关岭母牛存在产犊的间隔周期长、泌乳周期短、犊牛断奶体重和饲料报酬低、后期生长缓慢的问题[1]。研究表明，在日粮中添加过瘤胃氨基酸能够提高奶牛的泌乳性能[2]，缩短母畜产后复配受胎时间，提高犊牛断奶体重[3]。蛋氨酸和赖氨酸分别是奶牛的第一和第二限制性氨基酸，其能够参与机体的能量代谢、脂肪代谢以及蛋白质的合成[4]，在机体的生长、发育和繁殖等方面具有重要作用[5]。在日粮中添加适量的过瘤胃氨基酸可提高肉羊小肠可吸收氨基酸水平、平衡小肠氨基酸营养，从而提高肉羊的生长性能[6]。在日粮中添加过瘤胃氨基酸能够增加过小肠中氨基酸比例，平衡消化道氨基酸比例，提高血液氨基酸含量以及进入乳腺的氨基酸含量，为乳腺中蛋白质的合成提供了充足的前体物质，进而提高奶牛的泌乳量和乳中蛋白质含量[7]。本试验研究在日粮中添加过瘤胃赖氨酸和过瘤胃蛋氨酸对泌乳母牛生产性能、血清生化指标及日粮养分表观消化率的影响，为关岭牛产业健康、快速、可持续发展提供参考。1材料与方法1.1试验时间与地点本试验于2021年2—10月在贵州省农业科学院草业研究所长顺科研示范基地（贵州地方牛品种资源保种场）进行。1.2试验设计选择24头产犊日期（20±10）d、体重（275±25）kg、胎次相同（2胎）的贵州关岭母牛，随机分成4组，每组6个重复，每个重复1头牛。A组（对照组）母牛饲喂基础日粮，B组、C组、D组分别在基础日粮上添加15 g/(头·d)RP-Met、15 g/(头·d)RP-Lys、15 g/(头·d)RP-Lys+15 g/(头·d)RP-Met。预试期7 d，正式试验期90ｄ。参照文献[8]中哺乳母牛营养需要量配制饲粮。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.002.T001表1基础日粮组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.0玉米19.0干物质/%91.50麦麸8.0粗蛋白/%13.45豆粕8.0粗脂肪/%3.75菜籽粕3.5中性洗涤纤维/%43.50预混料0.5钙/%0.58磷酸氢钙1.0磷/%0.77甜象草青贮60.0小肠可消化蛋白/(g/kg)126.50赖氨酸/(g/kg)0.42蛋氨酸/(g/kg)0.18综合净能/(MJ/kg)6.50注：1.预混料为每千克饲粮提供：VA 15 000 IU、VD 5 000 IU、VE 50 mg、铁9 mg、铜 12.5 mg、锰130 mg、锌100 mg、硒0.3 mg、碘1.5 mg、钴0.5 mg。2.营养水平中小肠可消化蛋白和综合净能为计算值，其余均为实测值。1.3饲养管理泌乳母牛与犊牛分开采取单独舍饲，每天犊牛喂4次母乳，每次间隔6 h。每个圈舍积为12 m2，每15 d更换一次垫料。每天日粮干物质饲喂量为母牛体重的2.5%，分别于9：00、17：00饲喂，在第2 d投料前对每头牛的剩料进行称重并记录。每7 d根据采食情况和体况变化调整饲喂量，试验牛自由饮水。1.4测定指标及方法1.4.1样品采集试验过程中收集日粮和粪便样品，样品粗蛋白（CP）、粗灰分（Ash）、中性洗涤纤维（NDF）、粗脂肪（EE）、钙（Ca）、磷（P）的含量采用张丽英[9]方法进行测定；Lys、Met、总氨基酸含量按照GB/T 18246—2000的方法，采用日立L-8900氨基酸自动分析仪测定。1.4.2泌乳性能泌乳量采用差量法计算，即在犊牛吃乳前和吃乳后分别称重，两次体重的差即为本次的母牛产奶量。初乳期每天测量记录，常乳期隔7 d测量记录，每次测定母牛泌乳量取3 d数值求平均值。1.4.3乳成分使用人工挤奶采集关岭牛的母牛初乳期和常乳期牛乳，早晚各取乳20 mL。使用乳成分分析仪测定牛乳中蛋白质、乳脂、乳糖、总固形物等成分。1.4.4养分表观消化率采用全收粪、尿法，在试验第20~23、50~53、80~83 d，每组选择3头体重相近的健康母牛进行3期消化代谢试验。预试期7 d，正式试验期4 d，记录每头母牛正式试验期每日排粪量和排尿量，每天收集粪便总量的5%作为混合样品，每100 g新鲜粪便加入10%的稀硫酸10 mL固氮，每天收集尿总量的1%作为混合样品，采用10%稀硫酸调试尿样使pH值≤3，收集的粪、尿样存放在-20 ℃冰箱保存。养分表观消化率=(食入日粮总养分-食入日粮后排泄物养分)/(食入日粮总养分)×100%(1)1.4.5血清生化指标于试验第22、52、82 d早晨，选取每头用于消化代谢试验母牛，颈静脉采血10 mL，4 ℃静置0.5 h，3 500 r/min离心15 min，取上清分装到离心管中，于-20 ℃冰箱保存。采用全自动生化分析仪测定总蛋白、白蛋白、球蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮、尿酸、总胆固醇、血糖等指标。1.5数据统计与分析数据采用Excel 2010软件进行整理，SPSS 17.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以平均值和标准误（SEM）表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸对关岭母牛泌乳量及乳成分的影响（见表2）由表2可知，试验1~30、31~60 d，D组母牛的平均日泌乳量显著高于A组和C组（P0.05）；试验61~90 d，D组母牛的平均日泌乳量高于其他组（P0.05）。试验各阶段，各试验组母牛牛乳中的乳蛋白含量均高于A组，牛乳中乳脂率、乳糖含量、总固形物含量变化不明显。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.002.T002表2过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸对关岭母牛泌乳量及乳成分的影响项目A组B组C组D组SEMP值平均日泌乳量/[kg/(头·d)]1~30 d3.63a4.80b4.26a5.31b0.620.0231~60 d3.11a4.04b3.32a4.47b0.550.0361~90 d2.873.052.883.450.230.081~30 d乳成分乳蛋白含量/%4.05a4.22b4.25b4.37b0.110.02乳脂率/%5.325.585.135.340.160.06乳糖含量/%6.226.216.046.310.100.07总固形物含量/%16.88a17.01ab16.96ab17.22b0.130.0231~60 d乳成分乳蛋白含量/%3.98a4.09ab4.06ab4.21b0.080.04乳脂率/%5.034.914.955.070.060.12乳糖含量/%6.105.926.106.080.080.21总固形物含量/%16.21a16.32a16.44ab16.68b0.180.0461~90 d乳成分乳蛋白含量/%3.85a4.00ab3.91a4.08b0.090.13乳脂率/%4.885.024.905.100.090.09乳糖含量/%5.635.785.655.740.060.08总固形物含量/%16.2316.3316.7216.750.230.15注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同研究表明，在泌乳早期关岭泌乳母牛的日粮中添加过瘤胃氨基酸15 g/(头·d) RP-Lys+15 g/(头·d) RP-Met，能够提高泌乳量和乳蛋白含量，对提高牛乳中主要成分效果不明显。2.2过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸对关岭母牛泌乳期间犊牛体重的影响（见表3）由表3可知，试验各阶段，D组犊牛的平均日增重均显著高于其他组（P0.05）。研究表明，泌乳母牛日粮中添加15 g/(头·d) RP-Lys+15 g/(头·d) RP-Met有利于犊牛早期生长发育。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.002.T003表3过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸水平对关岭母牛泌乳期间犊牛平均日增重的影响试验时间/d平均日增重/[kg/(头·d)]SEMP值A组B组C组D组1~300.22a0.25a0.23a0.31b0.030.0431~600.31a0.34a0.38a0.42b0.040.0261~900.42a0.47a0.46a0.54b0.050.041~900.32a0.35a0.39a0.42b0.040.022.3过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸对母牛养分表观消化率的影响（见表4）由表4可知，在泌乳母牛日粮中过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸水能够提高日粮中养分表观消化率，但差异不显著（P0.05）。研究表明，过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸有利于提高泌乳母牛对日粮中粗蛋白和氨基酸的吸收。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.002.T004表4过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸对母牛养分表观消化率的影响项目A组B组C组D组SEMP值干物质20~23 d73.5575.0275.4877.141.280.2350~53 d72.4671.4472.0474.151.010.1180~83 d70.2874.4874.1672.761.660.36氮20~23 d65.3266.9967.4371.852.410.1750~53 d62.1564.1664.3371.203.420.3080~83 d67.6166.6567.8271.491.840.09中性洗涤纤维20~23 d33.1532.8131.8834.661.000.2750~53 d32.1834.5232.1834.761.230.3480~83 d34.0932.9934.1634.850.670.16粗脂肪20~23 d70.3373.0475.6777.032.570.1750~53 d70.6373.3575.9977.352.580.3680~83 d70.9973.7276.3877.752.590.18钙20~23 d54.3456.2352.4354.091.350.2350~53 d54.4553.3452.5354.200.750.1480~83 d54.5853.4652.6654.330.760.09总氨基酸20~23 d73.6477.8575.8883.643.710.2250~53 d72.0876.5574.1381.053.340.2580~83 d71.0074.6577.4379.883.300.28赖氨酸20~23 d66.5569.1271.0375.933.430.4750~53 d68.1270.3370.6275.502.690.3080~83 d67.3569.7871.4176.343.290.46蛋氨酸20~23 d66.5270.1267.2377.954.530.4750~53 d65.0872.1169.5378.074.700.3880~83 d68.2273.1571.2074.152.260.26%2.4过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸对泌乳母牛血清生化指标的影响（见表5）由表5可知，过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸对泌乳母牛血清生化指标无显著影响（Ｐ0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.21.002.T005表5过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸对泌乳母牛血清生化指标的影响项目A组B组C组D组SEMP值总蛋白/(g/L)66.4668.4362.7765.092.060.27白蛋白/(g/L)27.5526.3726.3129.301.210.12球蛋白/(g/L)34.1235.3632.7432.201.230.10白球比0.810.750.800.910.060.52谷草转氨酶/(U/L)38.4841.3635.3334.842.630.47谷丙转氨酶/(U/L)74.1277.3272.9373.871.650.09谷丙转氨酶/谷草转氨酶1.931.872.062.120.100.22尿素氮/(mmol/L)3.213.052.772.730.200.25尿酸/(µmol/L)67.0065.0055.7058.004.700.62总胆固醇/(mmol/L)2.642.512.332.430.110.12血糖/(mmol/L)3.763.663.263.460.190.073讨论3.1过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸对关岭母牛泌乳性能的影响牛的品种、胎次、营养水平和健康状况等均会影响母牛泌乳量[10]。本研究表明，在泌乳母牛日粮中添加RP-Lyst和RP-Met对提高关岭牛早期（1~60 d）泌乳量具有明显效果，与陈傲东等[11]研究结果相同。原因可能是日粮中添加过瘤胃氨基酸能够有效避免氨基酸被瘤胃微生物分解利用，使到达小肠中的氨基酸含量增加，从而提高了泌乳时奶牛对限制性氨基酸的需要量，进而提高了泌乳量[12]。乳蛋白和乳脂率含量是衡量牛乳品质的重要指标。母牛品种、泌乳母牛的健康状况、产犊胎次及营养水平等是影响牛乳中乳蛋白含量的主要因素。本研究发现，在试验期间内各处理组牛乳中的乳蛋白含量和总固形物含量之间存在显著差异，D组乳脂率和乳糖含量相对于其他处理组有所提高。原因可能是乳蛋白的主要组成是氨基酸，乳蛋白含量提高说明通过牛乳中氨基酸的含量增加[13]。本研究表明，在试验期内泌乳母牛日粮中添加过瘤胃氨基酸，牛乳中的乳蛋白含量显著高于未加处理组，说明在泌乳母牛日粮中添加过瘤胃氨基酸对乳蛋白含量的提高起到主要作用。同时添加RP-Lyst和RP-Met的组中牛乳蛋白的含量高于单一添加赖氨酸或蛋氨酸的组，原因可能是赖氨酸和蛋氨酸在泌乳过程中对乳蛋白合成起到协同作用。Lee等[14]研究发现，赖氨酸和蛋氨酸是影响乳蛋白含量的第一限制性氨基酸。而乳中总固形物含量主要受乳蛋白、乳脂率、乳糖含量的影响。本试验发现，在牛乳中乳脂率和乳糖含量变化不明显的基础上，乳蛋白含量上升乳中总固形物含量也随之增加，也从侧面证明了氨基酸是影响乳蛋白含量变化的主要因素。犊牛通过母乳获取生长发育所需的主要营养物质，犊牛的平均日增重和体重变化可反映泌乳母牛的泌乳量和乳成分之间的关系[15]。本研究为克服品种、胎次[16]和营养水平对犊牛体重变化的影响，发现各处理组间犊牛平均日增重存在明显差异，且赖氨酸和蛋氨酸添加组显著高于其他处理组，同时犊平均日增重结果与母牛泌乳量和乳成分研究结果相对应。原因可能是母牛泌乳量的增加和乳成分含量的提高，可为犊牛生长发育提供更多的物质基础，确保了犊牛机体生长发育的需要。3.2过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸对关岭母牛养分表观消化率的影响本试验发现，泌乳母牛的消化系统已发育完善，虽然养分表观消化率存在一定变化，但变化较小，可能是瘤胃内微生物发酵功能已经趋于稳定[17]。Hill等[18]研究表明，在肉牛日粮中添加氨基酸对饲料养分表观消化率无影响。同时，Hussein等[19]研究发现，使用瘘管每天向荷斯坦生长公牛真胃内注射6 g未经包被处理的赖氨酸对日粮中干物质表观消化率无影响，这可能是过瘤胃氨基酸经过包被处理，在瘤胃中未被微生物发酵分解生成挥发酸或利用合成微生物菌体蛋白[20]。因此，在同一水平日粮条件下，营养物质在后消化道中的消化吸收情况相近所致。3.3过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸对关岭母牛血清生化指标的影响动物机体的血清生化指标主要受日粮的组成结构、营养水平、饲料物理特性及特定的生长发育阶段及外部环境等因素的影响[21]。血清中的白蛋白由肝脏产生，并通过体内血液循环在体内起到营养细胞和维持血管内渗透压的作用；而球蛋白是由机体免疫器官产生，起到维持机体健康和提高机体免疫力的功能。总蛋白可以反映机体蛋白营养代谢水平和免疫功能[22]。本试验发现，过瘤胃氨基酸对关岭泌乳母牛血清中总蛋白、白蛋白及球蛋白含量差异不显著，说明在同一营养水平下氨基酸对关岭泌乳母牛的蛋白质代谢和机体免疫力无不良影响。在反刍动物瘤胃是将饲料中的营养物质经微生物分解、利用、合成为机体所需营养成分，特别是在合成非必需氨基酸和蛋白质代谢过程中在这一过程中需要经过谷丙转氨酶和谷草转氨酶提供的转氨酶，因此血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平对反刍动物的生长性能具有重要的作用[23]。血糖水平可以反映日粮能量水平，也可反映体内糖原分解和糖异生两者在机体内的动态平衡，在达到体平衡后机体将多余的血糖转化为脂肪进行能量储存[24]。本试验发现，过胃氨基酸对关岭泌乳母牛血清生化指标差异不显著，说明在同一营养水平下过瘤胃氨基酸对关岭泌乳母牛血清生化指标无不良影响。4结论本试验结果表明，日粮中添加5 g/(头·d) RP-Lys+15 g/(头·d) RP-Met对提高关岭母牛泌乳量、乳成分、犊牛生长性能具有较好的效果。