近年来，本交笼养模式因其人工劳动力数量少、生产管理效率高和福利性好等优点而快速发展[1]，广泛应用于蛋种鸡[2]和山麻鸭[3]等家禽生产中。畜牧科技工作者开展了本交笼养模式公母配比[4]、剪趾、剪冠[5-6]以及种鸡行为与生长发育[7]等方面的研究，促进了本交笼养殖技术的发展。在本交笼养模式中，种公鸡与母鸡饲养在一起，种公鸡采食母鸡饲料。种公鸡在繁殖期间的营养需求不同于产蛋期母鸡，种公鸡在繁殖期间对蛋白质和钙水平需求量低于产蛋期母鸡营养需要量[8]。种公鸡采食母鸡高钙高蛋白饲料后增加了种公鸡代谢负担，对公鸡肾脏产生损伤，而且还会引起机体代谢紊乱而影响生殖激素的分泌，进而影响繁殖性能。饲料营养水平对公鸡生殖激素的分泌和精液质量具有一定的影响[9]。吴元朝[10]研究发现，高钙日粮对种蛋受精率具有一定的负面影响，导致种公鸡的繁殖性能下降。王竹伟等[11]研究发现，种公鸡精子活力随饲料中蛋白质水平的提高而降低。因此，本试验以皖南三黄鸡公鸡为研究对象，探索母鸡日粮对公鸡体重、血清生化指标、睾丸组织形态结构和精液品质的影响，为皖南三黄鸡本交笼养模式提供参考。1材料与方法1.1试验设计与饲养管理选取30周龄体重相近、健康状况良好的皖南三黄鸡公鸡60只，随机分为2组（公鸡日粮组和母鸡日粮组），分别饲喂公鸡日粮和母鸡日粮，每组6个重复，每个重复5只鸡。基础日粮组成及营养水平见表1。所有公鸡采用单笼饲养，每天早晚分别饲喂粉料1次，自由采食和饮水，光照时间为14 h/d，光照强度为10 lx，每周消毒1次。试验期8 w。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.009.T001表1基础日粮组成及营养水平项目公鸡日粮组母鸡日粮组原料组成/%玉米70.0052.40豆粕23.4030.10石粉1.208.40预混料5.005.00大豆油0.404.10合计100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)11.9011.5粗蛋白/%15.5017.00赖氨酸/%0.720.72钙/%1.103.70有效磷/%0.450.45注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 10 000 IU、VD3 3 000 IU、VE 20 IU、VK 3 IU、VB12 0.025 mg、VB1 1.8mg、VB2 5.0mg、生物素0.04 mg、叶酸0.6 mg、烟酸12 mg、泛酸12 mg、吡哆醇3.75 mg、锰100 mg、锌75 mg、铁80 mg、铜8 mg、碘0.15 mg、硒0.10 mg。2.营养水平均为计算值。1.2测定指标及方法1.2.1生长性能试验期间每天按重复记录上料量和余料量，计算平均日采食量。每两周公鸡称重1次。平均日采食量每周统计1次，体重每两周统计1次。平均日采食量=（上料量-余料量)/(试验天数×试验鸡数)(1)1.2.2血清生化指标在试验中期和试验结束时，所有公鸡禁食12 h后，每组随机选择18只公鸡（每个重复3只公鸡），翅下静脉采集血样2 mL，并用4 ℃冰袋保存迅速送到实验室。在4 ℃条件下3 000 r/min离心10 min，分离血清，使用南京建成生物工程研究所试剂盒测定血清总蛋白（TP）、葡萄糖（GLU）、尿素氮（BUN）、总胆固醇（T-CHO）、钙（Ca）、雄激素（T）、促卵泡激素（FSH）和黄体生成素（LH）等生化指标。血清TP和GLU采用BCA微板法测定，BUN和T-CHO采用ELISA法测定，Ca使用原子吸收法测定，T、FSH和LH使用放射免疫分析法测定。在试验结束时，使用血凝抑制试验测定禽流感（H5N1、H7N9、H9N2）和新城疫（ND）抗体效价。1.2.3睾丸组织学试验结束时，鸡群空腹12 h后，每组随机选择6只公鸡（每个重复1只公鸡）进行屠宰，采集公鸡右侧睾丸，采用伊红-苏木精染色法制备睾丸组织切片，每只鸡制作3张切片，一个切片拍3个视野，采用Image Pro Plus软件测定曲细精管周长、面积和单位面积的间质细胞数量。1.2.4精液品质精液品质测定前使用腹部按摩法对所有公鸡进行每周2次的人工采精训练，在试验第7~8 w每只鸡进行精液品质检测。精液采集由同一名采精人员在9：00—11：00和15：00—17：00进行，使用2.0 mL离心管收集每只公鸡的精液，测定精液量、精液颜色、精液pH值、精子密度、精子活率和精子畸形率等指标[12]。1.3数据统计与分析试验数据采用WPS记录，SPSS 20.0软件进行t检验分析，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1母鸡日粮对皖南三黄鸡公鸡平均日采食量和体重的影响（见表2、表3）由表2、表3可知，整个试验期间，母鸡日粮对皖南三黄鸡公鸡平均日采食量和体重无显著影响（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.009.T002表2母鸡日粮对皖南三黄鸡公鸡平均日采食量的影响组别1 w2 w3 w4 w5 w6 w7 w8 w1~8 w公鸡日粮组88.1±10.698.6±5.7b90.6±7.097.1±6.394.2±6.499.6±6.498.6±8.3101.0±7.096.0±8.40母鸡日粮组91.6±12.9103.3±8.0a92.0±8.296.9±11.594.7±11.7101.4±8.999.5±8.999.5±8.497.4±10.7注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。g/（只·d）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.009.T003表3母鸡日粮对皖南三黄鸡公鸡体重的影响组别2 w4 w6 w8 w公鸡日粮组2 264.2±184.42 312.6±194.62 359.1±203.32 436.9±215.4母鸡日粮组2 255.7±236.82 305.4±225.72 375.6±281.62 439.9±294.7g/只2.2母鸡日粮对皖南三黄鸡公鸡血清生化指标及抗体水平的影响（见表4~表6）由表4可知，在试验中期，公鸡日粮组公鸡血清葡萄糖含量比母鸡日粮组高7.69%（P0.05），公鸡日粮组公鸡血清钙含量比母鸡日粮组低10.9%（P0.05）。由表5可知，试验结束时，公鸡日粮组公鸡血清钙含量比母鸡日粮组低12.5%（P0.05），血清雄激素水平比母鸡日粮组高10.2%（P0.05）。由表6可知，在试验结束时母鸡日粮对皖南三黄鸡公鸡H5N1、H7N9、H9N2和ND抗体水平均无显著影响（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.009.T004表4母鸡日粮对试验中期皖南三黄鸡公鸡血清生化指标的影响组别总蛋白/(mg/L)葡萄糖/(mmol/L)尿素氮/(μmol/L)总胆固醇/(μmol/L)钙/(ng/L)黄体生成素/(ng/L)促卵泡激素/(IU/L)雄激素/(nmol/L)公鸡日粮组3 360.20±329.500.42±0.05a155.30±22.30905.40±128.30687.60±94.90b924.30±166.907.20±1.304.70±0.70母鸡日粮组3 177.40±374.300.39±0.03b156.30±28.10851.40±128.50771.70±78.70a991.20±154.807.50±1.204.40±0.9010.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.009.T005表5母鸡日粮对试验结束时皖南三黄鸡公鸡血清生化指标的影响组别总蛋白/(mg/L)葡萄糖/(mmol/L)尿素氮/(μmol/L)总胆固醇/(μmol/L)钙/(ng/L)黄体生成素/(ng/L)促卵泡激素/(IU/L)雄激素/(nmol/L)公鸡日粮组3 416.40±338.800.43±0.05148.50±23.201 145.40±69.70666.70±91.00b1 013.10±79.306.90±0.305.40±0.40a母鸡日粮组3 248.20±362.900.41±0.03154.50±22.601 113.60±47.70761.80±74.10a1 051.80±84.407.20±0.504.90±0.30b10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.009.T006表6母鸡日粮对皖南三黄鸡公鸡抗体水平的影响 单位：lg2组别H5N1H7N9H9N2ND公鸡日粮组8.2±0.97.6±1.47.3±1.46.6±1.3母鸡日粮组8.1±0.97.7±1.07.1±1.17.1±0.82.3母鸡日粮对皖南三黄鸡公鸡睾丸组织形态和精液品质的影响（见表7、表8）由表7、表8可知，两种日粮对皖南三黄鸡公鸡睾丸组织形态和精液品质均无显著影响（P0.05），但是公鸡日粮组各指标优于母鸡日粮组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.009.T007表7母鸡日粮对皖南三黄鸡公鸡睾丸组织形态的影响组别曲细精管周长/mm曲细精管面积/mm2间质细胞数/（个/mm2）公鸡日粮组1.06±0.070.08±0.01131.40±35.32母鸡日粮组1.05±0.050.08±0.01115.11±32.1010.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.009.T008表8母鸡日粮对皖南三黄鸡公鸡精液品质的影响组别精液量/μL精液颜色精液pH值精子密度/(×109/mL)精子活率/%精子畸形率/%公鸡日粮组380.9±204.02.7±0.87.8±0.31.9±0.986.6±11.410.4±6.6母鸡日粮组319.2±124.52.2±1.27.8±0.31.7±0.983.6±14.29.7±5.53讨论3.1母鸡日粮对皖南三黄鸡公鸡平均日采食量和体重的影响适宜的营养水平是保证家禽健康的重要条件。能量和粗蛋白是家禽重要的营养元素，且两者代谢相互影响[13]。家禽具有为能而食的特性，随着饲料代谢能的提高，采食量相应减少[14]。饲粮粗蛋白水平也影响鸡的生长性能，日粮中粗蛋白含量过高会加重机体代谢负担，降低饲料利用率，增加排泄物中氮排放；而粗蛋白含量过低则会导致鸡生长发育受阻[15]。日粮钙水平对鸡采食量无显著影响[16]。随着饲料中代谢能水平的提高，鸡的平均日采食量逐渐下降[17]。本试验中，母鸡日粮对皖南三黄鸡公鸡体重和平均日采食量无显著影响，与柳迪等[18]研究结果不一致，原因可能是母鸡日粮中高含量的钙会螯合一部分脂肪，进而降低了日粮的能量值[19]。3.2母鸡日粮对皖南三黄鸡公鸡血清生化指标的影响血清生化指标能够反映动物机体营养物质代谢和组织器官机能的变化情况[20]。尿素氮含量与蛋白质的利用率之间呈显著负相关，反映动物体内蛋白质的代谢情况。在动物机体健康状况下，肝中蛋白质代谢和肾排泄功能正常时，血清尿素氮含量维持在一定的范围内，尿素氮含量升高表示肝肾功能受损[21]。林厦菁等[22]研究发现，饲料营养水平对公鸡血清尿素氮含量无显著影响。郭小权等[23]研究发现，使用高钙饲料饲喂育雏期伊莎蛋鸡，血清尿素氮含量显著提高。荣雪路[24]研究发现，饲喂高钙或高蛋白饲料可以使鸡血清尿素氮含量显著升高。本研究中，母鸡日粮对皖南三黄鸡公鸡血清尿素氮含量无显著影响，表明在试验期内母鸡日粮对公鸡肝肾功能无不良影响。血糖是动物机体主要能量来源之一，为新陈代谢提供动力。多乐等[25]研究发现，高能量饲料能够显著提高血清葡萄糖含量。柳迪等[18]研究发现，饲料代谢能和粗蛋白水平对育成期坝上长尾鸡血清葡萄糖含量有显著影响。本研究中，试验中期公鸡日粮组公鸡血清葡萄糖含量显著高于母鸡日粮组，与上述研究结果一致；在试验结束时，两组公鸡血清葡萄糖含量之间差异不显著，可能与公鸡血清葡萄糖调控机制有关，使血清葡萄糖含量稳定在一定的范围内。钙是生物体正常细胞生理和信号传导所必需的矿物质，具有促进骨骼生长、调节神经和肌肉的正常活动以及维持体内的酸碱平衡等生物学功能。饲料中钙含量过高将导致钙与其他元素产生颉颃作用，可能诱发蛋鸡疾病[26]。唐建霞等[27]和郭小权等[23]研究发现，高钙日粮组鸡血钙含量显著提高。石诚[28]研究发现，日粮能量水平对血钙含量无显著影响，但日粮钙含量对血钙产生显著影响，随着日粮钙含量的升高，血钙含量也有一定的提高，而低钙日粮显著降低血钙含量。本研究中，母鸡日粮组公鸡血钙含量高于公鸡日粮组，与石诚[28]研究结果一致，表明饲料中钙含量高会导致鸡肠道对钙的吸收增加，进而血钙含量升高。公鸡睾丸生长发育和精子发生受雄激素、促卵泡激素和黄体生成素等激素的调控[29]。促卵泡激素可以促进睾丸曲细精管发育和刺激睾丸支持细胞增殖分化，促进睾丸生成精子[30]。黄体生成素能够促进睾丸间质细胞增殖并分泌睾酮[31]。雄激素能够促进精子的发生、生殖器官的发育和维持第二性征[32]。雄激素、促卵泡激素和黄体生成素等激素受环境[33]、饲料营养[34]和体内其他激素水平[35]等因素的影响。雄激素是精子发生的必需激素，雄激素分泌不足会导致公鸡精子发生异常，尤其是雄激素浓度较低的老年公鸡[36]。本研究中，试验中期两种日粮对血清雄激素、促卵泡激素和黄体生成素含量无显著影响，随着饲喂公鸡日粮时间的延长，试验结束时公鸡日粮组血清雄激素水平显著高于母鸡日粮组，可能与高钙母鸡日粮中钙含量高导致睾丸的间质细胞数量减少有关。3.3母鸡日粮对皖南三黄鸡公鸡睾丸组织形态和精液品质的影响睾丸生长发育受到遗传和饲料营养等方面因素的影响[37-38]。Xue等[39]研究发现，黄羽种公鸡日粮粗蛋白水平为14%，能量为11.72、12.14 MJ/kg组公鸡的曲精细管上皮高度、曲细精管周长和曲细精管面积均高于11.30 MJ/kg日粮组，其中以11.72 MJ/kg日粮组最佳。本研究中，公鸡日粮组公鸡睾丸曲精细管周长和面积与母鸡日粮组之间无显著差异，与Xue等[39]研究结果不同，表明本试验中的两种日粮营养水平未对公鸡睾丸曲精细管产生显著影响。Thompson[40]研究发现，高血钙会导致睾丸组织细胞内钙离子增加，诱发间质细胞凋亡。Pezzella等[41]研究发现，高浓度的促卵泡激素会损伤曲精细管上皮细胞和精子发生。公鸡日粮组睾丸间质细胞数量高于母鸡日粮组，可能是母鸡日粮组公鸡血清钙和促卵泡激素含量较高而导致公鸡睾丸间质细胞数量减少。精液品质受品种、养殖方式和饲料营养等因素的影响，可以通过精液量和精子密度等指标进行评价[42]。公鸡精液量受品种、体重、饲料营养、饲养管理、环境温度和生殖激素水平等因素的影响[12,43-45]。高小芳等[46]研究发现，广西三黄鸡能量水平为11.7 MJ/kg时，精液量最多。本研究中，公鸡日粮组精液量高于母鸡日粮组，可能与公鸡日粮组能量和雄激素水平较高有关，维持了公鸡生殖器官处于较好的生理机能。种公鸡饲喂高于自身需求的粗蛋白日粮会导致繁殖期缩短和精子密度降低[47]。Tyler等[48]研究发现，种公鸡饲喂10.5%~15.0%粗蛋白日粮时对精子密度无影响。但高钙日粮则显著降低了42周龄和57周龄公鸡的精子密度[49]。本研究中，公鸡日粮组公鸡的精子密度高于母鸡日粮组，可能是高钙日粮导致睾丸间质细胞数量减少进而影响了精子发生，从而导致精子密度降低。4结论本研究结果表明，母鸡日粮可以提高皖南三黄鸡公鸡血钙含量，减少公鸡睾丸间质细胞数量，进而降低了血清中雄激素水平和精子密度。