在现代集约化养殖中，不当的饮食和环境等均会导致仔鸡发病率上升，甚至死亡，对此须采取措施保持仔鸡的健康和生产力[1]。我国农业农村部发布在饲料端禁止添加抗生素，减少抗生素对动物和人类的危害。植物多糖因具有无毒副作用、耐药性低、抗菌活性强等特点备受关注。研究表明，植物多糖具有提高家禽生长性能、调节免疫、抗炎、抗病毒、维持肠黏膜完整性以及调节肠道微生物群等功效[2-4]，具有广阔的应用前景。红豆杉多糖（TP）是从红豆杉枝叶中提取的吡喃型杂多糖[5]，具有免疫调节、抗肿瘤、降血糖、调节心血管系统和保肝等生物活性。红豆杉的根茎叶均可入药。红豆杉提取物研发和生产的主要产品为红豆杉中药饮片、医药中间体（紫杉醇、10-DAB、红豆杉多糖）、创制新药（复方红豆杉颗粒剂、降尿酸颗粒剂）[6]，但其在中药源性饲料添加剂开发方面未见报道。本试验探讨红豆杉多糖对817杂交肉仔鸡生长性能及免疫功能的影响，为红豆杉多糖作为绿色、高效饲料添加剂的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料1.1.1试验动物180羽7日龄817杂交肉仔鸡购自天津市宝坻区民清养鸡场。1.1.2试验日粮本试验日粮为临沂盛泉油脂化工有限公司江泉饲料厂生产的配合饲料（产品标准编号：Q/1300LJQ002-2020），其营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.005.T001表 1试验日粮营养水平项目粗蛋白水分粗纤维粗灰分钙总磷氯化钠蛋氨酸含量≥20.0≤13.0≤4.50≤7.000~0.80≥0.600.30~0.800.50~0.90%1.1.3主要试剂红豆杉多糖（纯度68.9%）购自盛世丰烨（天津）生物技术有限公司，盐酸金霉素（纯度20%）购自新乡市八牧科技有限公司，红豆杉精多糖（纯度91.9%）由课题组纯化。谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白A（IgA）、分泌型免疫球蛋白A（sIgA）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、白细胞介素-4（IL-4）、转化生长因子-β（TGF-β）检测试剂盒购自江苏酶免实业有限公司。1.2试验设计7日龄817杂交肉仔鸡180羽，随机分为6组，每组3个重复，每个重复10羽鸡。空白对照组（NC）仔鸡饲喂基础日粮，其他组为红豆杉多糖低剂量组（TP-L，0.5 g/kg）、中剂量组（TP-M，1.0 g/kg）、高剂量组（TP-H，2.0 g/kg）、红豆杉精多糖组（TEP，0.75 g/kg）、金霉素组（CTE，1 g/kg）。各组连续饲喂14 d，21日龄时每组每个重复随机选3羽鸡屠宰，检测各项指标。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能在7日龄和21日龄分别对每个重复所有试验鸡逐羽称重，记录采食量，计算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）、料重比（F/G）。ADG=(末重-初重)/饲养时间(1)ADFI=总采食量/(试验天数×鸡羽数)(2)F/G=ADFI/ADG(3)1.3.2免疫器官指数肉仔鸡屠宰后，剖出法氏囊、脾脏和胸腺，计算免疫器官指数。免疫器官指数=免疫器官重量/体重(4)1.3.3十二指肠形态学观察摘取十二指肠5 cm，4%多聚甲醛溶液固定，石蜡切片，HE染色，测量绒毛长度（V）和隐窝深度（C），计算V/C值。V/C=绒毛长度/隐窝深度(5)1.3.4血清免疫指标及肝功能指标翅下静脉采血2 mL，37 ℃恒温培养箱放置1 h后，置于4 ℃冰箱，3 000 r/min离心10 min，分离血清。按照说明书（ELISA法）检测IgG、IgM、IgA、IL-1β、IL-4、AST、ALT等指标。1.3.5十二指肠黏膜细胞因子屠宰后，分离出十二指肠，载玻片刮取十二指肠黏膜0.5 g，精密称取0.1 g肠黏膜，加入5 mL磷酸盐缓冲液（PBS，pH值7.4），组织匀浆机破碎匀浆，4 ℃、10 000 r/min离心2 min，收集上清液，-80 ℃保存。按照ELISA法说明书测定十二指肠肠黏膜上清液中总sIgA、TGF-β、IL-1β、IL-6、IL-4水平。1.4数据统计与分析试验数据采用Prism 8.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1红豆杉多糖对肉仔鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，与CTE组相比，TP-L组、TP-M组肉仔鸡ADG有所增加，F/G有所降低，但差异均不显著（P0.05）。研究表明，日粮添加红豆杉多糖对仔鸡的生长性能无显著影响。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.005.T002表2红豆杉多糖对肉仔鸡生长性能的影响组别初重/(g/羽)末重/(g/羽)ADG/[g/(羽·d)]ADFI[g/(羽·d)]F/GNC组79.00±8.79251.50±38.7012.30±2.2724.70±2.072.20±0.42CTE组77.40±8.21238.80±27.4311.50±2.0625.30±1.532.40±0.45TP-L组75.50±11.56243.20±37.9112.00±2.0426.10±2.572.30±0.38TP-M组77.30±9.35249.10±24.8112.30±1.3927.90±2.462.20±0.24TP-H组80.60±11.38235.30±46.3311.10±2.8425.60±2.132.60±0.73TEP组79.30±7.02236.00±33.6111.20±2.0327.00±1.982.40±0.482.2红豆杉多糖对肉仔鸡肝功能的影响（见表3）由表3可知，CTE组肉仔鸡血清AST、ALT活性及AST/ALT极显著低于NC组（P0.01），TP-L组、TP-H组、TEP组肉仔鸡血清AST活性极显著高于NC组（P0.01）；TP-M组肉仔鸡血清ALT活性极显著高于NC组（P0.01），TP-H组、TEP组肉仔鸡血清ALT活性显著高于NC组（P0.05）；TP-L组AST/ALT显著高于NC组（P0.05），TP-M组、TEP组AST/ALT显著高于NC组（P0.05）。各组雏鸡肉仔鸡血清AST活性及AST/ALT极显著高于CTE组（P0.01），ALT活性极显著低于CTE组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.005.T003表3红豆杉多糖对肉仔鸡肝功能的影响组别AST/(U/L)ALT/(U/L)AST/ALTNC组54.30±1.72B51.30±0.86B1.10±0.03BCTE组25.50±1.00A113.00±4.97A0.20±0.01ATP-L组60.60±0.37AB42.10±2.15B1.40±0.07aBTP-M组55.80±0.37B27.90±2.28AB2.00±0.18ABTP-H组65.50±1.50AB63.00±4.86aB1.00±0.08BTEP组62.50±1.35AB39.90±4.37aB1.60±0.19AB注：与NC组对比，肩标小写字母a为差异显著（P0.05），大写字母A为差异极显著（P0.01）；与CTE组相比，肩标小写字母b为差异显著（P0.05），大写字母B为差异极显著（P0.01）；下表同。2.3红豆杉多糖对肉仔鸡免疫器官指数的影响（见表4）由表4可知，TP-L组、TP-M组肉仔鸡胸腺指数均极显著高于NC组和CTE组（P0.01），TP-H组肉仔鸡的胸腺指数显著高于NC组（P0.05）。TP-L组肉仔鸡脾脏指数极显著低于NC组和CTE组（P0.01）。TP-L组、TP-M组、TP-H组肉仔鸡法氏囊指数与CTE组相比均有所提升，但差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.005.T004表4红豆杉多糖对肉仔鸡免疫器官指数的影响组别胸腺指数法氏囊指数脾脏指数NC组4.80±0.08B6.50±0.88b2.00±0.05CTE组5.60±0.04A4.60±0.50a2.00±0.20TP-L组5.80±0.05AB5.40±0.520.90±0.11ABTP-M组5.80±0.07AB5.00±0.491.30±0.37TP-H组5.00±0.07aB5.40±0.772.00±0.41TEP组4.70±0.04B4.10±1.03a1.50±0.25g/kg2.4红豆杉多糖对肉仔鸡血清免疫指标的影响（见表5）由表5可知，TP-L组、TP-M组、TP-H组、TEP组肉仔鸡血清IgG、IgM、IgA含量均极显著高于NC组（P0.01），血清IgG、IgA含量均极显著高于CTE组（P0.01）；TP-H组、TEP组肉仔鸡血清IgM含量均极显著高于CTE组（P0.01），TP-M组肉仔鸡血清IgM含量高于CTE组，但差异不显著（P0.05）。TP-M组、TP-H组、TEP组肉仔鸡血清IL-1β含量极显著低于NC组和CTE组（P0.01）。TP-M组、TP-H组、TEP组肉仔鸡血清IL-4含量均极显著高于CTE组（P0.01），TEP组肉仔鸡血清IL-4含量均极显著高于NC组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.005.T005表5红豆杉多糖对肉仔鸡血清免疫球蛋白和细胞因子含量的影响组别IgG/(mg/L)IgM/(μg/L)IgA/(μg/L)IL-1β/(ng/L)IL-4/(ng/L)NC组31.80±0.28B1 587.00±166.50B972.50±281.70b135.90±1.724127.10±3.86CTE组36.20±0.75A2 653.00±62.92A1 631.00±118.10a148.50±13.08113.70±10.44TP-L组54.80±0.57AB2 137.00±28.87AB3 348.00±66.14AB137.30±14.69135.80±3.62TP-M组52.80±0.28AB2 695.00±43.30A3 014.00±146.50AB101.40±2.986AB159.30±10.20aBTP-H组62.60±0.28AB5 937.00±38.19AB5 123.00±325.00AB90.17±3.448AB147.70±11.05BTEP组59.50±0.28AB5 487.00±52.04AB4 848.00±175.00AB91.03±0.8621AB165.70±3.95AB2.5红豆杉多糖对肉仔鸡十二指肠黏膜免疫指标的影响（见表6）由表6可知，TP-L组、TP-M组、TP-H组肉仔鸡十二指肠黏膜IL-1β含量极显著低于CTE组（P0.01），低于NC组，但差异不显著（P0.05）；TEP组肉仔鸡十二指肠黏膜IL-1β含量均极显著低于NC组和CTE组（P0.01）。TP-L组、TP-M组、TP-H组、TEP组肉仔鸡十二指肠黏膜IL-6含量均极显著低于NC组和CTE组（P0.01）。TP-L组、TP-M组肉仔鸡十二指肠黏膜IL-4含量极显著高于CTE组（P0.01）。TP-L组、TP-M组、TP-H组、TEP组肉仔鸡十二指肠黏膜TGF-β含量极显著低于CTE组（P0.01）。TP-L组肉仔鸡十二指肠黏膜sIgA含量显著高于NC组（P0.05）。TP-H组、TEP组肉仔鸡十二指肠黏膜sIgA含量高于NC组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.005.T006表6红豆杉多糖对肉仔鸡十二指肠黏膜细胞因子含量的影响组别IL-1βIL-6IL-4TGF-βsIgANC组148.20±1.99B53.80±7.71237.10±2.97B314.80±6.72B1 570.00±10.91bCTE组177.20±3.76A53.30±3.73185.60±0.76A359.10±13.04A1 854.00±51.51aTP-L组135.60±6.58B37.30±0.92AB223.30±3.38AB324.10±2.44B1 844.00±33.76aTP-M组133.30±11.66B36.00±3.24AB202.30±1.90AB257.90±4.93AB1 439.00±31.14BTP-H组144.80±3.89B35.50±0.32AB189.80±2.66A271.30±0.70AB1 682.00±18.90TEP组114.60±6.06AB23.30±2.20AB179.30±2.49A307.10±3.23B1 680.00±58.18ng/L prot2.6红豆杉多糖对肉仔鸡十二指肠绒毛形态的影响（见表7、图1）由表7可知，TP-L组、TP-M组、TP-H组、TEP组肉仔鸡十二指肠V值均极显著高于CTE组（P0.01）。TP-L、TP-M、TEP组肉仔鸡十二指肠V/C值极显著高于CTE组（P0.01），TP-L组、TP-M组肉仔鸡十二指肠V/C值高于NC组，但差异不显著（P0.05）；TEP组肉仔鸡十二指肠V/C值极显著高于NC组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.005.T007表 7红豆杉多糖对肉仔鸡十二指肠绒毛形态的影响组别V值/μmC值/μmV/C值NC组1 112.00±11.50b140.10±12.34B8.00±0.66BCTE组1 070.00±18.04a216.80±4.63A4.90±0.15ATP-L组1 129.00±15.31B132.40±3.87B8.50±0.23BTP-M组1 305.00±9.29AB145.40±3.07B9.00±0.23BTP-H组1 272.00±7.55AB301.60±5.44AB4.20±0.10ATEP组1 366.00±19.97AB148.70±6.87AB9.20±0.29AB由图1可知，与NC组相比，CTE组、TP-H组肉仔鸡肠形态明显异常，肠绒毛排列参差不齐，微绒毛破碎消失，具有明显病变；与CTE组相比，TP-L组、TP-M组、TEP组肉仔鸡肠形态正常，肠绒毛排列整齐，具有明显微绒毛，无明显病变。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.005.F001图1红豆杉多糖对肉仔鸡十二指肠形态的影响（HE，40×）3讨论3.1红豆杉多糖对仔鸡生长性能的影响在现代化养殖体系中，生长性能是最直接反映动物养殖经济效益的指标[7]。研究发现，甘草多糖可提高肉鸡ADG，降低料重比（1~42日龄）[8-9]。Long等[10]研究发现，在育雏期（1~21日龄）补充棘五加多糖，各组雏鸡ADG、ADFI和F/G差异不显著；在育成期（22~42日龄）补充1 g/kg棘五加多糖，雏鸡ADG和ADFI显著增加，F/G显著降低。本研究发现，与对照组相比，在基础日粮中添加0.5、1.0、2.0 g/kg红豆杉多糖和0.75 g/kg红豆杉精多糖对仔鸡的末重、ADG、ADFI、F/G影响不显著，但与金霉素组（1 g/kg日粮）相比，基础日粮中添加0.5、1.0 g/kg红豆杉多糖可提高仔鸡的ADG，降低F/G。本试验饲喂时间为7~21日龄，与Long等[10]结果一致，若持续添加红豆杉多糖（22日龄之后）可能具有改善生长性能的效果，与上述添加甘草多糖研究结果略有不同，可能与试验期较短或添加红豆杉多糖的起始日龄（7日龄）有关。3.2红豆杉多糖对肉仔鸡肝功能的影响ALT主要存在肝细胞中，当1%的肝细胞发生坏死时，血清ALT活性迅速升高，与肝脏损伤程度呈正相关。AST主要存在肝细胞线粒体中，当肝细胞线粒体受到损伤，AST也会进入血液。临床中通常将AST/ALT作为衡量肝功能的重要指标[11-12]。本研究发现，日粮添加1 g/kg金霉素可极显著降低仔鸡血清AST/ALT，造成仔鸡明显的肝损伤。与空白对照组和金霉素组相比，日粮添加1.0 g/kg红豆杉多糖和0.75 g/kg红豆杉精多糖可极显著提升肉仔鸡血清AST/ALT；日粮添加2.0 g/kg红豆杉多糖可使仔鸡血清AST/ALT明显低于空白对照组，该剂量可能导致仔鸡轻度肝损伤。3.3红豆杉多糖对肉仔鸡免疫器官指数的影响免疫器官指数是衡量禽类免疫功能的重要指标[13]。Cai等[14]发现，补充蜂蜜多糖（1.2 g/kg）可明提高禽的免疫器官指数。单舒萱等[15]研究发现，2 g/kg蒲公英多糖能够提高肉仔鸡免疫器官指数。韦晓晨等[16]通过饮水添加人参叶多糖，发现0.010%~0.020%人参叶多糖能够明显提升仔鸡免疫器官指数，且作用效果优于黄芪多糖组（饮水添加0.020%）。本研究结果表明，与对照组相比，日粮添加0.5、1.0 g/kg红豆杉多糖可极显著提高肉仔鸡胸腺指数，且作用效果优于金霉素组。与金霉素组相比，日粮添加不同剂量红豆杉多糖均可明显提高肉仔鸡的法氏囊指数；与对照组和金霉素组相比，日粮添加0.5 g/kg红豆杉多糖极显著降低肉仔鸡的脾脏指数。3.4红豆杉多糖对肉仔鸡血清免疫指标的影响植物多糖可通过激活淋巴细胞分泌免疫球蛋白和细胞因子，发挥免疫调节作用[17]。IgA、IgG和IgM在动物机体的免疫系统中起到重要的调节作用[18]。Zhang等[19]发现，蒿多糖在体外可特异性地促进IgM、IgG、IL-1β、IL-6和TNF-α的产生。Long等[10]研究发现，膳食补充棘五加多糖可通过提高雏鸡血清IgA和IgM含量，从而促进体液免疫反应。Wu等[20]研究表明，日粮添加菊粉可有效提高肉鸡血清IgA和IgM的含量。于阿男等[21]研究发现，日粮添加250 mg/kg黄芪多糖可降低樱桃谷鸭血清IL-1β、IL-2含量，提高IL-4含量。本研究发现，与空白对照组相比，日粮添加0.5、1.0、2.0 g/kg红豆杉多糖和0.75 g/kg红豆杉精多糖可极显著提高仔鸡血清IgG、IgM、IgA含量，且以2 g/kg红豆杉多糖和0.75 g/kg红豆杉精多糖提高肉仔鸡血清免疫球蛋白含量的效果最佳，优于金霉素组。与对照组相比，金霉素组肉仔鸡血清IL-1β含量明显上升，IL-4含量明显下降，激发了机体炎症反应。与空白对照组和金霉素组相比，日粮添加1.0 g/kg红豆杉多糖和0.75 g/kg红豆杉精多糖可极显著降低肉仔鸡血清IL-1β的含量，显著或极显著提高仔鸡血清IL-4的含量。研究表明，红豆杉多糖能够有效激活免疫细胞分泌免疫球蛋白和细胞因子，从而提高仔鸡的体液免疫和细胞免疫功能。3.5红豆杉多糖对肉仔鸡十二指肠黏膜免疫指标的影响肠黏膜免疫是抵抗病原体入侵和维持肠道健康的重要因素，通过激活T细胞、释放sIgA发挥免疫保护作用[22-25]。免疫细胞可分泌促炎细胞因子（IL-1β、IL-6）和抑炎细胞因子（IL-4和TGF-β），通常情况下促炎介质编码基因在健康机体不表达，但若由外伤、感染或毒菌等因素，会激发促炎介质编码基因的表达[26]。在肠道屏障中，TGF-β可与肠道上皮细胞上的TGF-β受体结合，激活细胞内信号转导途径，刺激sIgA分泌，调节黏膜免疫，促进肠道稳态[27-29]。Cai等[14]研究发现，日粮补充蜂蜜多糖后肠道sIgA和细胞因子白细胞介素-17（IL-17）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-2（IL-2）和干扰素-γ（INF-γ）含量显著上调。宛燕飞[30]发现，饮水添加仙人掌多糖能够有效提高鸡十二指肠、空肠sIgA分泌，显著提高鸡十二指肠、空肠的肠黏膜免疫能力。Sha等[22]发现，日粮添加马尾松花粉多糖能够显著增加鸡肠黏膜sIgA的分泌、肠绒毛结构以及黏膜免疫相关基因的表达。本研究发现，与空白对照组相比，日粮添加1.0 g/kg金霉素可使仔鸡十二指肠黏膜中IL-1β含量极显著上升、IL-4含量极显著下降，激发了机体炎症反应；与金霉素组相比，日粮添加0.5、1.0、2.0 g/kg红豆杉多糖和0.75 g/kg红豆杉精多糖可极显著降低仔鸡十二指肠黏膜IL-1β、IL-6的含量。其中，1.0 g/kg红豆杉多糖和0.75 g/kg红豆杉精多糖对仔鸡十二指肠黏膜IL-1β、IL-6含量的下调效果最佳；与金霉素组相比，日粮添加0.5、1.0 g/kg红豆杉多糖可极显著增加仔鸡十二指肠黏膜IL-4的含量。与空白对照组相比，日粮添加0.75 g/kg红豆杉精多糖和0.5 g/kg红豆杉多糖可分泌少量TGF-β，更好地刺激肉仔鸡sIgA的分泌。本研究表明，红豆杉多糖可有效替代抗生素，作为绿色高效饲料添加剂调节肠黏膜免疫功能，日粮添加0.5 g/kg红豆杉多糖或0.75 g/kg红豆杉精多糖对仔鸡肠黏膜免疫调节作用最佳。3.6红豆杉多糖对仔鸡十二指肠绒毛形态的影响肠道不仅是动物机体最大的免疫器官，也是最大的消化吸收器官[22]。V/C是估计小肠吸收能力的重要指标[31]。Liu等[32]在日粮添加藻类衍生多糖饲喂35 d后发现，十二指肠和回肠的V值明显增加。Li等[4]研究表明，日粮添加600 mg/kg黄芪多糖可使肉鸡肠绒毛长度值和V/C值明显增加，表明多糖有助于改善肉鸡肠道形态。本研究发现，与空白对照组相比，金霉素组十二指肠V值和V/C值极显著下降，表明日粮添加金霉素对十二指肠的吸收功能有一定损伤；与空白对照组和金霉素组相比，日粮添加1.0、2.0 g/kg红豆杉多糖和0.75 g/kg红豆杉精多糖可极显著提升仔鸡十二指肠V值；与空白对照组相比，日粮添加0.5、1.0 g/kg红豆杉多糖可明显提升仔鸡十二指肠V/C值；与空白对照组和金霉素组相比，日粮添加0.75 g/kg红豆杉精多糖可极显著提高肉仔鸡十二指肠V/C值，对十二指肠吸收作用最佳。研究表明，饲粮添加0.5、1.0 g/kg红豆杉多糖或0.75 g/kg红豆杉精多糖均可有效改善肉仔鸡十二指肠的消化吸收功能。4结论本试验条件下，日粮添加红豆杉多糖可有效提高817杂交肉仔鸡的免疫器官指数、血清免疫球蛋白含量、十二指肠黏膜细胞因子的分泌，降低肝损伤和改善十二指肠吸收功能，从而提高肉仔鸡的免疫性能。其中，红豆杉多糖添加量为0.5~1.0 g/kg或红豆杉精多糖添加量为0.75 g/kg时均能够取得较好的效果，且添加0.75 g/kg红豆杉精多糖对提高仔鸡免疫性能的作用最好。