植物是饵料行业应用范围广阔的绿色饵料添加剂，其资源丰富，具有良好的药用性和营养性[1-2]。艾叶（Artemisia argyi）在医疗行业中应用广泛。随着科学技术的发展，其有效生物活性成分、药用功能被陆续发现和应用[3-5]。艾叶具有抗菌、抗病毒、免疫调节、护肝利胆及补体激活等药物活性作用[4-8]。努尔比耶·奥布力喀斯木等[9]研究发现，艾叶挥发油能够对黑曲霉、粉红聚端孢对5种真菌等产生抑制作用。任海等[10]研究发现，艾叶能够对鲤鱼源嗜水气单胞菌产生抑制作用。李小妞等[11]研究表明，艾叶对大肠杆菌具有抑制作用。梁志凌等[12]研究表明，艾叶对罗非鱼无乳链球菌有抑制作用。王华等[13]研究表明，艾叶可以增强家兔对大肠杆菌的免疫力。试验以鲤鱼为试验动物研究饵料中添加艾叶对鲤鱼生长性能、抗氧化功能和机体非特异性免疫力的影响，以期为研究绿色安全的替代饲用抗生素的艾叶饵料添加剂产品提供参考。1材料与方法1.1试验动物与饲养管理规格一致、健康良好、体重（5.36±0.05）g的鲤鱼苗300尾由太原渔场提供。试验分为4组。对照组饲喂基础饲饵料，试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在基础饵料中分别添加艾叶粉1%、2%、3%。每组3个重复，每个重复25尾鱼。试验期间，平均水温保持26 ℃，pH值约7.2，溶解氧浓度大于6 mg/L，日投喂率为体重的4%~5%，每日投喂2次，每天早上清除箱内粪便，并换水约25%，试验期60 d。基础饵料组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.05.014.T001表1基础饵料组成及营养水平（风干基础）原料组成含量营养水平合计100.0花生粕16.0粗蛋白31.60豆粕16.8钙1.40菜籽粕13.4磷1.10鱼粉8.3粗脂肪7.68干酒糟及其可溶物3.1粗灰分9.34次粉16.9麸皮13.5面粉9.2预混料2.8注：预混料购自北京鑫洋水产高新技术有限公司。%1.2试剂与仪器艾叶粉（芝庆堂生物科技有限公司）、抗氧化和非特异性免疫功能测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）、紫外可见分光光度计（上海尤尼柯）、冷冻离心机（德国艾本德）、水质分析仪（意大利哈纳）、电子分析天平（上海恒平科学仪器有限公司）、酶标仪（北京天普仪器技术有限公司）、显微镜成像系统（美国赛默飞）。1.3样品采集与指标测定1.3.1生长性能的测定试验前及试验第60 d时，每个重复随机选取5尾鱼测量体重并计算体重、平均日增重等指标。计算公式如下：体重(W)=(W1+W2+……+Wn)/n(1)特定生长率(SGR)=[(lnW2-lnW1)/(T2-T1)]×100(2)饵料系数(FCR)=干物质摄入量鱼体增重(3)成活率=(开始尾数-死亡尾数)/开始尾数×100%(4)平均日增重=(试验末重-试验始重)/试验天数(5)肥满度=(W/L³)×100(6)式中：W为体重（g）；L为体长（cm）。1.3.2NBT阳性细胞数的测定饲养试验结束后，各重复组随机取鱼5尾，在尾静脉采血后放于抗凝管中备用。按照曹婷婷等[14]、陈剑杰等[15]在显微镜下观察NBT硝基四氮唑蓝（nitrotetrazolium blue chloride，NBT）阳性细胞并进行计数。1.3.3血清中抗氧化功能和非特异性免疫力的测定饲养试验结束后各重复组随机取鱼5尾，在尾静脉采血于抗凝试管中备用。血液通过3 000 r/min离心10 min析出血清，测定血清中抗氧化功能和非特异性免疫力，方法按照南京建成试剂盒说明进行。1.3.4白细胞吞噬功能的测定试验结束后用MS-222对鱼体进行麻醉，然后在尾静脉进行无菌采血置于已经准备好的抗凝管中备用。用移液器抽取血液250 μL，加入已经制备好的金黄色葡萄球菌悬液（6×108 CFU/mL）100 μL，室温静置60 min后做涂片。晾干后，置于甲醇中处理3 min，随后经蒸馏水漂洗碱性美兰染色，蒸馏水轻轻洗净室温晾干，置于显微镜下观察并计数。吞噬百分比(PP)=100个白细胞中参与吞噬的细胞数/100×100％(7)吞噬指数(PI)=被吞噬的细菌数/吞噬细菌的细胞数(8)1.4数据统计与分析采用SPSS 20.0统计分析软件进行单因素方差分析，采用Duncan氏法进行多重比较，数据结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1艾叶粉对鲤鱼生长性能的影响（见表2）由表2可知，各组鲤鱼日增重、饵料系数和特定生长率随艾叶粉水平的增加呈递增趋势，且添加水平为2%时显著高于对照组和试验组Ⅰ（P0.05）。肥满度随着艾叶粉添加水平的增加有升高趋势，但各组无显著性差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.05.014.T002表2艾叶粉对鲤鱼生长性能的影响（n=15）项目对照组试验组Ⅰ试验组Ⅱ试验组Ⅲ成活率/%97.02±2.5697.56±2.7397.98±2.6198.02±2.38初重/g5.36±0.035.37±0.025.4±0.015.33±0.02末重/g30.21±0.4930.56±0.8331.62±0.6531.09±1.02平均日增重/g0.414±0.009b0.419±0.011b0.437±0.015a0.429±0.012ab特定生长率/（%/d）3.08±0.06b3.09+0.06b3.12±0.04a3.10±0.05ab饵料系数1.49±0.18b1.51±0.23b1.53±0.35a1.52±0.16ab肥满度/(g/cm3)3.41±0.033.44±0.043.56±0.033.51±0.03注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2艾叶粉对鲤鱼NBT阳性细胞数的影响（见图1）由图1可知，与对照组相比，艾叶粉试验组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组）鲤鱼NBT阳性细胞数呈上升趋势，分别较对照组上升3.44%、17.24%、20.68%，且试验组Ⅱ、Ⅲ显著上升（P0.05）。相关性分析表明，试验60 d后，艾叶粉添加水平与鲤鱼NBT阳性细胞数呈正相关（皮尔逊相关系数为0.803，P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.05.014.F001图1艾叶粉对鲤鱼NBT阳性细胞的影响（n=15）注：各组别不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母表示差异不显著（P0.05）。2.3艾叶粉对鲤鱼白细胞吞噬功能的影响（见表3）由表3可知，与对照组比较基础饵料中添加不同水平的艾叶粉，鲤鱼吞噬百分比和吞噬指数均呈上升趋势。其中试验组Ⅲ的吞噬百分比和吞噬指数均显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.05.014.T003表3艾叶粉对鲤鱼白细胞吞噬功能的影响（n=15）项目对照组试验组Ⅰ试验组Ⅱ试验组Ⅲ吞噬百分比/%28.32±2.13b30.25±2.26b34.54±2.71ab37.08±2.08a吞噬指数1.29±0.36b1.36±0.54b1.48±0.68ab1.51±0.23a2.4艾叶粉对鲤鱼非特异性免疫相关酶活性的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，基础饵料中添加不同水平的艾叶粉，鲤鱼血清中溶菌酶活性和碱性磷酸酶活性呈上升趋势。其中，试验组Ⅱ和试验组Ⅲ鲤鱼血清中溶菌酶活性均显著高于对照组和试验组Ⅰ（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.05.014.T004表4艾叶粉对鲤鱼非特异性免疫相关酶活性的影响（n=15）项目对照组试验组Ⅰ试验组Ⅱ试验组Ⅲ溶菌酶/（mg/L）1.82±0.38c2.26±0.56c3.26±0.45ab3.54±0.69a碱性磷酸酶/（U/mL）7.51±1.05c8.32±0.96bc9.01±1.18ab9.84±1.09a酸性磷酸酶/（U/mL）13.58±03815.03±0.6115.86±0.4216.35±0.482.5艾叶粉对鲤鱼血清抗氧化指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，基础饵料中添加不同水平的艾叶粉，鲤鱼血清中谷胱甘肽过氧化物酶活性和超氧化物歧化酶活性呈上升趋势，其中试验组Ⅱ谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于对照组（P0.05），试验组Ⅲ超氧化物歧化酶活性显著高于对照组（P0.05）。各试验组鲤鱼血清中丙二醛含量呈下降趋势，其中试验组Ⅲ丙二醛含量显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.05.014.T005表5艾叶粉对鲤鱼血清抗氧化指标的影响（n=15）项目对照组试验组Ⅰ试验组Ⅱ试验组Ⅲ丙二醛/（μmol/L）2.38±0.15a2.31±0.18a2.16±0.12ab1.97±0.13b谷胱甘肽过氧化物酶/（U/mL）98.23±10.52b110.46±12.87ab125.38±15.08a116.29±10.71ab超氧化物歧化酶/（U/mL）135.03±16.51b150.21±20.66ab163.28±19.51ab172.63±21.26a3讨论艾叶中含有多种营养成分，可以改善动物的生产性能。周孝琼等[16]给予肉兔3.0 mL/d艾叶水煮醇提液，发现肉兔日增重比对照组提高13.96%。牛壮[17]研究发现，艾叶提高肉仔鸡的生长性能。本试验研究发现，饵料里添加不同水平艾叶粉的鲤鱼饵料系数、特定生长率、平均日增重均有所提高，表明艾叶粉可在一定程度上改善水产动物的生长性能。马政发等[18]添加5%艾叶粉到黔北麻羊饵料，发现对黔北麻羊饵料平均日增重作用不明显。这可能是不同的动物种类、规格、饵料组分、养殖环境条件等方面存在差异导致，有待于深入研究。鱼类血液NBT阳性细胞数量的多少能够呈现出机体非特异性免疫的状态[19-21]。吞噬细胞能够在吞噬和消化外来异物的同时激发机体的动物非特异性免疫，其吞噬功能的强弱能够体现出机体非特异性免疫状态[22]。溶菌酶机体是重要的非特异性免疫因子之一，是鱼类非特性免疫系统的重要组成部分[23]，碱性磷酸酶和酸性磷酸酶是动物溶酶体的重要组分，在免疫反应中具有举足轻重的地方[24]。本研究发现，与对照组相比，添加艾叶粉试验组血液NBT阳性细胞数、白细胞吞噬百分比和吞噬指数以及血清溶菌酶活性均表现出上升趋势，且呈现一定的剂量效应关系，表明饵料中添加艾叶粉可使鲤鱼的非特异性免疫能力增强。王雅莉[25]研究发现，艾叶水提物可以提高小鼠血清中IgG、IgM和L-1β的水平增强其免疫功能。罗旋等[26]研究表明，艾叶可以提高免疫细胞的活性，增加小鼠血清中的抗体数量，从而提高机体的免疫力，与本研究结果基本一致。超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶是机体内抗氧化的重要酶类，两者酶活性的增高的是动物机体抗氧化性能增强的体现；而丙二醛是脂质过氧化反应的产物，不利于动物健康[27-28]。胡岗等[29]研究发现，艾叶多糖对各种自由基均有明显的清除作用。许丹妮等[30]研究发现，艾叶麦酱产品对多种自由基有较强的清除能力。本研究发现，与对照组相比，添加艾叶粉试验组血液谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性呈上升趋势，且添加2%艾叶粉时鲤鱼血液谷胱甘肽过氧化物酶活性较对照组显著上升，添加3%艾叶粉时鲤鱼血液超氧化物歧化酶活性显著高于对照组；丙二醛含量呈下降趋势，且添加3%艾叶粉鲤鱼血液丙二醛含量显著下降。表明饵料中添加艾叶粉能在一定程度上提高鲤鱼的抗氧化能力，但其机理还需要进一步研究。4结论试验表明，鲤鱼饵料中添加艾叶粉能够在鲤鱼的生长性能、抗氧化能力和免疫功能方面起到积极的作用。本研究可以为艾叶在饲用抗生素替代方面的研究提供参考。