铜是动物机体必需的微量元素之一，是多种酶的组成成分（如铜蓝蛋白、酪氨酸酶、铜锌超氧化物歧化酶等），直接参与机体造血、免疫、毛皮发育等生长活动[1-2]。Braude[3]发现，猪饲喂高铜饲粮可以显著提高生产性能。国内外学者在猪、鸡等多种动物的研究中也发现相似结论，并确定最适饲粮中铜水平[4-7]。铜蓝蛋白（CP）与铜锌超氧化物歧化酶（Cu-Zn SOD）在清除体内自由基方面有着重要作用，铜可以提高血清中铜蓝蛋白与铜锌超氧化物歧化酶的活性。赵汝等[8]在雏鸡的研究中发现，饲粮铜水平为100~200 mg/kg时，血清内铜蓝蛋白与铜锌超氧化物歧化酶含量显著提升。但是过量摄入铜会对机体造成较大危害[9-10]。Wu等[11]报道，水貂饲粮中铜含量为32 mg/kg时，水貂的生长性能与抗氧化能力得到极大改善。试验研究添加不同剂量铜对育成期乌苏里貉生长性能及血清生化指标的影响，探讨乌苏里貉饲粮中适宜的铜添加水平，为貉生产实践提供参考。1材料与方法1.1试验动物试验在农业农村部长白山野生生物资源重点野外科学观测试验站进行。随机选取（60±5）日龄健康、体重相近雄性乌苏里貉105只，随机分成7组，每组15个重复，每个重复1只。1.2试验设计与试验饲粮试验采用单因素试验设计，分别添加不同剂量蛋氨酸螯合铜（C10H20S2N2O4Cu)，使饲粮铜水平分别为1.6（I）、21.6（Ⅱ）、31.6（Ⅲ）、41.6（Ⅳ）、51.6（Ⅴ）、61.6（Ⅵ）、201.6（Ⅶ）mg/kg（以铜元素计）。试验参考狐NRC（1982）[12]、张显华等[13]试验、白玉妍等[14]试验及大中型养殖场中生产实践中应用效果较好的乌苏里貉育成期各营养物质需要量配制貉基础日粮，基础日粮组成及营养水平见表l。1.3饲养管理所有试验动物常规免疫、单笼饲养，每日7：00与15：30各饲喂1次，自由饮水，每日每食定量饲喂。预饲期7 d，正式试验期47 d。1.4测定指标及方法正式试验第1、18、33、47 d早晨，称量乌苏里貉空腹体重（BW），计算每组的平均日增重（ADG）。平均日增重=(末重-初重)/饲养天数(1)饲养试验结束时，每组随机选取8只健康乌苏里貉，称重后，后肢静脉采血10 mL置于促凝采血管中，3 500 r/min离心8 min，将分离出的血清-80 ℃保存。血清中的血糖（GLU）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）的测定采用自中生北控生物科技股份有限公司试剂盒检测，使用VITALIB-E全自动生化分析仪测定。血清中铜锌超氧化物歧化酶（Cu-Zn SOD）、铜蓝蛋白（CP）和总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力的测定采用南京建成生物科技有限公司试剂盒检测，使用紫外分光光度计（Specord 50，Analytik Jena AG，德国）测定酶活力。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.05.026.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00膨化玉米粉42.00代谢能/（MJ/kg）14.57玉米胚芽粕26.50粗蛋白/%23.74肉骨粉6.50粗脂肪/%8.82鱼粉6.00赖氨酸/%1.42膨化大豆4.40蛋氨酸/%0.75鸡肉粉4.00胱氨酸/%0.29豆粕2.90钙/%1.75豆油4.20磷/%1.13磷酸二氢钙1.30铜/（mg/kg）1.60赖氨酸0.50蛋氨酸0.40食盐0.30预混料1.00注：1.每千克预混料含：VA 1 000 000 IU、VD3 2 000 000 IU、VE 6 000 IU、VB1 600 mg、VB2 800 mg、VK3 100 mg、VC 40 000 mg、烟酸4 000 mg、泛酸80 mg、胆碱30 000 mg、Fe 8 200 mg、Mn 1 200 mg、Zn 5 200 mg、I 50 mg、Se 20 mg、Co 50 mg。2.代谢能为计算值，其余为实测值。1.5数据统计与分析试验数据采用SAS 9.4进行单因素方差分析（One way ANOVA），采用Duncan氏法进行显著性检验。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1饲粮铜水平对育成期乌苏里貉生产性能的影响（见表2、表3）由表2可知，饲粮铜水平对各组育成期乌苏里貉体重差异不显著。由表3可知，34~47 d，Ⅰ组乌苏里貉的平均日增重显著低于其余各组，Ⅱ组获得最大平均日增重。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.05.026.T002表2饲粮铜水平对育成期乌苏里貉生产性能的影响组别第1 d第18 d第33 d第47 dⅠ组2 842.86±832.233 814.29±367.104 407.14±320.715 250.00±316.23Ⅱ组2 831.25±263.143 806.25±197.194 301.25±222.035 487.50±314.81Ⅲ组2 833.33±338.003 758.33±356.654 358.33±403.865 470.83±477.43Ⅳ组2 833.33±256.173 888.89±260.744 500.00±259.815 666.67±291.55Ⅴ组2 830.00±330.993 945.00±333.714 570.00±330.195 660.00±281.66Ⅵ组2 818.75±311.613 837.50±216.714 475.00±273.865 568.75±396.36Ⅶ组2 827.27±227.343 740.91±236.454 395.45±250.455 504.55±245.41注：同列数据肩标无字母或相同小写字母表示差异不显著(P0.05)，不同小写字母表示差异显著(P0.05)；下表同。g10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.05.026.T003表3饲粮铜水平对育成期乌苏里貉不同阶段平均日增重的影响组别第1~18 d第19~33 d第34~47 dⅠ组53.97±6.9639.52±5.5960.20±7.83bⅡ组54.17±9.1533.00±5.6684.73±8.43aⅢ组51.39±7.0640.00±7.3979.46±8.22aⅣ组58.64±5.0940.74±5.2183.33±7.58aⅤ组61.94±7.0641.67±6.5377.86±7.86aⅥ组56.60±8.1242.50±7.9278.13±11.84aⅦ组50.75±6.2243.64±4.0779.22±7.29ag2.2饲粮铜水平对育成期乌苏里貉血清指标的影响（见表4、表5）由表4可知，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组乌苏里貉血清中碱性磷酸酶活性显著高于其他各组（P0.05），Ⅲ、Ⅶ组乌苏里貉血清碱性磷酸酶活性显著高于Ⅰ组（P0.05）。Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ组各组乌苏里貉血清乳酸脱氢酶活性差异显著（P0.05），且均显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组（P0.05）。Ⅶ组乌苏里貉血清谷丙转氨酶活性显著高于其余各组（P0.05））。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.05.026.T004表4饲粮铜水平对育成期乌苏里貉血清生化指标的影响组别血糖/（mmol/L）碱性磷酸酶/（U/L）乳酸脱氢酶/（U/L）谷丙转氨酶/（U/L）谷草转氨酶/（U/L）Ⅰ组2.87±0.5339.39±6.10c194.71±12.16d38.78±5.66b54.31±12.82Ⅱ组3.35±0.2944.07±5.98bc190.40±19.27d41.40±8.88b56.31±14.14Ⅲ组3.23±0.4451.03±6.31ab189.12±7.91d38.74±10.61b47.85±8.84Ⅳ组3.09±0.3857.13±9.53a191.79±17.38d36.07±9.72b61.59±15.06Ⅴ组2.89±0.6257.91±4.27a216.61±13.99c36.04±4.97b57.95±15.25Ⅵ组2.75±0.4855.76±4.49a241.47±17.00b43.17±14.49b61.74±12.01Ⅶ组2.67±0.3647.38±6.93b258.85±18.69a54.34±7.48a59.33±13.90由表5可知，Ⅵ、Ⅶ组乌苏里貉血清总超氧化物歧化酶活性显著高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组（P0.05），Ⅰ组乌苏里貉血清总超氧化物歧化酶活性显著低于各组（P0.05）。Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ组乌苏里貉血清铜锌超氧化物歧化酶活性显著高于Ⅰ组（P0.05）。Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ组乌苏里貉血清铜蓝蛋白含量显著高于Ⅳ组，Ⅳ组血清铜蓝蛋白含量显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.05.026.T005表5饲粮铜水平对育成期乌苏里貉血清抗氧化指标的影响组别总超氧化物歧化酶铜锌超氧化物歧化酶铜蓝蛋白Ⅰ组115.38±14.82c47.19±2.80b18.00±1.48cⅡ组139.91±5.27b49.15±4.55ab19.06±1.65cⅢ组139.91±6.67b49.24±4.47ab18.90±0.77cⅣ组136.36±5.72b51.04±2.24ab21.59±2.03bⅤ组138.57±5.93b53.35±4.16a24.16±1.73aⅥ组156.51±2.22a53.46±3.80a23.90±1.50aⅦ组153.53±6.05a53.56±3.48a24.11±1.93aU/mL3讨论3.1铜水平对育成期乌苏里貉生产性能的影响张永翠等[6]发现，獭兔饲粮铜水平44.56~83.58 mg/kg时获得最优的平均日增重与最大毛皮面积。但在鹅的研究中发现，高铜对鹅平均日增重有负面影响，对体重方面影响不显著[7]。本试验发现，饲粮铜水平对育成期乌苏里貉不同时间的体重无显著影响，但是随着铜添加水平的增加，体重呈现先升高再降低的趋势，表明适宜的铜水平对有促生长作用，但是高铜会抑制其生长效率。根据不同时间体重的对比，育成前期的体重与平均日增重的变化不大，但是育成后期的添加组的平均日增重出现显著性升高，表明铜在体内发挥作用需要在体内积累一定含量。这与李凡等[15]和陈志勇等[16]结果相似。适当提升饲粮中铜含量可以提升某些酶的活性。本试验中，体重的升高可能与提高含铜酶如铜锌超氧化物歧化酶的活性提高有关，铜锌超氧化物歧化酶的活性提高使机体的抗氧化能力提升，机体清除自由基能力提高，免疫能力增强，从而更利于机体的生长发育[17-18]。但是，高铜对貉的生长反而有抑制效果，可能是由于铜的吸收与锌、锰元素产生拮抗作用有关，导致继发性锰、锌的缺乏，破坏了机体的稳定性所导致[19-20]。在毛皮动物生产中发现，冬毛期体重与育成期体重呈现正相关，而冬毛期取得更大体重有利于获得最大面积皮张，结合铜对平均日增重的影响，饲粮中添加适宜的铜有利于提升经济效益。3.2铜水平对育成期乌苏里貉血清指标的影响在生理性骨骼发育阶段，血清碱性磷酸酶活力会显著增高[21]。乳酸脱氢酶主要储存与内脏中，当内脏细胞破损后，会释放大量的乳酸脱氢酶到血清中，使血清中乳酸脱氢酶含量上升[22]。血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性可以反映肝脏健康情况的重要指标。肝脏受损的机体血清中的谷草转氨酶与谷丙转氨酶活性会显著升高[23]。邓科敏[24]研究表明，高铜会使鹅的血清乳酸脱氢酶显著升高。研究发现，饲喂高铜饲粮会显著影响鼠、兔血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性[25-26]。本试验中，血清碱性磷酸酶含量有显著变化，表明饲粮中铜添加水平对貉的骨生长发育有促进作用。血清中乳酸脱氢酶随饲粮铜水平升高而变化，可能会对内脏器官代谢产生负担，使内脏细胞破损导致。当添加水平为200 mg/kg时，血清中谷丙转氨酶显著升高，说明高铜饲喂对动物肝脏造成伤害。总超氧化物歧化酶的主要功能是清除体内自由基，其在真核生物中包含2种形式，一种为铜锌超氧化物歧化酶，主要分布于机体细胞浆中；另一种是含锰金属辅基的称（Mn-SOD），存在于的线粒体。铜锌超氧化物歧化酶是机体防御氧化损伤重要金属酶的，对超氧阴离子自由基的清除有着重要作用[27]。铜蓝蛋白在血液中大量存在，具有抗氧化性、抑制脂类自身氧化、清除体内自由基的功能[28]。张永翠[6]等报道，随着饲粮铜水平的升高，兔血清中铜锌超氧化物歧化酶与铜蓝蛋白含量也随之升高。高原等[29]也曾报道，高铜饲粮会提高猪血清铜锌超氧化物歧化酶与铜蓝蛋白含量。本试验中，血清中总超氧化物歧化酶、铜锌超氧化物歧化酶与铜蓝蛋白含量随着铜添加水平的升高而升高，最后趋于平稳。饲粮适宜铜水平可以增强育成期乌苏里貉的抗氧化功能，自由基消除能力提高。本试验中，饲粮铜可以通过调节抗氧化酶的活性提升免疫力，从而可以提升貉的生长性能，但是铜过量会增强其他元素的拮抗作用4结论在育成期乌苏里貉日粮中添加30~50 mg/kg蛋氨酸铜时获得较高的平均日增重，抗氧化能力有较高的提升。为减少高铜对环境的影响，实践中推荐添加量为30 mg/kg。