产蛋后期蛋鸡生理功能退化、氧化还原失调，易受致病菌侵袭，生产性能大幅下降[1]，蛋鸡淘汰率提高，经济效益下降[2]。虾青素可调节动物免疫机制，能够有效预防冠心病和脑梗发生[3]。此外，在蛋鸡日粮中添加虾青素能够改变蛋黄颜色[4]。虾青素能够提高蛋鸡的生产性能和蛋品质，增强机体免疫功能[5-7]。抗菌肽具有免疫作用，作为饲料添加剂深受养殖户青睐[8]。Chen等[9]发现，日粮中添加抗菌肽能够显著提高产蛋率，并影响蛋鸡产蛋后期的盲肠微生物结构。侯佳妮等[10]发现，抗菌肽可延缓产蛋率下降，改善蛋品质。抗菌肽能够提高蛋鸡生产性能，改善蛋品质，增强免疫力和调节肠道菌群[11-12]。目前关于虾青素和抗菌肽联合使用的相关报道较少。本试验探究日粮中添加不同配比的虾青素和抗菌肽对产蛋后期蛋鸡饲喂效果的影响，为虾青素和抗菌肽联合在蛋鸡生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料虾青素（含量3.76%）购自苏州睿藻生物科技有限公司，抗菌肽（天蚕素提取物，含活性成分10%）购自河南邦莱实业有限公司。1.2试验设计试验在交城宏远农牧科技有限公司进行。试验选取同一饲养条件下、体重接近的56周龄健康海兰褐蛋鸡700只，随机分为7组，每组5个重复，每个重复20只鸡。E0（对照组）蛋鸡饲喂玉米-豆粕型基础日粮，参照《鸡饲养标准》（NY/T 33—2004）配制；E1~E6在基础日粮中分别添加不同水平的虾青素和抗菌肽。基础日粮组成及营养水平见表1，试验设计见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.009.T001表1基础日粮组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米60.89代谢能/(MJ/kg)11.24豆粕25.99粗蛋白/%16.63大豆油1.04钙/%3.76石粉9.04总磷/%0.45预混料3.04赖氨酸/%0.75蛋氨酸/%0.26注：1.预混料由山西省太谷县光太饲料有限公司提供。2.营养水平为计算值。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.009.T002表2试验设计组别试验鸡数/只日粮E0100基础日粮E1100基础日粮+0.5%虾青素+300 mg/kg抗菌肽E2100基础日粮+0.5%虾青素+500 mg/kg抗菌肽E3100基础日粮+1.0%虾青素+300 mg/kg抗菌肽E4100基础日粮+1.0%虾青素+500 mg/kg抗菌肽E5100基础日粮+1.5%虾青素+300 mg/kg抗菌肽E6100基础日粮+1.5%虾青素+500 mg/kg抗菌肽预试期1 w，正式试验期8 w。采用三层全阶梯式笼养的饲养方式，每笼4只鸡，每日饲喂时间为8：00、11：30和18：00，蛋鸡自由采食、饮水，严格按照公司的规定进行饲养，做好数据记录。1.3样品采集试验结束时，各重复随机选健康鸡1只，采血5 mL（翅静脉），静置60 min（室温），3 000 r/min离心10 min，血清-20 ℃冰箱保存。解剖采血后的鸡，取十二指肠、空肠、回肠肠段，甲醛固定。1.4测定指标及方法1.4.1生产性能试验阶段，记录每天各重复的产蛋数、蛋重、破壳数和死亡数，计算产蛋率、平均日产蛋重；记录每日日粮投喂量、剩余量，计算平均日采食量、料蛋比。产蛋率=每天蛋数/鸡数(1)平均日产蛋重=日产蛋总重/鸡数(2)平均日采食量=(投喂量-剩余量)/(鸡数×试验天数)(3)料蛋比=日耗料总重/日产蛋总重(4)1.4.2免疫功能严格按照相关试剂盒（上海威奥生物科技有限公司）说明书测定血清中白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-6（IL-6）、干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量。1.4.3小肠形态参照刘雅婷等[13]的方法：在十二指肠、空肠、回肠中选约1.5 cm中段一样部分，用事先配好的磷酸盐缓冲液洗净，放在4%多聚甲醛，固定24 h。经过酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋等一系列操作后，制成5 μm石蜡切片，HE染色，中性树胶固定，观察切片。每个切片上任选6组非连续性视野，每一视野3组数据，由Image-Pro Plus 6.0软件测定绒毛高度（VH）、隐窝深度（CD），计算绒隐比（V/C）。1.4.4盲肠微生物数参照刘闰[14]的方法：试验结束后，各重复随机选健康鸡1只，无菌取盲肠内容物，混匀，-80 ℃保存。通过麦康凯培养基和MRS琼脂培养基培养，用平板计数法统计分析大肠杆菌、乳酸杆菌数量。1.5数据统计与分析试验数据采用SPSS 23.0一般线性模型（GLM）进行两因素多水平方差分析。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1虾青素和抗菌肽对产蛋后期蛋鸡生产性能的影响（见表3）由表3可知，E1~E6产蛋率显著高于E0（P0.05）。添加虾青素、抗菌肽或联合添加虾青素和抗菌肽均对产蛋率具有显著影响（P0.05），其中E3效果最明显。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.009.T003表3虾青素和抗菌肽对产蛋后期蛋鸡生产性能的影响项目平均日采食量/[g/(只·d)]平均日产蛋重/(g/d)产蛋率/%料蛋比E0112.26±0.1263.57±0.1276.03±0.22e2.06±0.01E1112.19±0.1164.08±0.3179.83±0.21d2.05±0.01E2112.11±0.1164.32±0.3480.82±0.24d2.04±0.01E3111.98±0.1264.68±0.2485.78±0.24a1.99±0.24E4112.08±0.1164.25±0.2582.25±0.25c2.03±0.01E5112.01±0.1164.33±0.1283.53±0.22b2.02±0.01E6112.10±0.1164.30±0.1780.01±0.27d2.04±0.01主效应虾青素0.5%112.15±0.1264.20±0.1880.32±0.22c2.04±0.011.0%112.03±0.1164.46±0.2284.01±0.24a2.01±0.011.5%112.05±0.1364.30±0.2081.77±0.21b2.03±0.02抗菌肽300 mg/kg112.06±0.1264.36±0.3683.04±0.26a2.02±0.02500 mg/kg112.09±0.1164.29±0.3281.02±0.25b2.03±0.01P值虾青素0.432 10.526 40.017 50.587 6抗菌肽0.614 30.614 20.025 30.312 4虾青素×抗菌肽0.254 70.335 40.016 40.298 42.2虾青素和抗菌肽对产蛋后期蛋鸡免疫性能的影响（见表4）由表4可知，E1~E6蛋鸡血清IL-2、IL-10、TNF-α和IFN-γ的含量均显著高于E0（P0.05）；各组蛋鸡血清IL-6含量差异不显著（P0.05）。添加虾青素、抗菌肽或联合添加虾青素和抗菌肽均对蛋鸡血清IL-2、IL-10、TNF-α和IFN-γ的含量具有显著影响（P0.05），其中E3效果最明显。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.009.T004表4虾青素和抗菌肽对产蛋后期蛋鸡免疫性能的影响项目IL-2IL-6IL-10TNF-αIFN-γE095.82±12.84d8.76±0.2496.69±8.76d177.16±26.42c95.93±8.12cE1144.92±18.63c8.80±0.36188.90±11.24c204.27±35.26b106.32±7.68bE2151.93±17.86b8.77±0.18208.36±13.68b198.98±21.31b104.92±8.06bE3166.53±15.42a8.73±0.26227.11±18.82a225.98±45.65a113.93±7.65aE4147.33±21.36c8.74±0.30189.36±17.64c202.49±46.24b106.11±8.12bE5153.75±18.34b8.78±0.32204.47±16.84b208.31±38.96b104.31±8.36bE6151.07±16.58b8.72±0.22185.63±14.62c204.91±41.62b105.11±7.84b主效应虾青素0.5%148.42±18.78c8.78±0.24198.63±14.26b201.62±44.24b105.62±9.26b1.0%156.93±22.26a8.73±0.24208.23±15.88a214.23±42.96a110.02±11.42a1.5%152.42±21.84b8.75±0.26195.05±17.12b206.61±38.86b104.71±9.88b抗菌肽300 mg/kg155.06±23.5a8.77±0.28206.82±18.44a212.85±12.84a108.18±11.44a500 mg/kg150.11±16.64b8.74±0.32194.45±14.92b202.12±12.84b105.38±9.28bP值虾青素0.027 80.765 40.037 20.044 60.034 1抗菌肽0.024 60.726 80.023 80.047 20.027 8虾青素×抗菌肽0.021 40.652 80.032 20.034 20.020 4ng/L2.3虾青素和抗菌肽对产蛋后期蛋鸡小肠形态结构的影响（见表5~表7）由表5可知，各组蛋鸡十二指肠绒毛高度、隐窝深度和绒隐比差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.009.T005表5虾青素和抗菌肽对十二指肠形态结构的影响项目绒毛高度/μm隐窝深度/μm绒隐比E01 698.72±132.7692.14±6.5418.46±2.84E11 724.68±142.3294.72±8.6418.24±2.68E21 736.84±164.72104.56±11.2416.62±4.44E31 944.86±147.98102.12±13.4819.06±3.62E41 754.73±212.14108.72±14.5216.16±4.62E51 786.92±206.5696.84±16.4418.46±2.94E61 756.78±231.41104.46±12.2216.84±4.78主效应虾青素0.5%1 730.76±226.3299.64±13.4617.43±3.411.0%1 849.79±219.86105.42±8.0217.61±3.261.5%1 771.85±221.02100.65±10.2117.65±3.30抗菌肽300 mg/kg1 818.82±218.9897.89±15.3418.58±2.92500 mg/kg1 749.45±222.04105.91±7.9616.54±4.34P值虾青素0.727 30.826 40.772 5抗菌肽0.746 10.891 30.753 4虾青素×抗菌肽0.637 70.675 70.613 6由表6可知，E3蛋鸡空肠的绒毛高度显著高于E0（P0.05）；E1~E6蛋鸡空肠隐窝深度显著低于E0（P0.05）；E1~E6蛋鸡空肠绒隐比显著大于E0（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.009.T006表6虾青素和抗菌肽对空肠形态结构的影响项目绒毛高度/μm隐窝深度/μm绒隐比E01 525.07±142.14b151.21±25.12a10.09±1.45cE11 579.38±112.62b111.31±27.84b14.20±1.23bE21 511.91±124.46b101.84±29.96b14.86±1.26bE31 872.31±126.84a95.07±25.68b19.70±2.38aE41 531.62±116.84b98.58±20.68b15.56±1.72bE51 540.24±118.96b101.86±23.61b15.15±1.64bE61 550.12±116.82b103.61±21.14b14.96±1.58b主效应虾青素0.5%1 545.64±142.13b106.57±26.26a14.53±1.38c1.0%1 701.96±121.36a96.82±20.44c17.63±1.86a1.5%1 545.18±148.84b102.73±23.02b15.04±1.64b抗菌肽300 mg/kg1 663.97±152.32a102.74±24.18a16.35±1.76a500 mg/kg1 531.21±149.68b101.34±22.43b15.12±1.59bP值虾青素0.022 30.036 20.022 3抗菌肽0.021 60.029 00.025 1虾青素×抗菌肽0.017 30.013 50.011 0由表7可知，E1~E6蛋鸡回肠绒毛高度显著高于E0（P0.05）；E1~E6蛋鸡回肠隐窝深度显著低于E0（P0.05）；E1~E6蛋鸡回肠绒隐比显著大于E0（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.009.T007表7虾青素和抗菌肽对回肠形态结构的影响项目绒毛高度/μm隐窝深度/μm绒隐比E01 061.89±212.44b214.90±54.21a4.95±2.14cE11 293.68±164.72a156.37±41.42b8.30±2.52bE21 435.35±374.24a104.04±18.94c13.80±2.94aE31 540.32±156.84a105.39±26.02c14.62±4.22aE41 386.59±156.12a105.29±25.24c13.16±3.26aE51 372.68±151.72a103.68±22.72c13.25±2.78aE61 411.24±158.94a102.66±19.96c13.75±2.64a主效应虾青素0.5%1 364.51±150.37c130.20±21.79a11.05±2.87b1.0%1 463.45±152.13a105.34±15.35b13.89±3.65a1.5%1 391.96±156.25b103.17±18.07b13.50±3.79a抗菌肽300 mg/kg1 402.22±159.35b121.81±17.13a12.05±2.96b500 mg/kg1 411.06±162.47a103.99±18.23b13.57±3.35aP值虾青素0.021 80.035 40.033 5抗菌肽0.020 80.028 70.028 7虾青素×抗菌肽0.012 50.011 80.012 2添加虾青素、抗菌肽或联合添加虾青素和抗菌肽均对空肠和回肠的绒毛高度、隐窝深度和绒隐比有显著影响（P0.05），其中E3影响最显著。2.4虾青素和抗菌肽对产蛋后期蛋鸡盲肠微生物数量的影响（见表8）由表8可知，E1~E6蛋鸡盲肠中乳酸杆菌数量显著大于E0（P0.05），大肠杆菌数量显著小于E0（P0.05）。添加虾青素、抗菌肽或联合添加虾青素和抗菌肽均对蛋鸡盲肠中乳酸杆菌和大肠杆菌数量具有显著影响（P0.05），其中以E3影响最显著。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.009.T008表8虾青素和抗菌肽对产蛋后期蛋鸡盲肠微生物数量的影响项目乳酸杆菌大肠杆菌E08.54±0.02c8.57±0.02aE18.77±0.03b8.47±0.02bE28.89±0.02ab8.46±0.03bE38.93±0.04a8.36±0.02cE48.90±0.02ab8.47±0.03bE58.75±0.03b8.46±0.03bE68.78±0.02b8.45±0.02b主效应虾青素0.5%8.83±0.02b8.46±0.03a1.0%8.91±0.04a8.41±0.02b1.5%8.76±0.02c8.45±0.03a抗菌肽300 mg/kg8.81±0.02b8.43±0.02b500 mg/kg8.85±0.03a8.46±0.03aP值虾青素0.020 10.021 3抗菌肽0.017 60.021 5虾青素×抗菌肽0.010 30.011 2lgCFU/g3讨论3.1虾青素和抗菌肽对产蛋后期蛋鸡生产性能的影响虾青素或抗菌肽作为动物饲料添加剂，均能够提高动物的生产性能。Nugroho等[15]试验发现，添加虾青素和富虾青素的蛋鸡日采食量均低于对照组。白建[16]在24周龄的海兰褐蛋鸡日粮中添加0、5、10、15 g/kg虾青素，结果表明，与对照组相比，5、10、15 g/kg组产蛋率分别提高了1.46%、5.85%、8.69%。刘梦雪等[17]在66周龄海兰褐蛋鸡日粮中分别添加100、200、400 mg/kg的抗菌肽，结果发现，与空白组相比，添加200 mg/kg抗菌肽组的平均蛋重增加了1.27%、产蛋率升高了3.41%、料蛋比降低了6.07%。白建等[18]研究在不同周龄海兰褐蛋鸡饲料中添加0、1.0%、3.0%、5.0%的海藻粉和300、600 mg/kg的抗菌肽，发现添加抗菌肽组的产蛋率和料蛋比与对照组比均存在显著差异。上述研究结果与本研究基本一致。本试验中，在虾青素和抗菌肽二者的协调作用下，有效提高了日粮养分的利用率，从而改善了蛋鸡生产性能。其中E3组的最理想，可能是1.0%虾青素和300 mg/kg抗菌肽生理生化反应效果最好。3.2虾青素和抗菌肽对产蛋后期蛋鸡免疫指标的影响邓心怡等[19]给C57BL/6小鼠灌胃30、60、100 mg/kg虾青素，结果发现，添加虾青素组血清IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量均显著高于对照组。Wu等[20]在饲料中分别添加含200、400和800 mg/kg虾青素，结果表明，虾青素组IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-γ的含量与对照组相比差异显著，且虾青素的最佳添加剂量为400 mg/kg。刘梦雪等[21]在产蛋后期的海兰褐蛋鸡中添加了不同水平（100、200、400 mg/kg）的抗菌肽，结果表明，200 mg/kg试验组血清IL-10含量高于对照组和100、400 mg/kg试验组，100 mg/kg试验组血清IL-2含量高于对照组和400 mg/kg试验组，100、200、400 mg/kg试验组血清IFN-γ含量均高于对照组。田丽娜等[22]研究结果表明，蛋鸡日粮中加入100~300 mg/kg的抗菌肽，与对照组相比，试验组血清中IL-2的含量显著提高。Dai等[23]研究表明，肉仔鸡日粮中加入4、6 mg/kg抗菌肽，血清IL-10含量均显著高于对照组。本试验结果表明，试验组E1~E6蛋鸡血清IL-2、IL-10、TNF-α和IFN-γ含量显著高于E0（对照组），且E3显著高于其他试验组，说明虾青素和抗菌肽联合能够调节免疫细胞活性，促进细胞因子的分泌，提高细胞免疫能力，其中添加1.0%虾青素和300 mg/kg抗菌肽效果较好。3.3虾青素和抗菌肽对产蛋后期蛋鸡小肠形态结构的影响高远等[24]给5~6 w龄雄性小鼠灌胃50 mg/(kg·BW)虾青素酯，结果发现，与对照组相比，虾青素能够显著增加小肠绒毛长度，降低隐窝深度，增加绒毛高度/隐窝深度，从而使小肠形态得到改善。张靖垚等[25]采用小鼠盲肠结扎穿孔法诱导脓毒症，试验随机分为对照组、脓毒症组、虾青素预处理组，结果表明，虾青素预处理组的小鼠肠绒毛高度显著高于其他两组，脓毒症小鼠的死亡率减小。张耀文等[26]在70周龄海兰褐蛋鸡饲料中添加50、100 mg/kg的抗菌肽，结果表明，添加抗菌肽的试验组回肠绒毛高度显著大于对照组，隐窝深度显著低于对照组。上述研究结论与本研究基本相同。在本研究中，与对照组相比，试验组E1~E6蛋鸡空肠和回肠的绒毛高度和绒隐比显著提高，隐窝深度显著降低，表明虾青素和抗菌肽可改善小肠形态结构。日粮添加虾青素和抗菌肽后，小肠绒毛变长，小肠上皮表面积增大，更有利于营养物质的消化吸收。隐窝变浅，表示小肠上皮细胞新陈代谢加快，结果增大了绒隐比，从而增强了机体吸收营养物质的能力以及抵御病菌感染的能力。3.4虾青素和抗菌肽对产蛋后期蛋鸡盲肠微生物数量的影响Shi等[27]研究发现，在蛋鸡日粮中添加虾青素能够优化肠道菌群，有效抑制有害菌繁殖。周芬等[28]在0日龄蛋鸡日粮中添加100、200 g/t的抗菌肽，结果表明，添加抗菌肽的试验组肠道大肠杆菌呈下降趋势。吕尊周等[29]研究在210日龄海赛克斯褐壳蛋鸡日粮中添加200、400、600 mg/kg抗菌肽，结果发现，添加抗菌肽试验组的大肠杆菌数显著小于对照组。上述结论均与本研究一致。造成此结果的原因可能是虾青素中的活性成分能够将饲料原料中水溶性NSP酶解，从而使食糜黏性降低。同时，抗菌肽具有光谱杀菌功能，可消灭盲肠中的有害菌，排斥病原菌的附着，从而抑制病原菌增殖，保持肠道形态完整，促进动物肠道维持菌群平衡[30]。4结论本研究结果表明，日粮添加不同水平的虾青素（0.5%、1.0%、1.5%）和抗菌肽（300、500 mg/kg）能够增强蛋鸡的免疫功能，改善空肠和回肠形态结构，提高盲肠乳酸杆菌数量，降低大肠杆菌数量，调节盲肠微生态平衡；还能够降低隐窝深度，提高绒隐比，维持肠道形态完整。综合考虑，蛋鸡产蛋后期日粮中添加1.0%虾青素和300 mg/kg抗菌肽较为适宜。