新生鸡雏消化系统与免疫系统功能尚未完善，对外界环境的抵御能力薄弱，易发生疾病，从而影响机体各系统与器官的早期发育[1]。中草药具有来源天然、毒副作用小、低残留等特点，作为饲料添加剂使用可提供动物所需营养物质，并对疾病防治起到积极作用。桑叶不仅含有丰富的粗蛋白、粗脂肪、维生素和微量元素等营养物质，还含有黄酮、生物碱、多糖等多种天然活性成分，具有抗炎、调节机体免疫能力以及抗氧化等多种药理作用[2]。女贞子的主要活性成分为齐墩果酸、红景天苷和熊果酸等单体化合物，具有免疫调节、保肝护肝、降血脂等多种药理作用[3]。麦冬的主要活性成分包括甾体皂苷、高异黄酮、多糖、挥发油等，在抗氧化、抑制炎症以及保护肝脏方面发挥作用[4-5]。蒲公英的主要活性成分有多糖类、多酚类、黄酮以及三萜类等，具有抗炎抑菌、保肝利胆、免疫调节等作用[6]。马齿苋的生物活性物质主要包括有机酚酸类、黄酮类、生物碱类、萜类等，具有抗炎抑菌、抗氧化、降血糖血脂等药理活性作用[7]。本课题组依据中兽医学理论进行组方，以桑叶，女贞子为主要成分，辅以麦冬、蒲公英和马齿苋等中草药组成中草药复方添加剂，在前期优化筛选试验中得出最佳添加剂量为0.2%[8]。本研究进一步开展该中草药复方添加剂对海兰褐蛋雏鸡生长性能、血清生化指标及脾脏IL-2 mRNA表达量的影响，为中草药添加剂在家禽生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料1日龄海兰褐蛋雏鸡960只，由公主岭吉农养殖专业合作社提供。中草药复方添加剂由吉林续生堂科技发展有限公司提供，其成分包括桑叶、女贞子、麦冬、蒲公英以及马齿苋5味中药，按照8∶7∶2∶2∶1的比例配伍而成，混合后经超微粉碎制成粉剂。基础日粮1~21 d为颗粒料，22~42 d为粉料，日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.006.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）项目1~21 d22~42 d原料组成/%玉米60.8861.66豆粕20.2921.88DDGS10.159.94玉米蛋白粉3.040鱼粉2.032.98石粉1.831.79磷酸氢钙1.221.19食盐0.300.30DL-蛋氨酸0.070.07赖氨酸0.060.06微量元素0.100.10复合多维0.030.03合计100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)11.5411.36粗蛋白质/%20.2819.80钙/%1.221.26有效磷/%0.500.48总磷/%0.740.76赖氨酸/%0.880.93蛋氨酸/%0.430.41注：1.微量元素为每千克日粮提供：Fe 81 mg、Cu 11.2 mg、Zn 123.3 mg、Mn 121.6 mg、I 0.75 mg、Se 0.35 mg。2.复合多维为每千克日粮提供：VA 12 000 IU、VD3 2 800 IU、VE 45.3 mg、VK3 2.9 mg、VB1 1.95 mg、VB2 4.8 mg、VB6 3 mg、VB12 0.03 mg、烟酸16.2 mg、叶酸、1.22 mg。3.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。1.2试验设计与饲养管理将960只1日龄健康海兰褐蛋雏鸡随机分成2组，每组5个重复，每个重复96只。对照组蛋雏鸡饲喂基础日粮，试验组蛋雏鸡在基础日粮中添加0.2%中草药复方添加剂[8]。试验鸡均在同一鸡舍内，双层叠层笼养，自然通风，乳头式饮水器饮水，人工喂料，常规免疫。试验期42 d。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能与体尺性状试验开始及结束对试验鸡空腹（禁食12 h）称重。试验结束，统计各重复总采食量及死亡数，计算平均日增重、平均日采食量、料重比和死淘率。试验结束时，每个重复选取平均体重相近的试验鸡30只进行体尺测定，参照标准《家禽生产性能名词术语和度量计算方法》（NY/T 823—2020）[9]对龙骨长、胸深、胸宽、胫长、胫围以及髋骨宽进行测定。平均日增重=(末重-初重)/饲养天数(1)平均日采食量=采食量/饲养天数(2)料重比=试验期内所耗标准饲料量/同期增重(3)死淘率＝(试验期内死淘雏鸡数/入舍雏鸡数)×100%(4)1.3.2血清生化指标试验结束，每个重复随机抽取10只蛋雏鸡，空腹禁食12 h，心脏采血，4 ℃、3 000 r/min离心10 min，血清-20 ℃保存。血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、尿素氮（BUN）、总胆固醇（TC）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）以及干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素2（IL-2)等指标均采用深圳子科生物科技有限公司仪器和试剂盒进行检测。1.3.3免疫器官指数试验结束，试验雏鸡活体称重后处死，采集脾脏、胸腺以及法氏囊等免疫器官称重，计算免疫器官指数。免疫器官指数=免疫器官鲜重/活体重(5)1.3.4脾脏IL-2 mRNA的表达量取试验鸡脾脏组织样本-80 ℃保存。采用SYBR Green实时荧光定量方法测定试验鸡脾脏IL-2 mRNA的表达量，以2-ΔΔCt法计算相对表达量。1.4数据统计与分析使用SPSS 23.0软件对试验数据进行统计分析，采用t检验进行显著性分析。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1中草药复方添加剂对蛋雏鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，试验组蛋雏鸡末重和平均日增重极显著提高（P0.01），料重比与死淘率极显著下降（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.006.T002表2中草药复方添加剂对蛋雏鸡生长性能的影响组别初重/(g/只)末重/(g/只)平均日增重/[g/(只·d)]平均日采食量/[g/(只·d)]料重比死淘率/%对照组40.59±1.44451.84±32.029.79±0.2423.54±0.462.41±0.093.75±0.57试验组40.58±1.45483.97±35.49**10.64±0.61**22.94±0.362.16±0.11**1.67±1.19**注：与对照组相比，数据肩标标注“*”表示差异显著（P0.05），“**”表示差异极显著（P0.01）；下表同。2.2中草药复方添加剂对蛋雏鸡体尺性状的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，试验组蛋雏鸡龙骨长和胫长极显著提高（P0.01），胸宽与髋骨宽显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.006.T003表3中草药复方添加剂对蛋雏鸡体尺性状的影响组别龙骨长胸深胸宽胫长胫围髋骨宽对照组63.79±3.7655.97±4.7548.48±4.0267.23±3.0630.91±0.1748.00± 8.87试验组69.26±5.89**55.93±7.5951.67±7.68*70.35±2.65**31.11±0.1351.62±4.22*mm2.3中草药复方添加剂对蛋雏鸡血清生化指标的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，试验组蛋雏鸡血清BUN和TC含量极显著下降（P0.01），AST活性显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.006.T004表4中草药复方添加剂对蛋雏鸡血清生化指标的影响组别TP/(g/L)ALB/(mmol/L)GLB/(mmol/L)BUN/(mmol/L)TC/(mmol/L)ALT/(U/L)AST/(U/L)ALP/(g/L)对照组52.72±7.0726.70±5.0426.02±4.006.09±0.585.21±0.4125.68±4.9625.24±4.04116.28±27.40试验组58.58±6.8931.61±4.9126.97±4.003.80±0.44**3.74±0.35**24.24±4.9517.28±8.24*103.74±35.932.4中草药复方添加剂对蛋雏鸡血清免疫因子指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，试验组蛋雏鸡血清免疫因子IFN-γ与IL-2含量均极显著上升（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.006.T005表5中草药复方添加剂对蛋雏鸡血清免疫因子指标的影响组别IFN-γIL-2对照组60.34±7.5167.17±2.66试验组75.50±3.10**98.03±4.52**ng/L2.5中草药复方添加剂对蛋雏鸡免疫器官指数的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，试验组蛋雏鸡胸腺指数和法氏囊指数极显著升高（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.006.T006表6中草药复方添加剂对蛋雏鸡免疫器官指数的影响组别胸腺指数法氏囊指数脾脏指数对照组3.17±1.481.16±0.342.93±0.72试验组4.57±1.26**1.47±0.37**3.20±1.09g/kg2.6中草药复方添加剂对蛋雏鸡脾脏IL-2 mRNA表达量的影响（见表7）由表7可知，与对照组相比，试验组蛋雏鸡脾脏IL-2 mRNA表达量极显著升高（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.006.T007表7中草药复方添加剂对蛋雏鸡脾脏IL-2 mRNA相对表达量的影响组别IL-2 mRNA相对表达量对照组1.00±0.22试验组1.70±0.36**3讨论3.1中草药复方添加剂对蛋雏鸡生长发育的影响中草药中含有畜禽生长所必需的营养物质，如蛋白质、糖类及维生素等，作为饲料成分添加在畜禽日粮中具有促进生长的效果[10]。周广驰等[11]研究表明，在日粮中添加0.20%的复方中草药能够显著改善肉鸡的生长性能。于佳楠等[12]研究发现，复方中草药可提高芦花鸡平均日增重，改善饲料利用率。本试验结果显示，与对照组相比，试验组蛋雏鸡末重和平均日增重极显著提高，料重比极显著下降，蛋雏鸡生长性能得到了改善，可能与添加的中草药复方成分有关。研究表明，桑叶能够提升机体对干物质的消化率，提升对粗蛋白和淀粉等营养物质的消化吸收，从而促进生长性能[13]。马齿苋含有黄酮类化合物（山柰酚和槲皮素）和生物碱等多种次生代谢产物，能够通过清除氧化自由基，提高抗氧化能力，促进小肠对营养物质的吸收，提高饲料转化率，降低料重比[14]。育雏期是蛋鸡机体、骨骼发育的关键时期，此阶段骨骼中大量的矿物质沉积。骨骼发育水平决定了开产前蛋鸡体重的增长上限以及开产后的机体钙磷代谢水平，而体尺性状是展现其骨骼发育最直观的表观性状，且以胫长为主要指标[15]。本试验结果表明，试验组蛋雏鸡胫长极显著高于对照组，究其原因可能是中草药复方添加剂中女贞子发挥了作用。女贞子所含有的活性成分齐墩果酸、熊果酸、红景天苷等可促进小肠上皮细胞对钙质吸收，影响骨骼发育[16]。3.2中草药复方添加剂对蛋雏鸡血清生化指标的影响动物机体内环境稳定能够调节机体的生理代谢平衡，从而促进畜禽健康生长发育。血清生化指标是反映机体内环境的重要指标，与机体代谢密切相关[17]。血清中TP和BUN可反映蛋白质机体蛋白质的代谢情况，BUN是蛋白质及氨基酸主要代谢产物，其含量与机体蛋白质利用效率呈负相关[18]。TC是反映机体血脂情况重要的指标，其值越低，表明动物对脂肪的利用率越高[19]。刘胜男等[20]研究表明，在日粮中添加复方中草药添加剂能够显著降低肉鸡血清中BUN和TC含量。本试验结果表明，与对照组相比，试验组蛋雏鸡血清BUN与TC含量极显著降低，蛋雏鸡的机体代谢得到改善。桑叶中含有的植物甾醇（豆甾醇、谷甾醇）能够竞争性抑制乳糜微粒中的胆固醇，抑制肠道对胆固醇的吸收，从而降低了血清TC含量[21]。女贞子中的齐墩果酸可激活G蛋白偶联胆汁酸受体（TGR5），促进miRNA-26a基因的表达，提高机体对胰岛素的敏感性，从而降低机体血糖与脂肪的沉积[22]。肝脏不仅在机体代谢中发挥着至关重要的作用，同时也承担一定的解毒功能[23]。当肝脏受到损伤时，ALT和AST释放到血液中，从而使血清中转氨酶活性升高[24]。据报道，桑叶中的黄酮类物质、γ－氨基丁酸以及蒲公英中的多糖类物质等均具有保肝利胆、改善肝功能的作用[21,25]。本试验结果显示，与对照组相比，试验组雏鸡血清AST活性显著降低，提示该中草药复方添加剂对预防养殖过程中由于外部原因而导致的鸡肝损伤具有重要意义，对肝脏起到了保护作用。3.3中草药复方添加剂对蛋雏鸡免疫功能的影响脾脏、胸腺和法氏囊是家禽的重要免疫器官，其发育情况对机体抵抗病原体入侵及对抗原的免疫应答水平有直接影响[26]。脾脏是家禽最大的外周免疫器官，是机体在抗原刺激下发生免疫应答的场所；法氏囊是家禽特有的体液免疫器官，被破坏将直接导致B细胞缺陷，抑制体液免疫；胸腺是T淋巴细胞发育、成熟的部位，会随着家禽日龄增长而逐步退化[27-28]。免疫因子是由免疫细胞和某些非免疫细胞合成与分泌的一类高活性多功能蛋白质多肽分子，IL-2与IFN-γ均为主要由CD4+和CD8+ T细胞分泌合成的具有免疫调节作用的多效性免疫因子[29]。这些免疫因子可参与机体的免疫调控，起到增强免疫的作用。高文婧等[30]报道，0.3%的复合中草药添加剂能够促进芦花雏鸡免疫器官发育，提高脾脏的IL-2 mRNA基因表达量。彭凤强等[31]试验显示，复方中草药可增加和田黑鸡血清免疫球蛋白含量，提高免疫器官指数，改善免疫性能。李姣清等[32]试验表明，复方中草药具有促进黄羽肉鸡育雏期免疫器官发育以及提高免疫细胞因子IL-2和IFN-γ mRNA表达量的作用。本试验结果显示，在饲料中加入该中草药复方添加剂极显著地提升了蛋雏鸡胸腺指数和法氏囊指数，促进免疫器官发育，提高血清免疫因子IL-2与IFN-γ含量，提高了脾脏IL-2 mRNA的相对表达量。本研究结果与前人试验结果一致，这可能是该中草药复方添加剂使用的中草药成分中含有的生物活性物质发挥了作用。女贞子中的红景天苷可通过调节Th1和Th2相关细胞因子的表达，提高Th1淋巴细胞内抗炎因子如IL-2和IFN-γ的含量，从而调节机体的免疫功能[33]。中药多糖又被称为免疫活性多糖，多项研究表明，蒲公英多糖[25]、麦冬多糖[34]以及马齿苋多糖[35]等均可促进雏鸡的免疫器官发育，促进相关免疫因子的基因表达，提高血液中免疫因子的含量，从而达到增强雏鸡机体免疫力的作用。4结论本研究结果表明，在海兰褐蛋雏鸡日粮中添加0.2%的中草药复方添加剂可提高蛋雏鸡的生长性能，改善血清生化指标，促进免疫器官发育及脾脏IL-2 mRNA的表达。