我国是生猪养殖大国，也是猪肉消费大国。随着人们生活水平的不断提高，消费者更加注重猪肉的品质。生猪养殖饲料原料价格不断上涨，导致饲料生产成本增加，促使饲料生产企业及养殖场寻找高性价比的饲料原料。自2020年7月1日起，我国全面禁止在饲料中添加抗生素，关于替抗产品的研究越来越多。利用益生菌对饲料原料进行发酵已成为缓解饲料资源短缺、保障食品安全、促进节能减排、推进无抗养殖的重要策略之一，具有广阔的应用前景[1]。益生菌发酵饲料是利用微生物自身的代谢活动，将一些动物性、植物性饲料原料中的抗营养因子分解或转化成更容易被动物采食、消化和吸收的饲料原料[2-3]。发酵过程中还会产生各种有机酸、酶、维生素、多肽和其他未知的生长因子，进而提高饲料的营养价值，改善饲料口感，从而提高动物机体的抗菌、抗病毒、免疫能力[4-5]。目前，有关发酵饲料蛋白在猪养殖中的研究主要集中在植物性蛋白源，发酵能够显著提高植物蛋白源的蛋白质及原料的其他营养价值，在猪日粮中合理添加发酵饲料能够促进饲料消化吸收，调节肠道微生物群落，达到降本增效的目的[1,6-7]。海洋鱼类经过分级、去头、洗涤、剥皮、去内脏、去鱼鳍、分离肉骨、鱼排和鱼片等加工步骤后，产生约20%~80%的加工副产物，这些副产物富含蛋白质、鱼油、矿物质、胶原蛋白和生物活性肽等高价值成分，且不易储存，易氧化酸败，若处理不当会引起资源浪费和环境污染[8]。目前有关使用微生物发酵处理的海水鱼加工副产物在猪生产中的使用效果尚未见报道。因此，本试验研究鱼源发酵饲料蛋白对猪生长性能、机体健康和肉品质的影响，为鱼源发酵饲料蛋白在生猪养殖中的推广应用提供参考。1材料与方法1.1鱼源发酵饲料蛋白制备试验所用发酵饲料为山东美佳集团提供鱼源发酵饲料蛋白，其粗蛋白含量为30.85%，水分含量为40%。其他饲料原料均由九牛农牧有限公司提供。发酵原料组成为海水鱼加工副产物、豆粕、菌种。发酵菌种包含植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母等益生菌，活菌数6.7×108 CFU/g，选用固态发酵工艺。鱼源发酵饲料蛋白营养成分见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.006.T001表1鱼源发酵饲料蛋白营养成分项目含量项目含量/(g/100 g)水分/%40.000赖氨酸1.890粗蛋白/%30.850蛋氨酸0.430粗脂肪/(g/kg)90.000胱氨酸0.450酸溶性蛋白/%25.330苏氨酸1.120灰分/%5.200DHA0.631氯化物/%1.500EPA0.179钙/%6.590磷/%0.010铁/(mg/kg)176.000锌/(mg/kg)33.800硒/(mg/kg)0.478注：DHA为二十二碳六烯酸，EPA为二十碳五烯酸。1.2试验设计试验采用单因素完全随机设计，选取120头窝源一致、精神状态良好、健康、体重相近（17.8±0.2） kg的长白系列的外三元育肥猪仔猪，随机分为4组，每组3个重复，每个重复10头猪。对照组猪饲喂常规全价颗粒料。试验前30 d（1~30 d），试验组1、组2、组3保育期猪分别饲喂添加10%、15%、20%的鱼源发酵饲料蛋白的饲料；试验30 d后（31~180 d），试验组1、组2、组3育肥猪分别饲喂添加15%、20%、25%的鱼源发酵饲料蛋白的饲料。对照组颗粒料与试验组使用的饲料蛋白配合粉料均由九牛农牧饲料有限公司配制。饲料配方设计参照NRC第11版《猪营养需要》进行设计，饲料蛋白水分按豆粕12%水分折合，维生素及矿物质按NRC仔猪25~50 kg阶段推荐量配制。保育期和育肥期猪试验日粮组成及营养水平分别见表2和表3。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.006.T002表2保育期试验日粮组成及营养水平（风干基础）项目对照组试验组1试验组2试验组3原料组成/%玉米35.045.050.669.5米糠粕8.07.08.08.0小麦40.030.022.00膨化豆粕（43%）13.05.51.90.5豆油0.5000鱼源发酵饲料蛋白010.015.020.0552小料3.52.52.52.0合计100.0100.0100.0100.0营养水平消化能/(MJ/kg)13.4613.5013.3813.42粗蛋白/%16.0015.5015.8016.20钙/%0.660.620.640.65有效磷/%0.260.250.270.24赖氨酸/%1.121.101.111.14蛋氨酸+胱氨酸/%0.650.680.660.69苏氨酸/%0.720.710.730.70注：1.552小料由九牛农牧有限公司提供；下表同。2.营养水平均为实测值；下表同。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.006.T003表3育肥期试验日粮组成及营养水平（风干基础）项目对照组试验组1试验组2试验组3原料组成/%玉米64.0025.5565.0963.44燕麦麸0005.05细麸15.00012.444.41大麦056.6300膨化豆粕（43%）17.00000豆油1.00000鱼源发酵饲料蛋白015.0020.0025.00552小料3.002.822.472.10合计100.00100.00100.00100.00营养水平消化能/(MJ/kg)13.5913.4613.6313.50粗蛋白/%15.0015.3014.8014.60钙/%0.590.610.580.60有效磷/%0.270.290.260.30赖氨酸/%0.971.031.020.98蛋氨酸+胱氨酸/%0.570.550.610.58苏氨酸/%0.640.620.630.621.3饲养管理在整个试验过程中，自动饮水，保持舍内通风正常。每天饲喂3次，采食量依据猪生长需求增加用料量，确保每次饲喂不剩料。定时打扫圈舍卫生，免疫保健程序严格依照猪场制定的程序进行。饲喂前注意观察猪的生长、健康情况，对进食情况做好记录。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能及增重成本记录试验猪的初重与末重，统计试验过程中饲料的消耗量，统计剩余的饲料和溅到食槽外面的饲料重量，即为饲料累计损耗量，计算试验猪的平均日增重、料重比、钱料比等指标。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)料重比=饲料总耗量/总增重(2)钱料比=饲料总费用/饲料总耗量(3)1.4.2疾病发生情况在整个养殖周期内，每天早晚巡查各一次，观察猪的吃食、活动和粪便等情况。定期接种疫苗，预防发生传染病，定期体检，发现病症及时治疗。1.4.3常规营养成分选取对照组和生长性能较好的试验组1（15%鱼源发酵饲料蛋白组）测定肉品质，每组选取6头猪屠宰。育肥猪屠宰后，取前腿（瘦肉）和五花肉（肥肉）各500 g，冷冻保存，其中200 g用于测定常规营养成分，其余300 g测定脂肪酸和氨基酸含量。参照GB/T 5009.3—2010测定肌肉水分含量，GB/T 5009.5—2010测定肌肉粗蛋白含量，GB/T 5009.6—2010测定肌肉粗脂肪含量；GB/T 5009.4—2010测定肌肉粗灰分含量。1.4.4脂肪酸含量参照《食品中脂肪酸的测定方法》（GB 5009.168—2016），采用气相色谱法测定试验猪背最长肌脂肪酸的含量。气相色谱仪为日本岛津GC-2010，色谱柱为聚二氰丙基硅氧烷强极性固定相，柱长100 m，内径0.25 mm，膜厚0.2 μm。1.4.5氨基酸含量参照GB/T 5009.124—2016测定氨基酸的含量，使用日立全自动L-8900型氨基酸分析仪。1.5数据统计与分析采用SPSS 21统计软件对数据进行统计学分析。2结果与分析2.1鱼源发酵饲料蛋白对猪生长性能及疾病发生情况的影响（见表4、表5）由表4可知，试验第30 d，试验组1猪的总增重比对照组多37.5 kg，试验组2猪的总增重比对照组低10 kg，试验组3猪的总增重比对照组低26 kg。试验第180 d，与对照组相比，试验组1、组2、组3猪出栏体重、平均日增重均高于对照组，料重比低于对照组。研究表明，使用鱼源发酵饲料蛋白有助于提高生猪饲料利用率，降低料重比。整个育肥期内，急性间质性肺炎和急性疫苗过敏反应造成猪伤亡。由表5可知，鱼源发酵饲料蛋白的试验组猪的发病率降低。在后续试验开始前，咨询了企业科研人员的意见，改变日粮中的营养成分会影响猪肉品质，且关于鱼源发酵饲料蛋白作为饲料添加剂的研究较少，大比例添加会改变肉品质，因此选用添加比例低的试验组1作为后续试验。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.006.T004表4鱼源发酵饲料蛋白对猪生长性能的影响项目试验组1试验组2试验组3对照组初重/(kg/头)17.817.817.817.830 d总增重/(kg/组)394.5347.0331.0357.030 d总重/(kg/组)928.5881.0865.0891.030 d平均体重/(kg/头)30.9529.3728.8329.70180 d出栏重/(kg/组)4 986.04 982.05 103.05 058.5180 d末重/(kg/头)171.93171.79170.10168.6030~180 d平均日增重/[kg/(头·d)]0.955 10.954 30.945 00.936 7料重比（1~180 d）2.943.033.053.06伤亡/头1100淘汰猪重/(kg/组)5335035出栏数/头29293030饲料总用料量/kg13 895.814 598.815 341.914 760.0饲料累计损耗量/kg162.7143.2158.3128.6鱼源发酵饲料蛋白含水量/kg504.0851.21 218.00注：鱼源发酵饲料蛋白含水量为使用鱼源发酵饲料蛋白总量中水分的重量；在饲料配制过程中，豆粕的含水量为12%，为了保证饲料营养成分的一致性，鱼源发酵蛋白按照28%进行折算水分重量。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.006.T005表5鱼源发酵饲料蛋白对猪疾病发生情况的影响项目试验组1试验组2试验组3对照组合计13111216腹泻、厌食3346发烧3333咳喘5436肺炎1000关节炎0011其他问题1110头2.2鱼源发酵饲料蛋白对猪肉营养成分、脂肪酸组成、游离氨基酸含量的影响（见表6~表8）由表6可知，试验组猪肥肉和瘦肉样品的脂肪含量均偏低（蛋白和水分偏高），糖含量偏高；试验组猪肉保水性更好，口感较好，味道较鲜。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.006.T006表6鱼源发酵饲料蛋白对猪肉营养成分的影响项目试验组1（肥）对照组（肥）试验组1（瘦）对照组（瘦）总脂肪76.6084.202.504.70灰分0.170.181.101.10糖0.050.030.520.21水分5.367.3861.6055.99重量占比57.6022.8242.4077.20%由表7可知，试验组猪肥瘦肉中大部分多不饱和脂肪酸均高于对照组；试验组肥肉中DHA/EPA值稍低于对照组，而瘦肉DHA含量高于对照组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.006.T007表7鱼源发酵饲料蛋白对猪肉脂肪酸组成的影响项目试验组1（肥）对照组（肥）试验组1（瘦）对照组（瘦）葵酸0.0350.0360.0010.005十二碳酸0.0390.0390.0020.004十三碳酸0.0030.00300十四碳酸（豆蔻酸）0.7210.7860.0200.05顺-9-十四一烯酸（豆蔻脑酸）0.0080.01000十五碳酸0.0210.02600.001十六碳酸（棕榈酸）13.00015.5000.4250.878顺-9-十六碳一烯酸（棕榈一烯酸）1.1701.6100.0490.126十七碳酸0.1090.1060.0030.006十八碳酸（硬脂酸）6.5606.7400.2360.460反-9-十八碳一烯酸（反油酸）000.0020.005顺-9-十八碳一烯酸（顺油酸）20.90029.8000.6811.540顺, 顺-9, 12-十八碳二烯酸（顺亚油酸）9.08010.8000.2140.268二十碳酸（花生酸）0.1220.1550.0040.008顺, 顺, 顺-6, 9, 12-十八碳三烯酸0.0270.0240.0010.002顺-11-二十碳一烯酸（花生一烯酸）0.4280.7410.0120.031顺, 顺, 顺-9, 12, 15-十八碳三烯酸0.3770.4590.0060.009二十一碳酸0.0060.00900顺, 顺-11, 14-二十碳二烯酸0.3850.6130.0060.012顺, 顺, 顺-8, 11, 14-二十碳三烯酸0.0540.0760.0040.005顺-13-二十二碳一烯酸（芥酸）0.0180.0200.0030.004顺-11, 14, 17-二十碳三烯酸0.0630.1040.0010.002顺-5, 8, 11, 14-二十碳四烯酸0.1310.1550.0480.028顺-13, 16-二十二碳二烯酸0.0050.00900二十四碳酸（木焦油酸）0.0060.0090.0040.002顺-5, 8, 11, 14, 17-二十碳五烯酸（EPA）0.0120.01400顺-4, 7, 10, 13, 16, 19-二十二碳六烯酸（DHA）0.0390.0490.0070g/100 g由表8可知，试验组瘦肉中含有谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸等4种呈味氨基酸，而对照组瘦肉中仅有甘氨酸和丙氨酸。试验组呈味氨基酸总量高于对照组，从而使猪肉味道更鲜美、厚重。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.006.T008表8鱼源发酵饲料蛋白对猪肉游离氨基酸的影响项目试验组1（肥）对照组（肥）试验组1（瘦）对照组（瘦）苏氨酸000.0300.050丝氨酸0000.012谷氨酸*000.0140甘氨酸*000.0120.013丙氨酸*00.0140.0380.041缬氨酸000.0140.013蛋氨酸000.0120.011异亮氨酸000.0110亮氨酸000.0150.012苯丙氨酸*000.0140赖氨酸0000.011组氨酸0000脯氨酸000.0240.029注：“*”为呈味氨基酸。%2.3鱼源发酵饲料蛋白对猪养殖经济效益的影响（见表9）由表9可知，试验组1饲料总费用最低，试验组2与对照组饲料总费用基本相同，试验组3饲料总费用最高。试验组1、试验组2、试验组3的钱料比分别为2.98、2.99、2.96元/kg，各试验组的钱料比约比对照组降低了9%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.006.T009表9鱼源发酵饲料蛋白对猪养殖经济效益的影响项目试验组1试验组2试验组3对照组发酵饲料蛋白总用量/kg1 800.003 040.004 350.000发酵饲料蛋白总费用/元5 670.009 576.0013 702.500配合饲料总用量/kg12 095.8011 558.8010 991.9014 760.00配合饲料总费用/元35 726.5034 130.0031 701.5048 237.00饲料总费用/元41 396.5043 706.0045 404.0048 237.00钱料比/(元/kg)2.982.992.963.273讨论3.1鱼源发酵饲料蛋白对生猪生长性能的影响固态发酵产物含水量少，发酵终产物浓度较高，易于储存，能耗较低，且在完整发酵过程中产生的废水较少[9]。本试验的饲料蛋白原料选用海水鱼加工副产物和豆粕，二者粉碎后添加筛选出的菌种密封发酵制得饲料蛋白。发酵饲料蛋白营养丰富，可提供优质蛋白、脂肪等营养物质，其通过益生微生物结合原料内源酶对蛋白实现合理改性（而非传统的蒸煮）使大部分鱼蛋白降解成纳米级短肽或氨基酸。发酵饲料含有优质的鱼油成分，使饲料更易被消化吸收。本试验发现，鱼源发酵饲料蛋白改善了饲料的适口性，饲料蛋白中富含有益菌、小肽和酶类等活性物质，可改善肠道菌群，减少猪的腹泻发生率，增强免疫力，提升平均日增重，降低料重比，提高同期猪的出栏体重。研究表明，在生长育肥猪日粮中添加乳酸菌发酵饲料，试验组猪的平均日增重显著高于对照组，料重比、发病率低于对照组，经济效益有所提高[10]。关志惠等[11]研究发现，添加15.7%发酵薯藤青饲喂肉猪能够提高猪的净增重、平均日增重，降低料重比。张玲清等[12]研究发现，在日粮中添加5%葡萄皮渣发酵饲料可以提高生长育肥猪的生长性能，改善胴体品质、肉品质。与未发酵饲料相比，发酵饲料能够降低猪胃的pH值，还可对胰腺分泌、绒毛结构、消化率和饲料营养素的吸收具有积极影响[13]。添加发酵饲料可提高饲料的营养价值和可利用性[14]。还有研究发现，发酵饲料组仔猪的平均日增重显著提高，肠道菌群丰度显著提升，胃肠道大肠菌群的数量降低，表明发酵饲料能够提高仔猪免疫力及抗氧化能力，优化仔猪肠道菌群结构[4,15]。3.2鱼源发酵饲料蛋白对生猪肉品质的影响动物肌肉中构成蛋白质的必需氨基酸的含量和组成会影响其营养价值，而呈味氨基酸含量是影响猪肉鲜美的主要因素[16-17]。甘氨酸、谷氨酸、丙氨酸等是主要的鲜味氨基酸。天冬氨酸和谷氨酸含量增多可以提高猪肉香味，甘氨酸和丙氨酸含量增多可以提高猪肉甜味，尤其谷氨酸含量提高时可使猪肉具有浓郁的鲜味[18-19]。本试验中，屠宰后试验组猪肉中的呈味氨基酸含量高于对照组多，表明日粮中添加鱼源发酵饲料蛋白可提高猪肉中呈味氨基酸含量，使猪肉味道更鲜美、厚重，提高了猪肉品质和营养价值。研究表明，日粮中添加8%发酵豆粕可显著提高猪肉天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸和丙氨酸含量，有效改善猪肉的口感、风味、香味和鲜味[20]。研究表明，在生长育肥猪日粮中添加10%乳酸菌、梭菌和双歧杆菌发酵的玉米-豆粕型日粮，可提高背最长肌中天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸等芳香族氨基酸的含量，提升猪肉鲜味[21]。肌肉中游离脂肪酸的含量和组成决定了猪肉的风味和适口性[22]，其中不饱和脂肪酸是肉香味的重要前体物质[23]。郝丽红[24]研究发现，饲喂8%枯草芽孢杆菌和戊糖片球菌发酵的玉米-豆粕日粮，猪肉油酸、亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸的含量分别提高了3.99%、14.86%、34.48%和20.69%。有研究采用枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、黑曲霉菌和产朊假丝酵母发酵的全价日粮饲喂育肥猪后，发现发酵饲料能够显著提高背最长肌中油酸、亚油酸、花生四烯酸、总不饱和脂肪酸的含量，降低总饱和脂肪酸含量[25]，与本试验的研究结果类似。脂肪酸含量变化的原因可能与发酵技术有关，发酵产生的有益菌及其代谢产物参与调控猪体内脂肪酸的合成及代谢，改变脂肪酸的组成和含量，从而改善猪肉风味[22]。发酵饲料改善猪肉感官和营养品质可能是发酵可改善饲料营养组成，提供益生菌、氨基酸、风味物质、抗氧化酶等，从而改善猪肉品质和风味[26]；微生物发酵饲料通过提高猪机体抗氧化性能、改善脂肪代谢，进而增加屠宰性能和改善肉品质[27]。因此，发酵饲料在提升猪肉的营养品质方面发挥比较重要的作用。3.3鱼源发酵饲料蛋白对猪养殖效益的影响养殖经济效益是评估新型饲料蛋白源可行性的重要指标之一。本试验养殖过程中使用的配合饲料总用量和费用，均按照与购买公司实际结算数量的费用进行计算，饲料蛋白按照3.15元/kg价格购买。由于试验过程中饲料原料的价格会有变化，本试验仅核算试验结束时总费用。市场生猪价格波动频繁、差别较大，因此本试验未进行增重收入和利润指标的计算，仅对相同价格阶段饲料使用量、料重比、钱料比进行分析。本试验中，试验组1饲料总用料量最少，试验组2饲料总用料量比对照组少161.2 kg，试验组3总用料量最多；试验组1饲料总费用最低，试验组2与对照组的饲料总费用基本相同，试验组3饲料总费用最高，各试验组比对照组钱料比降低约9%。结果表明，使用鱼源发酵饲料蛋白可降低饲料成本，增加养殖效益。关志惠等[11]研究发现，使用发酵薯藤青饲喂肉猪，饲养成本降低1.57元/kg，每头猪增加收益109.84元。玉皮发酵饲料代替部分基础日粮能够有效提高生猪养殖经济效益[28]。饲喂微生物发酵饲料猪的出栏利润由443元升高至503元，每头猪增加13%收益[29]。在生长猪中分别添20%~50%发酵饲料，与对照组相比，试验组料重比降低5.16%~7.54%，利润提高22.7%~31.6%[30]。4结论本试验结果显示，新型鱼源发酵饲料蛋白能够改善饲料风味，提高饲料利用率，降低料重比，增强机体免疫力，改善肉品质，其中以添加15%~20%鱼源发酵饲料蛋白效果较好。