子治疗因三硝基苯磺酸诱导的大鼠结肠炎。You等[12]研究发现，莽草酸可通过抑制MAPK/NF-κB信号通路减少骨关节炎引起的炎症反应。但目前关于莽草酸对冠状病毒的作用机制研究较少。因此，本试验研究莽草酸对哺乳仔猪抗病促生长的作用，为其在畜禽生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料莽草酸（含量大于98%）和绿原酸（含量大于50%）均购自桂林莱茵生物科技股份有限公司，庆大霉素购自河北远征禾木药业有限公司。免疫指标试剂盒购自江苏酶标生物科技有限公司，抗氧化指标试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.2试验设计选取120头体重约（3.4±0.5）kg感染PEDV的“杜×长×大”仔猪，随机分为6组，每组5个重复，每个重复4头猪。处理1组、2组、3组分别每日给感染PEDV仔猪灌服800、400、200 mg/kg的莽草酸，处理4组每日给感染PEDV仔猪灌服400 mg/kg的绿原酸，处理5组每日给感染PEDV仔猪灌服2万单位的庆大霉素，处理6组为阳性对照组（PEDV阳性）。另选取20头健康仔猪，设为空白对照组（PEDV阴性）。试验期5 d，之后观察3 d。1.3饲养管理本试验在广西某规模猪场进行，试验采用全封闭式猪舍，处理1~6组仔猪饲养在一间猪舍，空白对照组仔猪饲养在相隔较远的另一间猪舍。2间猪舍建筑设计完全一致，试验期舍内温度为（32±2）℃，相对湿度为60％~70％。试验仔猪分栏饲养于2 m × 3 m的漏缝式地板圈内，每天清扫猪舍1次，并用消毒液为栏舍消毒。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能于用药前和用药后第5 d分别对每头试验猪进行称重，计算平均日增重（ADG）及增重率。ADG=总增重/试验天数(1)增重率=(给药后体重-给药前体重)/给药前体重×100%(2)1.4.2腹泻指数试验期间每天观察并记录仔猪健康状况和腹泻发生情况，计算腹泻指数。按照粪便形态进行评分，粪便形态共分为4个等级，分别为正常（0分）、糊状（1分）、半液体（2分）、液体（3分），得分≥2视为腹泻[13]。腹泻指数=腹泻评分/供试猪总数(3)1.4.3疗效判定仔猪灌药后，观察其精神状态、腹泻等情况，治疗后停止腹泻，精神及采食恢复，并且在观察期内未复发的仔猪判定为治愈[14]。记录死亡和治愈数量，计算治愈率及死亡率。1.4.4血清免疫及抗氧化指标试验结束时，从每个重复中选择1头仔猪，利用一次性负压真空采血管进行前腔静脉采血，3 000 r/min离心10 min，测定血清免疫指标，包括免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）。抗氧化指标包括：丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、一氧化氮（NO）、髓过氧化物酶（MPO）、黄嘌呤氧化酶（XOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和总抗氧化能力（T-AOC）。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel表格进行分组统计，SPSS 18.0软件进行单因素方差分析，采用Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1莽草酸对感染PEDV仔猪生长性能的影响（见表1）由表1可知，试验结束时，处理1~5组试验猪的平均日增重显著高于阳性对照组（P0.05）。与空白对照组相比，处理1~3组试验仔猪的增重率分别提高了17%、15%和13%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.003.T001表1莽草酸对感染PEDV仔猪生长性能的影响组别给药前体重/(kg/头)给药后5 d体重/(kg/头)平均日增重/[kg/(头·d)]增重率/%处理1组3.55±0.145.46±0.430.38±0.09a54处理2组3.48±0.515.34±0.820.37±0.10ab53处理3组3.35±0.305.08±0.800.35±0.16abc52处理4组3.59±0.604.89±0.800.26±0.16bc36处理5组3.41±0.704.56±0.480.23±0.14c34阳性对照组3.18±0.212.98±0.31-0.04±0.09d-6空白对照组3.21±0.354.69±0.510.30±0.10abc46注：同列数据肩标相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05），不同字母表示差异显著（P＜0.05）；表2、表4与此同。2.2莽草酸对感染PEDV仔猪腹泻指数的影响（见表2）由表2可知，与阳性对照组相比，处理1~5组试验猪腹泻指数显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.003.T002表2莽草酸对感染PEDV仔猪腹泻指数的影响组别腹泻指数处理1组0.19±0.15b处理2组0.19±0.14b处理3组0.19±0.15b处理4组0.18±0.16b处理5组0.18±0.14b阳性对照组0.39±0.01a2.3莽草酸对感染PEDV仔猪的治疗效果（见表3）由表3可知，处理1~5组的试验猪的治愈率分别为85％、85%、70％、80%、65%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.003.T003表3莽草酸对感染PEDV仔猪的治疗效果项目动物数/头治愈数/头有效数/头无效数/头治愈率/%有效率/%总有效率/%无效率/%处理1组2017218510955处理2组20173085151000处理3组2014517025955处理4组20162280109010处理5组2013616530955阳性对照组1000100001002.4莽草酸对感染PEDV的仔猪血清免疫指标的影响（见表4）由表4可知，与阳性对照组相比，处理1~3组试验猪血清中IgG含量显著升高（P0.05），处理1组、处理3组试验猪血清中IgA含量显著升高（P0.05）。与阳性对照组和空白对照组相比，处理1组试验猪血清中IgM含量显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.003.T004表4莽草酸对感染PEDV仔猪血清免疫指标的影响组别IgGIgAIgM处理1组137.86±32.90a286.90±49.84a374.42±25.31a处理2组131.40±34.48a248.88±60.77ab351.84±40.48abc处理3组109.78±21.36ab265.66±68.86a355.24±30.91abc处理4组90.00±15.41bc231.96±69.40ab365.81±12.47ab处理5组95.81±7.46bc245.51±48.73ab341.10±39.20abc阳性对照组71.81±11.81c174.57±51.15b326.59±20.53bc空白对照组85.26±10.92bc249.57±31.44ab315.29±47.12cmg/L2.5莽草酸对感染PEDV仔猪血清抗氧化指标的影响（见表5）由表5可知，与阳性对照组相比，处理1组、2组和3组试验猪血清中SOD、GSH-Px、CAT、MPO活性、NO含量、T-AOC显著升高（P0.05），XOD活性、MDA含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.003.T005表5莽草酸对感染PEDV仔猪血清抗氧化指标的影响项目处理1组处理2组处理3组处理4组处理5组阳性对照组空白对照组MDA/(μmol/L)1.72±0.59b1.65±0.23b1.74±0.30b2.22±0.92ab2.41±0.35a2.74±0.84a1.68±0.15bSOD/(U/mL)31.90±6.46a31.78±8.42a30.01±5.99ab24.26±5.36bc21.54±3.37c18.04±6.26c31.50±2.97aCAT/(U/mL)14.45±3.76abc15.42±1.77ab11.94±2.54bcd11.31±1.24bc9.29±2.24d5.07±2.83e15.68±4.06aNO/(μmol/L)4.32±1.02a4.26±2.45a3.98±1.50a3.32±1.32ab2.86±0.84ab1.62±0.45c4.36±0.96aMPO/(U/L)31.47±6.25a31.07±9.64a29.37±7.34a26.55±6.85ab23.74±6.92ab18.85±5.11b32.60±3.92aXOD/(U/L)4.23±0.65c4.04±0.66c4.48±0.80c4.46±0.53c6.00±1.95b7.66±0.79a4.06±0.94cGSH-Px/(U/mL)526.60±95.95ab522.40±61.17ab533.92±102.16ab396.27±61.08bc297.50±58.33c289.60±68.45c500.53±103.04abT-AOC/(mmol/L)1.32±0.02a1.31±0.02a1.31±0.02a1.21±0.03b1.11±0.11c0.94±0.01d1.34±0.20a注：同行数据肩标相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05），不同字母表示差异显著（P＜0.05）3讨论3.1莽草酸对感染PEDV7日龄仔猪生长性能的影响PED病传染性强，死亡率高。因此，寻找一种安全、廉价、有效的PED防治措施成为目前研究热点。感染PED的哺乳仔猪除了腹泻、呕吐等典型症状外，还表现为体重增长率降低，严重影响了哺乳仔猪的生长性能，进而影响猪场的生产效益。Yu等[15]研究发现，莽草酸能够提高肉鸡生长性能。Liao等[16]研究发现，在饲粮中添加莽草酸能够提高断奶仔猪生长性能。杨云乔等[17]采用复方中药治疗PED，发现治愈后猪的体重增长率为22.4%。本试验结果显示，莽草酸能够显著提高感染PEDV的7日龄仔猪的平均日增重，表明莽草酸对感染PEDV的7日龄仔猪具有一定的促生长作用。3.2莽草酸对感染PEDV7日龄仔猪腹泻指数及治疗效果的影响PEDV感染仔猪后会侵入小肠，在肠绒毛上皮细胞浆中复制病毒，引起细胞变性和肠绒毛萎缩等病理变化，导致卡他性肠炎，7日龄仔猪死亡率达到100%。Xing等[18]研究发现，莽草酸对大鼠的结肠炎有显著的治疗作用，能够缓解肠道损伤，降低腹泻。王亚欣等[14]研究发现，莽草酸能够通过阻断病毒进入或凭借其抗氧化活性起到抗病毒作用。王冬玲等[19]研究发现，红茴香注射液的主要镇痛物质莽草酸可通过局部组织吸收入血，起镇痛和免疫调节的作用，从而缓解由于炎症、肿胀导致的张口受限。本试验中，感染PEDV 7日龄仔猪使用莽草酸治疗后，其呕吐、腹泻症状均有明显缓解，腹泻指数显著降低。杨久春等[20]采用复方中药对感染猪流行性腹泻病毒的仔猪进行治疗后发现能够有效提高感染病毒仔猪的治愈率。综上所述，莽草酸对感染PEDV7日龄仔猪有一定治疗作用。3.3莽草酸对感染PEDV7日龄仔猪血清免疫指标的影响免疫球蛋白是由B淋巴细胞产生的免疫活性分子，具有抗体（Ab）活性或化学结构，主要功能是特异性地结合抗原，在体内中和外毒素，阻止病毒感染等[21]。其中IgG在5种类型的血清免疫球蛋白中含量最高，在抗病毒方面发挥重要作用[22]。刘艳君[23]研究发现，在断奶仔猪饲料中添加莽草酸，能够提高仔猪血清中IgG含量。感染PEDV会引起黏膜免疫反应，而机体产生的IgA与IgM可以有效抵抗消化道内蛋白水解酶的降解作用，能够更好地中和病毒，抵抗PEDV感染。IgM作为天然抗体的主要成分，具有杀菌、激活补体、免疫调理和凝集作用[24]。朱海侠等[25]研究发现，仔猪感染PEDV后IgA抗体水平降低，机体的抗病毒能力降低，病程加快。本试验结果显示，莽草酸能够提高感染PEDV的仔猪体内的IgG、IgA和IgM含量，增强体液免疫和细胞免疫能力。3.4莽草酸对感染PEDV7日龄仔猪血清抗氧化指标的影响仔猪在感染PEDV后会导致机体脂质过氧化并产生大量氧自由基，进而对细胞造成氧化损伤，SOD可以将超氧阴离子转化为过氧化氢，从而对氧化损伤起到防御作用[23]。CAT、MPO、GSH-Px和NO是体内重要的抗氧化酶，其中GSH-Px是天然的自由基清除剂，可以将氧自由基转化为过氧化氢来清除细胞环境中有害的活性氧[26]。NO是生物体内一种反应性极强的自由基，有第二信使和神经递质的作用；T-AOC能够反映机体抗氧化能力的综合指标；MDA和XOD的水平可以用来判断机体脂质过氧化和细胞损伤程度[27]。Sun等[28]研究发现，莽草酸可以通过清除超氧自由基和羟基自由基从而表现其抗氧化活性，减轻肾损伤。Ding等[29]研究发现，补充莽草酸可促进血清中SOD、CAT、GSH-Px的表达，激活Nrf2信号通路，提高禽类抗氧化能力。金依依[30]研究发现，莽草酸能够通过降低P38 MAPK通路的磷酸化水平达到抑制炎症反应的目的。本试验中，莽草酸可以提高试验猪血清中的SOD、CAT、MPO、GSH-Px活性、NO含量、T-AOC，降低XOD活性、MDA含量，表明莽草酸对PEDV感染导致的氧化损伤具有缓解作用。4结论研究表明，莽草酸能够显著提高感染PEDV的7日龄仔猪的生长性能，降低腹泻指数，增强免疫力，提高血清抗氧化能力，建议莽草酸在临床中使用的适宜添加剂量为400 mg/kg。