罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii）具有生长速度快、营养价值高、抗病力强等特点，已成为我国主要的淡水对虾养殖品种之一[1]。2021年我国罗氏沼虾产量达171 263 t，位居我国淡水虾产量第4位[2]。猪肉粉（PM）是以油脂提炼新鲜的猪下杂肉后得到的固态蛋白质物质。猪肉粉的粗脂肪含量为5%~10%，粗蛋白含量为55%~65%[3]，除蛋氨酸和赖氨酸含量较低外，其余必需氨基酸含量相对平衡[4]。在鲶鱼养殖中，与其他替代植物蛋白原料相比，猪肉粉有更好的促生长效果[5]。邱红等[3]研究发现，猪肉粉替代25%的鱼粉对凡纳滨对虾的生长和饲料效率无显著影响。朱筛成等[6]用含有猪肉粉的复合蛋白替代鱼粉，发现替代水平高于33%时会显著降低中华绒螯蟹的生长性能和躯体营养物质的积累。Hernández等[7]研究发现，猪肉粉替代鱼粉会降低罗非鱼的生长速度，影响饲料的消化率。本试验以罗氏沼虾为研究对象，探究猪肉粉替代鱼粉对其生长性能、饲料利用和免疫性能的影响，确定猪肉粉替代鱼粉的最适水平，为制作低成本的优质饲料提供参考。1材料与方法1.1试验材料罗氏沼虾苗来自恩平罗氏沼虾遗传选育项目组，试验在海大集团恩平育种中心进行。选取6组等蛋白（占干物质43%）等脂肪（占干物质7%）的饲料，其组成及营养水平见表1。P0组、P5组、P10组、P15组、P20组、P25组分别用猪肉粉等蛋白替代0、5%、10%、15%、20%、25%的鱼粉。将原料混合均匀后放入压条机压条，制成直径1.2 mm的饲料，放入制粒机制粒。制粒后置入熟化桶内熟化30 min，25 ℃阴干，过筛，于-20 ℃保存。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.011.T001表1试验饲料组成及营养水平项目P0组P5组P10组P15组P20组P25组原料组成秘鲁鱼粉25.0023.0021.0019.0017.0015.00鸡肉粉10.0010.0010.0010.0010.0010.00猪肉粉02.204.406.608.8011.00虾膏2.002.002.002.002.002.00鱿鱼膏2.502.502.502.502.502.50豆粕32.4532.3532.2532.1532.0531.95面粉22.0022.0022.0022.0022.0022.00饲用鱼油0.500.400.300.200.100豆油1.501.501.501.501.501.50大豆磷脂油1.001.001.001.001.001.00磷酸二氢钙1.501.501.501.501.501.50膨润土0.350.280.210.140.070氯化胆碱0.200.200.200.200.200.20L-赖氨酸盐酸盐00.040.080.120.160.20DL-蛋氨酸00.030.060.090.120.15多维多矿1.001.001.001.001.001.00合计100.00100.00100.00100.00100.00100.00营养水平水分7.477.417.517.467.347.22粗蛋白41.2841.1241.3441.2641.3741.19粗脂肪6.586.406.516.566.426.43赖氨酸2.262.262.272.282.292.29蛋氨酸0.770.770.770.770.770.77苏氨酸1.491.481.471.471.461.45注：1.秘鲁进口鱼粉由广东华昇贸易有限公司提供，粗蛋白68.0%、粗脂9.0%。2.猪肉粉由福建中肽生物科技有限公司提供，粗蛋白61.9%、粗脂肪12.4%。3.多维多矿为每千克饲料提供：一水硫酸亚铁30.41 mg、一水硫酸铜41.91 mg、一水硫酸锌274.34 mg、一水硫酸镁284.47 mg、碘酸钙6.14 mg、亚硒酸钠0.44 mg、硫酸钴2.89 mg、VA 12 000 IU、核黄素40 mg、VB12 0.02 mg、VB1 50 mg、VK 40 mg、VC 250 mg、叶酸10 mg、泛酸钙100 mg、烟酸120 mg、生物素1 mg、VD3 2 000 IU、VE 120 mg、盐酸吡哆醇60 mg。4.营养水平均为实测值。%1.2试验设计及饲养管理试验正式开始前，罗氏沼虾使用相同水平蛋白和脂肪的商业饲料暂养投喂20 d。挑选初重（1.09±0.03）g、健康有活力的虾900尾，随机分为6组，每组3个重复，每个重复50尾虾。试验在室外土塘内的试验系统中进行，由18个网箱（长80 cm×宽80 cm×高60 cm）组成，网箱内放有人工水草供虾栖息。每日投喂3次（8：00、12：00、16：30），餐后1.5 h观察摄食情况，根据摄食情况调整投喂量，记录每天的摄食量，试验期90 d。试验前期需要对饲料进行粉碎，过24目筛网进行投喂，方便虾进食，后期逐渐转料至正常颗粒饲料。试验期间，水中溶解氧含量为5.8~6.8 mg/L，氨氮含量为0~0.2 mg/L，水温29~31 ℃。时刻注意观察虾的活动状态，及时记录死亡情况，并清理死虾避免活虾误食。1.3样品采集生长试验期间每周进行1次称重，记录虾生长情况。生长试验结束后，统计每个玻璃缸虾存活尾数、总重以及投喂的饲料总重等，计算存活率、增重率、饲料系数等。取样前将虾饥饿24 h，每组中随机取10尾虾于-20 ℃保存，用于体组成分析，另取10条虾用肝素钠浸润的1 mL针管头部取血，于4 ℃，3 000 r/min下离心15 min，吸取上清液血清，-80 ℃保存。再取6尾虾测量其体重、体长和肝胰腺重量，用于计算肝体比。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能增重率(WG)=100%×(末重-初重)/初重 (1)肝体比(HSI)=100%×肝胰腺重(g)/虾重(g)(2)特定生长率(SGR)=100%×(ln末重-ln初重)/养殖天数(3)饲料系数(FCR)=摄食量(g)/增重(g)(4)蛋白质效率(PER)=增重(g)/蛋白质投喂量(g)(5)1.4.2虾体组成采用杜马斯燃烧法快速定氮仪（Elementar，德国）测定虾的粗蛋白，采用全自动脂肪仪（ANKOMx715 自动脂肪仪，美国）测定粗脂肪含量。全虾样品在烘箱中125 ℃烘干24 h，按照减重法计算水分含量。1.4.3血清生化指标采用ELISA试剂盒（南京建成生物工程研究所）测定血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、溶菌酶（LZM）、血清免疫球蛋白M（IgM）、碱性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）水平。1.5数据统计与分析数据采用SPSS 23.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较，结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1猪肉粉替代鱼粉对罗氏沼虾生长性能和饲料利用的影响（见表2）由表2可知，猪肉粉替代20%及以上鱼粉时，罗氏沼虾的增重率降低，饲料系数提高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.011.T002表2猪肉粉替代鱼粉对罗氏沼虾生长性能和饲料利用的影响组别初重/g末重/g增重率/%特定生长率/(%/d)存活率/%肝体比/%饲料系数蛋白质效率/%P0组1.08±0.0329.90±0.40a2 753.30±40.86a3.68±0.02a92.45±0.024.14±0.091.56±0.02c1.36±0.02abP5组1.09±0.0329.57±0.08a2 715.60±8.00a3.67±0.01a90.67±0.034.13±0.111.58±0.02c1.38±0.03aP10组1.09±0.0228.92±0.42ab2 664.10±44.40ab3.65±0.02ab90.67±0.044.13±0.071.62±0.03b1.34±0.02abP15组1.09±0.0328.55±0.72ab2 624.60±66.60ab3.63±0.03ab91.82±0.014.13±0.081.65±0.02ab1.35±0.03abP20组1.09±0.0127.74±1.55b2 542.30±135.90b3.59±0.06bc88.60±0.044.15±0.141.67±0.01a1.33±0.03abP25组1.09±0.0326.30±0.50c2 416.10±53.20c3.54±0.03c90.15±0.034.20±0.081.67±0.02a1.32±0.02b注：同列数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著（P0.05），不同字母表示差异显著（P0.05）；下表同。2.2猪肉粉替代鱼粉对罗氏沼虾体组成的影响（见表3）由表3可知，P5组罗氏沼虾全虾粗脂肪含量显著低于P15组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.011.T003表3猪肉粉替代鱼粉对罗氏沼虾体组成的影响组别水分粗蛋白粗脂肪灰分P0组72.60±0.5618.67±0.473.13±0.15ab5.02±0.27P5组72.77±0.6718.63±0.213.06±0.21b5.15±0.10P10组72.25±0.4718.83±0.503.23±0.15ab5.06±0.23P15组72.80±0.6118.38±0.383.30±0.10a5.31±0.25P20组72.13±0.8118.53±0.213.27±0.21ab5.23±0.12P25组72.87±0.4018.74±0.253.29±0.12ab5.14±0.18%2.3猪肉粉替代鱼粉对罗氏沼虾血清生化指标的影响（见表4）由表4可知，P25组虾血清甘油三酯含量显著高于P0组和P5组（P0.05）。P0组、P5组、P10组虾血清LZM、IgM和AKP水平显著高于P25组(P0.05)。而猪肉粉对罗氏沼虾血清总胆固醇和ACP水平无显著影响。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.011.T004表4猪肉粉替代鱼粉对罗氏沼虾体血清生化指标的影响组别总胆固醇/(mmol/L)甘油三酯/(mmol/L)LZM/(μg/L)IgM/(mg/L)AKP/(U/L)ACP/(U/L)P0组0.77±0.040.62±0.03c129.70±4.73a1 286.00±38.51a54.38±4.28a30.00±5.72P5组0.75±0.060.63±0.02c132.30±3.06a1 243.30±41.97a54.44±3.91a31.45±5.51P10组0.79±0.040.65±0.07abc127.10±2.11a1 214.20±34.12a53.41±1.99a28.84±1.57P15组0.78±0.030.65±0.02ab119.40±5.86b1 171.70±94.59abc52.63±6.84a33.48±1.39P20组0.78±0.080.68±0.04ab119.30±4.04b1 072.10±70.03bc48.41±2.48ab29.40±2.25P25组0.76±0.020.69±0.05a109.90±2.52c996.60±101.80c40.38±4.87b27.06±4.363讨论3.1猪肉粉替代鱼粉对罗氏沼虾生长性能和饲料利用的影响Lim等[8]研究表明，猪肉粉蛋白质和脂质含量较高，适用于配制某些肉食性鱼类的饲料。但由于猪肉粉氨基酸比例不平衡，消化率低，替代鱼粉比例过高后会影响饲料的适口性[9-11]。在本研究中，猪肉粉替代鱼粉超过20%时，罗氏沼虾增重率显著性降低，饲料系数显著提高。Huang等[12]发现，猪肉粉替代鱼粉水平超过30%时，会影响卵形鲳鲹的生长性能，且会降低饲料效率。Hernandez等[13]发现，猪肉粉替代40%的鱼粉会降低凡纳滨对虾的生长速度。Lee等[14]研究发现，猪肉粉的替代比例低于20%时不会对许氏平鲉的生长发育产生影响。以上研究结果显示，猪肉粉替代效果在不同鱼类品种中替代比例有较大差异，一方面是由于不同种类的水产动物对猪肉粉的利用能力相差较大；另一方面可能是因为饲料基础配方里鱼粉含量差异造成的。此前已有研究表明，当饲料中鱼粉含量越高时，猪肉粉可替代的鱼粉比例越高[15]。有研究指出，其他动物蛋白源替代鱼粉造成生长缓慢的原因可能是由于饲料中鱼油低，不饱和脂肪酸含量降低引起[16]，猪肉粉中含有过多的饱和脂肪酸也是造成罗氏沼虾生长性能下降的原因[17]。本试验未发现猪肉粉替代鱼粉对罗氏沼虾存活率和肝体比有显著影响。这与邱红等[3]和Hernández等[7]在凡纳滨对虾中的研究结果一致。常国亮等[18]在中华绒螯蟹中观察到饲料中不饱和脂肪酸的下降会导致HSI略有上升，与本文研究结果一致。然而，猪肉粉替代鱼粉比例超过20%时会使罗氏沼虾饲料系数显著高于其他组，这在芙蓉鲤鲫[19]和大口黑鲈[20]的研究中也有发现。当猪肉粉替代25%的鱼粉时，饲料蛋白质效率也会显著低于其他组，这是由于猪肉粉的蛋白质和氨基酸消化率低于鱼粉导致的[21]。3.2猪肉粉替代鱼粉对罗氏沼虾体组成的影响本试验中，不同猪肉粉替代水平对罗氏沼虾全虾水分，粗蛋白和灰分含量无显著性影响，这一结果与凡纳滨对虾[3]和大口黑鲈[20]的研究结果相同。然而，P15组虾全虾粗脂肪升高，可能是由于猪肉粉脂肪含量比鱼粉高，且其中多为饱和脂肪酸，不利于脂肪的代谢和利用，造成了脂肪的过量堆积[22]。3.3猪肉粉替代鱼粉对罗氏沼虾血清生化指标的影响研究发现，饲料中过高的饱和脂肪酸会造成甘油三酯的堆积[22]。本试验中，P25组虾血清甘油三酯高于其他各组，可能是由于猪肉粉中脂肪含量较高，饱和脂肪酸过多导致[23]。免疫球蛋白和溶菌酶在识别和清除潜在病原体的补体系统、先天免疫和适应性免疫方面起着关键作用[24]。本试验发现，猪肉粉替代鱼粉比例过高时，会造成罗氏沼虾血清免疫球蛋白和溶菌酶水平下降。这与Wang等[25]研究结果相同。ACP和AKP是参与生物体生长代谢、保持内环境稳定及维持机体健康所必需的酶，对生物体的免疫作用具有重要意义[26-28]。本试验中，猪肉粉替代25%鱼粉组罗氏沼虾血清AKP活性低于其他组。饲料中添加过量的猪肉粉或其他猪副产品原料均会造成水产动物抗氧化和免疫性能的下降[29-30]。4结论以增重率为评价指标，罗氏沼虾配合饲料中猪肉粉替代鱼粉的比例不宜超过15%。猪肉粉替代鱼粉比例过高会造成罗氏沼虾饲料系数降低，血清甘油三酯含量上升，免疫性能下降，对罗氏沼虾的健康具有负面影响。