在畜牧业生产中，抗生素可用于治疗动物疾病和提高动物生产性能，但抗生素剂量过大或使用方法不当等均可导致动物中毒，损害机体组织器官，严重时甚至死亡[1]，影响养殖场的经济效益。针对中毒，一般采取排毒、保肝、补液及调节机体的钾钠平衡等方法进行治疗[2]。肖龙根等[3]报道，肉牛口服抗生素中毒后采取维生素C（VC）、葡萄糖、氯化钠和甲硝唑等进行治疗取得了较好的效果；中毒严重的牛需要配合微生态制剂和接种健康牛的瘤胃液，但未对效果进行详细说明。菌酶复合物可以提高奶牛的生产性能和饲料消化率[4]，但菌酶复合物治疗抗生素中毒奶牛效果的报道比较少见。因此，本试验研究维生素C配合葡萄糖以及菌酶复合物配合葡萄糖对口服抗生素中毒奶牛血常规、血清生化指标、免疫功能及抗氧化功能的影响，为奶牛的健康养殖提供参考。1材料与方法1.1试验动物试验所用奶牛20头，入栏15 d，由山东省菏泽市东明县王菜园村养殖场提供。由于运输应激出现轻微咳嗽，口服抗生素盐酸多西环素可溶性粉、泰妙菌素可溶性粉、卡巴匹林钙等制剂，3 d后出现食欲减少、反刍迟缓、饮欲增强、尿少色暗黄、粪便普遍变稀等症状。1.2试剂与仪器菌酶复合物（水分≤10%）购自河南省康星常笑动物药业有限公司，由酿酒酵母菌（≥5亿个/g）、纤维素酶（≥500 U/g）等组成；葡萄糖和VC购自菏泽市东明县。谷丙转氨酶（ALT）、总胆红素（TBIL）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、γ-谷氨酰基转移酶（GGT）、肌酸激酶（CK）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、尿素氮（BUN）、钠（Na）、钾（K）、磷（P）、钙（Ca）、镁（Mg）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白A（IgA）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）、干扰素-γ（IFN-γ）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及总抗氧化能力（T-AOC）等试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。主要仪器包括BC-5300全自动血液细胞分析仪、COBAS INTEGRA 800全自动生化检测仪、酶联免疫检测仪（芬兰ThermoLabsystems公司）、牛用投药瓶、注射器、促凝管等。1.3试验设计及饲养管理选择平均体重（250.00±10.23）kg、中毒后停药8 h还有食欲的奶牛20头，随机分为对照组和试验组，每组5个重复，每个重复2头牛。对照组采用护肝解毒的传统方法，每天每头牛静脉注射100 g葡萄糖和5 g VC，每日2次；试验组采用保肝利尿、调节瘤胃菌群的方法，按照瘤胃菌群正常含量的5%~10%，每天每头牛投喂菌酶复合物50 g和葡萄糖50 g，每日2次，3 d后菌酶复合物降为20 g/d。两组均连续处理7 d。试验期间，试验牛按照养殖场饲养管理程序进行，自由采食和饮水。试验日粮按照NY/T 815—2004肉牛饲养标准配制，两组饲喂日粮相同。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.004.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米青贮18.23粗蛋白/%13.06玉米秸秆41.77酸性洗涤纤维/%29.35玉米19.23中性洗涤纤维/%52.64豆粕12.62磷/%0.21麸皮6.81钙/%0.65磷酸氢钙0.43消化能/(MJ/kg)10.50预混料0.23石粉0.22食盐0.23小苏打0.23注：1.预混料购自河南省康星常笑动物药业有限公司。2.营养水平中消化能为计算值，其余均为实测值。1.4测定指标及方法试验第1、8 d，早上饲喂前，每个重复随机抽取1头牛，每组5头牛；同时选择同场、饲喂相同基础日粮、体重相近的健康牛5头，于尾巴腹侧第4、5尾椎间尾静脉采血，制备血清，用于血常规、血清生化、免疫和抗氧化指标测定。所有指标测定严格按照仪器和试剂盒说明书进行操作。1.5数据统计与分析数据采用Excel 2013软件进行初步处理，SPSS 19.0软件进行单因素方差分析。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同治疗方法对口服抗生素中毒奶牛血常规指标的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，试验第8 d，试验组奶牛白细胞、中性粒细胞、红细胞和血红蛋白显著减少（P0.05），单核细胞和淋巴细胞有所减少（P0.05），血小板显著增加（P0.05）。试验第8 d，试验组奶牛各血常规指标与健康牛差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.004.T002表2不同治疗方法对口服抗生素中毒奶牛血常规指标的影响项目组别第1 d第8 d健康牛白细胞/(×109/L)对照组11.33±0.3610.86±0.35a8.39±0.41试验组11.45±1.038.41±0.34b中性粒细胞/(×109/L)对照组5.48±0.195.04±0.15a3.63±0.17试验组5.61±0.523.59±0.36b单核细胞/(×109/L)对照组0.56±0.030.49±0.030.48±0.03试验组0.55±0.040.47±0.01淋巴细胞/(×109/L)对照组5.22±0.155.19±0.315.16±0.14试验组5.25±0.625.16±0.28红细胞/(×1012/L)对照组6.96±0.156.62±0.15a6.02±0.11试验组6.93±0.096.03±0.13b血红蛋白/(g/L)对照组125.21±6.53117.14±6.72a114.02±8.73试验组124.17±8.76113.48±9.37b血小板/(×109个/L)对照组341.33±22.66346.12±25.46b369.77±23.22试验组340.19±22.12369.53±21.16a注：同列同项目数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2不同治疗方法对口服抗生素中毒奶牛血清生化指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，试验第8 d，试验组奶牛血清ALT、CK活性及TBIL、Na、P和BUN含量显著降低（P0.05），ALB和Ca含量显著增加（P0.05）。试验第8 d，试验组奶牛各血清生化指标与健康牛较为接近。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.004.T003表3不同治疗方法对口服抗生素中毒奶牛血清生化指标的影响项目组别第1 d第8 d健康牛ALT/(U/L)对照组45.35±4.2241.21±4.27a35.34±4.61试验组46.22±3.7435.60±3.18bTBIL/(μmol/Ｌ)对照组10.31±0.189.29±0.09a6.43±0.61试验组10.33±0.726.22±0.31bAST/(U/L)对照组104.91±7.24102.03±6.18100.43±6.17试验组104.64±7.18100.11±5.63ALP/(U/L)对照组66.88±4.9266.24±4.6366.35±4.31试验组67.56±4.7266.89±4.09GGT/(U/L)对照组19.86±2.1319.04±1.9118.75±2.25试验组20.36±2.5818.83±1.47CK/(U/L)对照组256.32±46.31200.61±47.39a151.13±44.25试验组257.11±47.35153.52±44.89bTP/(g/L)对照组73.64±6.0176.76±6.5178.54±6.33试验组74.32±5.9978.97±6.89ALB/(g/L)对照组33.25±3.9834.76±4.12b36.53±3.41试验组33.74±4.0537.83±4.48aGLB/(g/L)对照组40.39±3.7841.00±4.0141.42±5.02试验组40.58±3.8140.14±3.89BUN/(mmol/L)对照组8.31±1.067.45±0.56a5.10±0.16试验组8.34±1.755.13±0.85bNa/(mmol/L)对照组154.33±41.27147.21±39.44a136.54±40.13试验组156.12±42.36136.23±40.93bK/(mmol/L)对照组5.67±1.475.58±0.645.56±1.11试验组5.70±1.185.53±0.52P/(mmol/L)对照组2.51±0.172.26±0.09a1.61±0.02试验组2.52±0.031.87±0.12bCa/(mmol/L)对照组2.01±0.242.04±0.43b2.17±0.11试验组2.02±0.312.23±0.06aMg/(mmol/L)对照组0.89±0.040.87±0.080.86±0.02试验组0.85±0.030.88±0.072.3不同治疗方法对口服抗生素中毒奶牛血清免疫球蛋白含量的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，试验第8 d，试验组奶牛血清IgA含量提高了6.04%（P0.05），IgM、IgG含量提高了5.43%、7.43%（P0.05）。试验第8 d，试验组奶牛血清免疫球蛋白含量与健康牛较为接近。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.004.T004表4不同治疗方法对口服抗生素中毒奶牛血清免疫球蛋白含量的影响项目组别第1 d第8 d健康牛IgA对照组17.33±2.1617.89±2.0118.95±2.03试验组17.41±2.1118.97±2.04IgM对照组59.64±10.3660.81±11.34b64.68±11.24试验组59.97±13.4464.11±10.52aIgG对照组147.42±26.53149.87±29.26b161.55±31.01试验组147.33±25.81161.01±30.04ag/L2.4不同治疗方法对口服抗生素中毒奶牛血清细胞因子含量的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，试验第8 d，试验组奶牛血清IL-2含量提高了26.22%（P0.05），IL-6、IFN-γ含量提高了28.53%、12.76%（P0.05）。试验第8 d，试验组奶牛血清细胞因子含量与健康牛较为接近。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.004.T005表5不同治疗方法对口服抗生素中毒奶牛血清细胞因子含量的影响项目组别第1 d第8 d健康牛IL-2对照组4.45±2.125.34±2.096.79±1.63试验组4.56±2.036.74±2.15IL-6对照组8.11±0.329.64±1.36b12.42±0.76试验组8.09±0.4712.39±0.81aIFN-γ对照组758.47±73.55778.11±72.23b878.77±70.33试验组756.41±68.74877.41±71.22ang/L2.5不同治疗方法对口服抗生素中毒奶牛血清抗氧化指标的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，试验第8 d，试验组奶牛血清MDA含量减少了48.9%（P0.05），SOD活性和T-AOC分别提高了9.00%和22.79%（P0.05）。试验第8 d，试验组奶牛血清抗氧化指标与健康牛较为接近。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.004.T006表6不同治疗方法对口服抗生素中毒奶牛血清抗氧化指标的影响项目组别第1 d第8 d健康牛MDA/(μmol/L)对照组4.64±0.074.11±0.02a2.08±0.02试验组4.87±0.012.10±0.01bSOD/(U/mL)对照组41.01±2.2443.23±1.46b47.23±1.61试验组40.17±2.4647.12±1.37aT-AOC/(U/mL)对照组6.23±0.046.89±0.02b8.48±0.07试验组6.11±0.028.46±0.03a3讨论3.1不同治疗方法对口服抗生素中毒奶牛血常规的影响杨媚等[5]报道，白细胞在机体损伤治愈方面起到重要作用，当机体发生炎症或其他疾病时，嗜中性粒细胞具有吞噬功能，其数量增多，白细胞数量增加。本研究中，试验组奶牛白细胞和嗜中性粒细胞显著减少，说明炎症得到缓解。红细胞与血红蛋白共同反映动物运输氧气和二氧化碳的能力，对机体产生的酸性物质起到缓冲作用。血小板主要在止血、炎症反应和伤口愈合方面起到主要作用。抗生素中毒后，反刍动物瘤胃内H+增多，渗透压升高，体液中水通过胃壁进入瘤胃，导致机体脱水，红细胞、血红蛋白浓度升高，同时骨髓抑制，血小板减少。马勇等[6]报道，当肝肾功能水平较差，炎性物较高时，会伴随血小板减少。本试验结束时，试验组奶牛红细胞、血红蛋白浓度降低，血小板数量增多，说明脱水症状缓解，骨髓抑制解除，肝功能转好，炎症减轻。3.2不同治疗方法对口服抗生素中毒奶牛血清生化指标的影响ALT主要存在于肝脏内，当肝细胞坏死时，血液中ALT活性显著增加，甚至超出正常范围，说明肝脏功能受损严重[7]。TBIL是胆汁的主要色素，肝脏损伤或胆管堵塞，血清TBIL含量升高。严重肝功损伤会影响ALB的合成水平。吕鑫泉等[8]报道，奶牛瘤胃酸中毒后，瘤胃pH值下降，微生物合成蛋白质能力下降。这可能与牛口服抗生素毒性太大，瘤胃内微生物无法适应，导致其数量大量减少有关。Na含量升高说明电解质失衡；Ca含量显著降低和P含量显著升高，与肝脏中毒有关；BUN含量显著升高，说明中毒后肠道内有过多炎症产物坏死，导致非蛋白氮含量过高[9]。本试验中，试验组奶牛各血液生化指标与健康牛较为接近，说明菌酶复合物配合葡萄糖处理强酸性抗生素中毒牛效果较好。王福刚[10]报道，复合益生菌可提高血清ALB的含量，与本试验结果一致。张洪伟等[11]与李慧梅等[12]报道，益生菌可改善羊的血清生化指标。3.3不同治疗方法对口服抗生素中毒奶牛血清免疫球蛋白含量的影响机体免疫功能主要包括体液免疫和细胞免疫，体液免疫主要由免疫球蛋白决定，免疫球蛋白含量越高，免疫力越强[13]。IgA主要参与黏膜免疫[14]；IgＭ是机体受刺激后最先产生的抗体，具有很强的杀菌功能，起到“先锋免疫”作用[15]；IgG体内含量高，分布广，维持时间长，参与抗感染等多种免疫过程[16]。VC参与免疫球蛋白合成[17]。徐鸿润等[18]报道，益生菌可调节奶牛的免疫力。白培钿等[19]报道，复合微生态制剂促进肠道黏膜分泌免疫球蛋白。本试验中，试验组奶牛血清IgM、IgG含量明显高于对照组，说明菌酶复合物配合葡萄糖提高中毒牛机体免疫球蛋白含量的效果比VC配合葡萄糖的效果好。3.4不同治疗方法对口服抗生素中毒奶牛血清细胞因子含量的影响IL-2可以促进T淋巴细胞增殖及产生抗体等，在细胞免疫过程中具有重要作用[20]。IL-6可以促进B细胞分化、增殖及再次产生免疫应答[21]。IFN-γ主要由NK细胞产生，可促进B淋巴细胞分化、增殖，起到抗病毒感染和抗肿瘤作用[22]。丛林等[17]报道，VC可促进干扰素产生，抑制病毒增殖，也可促进淋巴细胞的生成，增强杀菌能力。白培钿等[19]报道，复合微生态制剂可增强肠道黏膜的免疫功能。本试验中，试验组奶牛血清IFN-γ和IL-６含量均显著提高，说明菌酶复合物配合葡萄糖处理可激活NK细胞并促使其合成、分泌IFN-γ，起到免疫调节作用[23]。3.5不同治疗方法对口服抗生素中毒奶牛血清抗氧化指标的影响SOD主要清除机体代谢过程中产生的自由基等有害物质，避免自由基引起机体的脂质过氧化反应，导致组织细胞损伤[24]。MDA含量直接反映体内自由基的反应程度，也间接反映细胞的受损情况[25]。有研究指出，VC在宠物诊疗中可处理中毒导致的肝脏损伤[26]。顾丽红等[27]报道，VC可提高鸡的抗氧化能力。李丹等[28]报道，益生菌可提高公鸡的抗氧化能力。王传龙等[29]报道，酵母菌培养物能够提高蛋鸡的抗氧化性能，与本文结果一致。康永刚等[30]报道，菌酶复合物可提高湖羊抗氧化能力。本试验结果显示，试验组奶牛血清SOD活性和T-AOC显著提高，MDA含量显著降低，表明含有酿酒酵母菌的菌酶复合物配合葡萄糖处理比VC配合葡萄糖处理能够更有效地提高抗生素中毒牛机体的抗氧化能力。这可能是抗生素中毒牛体内的抗氧化酶系统被菌酶复合物的有效成分激活，多余的自由基被清除[31]，具体的作用机制有待进一步探讨。截至目前，未见VC和菌酶复合物配合解毒的报道，二者同时使用效果是否叠加有待进一步探讨。4结论本试验中，与VC和葡萄糖处理相比，菌酶复合物和葡萄糖处理能够较快改善抗生素中毒奶牛的血常规、血清生化指标，提高机体免疫力和抗氧化能力。