虾青素呈鲜红色，将其加入饲料中可以改变鸡蛋蛋黄的色泽，提高蛋鸡的经济价值[1-5]。白建[6]研究日粮添加虾青素对蛋鸡生产性能的影响，发现添加虾青素能显著提高蛋鸡生产性能。VA在满足蛋鸡营养需求的同时，对蛋鸡免疫功能至关重要[7-9]。陈玉程[10]研究表明，饲料中缺乏VA会使蛋鸡产蛋率降低。Yosaee等[11]指出，VA不仅是重要的微量营养元素，还是强大的免疫机能调节剂。试验通过探讨虾青素和VA两者的混合添加对蛋鸡饲喂效果的影响，为蛋鸡养殖户提供参考和实践指导。1材料与方法1.1试验材料虾青素（西安市卓睿生物科技有限公司）、VA（太原市食品添加剂有限公司）、新城疫疫苗（山东华宏生物工程公司）、新城疫抗原（武汉中创科仪科技公司）、红细胞保存液（北京生物工程公司）。1.2试验设计试验在交城县农牧科技有限公司完成。选取45周龄1 500只海兰褐蛋鸡，随机分成5组，每组3个重复，每个重复100只鸡。对照组饲喂基础日粮，基础日粮原料组成及营养水平见表1；阳性对照组在基础日粮中添加0.25%虾青素；试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别喂：基础日粮＋0.25%虾青素＋4 000 IU/kg VA、基础日粮＋0.25%虾青素＋8 000 IU/kg VA、基础日粮＋0.25%虾青素＋12 000 IU/kg VA。本设计中添加虾青素的2.5%的用量是由之前白建[6]研究所得。预试期1周，试验组饲喂基础日粮；正式试验期4周。试验期间时刻关注蛋鸡的健康状况，以防止出现健康问题。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.05.011.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/％营养水平合计100.00玉米60.03代谢能/（MJ/kg）11.28豆粕17.48粗蛋白/％16.80棉粕6.10钙/％3.78菜粕3.90有效磷/％0.48鱼粉1.40赖氨酸/％0.71菌丝蛋白1.20蛋氨酸/％0.23石粉6.63磷酸氢钙1.64食盐0.40预混料1.22注：预混料由山西省太谷县光太饲料有限公司提供。1.3试验设备离心机（L-500，赛德力仪器厂）、一次性血凝板（910040，太原市实验器材厂）、肝素钠管（K2E，江西众杰仪器公司）、移液器（Top Pette，DLAB科技公司）、显微镜（EX-30，上海光学仪器厂）、电子天平（JA5003，上海皓拂仪器公司）、生化培养箱（KLH-250FD，杭州科学实验仪器公司）、蒸汽灭菌器（YXQ-LS-18SI，深圳科学实验仪器公司）、超净工作台（VS-1300L，佩里机械有限公司）、游标卡尺（Mitutoyo，广州市赛拓仪器科技有限公司）、蛋壳强度测定仪［ESTG-1，南农畜牧技术（北京）有限公司］、罗氏比色扇（134，上海瑞达设备有限公司）、蛋白高度测定仪（EMT-5200，河南恒诺设备有限公司）。1.4测定指标及方法1.4.1产蛋性能统计每天的产蛋数量，每个鸡蛋的重量，每天的投料量以及回收料量。根据下列公式计算产蛋率、日均采食量、饲料转化效率和平均蛋重。产蛋率＝每天所产蛋数/鸡数×100%(1)平均日采食量(g)＝(饲喂料数－残留的料数)/鸡数(2)饲料转化效率＝耗料总量/产蛋总量×100%(3)平均蛋重(g)＝蛋重/产蛋数(4)1.4.2蛋品质蛋比重（g/cm3）：用盐水悬浮法[12]测定。蛋形指数：即鸡蛋的纵径长和横径长之比，用游标卡尺测量。蛋壳强度（kg/cm2）：用蛋壳强度测定仪测量。蛋黄颜色：采用罗氏比色扇进行比较。哈夫单位：用蛋白高度测定仪测定蛋白高度，根据蛋重和蛋白高度的数据计算哈夫单位。哈夫单位＝100 lg(H－1.7W0.37＋7.57)(5)式中：H为蛋白高度（mm）；W为蛋重（g）。1.4.3免疫器官指标的测定正式试验期的第14 d和第28 d，每个重复选3只蛋鸡，将每只蛋鸡的胸腺和脾脏称重，根据下面的计算方式计算每只蛋鸡的免疫器官指数。胸腺指数(mg/g)=胸腺重/鸡体重(6)脾脏指数(mg/g)=脾脏重/鸡体重(7)1.4.4新城疫疫苗抗体效价将新城疫疫苗通过饮水注入，并且在疫苗接种后的相应试验期间收集血液样品。在正式试验期第14 d和第28 d，在蛋鸡的静脉处吸取5 mL的血液，进行离心后，在冰箱进行保存，静置直到析出血清。通过血凝抑制法测定产蛋鸡新城疫疫苗的抗体滴度。具体操作如下：1.4.4.1检测新城疫抗原在血凝板的1至10孔依次添加反复稀释过的0.3 L新城疫抗原、0.3 L的生理盐水、0.3 L鸡红细胞。选择血凝板的11孔、12孔作为对照组，在11孔和12孔中添加0.3 L的生理盐水、0.3 L鸡红细胞在振荡器上均匀振荡后放入恒温箱中静置25 min。1.4.4.2血凝抑制试验在血凝板的1至10孔添加反复稀释过的待检血清0.15 L、0.15 L的生理盐水、0.15 L的新城疫抗原悬液、0.3 L鸡红细胞。在11孔和12孔中添加0.3 L的生理盐水、0.3 L鸡红细胞。在振荡器上均匀振荡后放入恒温箱中静置25 min。1.5数据统计与分析使用2019版微软办公软件对原始数据进行处理，再使用SAS 22.0统计软件对数据进行分析，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1虾青素和VA对蛋鸡产蛋性能的影响（见表2）由表2可知，阳性对照组的产蛋率与对照组相比显著提高（P0.05）。试验组的产蛋率、平均蛋重、平均日采食量、料蛋比与对照组和阳性对照组相比，均存在显著差异（P0.05）。表明随着添加比例的增加，在基础饲料中添加虾青素和VA可以提高蛋鸡的产蛋率、平均蛋重以及降低蛋鸡的平均日采食量和料蛋比。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.05.011.T002表2虾青素和VA对蛋鸡产蛋性能的影响项目对照组阳性对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组试验Ⅲ组产蛋率/%68.80±2.60e71.80±2.66d75.72±2.75c82.07±3.19b90.00±2.63a平均蛋重/g59.38±0.82d60.26±0.52d61.97±0.66c63.76±0.78b66.60±0.83a平均日采食量/g126.14±2.39d125.22±1.41d123.31±1.59c120.74±2.40b115.08±2.25a料蛋比2.12±0.03a2.11±0.03a1.99±0.03b1.89±0.04c1.73±0.07d注：同行数据肩标小写字母不同表示差异显著（P0.05），小写字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2虾青素和VA对蛋品质的影响（见表3）由表3可知，阳性对照组的蛋黄颜色、哈夫单位与对照组相比显著增大（P0.05）。试验组的蛋黄颜色、哈夫单位与对照组和阳性对照组相比显著增大（P0.05）。随着虾青素和VA添加量的增加，试验组的蛋比重、蛋形指数和蛋壳强度有增加的趋势。表明饲料中添加虾青素和VA能改善蛋品质。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.05.011.T003表3虾青素和VA对蛋品质的影响项目对照组阳性对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组试验Ⅲ组蛋比重/（g/cm3）1.095±0.0011.095±0.0011.095±0.0011.095±0.0011.096±0.001蛋形指数1.336±0.0101.338±0.0111.339±0.0121.340±0.0141.340±0.012蛋壳强度/（kg/cm2）3.89±0.023.90±0.043.92±0.013.95±0.043.95±0.02蛋黄颜色7.56±0.09e7.94±0.10d8.19±0.12c8.91±0.10b9.29±0.12a哈夫单位77.17±1.22e78.43±1.06d79.65±1.21c80.32±1.24b81.98±1.17a2.3虾青素和VA对蛋鸡免疫器官指数的影响（见表4）由表4可知，阳性对照组的脾脏指数比对照组显著提高（P0.05）。随着喂养时间的增加，试验组的脾脏指数比对照组和阳性对照组显著提高（P0.05）。试验组的胸腺指数比对照组和阳性对照组显著提高（P0.05）。试验组之间相比，试验Ⅲ组的胸腺指数比试验Ⅰ组和试验Ⅱ组显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.05.011.T004表4虾青素和VA对蛋鸡免疫器官指数的影响项目时间对照组阳性对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组试验Ⅲ组脾脏指数14 d0.82±0.001e0.85±0.001d0.87±0.001c0.89±0.013b1.02±0.003a28 d0.83±0.001e0.86±0.006d0.89±0.005c0.93±0.003b1.05±0.003a胸腺指数14 d0.26±0.005c0.26±0.005c0.27±0.006b0.27±0.005b0.29±0.007a28 d0.24±0.005c0.24±0.005c0.26±0.005b0.26±0.004b0.28±0.005amg/g2.4虾青素和VA对蛋鸡抗体效价的影响（见表5）由表5可知，试验组的抗体效价均显著高于对照组和阳性对照组（P0.05），且随着添加比例的增加和喂养时间的延长，蛋鸡的新城疫抗体效价水平会持续升高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.05.011.T005表5虾青素和VA对蛋鸡抗体效价的影响时间对照组阳性对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组试验Ⅲ组14 d8.52±0.06c8.60±0.06c8.77±0.07b8.86±0.07b9.16±0.08a28 d8.54±0.05c8.64±0.05c8.87±0.04b8.95±0.07b9.31±0.05alog23讨论3.1虾青素和VA对蛋鸡产蛋性能的影响试验表明，基础日粮中添加虾青素和VA对蛋鸡产蛋率以及平均蛋重的增加有明显的促进作用；对蛋鸡的日采食量和料蛋比的下降也有明显的促进作用。原因可能是VA通过维持机体内细胞膜的强度，阻止病毒透过细胞膜进入细胞，进而阻止病毒生存繁殖；同时，虾青素能增强蛋鸡的生殖能力、提高机体免疫力，与包志等[12]研究结果一致，其中以0.25%虾青素＋12 000 IU/kg VA为最佳。3.2虾青素和VA对蛋鸡蛋品质的影响试验表明，试验组与对照组的蛋比重无差异。刘文艳等[13]研究表明，蛋比重与鸡蛋的新鲜程度有关，与本试验结果一致，具体机制有待于进一步研究。蛋壳强度与蛋形指数受遗传因素影响较大。吴斯诺等[14]研究表明，虾青素对蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋形指数等因素无显著影响，与本试验结论基本一致。蛋壳强度与蛋鸡的身体条件，饲料配比有关，本试验关于蛋壳强度与蛋形指数影响不显著的原因，有待于进一步研究和探索。在整个试验期，随着VA添加量的增加，哈夫单位显著提高，与耿彦强等[15]的研究结果一致。哈夫单位是检验蛋新鲜度的指标。虾青素具有减少氧自由基，提升鸡蛋抗氧化能力的作用；VA最可以提升抗氧化能力，所以哈夫单位随虾青素和VA添加量的增加而提高。王钧艺等[16]研究表明，虾青素可以加深蛋黄颜色，与本试验结果一致。原因是虾青素与VA产生协同效应，增大虾青素的效果，且VA的添加促进类胡萝卜素的吸收，加深蛋黄颜色。说明虾青素和能改善蛋品质，其中添加0.25%虾青素＋12 000 IU/kg VA效果最好。3.3虾青素和VA对蛋鸡免疫器官的影响脾脏白髓中含有大量的淋巴细胞，脾脏对于机体免疫性能的发挥有重要影响。试验表明，随着饲养时间的延长，蛋鸡的脾脏指数显著提高，与马金松等[17]结果一致。表明虾青素和VA可以促进脾脏的生长，并且试验添加量以0.25%虾青素＋12 000 IU/kg VA为最佳。胸腺上不仅含有许多胸腺细胞和微量的巨噬细胞，而且在胸腺小体中还含有各种淋巴细胞和巨噬细胞，胸腺对于机体免疫性能的发挥有重要影响。但是，禽类的胸腺在性成熟之后会随着饲养时间的延长而退化或者萎缩。试验中，随着饲养时间的延长，日粮中添加虾青素和VA可以减缓蛋鸡胸腺指数的下降，与庞建建等[18]研究结果一致。另外，蛋鸡免疫功能的发挥与其产蛋性能的提高有着密切的联系[19]。表明虾青素和VA可以延缓蛋鸡胸腺的退化，且以0.25%虾青素＋12 000 IU/kg VA为最佳。3.4虾青素和VA对蛋鸡抗体效价的影响本试验中，添加虾青素和VA可以提高新城疫抗体效价水平，且随着添加比例的增加和喂养时间的延长蛋鸡的新城疫抗体效价水平持续升高。虾青素能促进抗原反应中抗体的产生，分泌IgG和IgM的细胞数显著增加，促进TD-Ag刺激时抗体产生。同时VA通过细胞核内类视黄酸受体调节和控制细胞核内信使RNA的激活与表达。类视黄酸通过核受体对靶基因的调控提高细胞免疫功能，促进免疫细胞产生抗体，以及促进T淋巴细胞产生某些淋巴因子。在二者的共同作用下，蛋鸡的新城疫抗体效价水平持续升高。此次结果与张进隆[20]研究的结果类似。表明虾青素和VA可以明显提高新城疫抗体效价水平，且以0.25%虾青素＋12 000 IU/kg VA为最佳。4结论饲料中添加虾青素和VA存在协同效应，能改善蛋鸡产蛋性能，改善蛋品质和增强免疫功能，且以0.25%虾青素＋12 000 IU/kg VA这一添加量为最佳。