活性酵母菌是一般是以淀粉、糖蜜为原料通过液态发酵后从中分离的酵母活菌,经干燥后得到的固体产品,一般活菌数可达到2×1010个/g[1]。活性酵母菌具有安全、无污染、无残留等特点,可作为饲料添加剂在动物生产中应用[2-3]。活性酵母菌在体外处于休眠状态,被动物采食后进入肠道可以通过分泌消化酶,促进机体对饲料中养分的消化吸收[4-5];也可通过消耗肠道中的氧气调节肠道菌群比例,降低肠道pH值,促进肠道发育改善肠道健康,帮助机体建立健康稳定的肠道内环境[6-8]。研究发现,使用活性酵母菌可提高断奶仔猪的平均日增重[9]。在断奶仔猪日粮中添加0.5 g/kg的活性酵母菌饲喂2周后,仔猪腹泻率显著降低,血清中免疫球蛋白A含量明显提高[10]。活性酵母菌还可以降低仔猪肠道中大肠杆菌的繁殖,增加肠道黏膜中免疫球蛋白A水平含量,进而提高仔猪的肠道免疫功能[11]。研究发现,日粮添加0.5 g/kg的活性酵母菌可提高育肥猪对饲料中钙的消化率[12]。本研究探讨了活性酵母菌对断奶仔猪生长、机体抗氧化及免疫力的影响,为断奶仔猪无抗健康养殖及活性酵母菌在动物生产中应用提供参考。1材料与方法1.1试验设计选择32日龄的断奶仔猪200头,随机分成4组,每组5个重复,每个重复10头仔猪。对照组仔猪饲喂基础日粮,试验组1、试验组2和试验组3分别在基础日粮中添加0.25、0.50、1.00 g/kg的包被布拉迪活性酵母菌。包被布拉迪活性酵母菌活菌数为3×1010 CFU/g,由安琪酵母股份有限公司提供。预试期1 w,正式试验期28 d。试验基础日粮配方参考NRC(2012)中断奶仔猪营养需要标准设计,其原料组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.006.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米67.23消化能/(MJ/kg)14.04膨化玉米4.00粗蛋白/%18.55豆粕20.00粗灰分/%7.02发酵豆粕5.00赖氨酸/%1.24豆油1.00蛋氨酸+胱氨酸/%0.73食盐0.22苏氨酸/%0.88氯化胆碱0.15钙/%0.73磷酸氢钙1.05有效磷/%0.43石粉0.85预混料(4%)0.50注:1.预混料由江西大北农饲料有限公司提供。2.营养水平均为计算值。1.2测定指标及方法1.2.1生长性能试验第1 d和最后1 d仔猪空腹称重,记为初重和末重,准确记录养殖中各重复仔猪消耗的日粮及各重复腹泻仔猪头数和腹泻天数,用于计算仔猪的平均日增重、平均日采食量、料重比、腹泻率。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/试验天数(2)料重比=总采食量/总增重(3)腹泻率=腹泻头数/仔猪总头数×100%(4)1.2.2抗氧化指标试验第28 d,晨饲前每个重复中挑选2头仔猪,颈静脉采血,离心收集血清,检测总超氧化物歧化酶(T-SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢(CAT)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等抗氧化相关指标。试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。1.2.3免疫指标使用1.2.2采集的血清检测各组仔猪血清中免疫球蛋白及细胞因子含量,主要包括免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TFN-α)、D-乳酸(DLA)、二胺氧化酶(DAO)指标,检测方法参考上海酶联生物科技有限公司生产的试剂盒说明书进行。1.2.4肠道菌群试验结束时,每组选择5头仔猪屠宰,采集空肠和盲肠食糜用于检测肠道中大肠杆菌、乳酸杆菌、凝结芽孢杆菌数量。以上菌群检测方法采用平板计数法测定[13]。1.3数据统计与分析试验数据使用SAS 9.4软件进行方差分析,LSD法对组间数据进行两两比较。结果以“平均值±标准差”表示,P0.05表示差异显著,P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1包被活性酵母菌对仔猪生长性能和腹泻率的影响(见表2)由表2可知,试验组2和试验组3仔猪的末重比对照组提高了6.21%、8.13%(P0.05),平均日增重比对照组提高了11.11%、13.68%(P0.05);所有包被活性酵母菌组仔猪的料重比比对照组显著降低了4.89%、7.61%、9.24%(P0.05),腹泻率比对照组极显著降低53.67%、69.50%、73.61%(P0.01)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.006.T002表2包被活性酵母菌对仔猪生长性能和腹泻率的影响项目初重/(kg/头)末重/(kg/头)平均日采食量/[g/(头·d)]平均日增重/[g/(头·d)]料重比腹泻率/%死亡率/%P值0.8360.0390.1630.0430.0170.006—对照组7.80±0.3218.69±1.03b715.50±23.51388.93±18.04b1.84±0.11a3.41±0.26A2.00试验组17.65±0.4819.27±1.63ab726.95±32.74415.00±21.05b1.75±0.22ab1.58±0.28B0试验组27.75±0.7219.85±2.04a735.73±40.05432.14±18.59a1.70±0.15bc1.04±0.12C0试验组37.83±0.2720.21±2.18a740.55±36.91442.14±19.53a1.67±0.31c0.90±0.11C0注:同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P0.05),不同大写字母表示差异极显著(P0.01),相同字母或无字母表示差异不显著(P0.05);下表同。2.2包被活性酵母菌对仔猪血清抗氧化功能的影响(见表3)由表3可知,试验组2和试验组3仔猪血清T-SOD活性、T-AOC均显著高于对照组(P0.05),各组MDA、GSH-Px、CAT等指标差异均不显著(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.006.T003表3包被活性酵母菌对仔猪血清抗氧化功能的影响项目MDA/(μmol/L)T-SOD/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)CAT/(U/mL)T-AOC/(U/mL)P值0.0930.0180.3170.6380.025对照组1.47±0.12184.21±10.34b263.98±13.883.10±0.158.53±0.47b试验组11.33±0.18197.40±13.28ab274.08±14.293.54±0.129.04±0.51ab试验组21.30±0.11231.94±15.28a281.04±12.013.77±0.1110.18±0.73a试验组31.26±0.17252.39±20.03a288.39±16.303.65±0.1910.72±0.63a2.3包被活性酵母菌对仔猪免疫功能的影响(见表4)由表4可知,各活性酵母菌组仔猪血清IL-10含量显著高于对照组(P0.05),且试验组2和试验组3仔猪血清IL-10含量显著高于试验组1(P0.05);试验组2和试验组3仔猪血清TNF-α含量显著低于对照组和试验组1(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.006.T004表4包被活性酵母菌对仔猪免疫功能的影响项目IL-2/(ng/L)IL-6/(ng/L)IL-10(ng/L)TNF-α/(ng/L)IFN-γ/(ng/L)DLA/(μmol/L)DAO/(U/L)P值0.2810.1490.0270.0390.8620.0870.318对照组112.74±5.3965.20±2.3222.85±1.05c169.54±8.05a179.05±10.777.65±0.544.85±0.21试验组1116.30±6.2865.97±2.8624.51±1.59b154.97±6.93a183.06±11.427.02±0.494.63±0.42试验组2120.30±7.2164.80±2.0225.90±2.64a137.09±7.55b185.50±13.656.83±0.444.79±0.59试验组3118.47±5.3964.08±2.5526.64±3.07a142.30±8.07b189.7±014.096.59±0.494.73±0.502.4包被活性酵母菌对仔猪肠道菌群的影响(见表5)由表5可知,试验组2和试验组3仔猪盲肠中的乳酸菌数量显著高于对照组(P0.05),所有包被活性酵母菌组仔猪盲肠大肠杆菌数量显著低于对照组(P0.05),酵母菌数量显著高于对照组(P0.05)。所有包被活性菌酶组仔猪空肠大肠杆菌数量显著低于对照组(P0.05),酵母菌数量显著高于对照组(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.006.T005表5包被活性酵母菌对仔猪肠道菌群的影响项目盲肠空肠乳酸菌大肠杆菌酵母菌乳酸菌大肠杆菌酵母菌P值0.0380.0110.0180.0820.0150.013对照组6.74±0.21b6.04±0.14a3.28±0.11c5.45±0.435.52±0.32a3.67±0.13c试验组17.03±0.48b5.21±0.23b4.38±0.43b5.88±0.324.64±0.18b4.84±0.41b试验组27.84±0.43a4.57±0.28c5.29±0.31a6.21±0.303.87±0.42c5.43±0.36a试验组37.94±0.54a4.6±0.25c6.04±0.47a6.43±0.433.47±0.26c6.31±0.32algCFU/g3讨论3.1包被活性酵母菌对仔猪生长性能的影响仔猪的生长性能及机体健康与后期的生长发育及养殖经济效益密切相关。仔猪由于消化机功能较弱,容易发生营养性腹泻,是困扰养殖业的主要问题。在仔猪饲料中添加适量的益生菌就可改善调节仔猪肠道功能,改善腹泻情况。本试验中,日粮中添加0.50、1.00 g/kg的包被活性布拉迪酵母菌使仔猪的平均日增重分别比对照组提高了11.11%、13.68%;添加0.25、0.50、1.00 g/kg的包被活性酵母菌使仔猪的料重比显著降低了4.89%、7.61%、9.24%,腹泻率极显著降低了53.67%、69.50%、73.61%。因此,适量的包被布拉迪活性酵母菌可改善仔猪的肠道健康及生长性能,避免仔猪死亡。王铎等[14]研究了酿酒活性干酵母(1、2 g/kg)和布拉迪干酵母(0.5、1.0 g/kg)对断奶仔猪生长、免疫及养分利用率的影响,发现所有试验组断奶仔猪的采食量和日增重均较对照组显著提高,且1 g/kg南京活性干酵母和0.5 g/kg布拉迪干酵母可使仔猪的腹泻率减低1.45%和1.44%。肖旭[15]研究发现,在哺乳母猪和断奶仔猪日粮中添加适量的活性酵母菌均可显著改善仔猪的生长性能。Kiros等[16]研究发现,在断奶仔猪日粮添加活性酵母菌可以明显提高断奶仔猪的平均日增重。因此,适量的活性酵母菌可以提高断奶仔猪的生长性能,有效降低腹泻率。活性酵母菌可以通过帮助仔猪机体建立健康稳定的肠道内环境,降低引发腹泻的大肠杆菌等数量改善肠道健康,通过分泌大量的消化酶提高机体对日粮中养分的消化吸收利用率来提高生长性能[17-19]。3.2包被活性酵母菌对仔猪抗氧化功能的影响当动物机体受到外界一些不利因素,如日粮改变、养殖场地更换等会导致机体产生应激,使机体的细胞膜受损,生理功能紊乱,严重影响机体的健康,进而影响生长性能[20-21]。本试验的断奶仔猪处于断奶保育阶段,此时机体极易受到氧化应激[22]。本研究结果发现,断奶仔猪日粮中添加0.5、1.0 g/kg的包被布拉迪活性干酵母可以显著提高仔猪血清T-SOD活性、T-AOC,表明活性酵母菌显著增强了机体的抗氧化能力。马嘉瑜等[23]研究发现,使用3%的酵母菌可使断奶仔猪血清中的SOD活性显著提高了72.87%,GSH-Px活性提高了63.16%。Yang等[24]研究发现,酵母菌可使断奶仔猪血清T-AOC增强,提高血清SOD活性,有效降低脂质氧化物(丙二醛)的活性。活性酵母菌改善机体抗氧化能力可能是因为其为机体提供了营养,且改善了肠道健康,增强机体的抗病力及抗应激能力[25]。目前,关于活性酵母菌改善动物机体抗氧化功能的研究较少,其作用机制有待进一步研究。3.3包被活性酵母菌对仔猪免疫功能的影响仔猪在断奶后机体免疫系统尚未建立完全,因此日粮的改变会导致机体产生免疫应激,使血清中TNF-α等促炎因子含量升高。动物体内的免疫细胞因子水平可反映机体的免疫力,促炎因子与抗炎因子处于动态平衡。本研究中,所有活性酵母菌组仔猪血清IL-10含量显著高于对照组,0.5、1.0 g/kg包被布拉迪活性酵母菌组仔猪血清TNF-α含量显著低于对照组,表明适量的活性酵母菌提高了抗炎因子水平,降低促炎因子水平,调节了机体的炎症反应。王铎等[14]研究表明,日粮中添加0.5 g/kg的活性布拉迪酵母可使断奶仔猪血清中免疫球蛋白M(IgM)含量提高34%。高亮轲等[26]研究表明,在奶牛产后使用5、10 g/kg的活性酵母菌可使奶牛血清白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-1β(IL-1β)含量显著降低。在断奶仔猪饲料中添加产朊假丝酵母可调节仔猪血清中的抗炎因子白细胞介素-10(IL-10)和促炎因子TNF-α的含量,降低机体的炎症反应[23]。活性酵母菌提高动物机体的免疫力的原因可能是其可刺激体内的白细胞、中性粒细胞等免疫细胞,进而激活了免疫应答[27]。3.4包被活性酵母菌对仔猪肠道菌群的影响仔猪肠道菌群的平衡有利于机体对饲料中营养物质的消化吸收,降低发生疾病的概率[28-29]。本研究发现,仔猪日粮中添加活性酵母菌显著改善了仔猪肠道菌群比例,显著提高了乳酸菌及酵母菌数量,显著降低了大肠杆菌数量,降低了由大肠杆菌引发的腹泻等问题。徐杰等[8]研究了包被活性酵母对仔猪肠道菌群及生长性能的影响,发现500 g/t的包被活性酵母显著提高了仔猪各肠道中酵母菌数量,降低了回肠中大肠杆菌数量,但对乳酸菌数量未产生显著性影响。彭全辉等[30]研究了活性干酵母对肉牛瘤胃菌群及养分消化率的影响,结果发现,2 g/(头·d)的活性干酵母通过调节瘤胃真菌菌群的比例,提高了子囊菌门、新丽鞭毛菌门和担子菌门的相对丰度,改善了机体对饲料中养分的消化率。张翔飞[31]发现,肉牛采食活性酵母后,明显提高了瘤胃中纤维降解菌数量,进而改善机体的消化吸收能力。以上研究均表明,在动物生产中使用适量的酵母菌可显著改变胃肠道中菌群比例,调节肠道健康,促进机体的消化吸收能力,主要是由于活性酵母菌促进了胃肠道中有益菌增殖,抑制有害菌繁殖,从而建立了稳定健康的胃肠道内环境。4结论本研究结果表明,断奶仔猪饲喂适量的包被布拉迪活性酵母菌可提高生长性能、抗氧化性能及免疫力,改善肠道菌群结构,且包被布拉迪活性酵母菌的适宜添加水平为0.50 g/kg。

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