目前，仔猪腹泻包括仔猪胃肠道发育不完全导致的细菌感染[1]、饲料配比失衡导致的营养性腹泻[2]、病毒感染以及环境因素引起的应激性腹泻[3]，是养猪业中常见的问题之一[4]。益生菌表面富含细胞壁肽聚糖、脂磷壁酸和细胞壁蛋白质3种活性物质[5-6]，可发挥抗菌及免疫调节作用[7]。复合益生菌由不同种类的益生菌混合而成[8]，可以通过菌株的协同作用发挥更全面的益生效果[9-10]。复合益生菌在动物肠道定植，可调节肠道菌群平衡[11-12]，通过促进机体对营养物质的消化吸收提高生产性能[13-14]。有研究表明，复合益生菌胞外分泌蛋白参与肠道微生物菌群的调节，能够增加厚壁菌门的相对丰度，降低变形菌门的相对丰度[15]。复合益生菌能够增强肠道屏障功能，通过与病原微生物竞争肠道内的营养物质或与其他微生物菌群互作抑制常见病原微生物的增殖[16]，有助于预防和减轻肠道感染和疾病，维持动物机体的健康生长[17]。研究发现，复合益生菌可以抑制大肠杆菌、沙门氏菌及部分病毒的生长繁殖[18]。本试验旨在探讨饲粮中添加不同剂量的复合益生菌对仔猪生长性能、血清生化指标以及养殖经济效益的影响，为复合益生菌在仔猪养殖中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料复合益生菌制剂（威凯海思生物工程有限公司）由枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌和地衣芽孢杆菌组成，有效活菌数≥1×1010 CFU/g。1.2试验设计选取21日龄、平均体重（7.55±0.20）kg、“杜×长×大”三元杂交断奶仔猪120头，随机分为4组，每组3个重复，每个重复10头仔猪。对照组、试验1组、2组和3组分别在基础饲粮中添加0、0.1%、0.2%、0.3%复合益生菌，试验期42 d。根据NRC（2012）仔猪的营养需求标准配制玉米-豆粕型饲粮作为基础饲粮。基础饲粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.005.T001表1基础饲粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米51.45消化能/(MJ/kg)13.50豆粕12.95粗蛋白质/%18.88发酵豆粕5.50粗脂肪/%5.13膨化大豆4.50粗纤维/%2.54乳清粉14.50粗灰分/%4.96鱼粉5.00钙/%0.65大豆油2.00有效磷/%0.47磷酸二氢钙0.80赖氨酸/%1.39赖氨酸0.65蛋氨酸0.20L-苏氨酸0.30色氨酸0.15预混料2.00注：1.预混料为每千克饲粮提供：Fe 80 mg、Cu 12 mg、Mn 48 mg、Zn 123 mg、VA 2 000 IU、VD3 145 mg、VE 23 mg、VB12 0.025 mg、烟酸28 mg、D-泛酸13 mg。2.营养水平均为计算值。1.3饲养管理所有仔猪统一管理，采用规模化养殖场的饲养管理方式进行喂食、保健和消毒。仔猪自由采食和饮水，使用保温灯保温，定时通风换气，保持舍内环境干燥，每日观察猪群健康状况，做好相关试验记录。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能在试验第1 d和最后1 d晨饲前，仔猪空腹称重，记为初重、末重，计算平均日增重（ADG）；每天记录每个重复仔猪的喂料量与剩料量，计算料重比（F/G）和平均日采食量（ADFI）。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2血清生化指标试验结束时，每个重复随机选择4头猪，前腔静脉采血10 mL，血液样室温静置25 min后，3 000 r/min离心15 min分离血清，置于-20 ℃保存。使用全自动生化分析仪测定血清中的尿素氮（BUN）、白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）、球蛋白（GLB）、葡萄糖（GLU）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）指标。试验操作按照试剂盒（北京利德曼公司）说明书进行。1.4.3肠道组织形态指标将在4%多聚甲醛中固定24 h的肠段组织依次进行酒精脱水，石蜡包埋，切成5 μm左右的切片以及苏木精-伊红（HE）染色，使用光学显微镜对肠段组织形态学变化观察拍照，选取10个典型视野用图像分析软件计算绒毛高度（VH）和隐窝深度（CD），计算绒毛高度与隐窝深度的比值（V/C）。1.4.4经济效益试验开始前，对每头仔猪空腹称重，每天记录试验期间耗料量。试验结束统计各组仔猪使用的饲料量，保育结束后猪单价为26元/kg，计算饲料的成本。增重=末重-初重(4)利润=增重×26-采食量×饲料单价(5)1.5数据统计与分析采用SPSS 22.0统计软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1复合益生菌对仔猪生长性能的影响（见表2）由表2可知，试验3组仔猪的末重、平均日增重比对照组分别提高了15.66%、24.89%（P0.05）；试验2组和试验3组仔猪的料重比显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.005.T002表2复合益生菌对仔猪生长性能的影响组别初重/(kg/头)末重/(kg/头)平均日增重/[g/(头·d)]平均日采食量/[g/(头·d)]料重比对照组7.60±0.1118.93±2.07b269.76±4.59b466.22±11.201.73±0.02a试验1组7.47±0.2619.98±2.03b297.85±7.44b501.67±12.331.68±0.05a试验2组7.52±0.2420.67±1.30b313.10±10.06b503.26±13.921.61±0.02b试验3组7.74±0.3021.89±2.41a336.90±8.36a511.66±9.271.52±0.04c注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表3与此同。2.2复合益生菌对仔猪血清生化指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，试验1组和试验3组仔猪血清GLU含量显著提高（P0.05），试验3组仔猪血清GLU含量显著高于试验2组（P0.05），试验2组、3组仔猪血清中BUN含量显著低于对照组和试验1组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.005.T003表3复合益生菌对仔猪血清生化指标的影响组别TP/(g/L)ALB/(g/L)GLB/(g/L)GLU/(mol/L)BUN/(mol/L)TG/(mol/L)TC/(mol/L)ALT/(U/L)AST/(U/L)对照组62.33±2.3426.40±2.3135.96±3.104.85±0.13c4.73±0.31a0.51±0.042.53±0.1062.93±2.68102.85±3.41试验1组64.81±2.4227.34±1.7537.54±1.285.20±0.17ab4.28±0.37a0.62±0.072.70±0.1861.77±3.39101.27±5.02试验2组63.59±3.3826.81±2.0136.67±2.534.26±0.12bc3.99±0.46b0.58±0.042.65±0.1162.62±3.30103.00±4.23试验3组63.96±2.2726.55±1.7637.60±1.595.37±0.15a3.68±0.19b0.56±0.082.74±0.1563.05±2.86103.61±3.602.3复合益生菌对仔猪肠道形态的影响（见表4）由表4可知，各试验组仔猪回肠VH显著高于对照组（P0.05），各试验组仔猪十二指肠和空肠的VH、CD、V/C差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.005.T004表4复合益生菌对仔猪肠道形态的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组十二指肠VH/μm369.33±22.41370.12±36.05374.97±25.67377.05±26.25CD/μm264.40±10.06261.43±9.87258.06±11.42252.44±14.80V/C1.40±0.041.42±0.021.45±0.061.49±0.06空肠VH/μm320.71±31.83316.55±35.27343.77±28.05352.23±34.77CD/μm226.40±12.03207.45±9.64221.95±11.44219.14±10.73V/C1.42±0.111.53±0.081.55±0.061.61±0.05回肠VH/μm345.25±24.56b386.34±18.71a382.16±28.69a389.74±30.47aCD/μm237.26±13.06235.69±7.72238.81±11.66232.79±9.58V/C1.46±0.051.64±0.031.60±0.041.67±0.02注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）2.4复合益生菌对仔猪养殖经济效益的影响（见表5）由表5可知，对照组、试验1组、2组、3组仔猪增重的利润分别为219.40、244.79、260.71和283.71元。与对照组相比，试验1组、试验2组和试验3组每头仔猪利润分别增加了25.39、41.31、64.31元。复合益生菌的添加量为0.3%时，养殖效益最高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.19.005.T005表5复合益生菌对仔猪养殖经济效益的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组总增重/(kg/头)11.3312.5113.1514.15增重收益/(元/头)294.58325.26341.90367.90耗料量/(kg/头)17.9019.3919.3319.81饲料单价/(元/kg)4.104.154.204.25饲料成本/(元/头)75.1880.4781.1984.19利润/(元/头)219.40244.79260.71283.713讨论3.1复合益生菌对仔猪生长性能的影响断奶仔猪腹泻是影响养猪生产效率的主要问题之一[19]。研究表明，在仔猪饲粮中添加复合益生菌能够降低仔猪腹泻率，提高仔猪生长性能[20]。本试验表明，试验3组仔猪的末重和平均日增重显著高于对照组，料重比显著降低，与蒋广志等[21]在日粮中添加复合益生菌可以显著提高断奶仔猪的平均日增重、降低料重比的结论一致。林水中等[22]研究表明，在育肥猪饲粮中添加1.5 g/kg的复合益生菌（枯草芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌）能够提高育肥猪生长期的平均日增重和饲料效率。田文锦等[23]发现，在日粮中添加复合益生菌（活菌数≥1.0×107 CFU/g）可以提高仔猪的平均日增重和末重。复合益生菌能够改善仔猪的生长性能的原因是复合益生菌能够合成多种消化酶[24-25]，提高机体对营养物质的消化和吸收，提高饲料转化率[26]；复合益生菌还可以产生抗菌肽等抗菌物质，这些物质能够有效抑制病原菌和有害细菌的增殖，维持肠道菌群的平衡，促进肠道健康，提高机体生产性能[27-28]。但本试验中复合益生菌对仔猪肠道微生物的具体调控机制还有待进一步的研究。3.2复合益生菌对仔猪血清生化指标的影响血清生化指标可以反映动物机体代谢、器官功能、营养状态以及健康状态等[29]。血清总蛋白由白蛋白和球蛋白组成，其含量可以反映机体的营养状况以及对蛋白质的吸收代谢水平[30]；甘油三酯和总胆固醇含量是评估机体脂质代谢的重要指标[31]；谷丙转氨酶和谷草转氨酶都是转氨酶家族成员，其活性决定了动物机体非必需氨基酸的合成和蛋白质分解代谢情况[32]。陈宝剑等[33]研究发现，在饮水中添加复合益生菌对断奶仔猪血清中总胆固醇和甘油三酯含量的影响不显著，试验组仔猪血清总蛋白含量比对照组提高了16.24%。吴东等[34]研究发现，益生菌发酵饲料对仔猪血清总蛋白、尿素氮含量以及谷草转氨酶活性的影响均不显著，谷丙转氨酶活性与对照组相比下降37.34%。本试验发现，饲粮添加复合益生菌对仔猪血清总蛋白、总胆固醇、甘油三酯的含量以及谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性均无显著影响，表明复合益生菌对仔猪蛋白质和脂质代谢无不利影响。血清中葡萄糖含量可反映仔猪的糖代谢状况，在一定范围内，葡萄糖浓度越高，机体代谢能力越强[35-37]。李婧等[38]运用体外模型证明了低聚葡萄糖对复合益生菌（嗜酸乳杆菌和双歧杆菌）的体外生长具有显著促进作用。本试验发现，试验1组和试验3组仔猪血清葡萄糖含量显著高于对照组，表明复合益生菌可增强机体对葡萄糖的利用和转化能力。尿素氮含量反映了氨基酸合成蛋白质的效率，当蛋白质合成增加时，尿素氮含量降低[39]。陈国福等[40]研究发现，在基础饲粮中添加0.5%的益生菌制剂，能够使育肥猪血清中尿素氮的含量显著降低13.7%。本研究发现，试验2组和试验3组仔猪血清中尿素氮含量显著降低，表明复合益生菌可以促进蛋白质的合成代谢，促进生长。原因可能是复合益生菌自身通过合成各种酶类提高对蛋白质的利用率[41]。因此，仔猪饲粮中添加复合益生菌可以通过影响血清中葡萄糖和尿素氮的含量来提高机体对营养物质的消化吸收。3.3复合益生菌对仔猪肠道形态的影响肠道形态与仔猪肠道健康密切相关，其中绒毛高度和隐窝深度是评估肠道健康和吸收功能的重要指标[42]。正常情况下，绒毛通常较长且均匀分布，较高的肠道绒毛高度通常表示良好的肠道健康和吸收能力，隐窝深度增加会影响机体对营养物质的吸收[43-44]。秦红等[45]研究发现，在饲粮中添加0.1 g/kg乳酸片球菌能够显著增加育肥猪回肠绒毛高度，降低十二指肠和空肠隐窝深度，进而改善肠道形态结构。在本研究中，添加复合益生菌能够显著提高仔猪回肠绒毛高度。赵天智等[46]研究发现，在育肥猪饲粮中添加0.4%复合益生菌和0.3%低聚果糖能够显著增加育肥猪肠道绒毛高度，改善肠道形态，与本研究的结论一致。可能是由于复合益生菌能够降低肠道炎症，促进肠道发育，保证营养成分在肠道中充分吸收。3.4复合益生菌对仔猪养殖经济效益的影响饲粮中添加复合益生菌可提高养殖经济效益。本试验发现，与对照组相比，3个试验组平均每头仔猪的利润分别增加了25.39、41.31、64.31元。尽管复合益生菌价格相对较高，但由于对提高动物生长性能、饲料利用率、改善仔猪健康状况方面具有积极影响，可以带来潜在的经济效益，可作为抗生素替代品在动物生产中应用。4结论本试验结果表明，在饲粮中添加适量的复合益生菌能够提高仔猪的生长性能，改善仔猪部分血清生化指标和肠道形态，提高养殖经济效益，复合益生菌的适宜添加量为0.3%。