断奶是仔猪生长发育过程的重要阶段之一。目前，大部分规模化猪场都会采取早期断奶（21~25 d），母仔分离、转群、运输、环境、日粮等因素的变化以及疫苗注射等应激会对仔猪健康造成不利影响[1]。断奶期仔猪处于自身免疫的形成阶段，疾病抵抗能力弱，很容易受到病毒和病菌的侵袭[2]；同时断奶仔猪肠道生理发生变化，如肠绒毛变短和受损，易使仔猪受病菌病毒感染。断奶仔猪日粮从母乳过渡到固体饲料，容易引发仔猪腹泻、采食量和体重下降，甚至死亡。早期断奶可造成仔猪应激，会导致断奶仔猪应激综合征，严重影响断奶仔猪的机体免疫功能和生长性能[3]。植物提取物、抗菌肽、酸化剂、微生态制剂和酶制剂等功能性保健添加剂能够缓解仔猪断奶应激引起的消化不良、腹泻和生长停滞等不良影响，促进仔猪的生长发育[4]。迷迭香是具有芳香气味的唇形科常绿植物。迷迭香提取物（RE）是天然的植物提取物，具有抗氧化性能高。RE的抗氧化功效远高于人工合成的抗氧化剂丁基羟基茴香醚（BHA）、叔丁基对苯二酚（TBHQ）、2, 6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）和N-苯乙酰基-L-谷氨酰胺（PG），具有结构稳定、耐高温的特点，且与传统抗氧化剂相比，RE还具有绿色无污染、无毒副作用的优点，更高效、稳定和安全[5]。RE被广泛应用于人类和宠物食品的抗氧化方面的研究。RE除了具备对食品和油脂抗氧化的功能以外，还具有清除自由基、保肝护肝、抗炎、抗肿瘤、提高免疫力等生物学功能[6]。但目前尚未有报道研究RE对处于氧化应激状态下动物的抗氧化能力和生长的影响。本研究旨在探讨RE对处于断奶应激下的仔猪抗氧化应激和生长性能的影响，为RE在断奶仔猪生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料RE主要成分为鼠尾草酚7.69%、鼠尾草酸34.59%、迷迭香酚1.59%、迷迭香酸0.59%，其余成分还包括表迷迭香酚、表迷迭香酚甲醚、熊果酸、齐墩果酸等萜类物质。1.2试验设计本试验在广西明阳畜牧有限公司猪场进行，选择144头26日龄断奶、体重8.0 kg左右的“杜×长×大”三元杂交断奶仔猪，随机分为4组，每组6个重复，每个重复6头仔猪（公、母各半）。断奶仔猪饲养于标准保育猪舍内，分别饲喂含RE（0、200、400、600 mg/kg）的基础日粮（教槽料）10 d；再饲喂含RE（0、200、400、600 mg/kg）的基础日粮（保育料）14 d。试验期24 d。教槽料购自广西百洋集团，其消化能14.65 MJ/kg，粗蛋白20%。保育料参考美国NRC（2012）的仔猪营养需要配制，保育期基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.005.T001表1保育期基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米62.30消化能/(MJ/kg)14.14豆粕21.20粗蛋白/%19.20鱼粉6.50钙/%0.90乳清粉5.00总磷/%0.76豆油1.50赖氨酸/%1.41食盐0.14苏氨酸/%0.81磷酸氢钙1.35石粉0.58预混料1.00赖氨酸0.40苏氨酸0.03注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 12 000 IU、VD 3 500 IU、VB12 22.76 μg、VE 40 mg、VK3 2.2 mg、核黄素5.5 mg、泛酸13.8 mg、烟酸30.3 mg、VB6 5 mg、叶酸1 mg、生物素0.1 mg、锰40 mg、铜50 mg、锌100 mg、碘0.3 mg、钴1 mg、硒0.3 mg。2.营养水平中消化能为计算值，其余均为实测值。1.3样品采集在试验第10、24 d的8：00进行仔猪前腔静脉采血，每组选择6头仔猪采血，每头采集样本2份，一份（10 mL）置于装有肝素钠抗凝剂的离心管，制作全血；另一份（10 mL）置于无抗凝剂的离心管中，静置30 min，3 000 r/min离心10 min，制备血清，分装于1 mL离心管中，转移至-20 ℃冰箱保存。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验期间每日记录耗料量，试验开始和结束时，禁食（自由饮水）12 h称重，计算平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和料重比（F/G）。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=试验期总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2血清激素及血清抗氧化指标血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）含量以及血清激素胰岛素样生长因子I（IGF-I）、生长激素（GH）和胃饥饿素（Ghrelin）含量的测定均采用南京建成生物工程研究所试剂盒。1.4.3血清免疫指标使用试剂盒（南京建成生物工程研究所） 测定血清中免疫球蛋白A （IgA）、免疫球蛋白G （IgG）和免疫球蛋白M （IgM） 含量。测定方法均参照说明书步骤进行。1.5数据统计与分析试验数据采用SPSS 17.0统计软件进行单因素方差分析，LSD法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1RE对断奶仔猪生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，200 mg/kg RE组仔猪的末重、平均日增重、平均日采食量显著升高（P0.05），料重比显著下降（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.005.T002表2RE对断奶仔猪生长性能的影响组别初重/(kg/头)末重/(kg/头)平均日增重/[g/(头·d)]平均日采食量/[g/(头·d)]料重比对照组8.33±0.1113.52±0.26216.00±5.04395.00±10.411.87±0.06200 mg/kg RE组8.21±0.0915.41±0.25*301.00±8.83*468.00±12.27*1.44±0.09*400 mg/kg RE组8.48±0.0714.06±0.28232.00±6.73421.00±7.151.82±0.10600 mg/kg RE组8.23±0.0913.83±0.30233.00±3.11394.00±13.681.63±0.04*注：与对照组相比，“*”表示差异显著（P0.05），“**”表示差异极显著（P0.01）；下表同。2.2RE对断奶仔猪血清激素的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，各RE组仔猪血清GH、IGF-I、Ghrelin水平均有上升趋势。与对照组相比，在试验第10 d，400 mg/kg RE组仔猪血清中GH水平显著上升（P0.05），200 mg/kg RE组仔猪血清中IGF-I和Ghrelin水平显著上升（P0.05）；试验第24 d，200 mg/kg RE组仔猪血清中GH和IGF-I水平显著上升（P0.05），600 mg/kg RE组仔猪血清IGF-I水平显著上升（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.005.T003表3RE对断奶仔猪血清激素的影响组别第10 d第24 dGHIGF-IGhrelinGHIGF-IGhrelin对照组36.25±1.09327.13±13.263.44±0.1851.52±2.21381.36±25.117.65±0.71200 mg/kg RE组50.57±2.38432.52±20.32*6.32±0.28*72.76±2.31*471.65±17.53*8.46±0.45400 mg/kg RE组65.77±1.02*379.65±18.654.65±0.7660.36±4.32396.52±24.827.83±0.63600 mg/kg RE组47.46±1.04385.02±16.524.12±0.6654.69±3.25488.84±24.90*8.05±0.37μg/L2.3RE对断奶仔猪血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，试验第10 d，与对照组相比，RE各组断奶仔猪血清中GSH-Px和SOD活性均显著升高（P0.05），200、600 mg/kg RE组仔猪血清MDA含量显著下降（P0.05）；600 mg/kg RE组仔猪血清CAT活性显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.005.T004表4RE对断奶仔猪血清抗氧化指标的影响组别第10 d第24 dGSH-Px/(U/mL)SOD/(U/mL)CAT/(U/mL)MDA/(μmol/L)GSH-Px/(U/mL)SOD/(U/mL)CAT/(U/mL)MDA/(μmoL/L)对照组335.37±12.1797.82±3.5618.93±5.412.77±0.42418.23±10.33115.43±5.4220.88±4.821.93±0.53200 mg/kg RE组426.83±20.45*121.65±5.26*21.32±6.851.79±0.81*425.84±11.50209.83±4.33**30.62±6.34*1.74±0.33400 mg/kg RE组463.82±24.63*126.33±4.12*21.72±5.372.25±0.56423.68±9.73135.42±8.1020.94±5.861.88±0.45600 mg/kg RE组451.81±31.86*124.92±4.48*26.83±3.26*1.75±0.32*516.37±10.12*117.92±5.1518.72±10.431.40±0.42*试验第24 d，与对照组相比，600 mg/kg RE组断奶仔猪血清GSH-Px活性显著升高（P0.05），MDA含量显著下降（P0.05）；200 mg/kg RE组仔猪血清SOD活性极显著升高（P0.01），CAT活性显著升高（P0.05）。2.4RE对断奶仔猪血清免疫指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，在试验第10、24 d，各RE组断奶仔猪血清中IgG、IgA和IgM的含量均呈上升趋势。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.22.005.T005表5RE对断奶仔猪血清免疫指标的影响组别第10 d第24 dIgGIgAIgMIgGIgAIgM对照组873.72±12.2171.33±6.72150.34±7.52836.43±14.2665.73±7.11155.51±8.34200 mg/kg RE组912.33±10.8180.87±5.30158.41±5.53865.81±11.3772.44±7.53160.36±7.88400 mg/kg RE组903.83±14.5082.76±6.28155.43±7.22853.82±12.4470.12±4.86161.30±8.22600 mg/kg RE组891.32±12.4481.11±8.97160.33±4.81858.66±12.7268.84±4.21163.41±6.10mg/L3讨论在集约化养殖模式下，仔猪早期隔离断奶成为普遍的生产模式，但是早期断奶容易使仔猪产生应激。常见的断奶应激包括转栏应激、营养应激和管理应激。仔猪断奶过程处理不当会造成断奶仔猪出现以腹泻为主要表现的消化不良、生长缓慢、免疫力下降以及精神萎靡等症状。RE富含高比例的鼠尾草酸和鼠尾草酚，具有良好的抗氧化性能[7]。本试验研究不同剂量RE对断奶仔猪生长性能和抗氧化应激的影响，进一步明确RE对断奶仔猪的抗氧化应激作用机制。3.1RE对断奶仔猪生长性能的影响植物提取物具有天然、安全和无残留的优点，是天然的绿色添加剂。植物提取物富含各种维生素和氨基酸，还富含多酚、黄酮和多糖等有机活性物质，能够提高动物机体的抗氧化应激能力，增强动物的免疫力，促进动物生长发育，这可能与植物提取物具有的特殊气味有关。某些植物提取物能够增加日粮的风味，显著改善动物日粮的适口性[8]。本研究发现，日粮中添加RE可以显著提高仔猪断奶后1~24 d的平均日增重和采食量，这与前人的植物提取物提高仔猪日采食量和日增重的研究结果一致。3.2RE对断奶仔猪生长相关激素的影响仔猪的生长性能与体内生长激素含量密不可分。哺乳动物生长轴中最重要的两种激素分别是GH和IGF-I[9]。GH经过血液循环进入组织，通过与细胞膜表面的受体结合，激活并启动细胞内生长信号通路，从而诱导胰岛素样生长因子（IGFs）的表达。IFG-I在机体水平能够促进动物生长发育，在细胞水平能够促进细胞的增殖和分化[10]。动物的生长性能和血清中IGF-I水平呈正相关[11]。限制饲喂、早期断奶和换料会导致断奶仔猪血浆中IGF-I水平下降，影响仔猪的生长性能[12]。添加植物提取物可以促进GH和IGF-I的合成和分泌，改善仔猪的生长性能[13]。本试验发现，日粮中添加RE能够显著提高仔猪血清中GH、IGF-I水平，从而促进仔猪的生长发育，提高断奶仔猪的平均日增重和采食量。Ghrelin是由28个氨基酸组成的多肽，在体内和体外均能促进GH的分泌[14]。Ghrelin还能够提高动物的食欲，影响动物胃肠动力以及食物摄入。本研究中，各RE组断奶仔猪的血清Ghrelin水平均上升，表明RE对Ghrelin的分泌释放具有促进作用。与对照组相比，不同RE组断奶仔猪的平均日采食量和平均日增重明显增加，料重比降低，表明RE特殊的风味和气味能够提高断奶仔猪食欲，提高断奶仔猪的生长性能。各RE组断奶仔猪血清GH、IGF-I、Ghrelin水平均有所上升，这与仔猪采食量和生长性能提高的结果相吻合。本研究结果为生产中解决仔猪断奶后拒食和采食量急剧下降和体重下降等问题提供参考。高剂量RE组也有提高仔猪日增重和采食量的作用，但差异却不显著，原因可能是RE添加量提高之后，日粮气味偏重，而猪的嗅觉味觉灵敏，使仔猪采食量受到影响。3.3RE对断奶仔猪抗氧化功能的影响氧化应激是影响断奶仔猪生长性能的重要因素。食用富含天然抗氧化剂的产品可以增强动物机体的抗氧化能力，以抵抗氧化应激和活性氧（ROS）引起的组织损伤和疾病。天然的酚类抗氧化剂成分在促进机体健康方面具有普遍功效，对胃肠道健康具有保护作用。RE是植物提取物添加剂，具有很强的抗氧化作用，其主要成分包括鼠尾草酚、迷迭香酚、鼠尾草酸、鼠尾草酸甲酯以及部分类黄酮。RE可能通过诱导核转录因子激活Nrf2的靶基因调节细胞内的抗氧化系统，从而增强细胞内GSH-Px活性[15]。通过体内和体外试验研究RE的抗氧化机制，结果均表明RE能够抑制超氧阴离子、羟基自由基和一氧化氮等自由基的形成，或与氧自由基结合，形成稳定的中间体，有效阻碍自由基种类的扩增，从而减少氧化应激损伤，发挥RE的抗氧化作用[16-17]。在动物日粮中添加抗氧化剂是提高动物生产性能和抗氧化功能的常见方法。SOD、CAT和GSH-Px活性常被用于判定动物体内氧化应激的程度。RE可以显著提高小鼠血清、肝及肾组织的SOD和CAT活性；可使肾组织GSH-Px活性明显升高；还可以降低血清、肝及肾组织MDA含量，表明RE具有提高小鼠体内抗氧化酶活性，同时降低小鼠体内脂质过氧化物含量的作用[18]。本试验表明，RE组断奶仔猪血清中GSH、SOD和CAT活性均显著提高，血清中MDA含量下降，表明RE可以提高仔猪断奶期的抗氧化能力，与前人研究结果一致。综合RE对断奶仔猪平均日采食量、平均日增重以及血清GSH、SOD和CAT活性的影响，200 mg/kg RE能够明显缓解仔猪断奶氧化应激，并改善其生长性能。3.4RE对断奶仔猪免疫功能的影响免疫球蛋白对动物机体免疫调节非常关键[19]。免疫球蛋白是体内具有抗体活性的蛋白质，能够与抗原结合，降低机体的损伤，在炎症反应中起重要作用[20-21]。饲喂适量的植物提取物能够显著提高断奶仔猪血清中IgA和IgG的含量[22]，迷迭香提取物可以显著提高奶山羊生产性能和血清中IgA和IgM含量[18]。本试验中，添加200~600 mg/kg RE可以不同程度地提高断奶仔猪血清中IgA、IgM和IgG的含量，表明在仔猪日粮中添加RE可以有效改善断奶仔猪的免疫机能，这与前人的研究基本一致。断奶仔猪血清免疫球蛋白含量提高的原因可能是RE抑制了机体相关炎症通路及相关炎症因子的表达，从而激活机体的免疫系统[23]；还可能是由于RE本身具有抗氧化功能，能够有效清除或降低机体自由基的水平。4结论本试验结果表明，在仔猪日粮中添加为200 mg/kg的RE时，能够提高仔猪机体抗氧化能力，缓解仔猪断奶氧化应激，改善断奶仔猪的生长性能。