我国秸秆资源丰富，但综合利用不充分。木质素降解菌或酶处理秸秆后转化为生物饲料，既能够提高秸秆利用率，还能够缓解牧区牛羊粗饲料短缺的问题[1]。秸秆中的木质素含量高，难以被动物消化，且影响饲料适口性，经过微生物降解后木质纤维素变为小分子多糖，不仅易于吸收还可提升口感，是目前秸秆饲料化处理的研究热点。臧强[2]发现，将白腐真菌和麦秆混合固体发酵25 d，能够明显降低木质素含量，显著提高蛋白质、氨基酸和微量元素含量。张学雯等[3]发现，复合菌与玉米芯混合发酵能够明显降低木质纤维素含量，提高蛋白质和还原糖含量；将发酵后的玉米芯添加至肉兔日粮中，与对照组相比，肉兔的平均日增重提高了17.91%，料重比降低了10.05%。木质素酶是木质素降解的关键作用酶，但是野生菌种产酶能力弱、稳定性低，不适合工业化生产的要求。为了提高微生物的产量，目前常采用随机诱变等传统的育种技术[4]，但随机诱变存在盲目性等问题，多次突变后甚至造成回复突变[5]。基因组重排结合了诱变育种与原生质体融合育种，具有定向性，能够明显缩短育种周期，聚集正向突变基因[6]，该技术在菌株的选育方面也得到了广泛应用[7-9]。本研究以黄孢原毛平革菌（Phanerochaete chrysosporium）为原始菌株[10-11]，采用常温常压等离子体（ARTP）和硫酸二乙酯（DES）复合诱变，结合基因组重排育种技术，得到能够高效降解木质纤维素的强化菌株，为高效降解木质素提供参考。1材料与方法1.1试验材料1.1.1供试菌株黄孢原毛平革菌（Phanerochaete chrysosporium，编号5.0776）购自中国科学院微生物研究所。1.1.2培养基PDA：20%马铃薯浸取液、葡萄糖20.0 g/L、琼脂20.0 g/L，自然pH值。菌体生长培养基：20%马铃薯浸取液、葡萄糖15.0 g/L、K2HPO4 3.0 g/L、MgSO4·7H2O 1.5 g/L、琼脂20.0 g/L，pH值6.0。苯胺蓝培养基：菌体生长培养基中加入0.1 g/L苯胺蓝。愈创木酚培养基：菌体生长培养基中加入0.04%愈创木酚。液体产木质素酶培养基：葡萄糖 10.0 g/L、蛋白胨1.2 g/L、KH2PO4 2.0 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、CaCl2·2H2O 0.1 g/L、0.2 mol/L pH值4.5醋酸钠-醋酸缓冲液50 mL、VB1 0.1 g、微量元素溶液70 mL，自然pH值。微量元素溶液：MgSO4·7H2O 3.0 g/L、甘氨酸0.6 g/L、NaCl 1.0 g/L、FeSO4·7H2O 0.1 g/L、CoSO4·7H2O 0.1 g/L、CaCl2·2H2O 0.1 g/L、ZnSO4·7H2O 0.1 g/L、CuSO4·5H2O 0.01 g/L、KAl(SO4)2·12H2O 0.01 g/L、H3BO3 0.01 g/L、Na2MnO4·2H2O 0.01 g/L、MnSO4·H2O 0.01 g/L。液体菌丝培养基：20%马铃薯浸取液、葡萄糖20.0 g/L、K2HPO4 3.0 g/L、MgSO4·7H2O 1.5 g/L、酵母粉15.0 g/L，pH值6.0。原生质体再生培养基：20%马铃薯浸取液、葡萄糖20.0 g/L、K2HPO4 3.0 g/L、MgSO4·7H2O 1.5 g/L、琼脂20.0 g/L、蔗糖205.0 g/L，pH值6.0。以上培养基均121 ℃灭菌20 min。1.1.3药品与试剂溶壁酶溶液：配制10 g/L溶壁酶溶液，0.22 μm滤膜过滤除菌，4 ℃保存。高渗缓冲液：0.6 mol/L MgSO4，pH值6.5柠檬酸缓冲液，0.22 μm滤膜过滤除菌，4 ℃保存。原生质体融合体系：0.6 mol/L MgSO4、pH值6.5柠檬酸缓冲液、35% PEG6000、10 mmol/L CaCl2，0.22 µm滤膜过滤除菌，现用现配。1.2试验方法1.2.1菌种活化与孢子悬浮液制备取一部分黄孢原毛平革菌孢子干粉溶解于1 mL的无菌水中，适当稀释后涂布于PDA平板培养基中，30 ℃培养7 d。将培养7 d后的菌种活化平板，分别取边长2 mm的小方块接种于菌体生长培养基，30 ℃分别培养约15、7 d，采用15%的甘油冲洗下菌丝及孢子，漩涡振荡器上振荡10 min，3层擦镜纸过滤，收集滤液调整孢子浓度为108 CFU/mL，-80 ℃冰箱保存。1.2.2诱变方法1.2.2.1ARTP诱变方法ARTP诱变仪设置输出功率110 W，照射距离为2 mm，工作气流10 L/min，在超净工作台中取原始菌株孢子悬液10 μL，均匀涂布于无菌诱变载片上，放入无菌平板中，转移至ARTP诱变工作室中，设置照射时间为0、30、50、70、90、110、130、150、180 s，将照射后的载片放入装有1 mL无菌水的1.5 mL离心管中，振荡10 min，适当稀释涂布于菌丝生长培养基，每个时间条件设置3个平行，30 ℃培养2~3 d，记录平板中的菌落数以计算致死率。1.2.2.2DES诱变方法取灭菌的50 mL离心管，加入原始菌株孢子悬液100 μL，再加入9.9 mL磷酸盐缓冲液（0.1 mol/L pH值7.0），分别加入0、20、40、60、80、100、120 μL DES原液，30 ℃避光恒温振荡20 min，加入500 μL 10% Na2S2O3继续振荡培养30 min，以终止反应。适当稀释后涂布于菌丝生长培养基，每个浓度设置3个水平，30 ℃培养2~3 d，记录平板中的菌落数以计算致死率。1.2.2.3ARTP-DES复合诱变根据ARTP与DES诱变致死率的情况，确定黄孢原毛平革菌复合诱变条件为ARTP照射时间为60 s，DES浓度为0.6%。按照ARTP诱变方法操作，设置相对应的照射时间，照射结束后，将诱变载片放入10 mL离心管中，加入2 mL生理盐水，30 ℃恒温摇床孵化30 min，按照DES诱变方法配成10 mL反应体系，诱变结束后涂布于菌丝生长培养基中，30 ℃培养2~3 d，挑取生长旺盛的菌落转接于菌丝生长培养基纯化培养，用于后续筛选。1.2.3筛选方法1.2.3.1初筛将复合诱变挑选的菌落，取边长2 mm的小方块转接至苯胺蓝培养基，30 ℃培养5 d，测量出现透明圈的直径（H），透明圈直径大说明过氧化物酶活性较高。将透明圈直径大的菌株，继续取边长2 mm的小方块转接至愈创木酚培养基，30 ℃培养7 d，测量红色显色直径（h），红色直径大的说明漆酶活性较高[12-13]。1.2.3.2复筛将苯胺蓝培养基透明圈直径与愈创木酚培养基红色显色直径都大于原始菌株的突变菌株，做产孢培养，制备孢子悬液，调整孢子悬液浓度为108 CFU/mL，以1%接种量加入液体产木质素酶培养基中，30 ℃、200 r/min培养5 d，自接入起每24 h取样检测酶活性。取3 mL发酵液于离心管中，8 000 r/min离心10 min，上清液即为粗酶液。酶活测定参考邓诗贵等[14]方法测定酶活。木质素过氧化物酶活：取200 μL藜芦醇（10 mmol/L）与400 μL酒石酸缓冲液（250 mmol/L、pH值2.5）混合，加入400 μL粗酶液混匀，加入100 μL 7% H2O2启动反应，以未加H2O2为对照，30 ℃水浴3 min，在310 nm下测定吸光值。锰过氧化物酶活：准确称取0.211 3 g MnSO4用酒石酸缓冲液（50 mmol/L pH值4.5）定容至1 L，取800 μL该溶液，加入200 μL粗酶液混匀，加入100 μL 7% H2O2启动反应，以未加H2O2为对照，30 ℃水浴3 min，在290 nm下测定吸光值。漆酶酶活测定：取500 μL醋酸-醋酸钠缓冲液（0.1 mol/L、pH值4.5）与300 μL ABTS溶液（0.5 mmol/L）混合，冰上与200 μL粗酶液混合，30 ℃水浴3 min，检测OD420 nm值。酶活力定义为每分钟氧化1 μmol底物所需的酶量为1个酶活力单位（U）。酶活力=ΔOD×106×nΔt×ξ×V (1)式中：ΔOD为吸光度变化值；Δt为反应时间（min）；106为将mol换算成μmol的系数；n为稀释倍数；V为粗酶液体积（mL）；ξ为摩尔吸光系数；ABTS氧化产物的摩尔吸光系数为3.6×104 L/（mol·cm）；Mn3+的摩尔吸光系数为8.1×103 L/（mol·cm）；藜芦醇的摩尔吸光系数 9.3×103 L/（mol·cm）。1.2.4原生质体的制备将黄孢原毛平革菌孢子悬液按1%的接种量接种到液体菌丝生长培养基，30 ℃、200 r/min培养20 h，擦镜纸过滤，收集菌丝，使用0.6 mol/Ｌ MgSO4 pH值6.5柠檬酸缓冲液离心洗涤两次，收集菌丝，加入溶壁酶溶液，使其浓度为5、10、15、20 g/L，30 ℃、200 r/min，酶解60 min，其间定时取样镜检观察原生质体产生情况[15]。在原生质体大量产生时，3 000 r/min离心除去上清酶液，0.7 mol/Ｌ NaCl pH值6.5柠檬酸缓冲液重悬后，用擦镜纸过滤除去未酶解的菌丝，3 000 r/min离心收集原生质体，用0.7 mol/Ｌ NaCl pH值6.5柠檬酸缓冲液离心洗涤两次，再用该溶液重悬，4 ℃保存。1.2.5原生质体的鉴定将制备好的原生质体，直接放在显微镜下观察，沿盖玻片边缘滴加两滴纯水后，观察原生质体吸水涨破过程[16]。1.2.6原生质体的再生将原生质体分别用高渗缓冲液于无菌水适当稀释后涂布于再生平板，30 ℃培养2 d，分别记录菌落数为A、B；计算原生质体再生率。原生质体再生率=n(A-B)C×100% (2)式中：C为显微镜下观察到的原生质体数；n为稀释倍数。1.2.7原生质体灭活研究1.2.7.1紫外灭活将制备好的原生质体悬液，取5 mL加入无菌7 mm平板中，在距离15 cm的14 W紫外灯下照射并计时。在照射0、10、20、30、40、50、60 min时，各取200 μL，用高渗缓冲液适当稀释后涂布于再生平板，30 ℃培养2~3 d，观察计数并计算致死率。1.2.7.2热灭活将制备好的原生质体悬液，取5 mL加入无菌10 mL离心管中，置于50 ℃水浴处理，分别于0、10、20、30、40、50、60 min时，各取200 μL，用高渗缓冲液适当稀释后涂布于再生平板，30 ℃培养2~3 d，观察计数并计算致死率。1.2.8原生质体融合将制备的亲本菌株的原生质体混合后，平均分为两部分，分别进行上述两种方法灭活，5 000 r/min离心，收集灭活的原生质体，加入适量原生质体融合体系，35 ℃恒温水浴30 min，用高渗缓冲液稀释，离心，洗涤两次，用该溶液重悬后，倾倒于原生质体再生平板，30 ℃培养。1.2.9基因组重排将亲本菌株，分别制备原生质体、灭活、融合，然后倾倒于原生质体再生平板培养，进行初筛和复筛，方法同1.2.3。将酶活高的融合子作为第二轮基因组重排的亲本，重复上述步骤，递归融合。1.2.10融合子遗传稳定性检测将高产的融合子连续培养7代，并分别制得孢子悬液，按1%的含量接种于液体产木质素酶培养基，30 ℃、200 r/min，在培养3 d时测定木质素过氧化物酶活、锰过氧化物酶活酶活，在培养5 d时测定漆酶酶活。1.2.11高产融合子与原始菌株形态学观察对比分别将高产菌株与原始菌株转接种至菌体生长培养基培养5 d，并观察其菌落生长状态；同时接种至液体PDA培养基30 ℃、200 r/min，培养3 d，观察菌丝状态；取一定体积的孢子悬液，观察孢子的形态[17]。2结果与分析2.1黄孢原毛平革菌复合诱变条件确定（见图1、图2）由图1可知，ARTP照射时间为60 s时，黄孢原毛平革菌孢子致死率为75%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F001图1黄孢原毛平革菌ARTP诱变致死率曲线由图2可知，当DES浓度为0.6%时，黄孢原毛平革菌孢子致死率为73.5%。根据复合诱变致死率原则，本研究确定ARTP照射时间为60 s，DES浓度为0.6%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F002图2黄孢原毛平革菌DES诱变致死率曲线2.2突变菌株初筛结果将黄孢原毛平革菌孢子悬液经过ARTP-DES复合诱变之后，在平板中挑选出200株生长旺盛的菌株，纯化培养并编号，随后将菌株接入到苯胺蓝培养基，经过观察与测量有28株菌株透明圈直径大于原始菌株。将28株菌株接入愈创木酚培养基中，经过观察与测量有13株红色显色圈直径大于原始菌株，见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.T001表113株产木质素酶突变株脱色圈与显色圈测定结果菌株苯胺蓝脱色圈直径愈创木酚显色圈直径PC4.72±0.12a4.90±0.14aPCAD-15.71±0.14b6.31±0.11fPCAD-36.02±0.11e6.20±0.14ePCAD-76.10±0.08f6.60±0.15hPCAD-196.30±0.13h6.50±0.13gPCAD-266.31±0.21h6.61±0.14hPCAD-326.20±0.14g5.80±0.09cPCAD-365.90±0.15d5.61±0.21bPCAD-416.31±0.21h5.60±0.13bPCAD-426.40±0.22i5.81±0.15cPCAD-435.80±0.12c6.01±0.21dPCAD-686.12±0.15f5.61±0.08bPCAD-836.31±0.09h5.82±0.16cPCAD-846.41±0.14i6.52±0.15g注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母表示差异不显著（P0.05）。cm后续进一步测定13株突变株的木质素酶活力，苯胺蓝脱色圈与愈创木酚显色圈见图3。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F003图3黄孢原毛平革菌诱变菌株PCAD-19苯胺蓝脱色圈和愈创木酚显色圈2.3突变菌株复筛结果在连续培养的5 d内，黄孢原毛平革菌原始菌株和13株诱变菌株的木质素过氧化物酶活见图4。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F004图4黄孢原毛平革菌原始菌株和13株诱变菌株的木质素过氧化物酶活由图4可知，原始菌株PC在第3 d达到最大木质素过氧化物酶活为4.03 U/mL，PCAD-19、PCAD-26、PCAD-43、PCAD-83在第3 d也达到最大酶活分别为6.45、7.35、6.81、6.09 U/mL，分别较原始菌株提高了60.0%、82.2%、68.9%、51.0%。在连续培养的5 d内，黄孢原毛平革菌原始菌株和13株诱变菌株的锰过氧化物酶活见图5。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F005图5黄孢原毛平革菌原始菌株和13株诱变菌株的锰过氧化物酶活由图5可知，原始菌株在第3 d达到最大锰过氧化物酶活为32.51 U/mL，PCAD-19、PCAD-26、PCAD-32、PCAD-43、PCAD-83在第3 d也达到最大酶活分别为53.29、56.58、52.47、51.23、54.41 U/mL，分别较原始菌株提高了63.9%、74.1%、61.4%、57.6%、55.1%。在连续培养的7 d内，黄孢原毛平革菌原始菌株和13株诱变菌株的漆酶酶活见图6。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F006图6黄孢原毛平革菌原始菌株和13株诱变菌株的漆酶酶活由图6可知，原始菌株在第5 d达到最大漆酶酶活为3.56 U/mL，PCAD-3、PCAD-19、PCAD-26、PCAD-43、PCAD-83在第5 d也达到最大酶活分别为6.16、5.37、5.00、5.09、5.97 U/mL，分别较原始菌株提高了72.7%、50.6%、54.3%、42.9%、67.5%。综合木质素过氧化物酶活、锰过氧化物酶活及漆酶酶活考虑，将这3种酶酶活提升幅度较大的PCAD-19、PCAD-26、PCAD-43、PCAD-83作为基因组重排的第一轮亲本菌株。2.4原生质体的制备与再生条件优化菌龄对原生质体的形成具有重要影响，培养时间过短，菌丝及细胞幼嫩，在细胞壁裂解酶的作用下，容易破坏整个细胞；培养时间过长，细胞壁加厚，不容易被细胞壁裂解酶裂解，也不能得到原生质体。本试验考察了黄孢原毛平革菌的菌龄在16、18、20、22、24、26、28 h时原生质体的形成情况，见图7。由图7可知，黄孢原毛平革菌的菌龄在20 h原生质体浓度最高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F007图7菌龄对黄孢原毛平革菌原生质体形成的影响不同稳渗剂对原生质体的形成有较大影响，不同的菌株所需稳渗剂的种类也不同，本试验采用0.7 mol/L KCl、0.7 mol/L NaCl、0.6 mol/L MgSO4、1.0 mol/L山梨醇、0.6 mol/L蔗糖分别作为稳渗剂制备原生质体。不同稳渗剂对黄孢原毛平革菌原生质体形成的影响见图8。由图8可知，黄孢原毛平革菌在稳渗剂为0.6 mol/L MgSO4时原生质体形成率最高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F008图8不同稳渗剂对黄孢原毛平革菌原生质体形成的影响细胞壁裂解酶的浓度也影响着原生质体的形成，浓度过低细胞壁脱壁不完全；浓度过高则可导致形成的原生质体破裂，并且浪费原料。本试验采用溶壁酶，分别配制5、10、15、20 g/L的溶壁酶溶液，作用于黄孢原毛平革菌菌丝。不同酶浓度黄孢原毛平革菌原生质体形成的影响见图9。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F009图9不同酶浓度黄孢原毛平革菌原生质体形成的影响由图9可知，黄孢原毛平革菌在溶壁酶浓度为10 g/L时原生质体形成率最高。不同稳渗剂对原生质体的再生也有较大影响，不同的菌株所需稳渗剂的种类也不同，本试验采用0.7 mol/L KCl、0.7 mol/L NaCl、0.6 mol/L MgSO4、1 mol/L山梨醇、0.6 mol/L蔗糖分别作为渗透压稳定剂用于原生质体的再生。不同稳渗剂对黄孢原毛平革菌原生质体再生的影响见图10。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F010图10不同稳渗剂对黄孢原毛平革菌原生质体再生的影响由图10可知，黄孢原毛平革菌在稳渗剂为0.6 mol/L蔗糖时原生质体再生率最高。2.5原生质体释放的形态学观察结果（见图11）本试验中，生长旺盛的菌丝在酶解10 min左右，可以看到部分菌丝细胞壁被轻微酶解，产生了膨胀区域。酶解20 min，可以看到菌丝开始断裂，原生质体撑破细胞壁，从菌丝中逃逸出来，见图11（a）；酶解30 min，可以看到原生质体开始增多，大小不一，直径在1~20 μm之间，见图11（b）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F011图11原生质体释放的形态学观察结果（400×）2.6原生质体的鉴定将原生质体做成装片，在显微镜下观察吸水涨破的过程，见图12。由图12（a）可知，在稳渗剂中原生质体可以维持其形态。由图12（b）可知，加入纯水后原生质体破裂，形成细胞残渣。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F012图12原生质体吸水涨破图（400×）2.7黄孢原毛平革菌的原生质体紫外灭活和热灭活致死率曲线（见图13）由图13可知，黄孢原毛平革菌原生质体在紫外灯下照射30 min，原生质体可全部致死，所以确定黄孢原毛平革菌紫外灯照射时间为30 min。黄孢原毛平革菌原生质体在50 ℃水浴处理时间为40 min，原生质体可全部致死，因此确定黄孢原毛平革菌原生质体热灭活处理时间为40 min。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F013图13黄孢原毛平革菌的原生质体紫外灭活和热灭活致死率曲线2.8不同原生质体融合条件设置（见表2）本试验采用不同灭活方法对双亲进行灭活，只有通过融合后，其致死损伤互补的融合子才能在平板中生长。本试验按照表2的条件分别进行了黄孢原毛平革菌原生质体融合试验，并在显微镜下观察融合情况，发现原生质体最适融合条件为试验D。测定试验D原生质体融合显微镜结果，见图14。由图14可知，多个原生质体聚集在一起并融合。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.T002表2不同原生质体融合条件设置试验号温度/℃PEG/%时间/minCa2+/(mmol/L)A30301030B30351030C35301010D3535101010.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F014图14原生质体融合显微镜图（400×）2.9不同黄孢原毛平革菌菌株木质素过氧化物酶活、锰过氧化物酶活、漆酶酶活比较（见图15）由图15可知，通过两轮基因组重排和筛选，得到了性能有大幅提升的融合子：PR2-11、PR2-24、PR2-36、PR2-75，其木质素过氧化物酶活分别较原始菌株提高了171%、181%、191%、165%，锰过氧化物酶活分别较原始菌株提高了188%、171%、181%、175%，漆酶酶活分别较原始菌株提高了217%、203%、237%、224%。图15不同黄孢原毛平革菌菌株木质素过氧化物酶活、锰过氧化物酶活、漆酶酶活比较10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F15a1（a）木质素过氧化物酶活10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F15a2（b）锰过氧化物酶活10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F15a3（c）漆酶酶活2.10黄孢原毛平革菌高产融合子遗传稳定性检测（见图16）由图16可知，经观察7代中只有菌株PR2-24的3种酶酶活始终较高且保持稳定，说明此菌株遗传稳定。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F016图16黄孢原毛平革菌高产融合子遗传稳定性检测2.11融合子PR2-24与原始菌株PC形态学比较PR2-24与PC的平板生长情况见图17。由图17可知，原始菌株PC的生长速度没有PR2-24快，生长72 h时可以明显看出PR2-24的菌丝较PC旺盛得多。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F017图17PR2-24与PC的平板生长情况PC与PR2-24摇瓶发酵菌丝形态见图18。由图18可知，在摇瓶发酵48 h时原始菌株PC的菌丝较为松散，而PR2-24的菌丝较为致密，菌丝缠绕程度较高；在摇瓶发酵72 h时PC菌丝没有太大变化，PR2-24的局部边缘菌丝开始扩展，缠绕程度降低。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F018图18PC与PR2-24摇瓶发酵菌丝形态（400×）PC与PR2-24孢子形态见图19。由图19可知，原始菌株PC的孢子壁较PR2-24厚，但原始菌株的孢子没有PR2-24大。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.015.F019图19PC与PR2-24孢子形态（400×）3讨论研究表明，酶解和微生物发酵对秸秆进行处理，可以提高秸秆的饲用价值和动物的生产能力。李军[18]将漆酶制剂和玉米秸秆混合，经过发酵后添加到绵羊日粮中，结果发现，与对照组相比，绵羊的采食量降低，平均日增重升高，料重比降低。结果表明，试验组绵羊的饲料转化率较高，有利于绵羊对粗纤维饲料的消化吸收。目前，使用酶制剂对秸秆进行预处理，商业微生物产漆酶能力相对较弱，造成酶活低导致成本较高的问题。本试验中，基因组重排菌株漆酶酶活为10.82 U/mL，后续还应继续进行酶活提升，降低成本，推动畜牧业的发展。赵雪莉[19]将白腐真菌L. edodes和P. eryngii与玉米秸秆共同发酵，确定了最佳的发酵时间为21~28 d，能够明显改善玉米秸秆的营养价值；将L. edodes发酵玉米秸秆饲喂绵羊，发现白腐真菌发酵有助于改善绵羊的生长性能，提高绵羊的日粮营养物质消化，改善肉品质。基因组重排中的递归融合可以进行多轮的融合，直至选育出集优良性状于一体的优良菌株，但往往在融合多轮之后会造成细胞的部分损伤，而降低产量，因此融合的次数要根据融合的情况和试验的目的决定。Zhu等[20]经过四轮基因组重排和耐低温性筛选，得到3株遗传稳定，耐低温的食用真菌。宋佳雯等[21]经过两轮基因组重排，获得了一株遗传稳定的茂源链霉菌融合子，其谷氨酰胺转氨酶产酶可达7.12 U/mL，较原始菌株酶活提高了65.5%。4结论本研究以黄孢原毛平革菌为原始菌株，进行ARTP-DES复合诱变，通过筛选将木质素酶活较高的突变菌株作为基因组重排的亲本菌株，经过两轮的基因组重排，遗传稳定性检测，最终得到1株木质素酶高产菌株PR2-24，其木质素过氧化物酶活、锰过氧化物酶活、漆酶酶活分别为11.34、88.35、10.82 U/mL，分别较原始菌株提高了181%、171%、203%。