单宁是广泛存在于植物体内的一类多酚类次生代谢产物，可分为缩合单宁和水解单宁两大类[1]。由于单宁会造成动物采食量和营养物质消化率的降低，早期研究认为单宁是饲料中的抗营养因子[2]。近年来，随着研究的不断深入，研究人员发现日粮中添加适量的单宁可以对动物尤其是反刍动物产生积极的影响，如日粮中添加适量单宁可以提高反刍动物生产性能[3]，改善氮的利用率[4]，预防臌胀病[5]，减少甲烷排放[6]，减少消化道内寄生物的数量[7]，抑制瘤胃生物氢化[8]等。因此，开发富含单宁的饲料资源对提高反刍动物生产性能、改善畜产品品质、保护环境具有重要意义。紫色达利菊（Dalea purpurea Vent.）是一种广泛分布在北美草原上的豆科牧草，营养价值高且适口性好，缩合单宁含量高[9-10]。Jin等[9]研究发现，紫色达利菊中缩合单宁含量为59~94 g/kg DM时，对DM的体外瘤胃降解率仅有微弱的影响，但是降低了CP的瘤胃降解率。Huang等[11]报道，紫色达利菊中缩合单宁含量为36 g/kg时，减少了羔羊CP的全消化道消化率，但对羔羊有机物（OM）的消化率无影响。因此，紫色达利菊虽然缩合单宁含量高，但是对反刍动物仍是一种营养价值很高的牧草。目前，关于紫色达利菊的研究主要以鲜草或冻干的形式进行，有关紫色达利菊贮藏为青贮或干草的形式的研究报道鲜有。贮藏方法会改变牧草的化学成分及缩合单宁的生物活性。因此，本研究旨在评价干草或青贮的贮藏方式对紫色达利菊营养成分以及瘤胃降解特性的影响，为紫色达利菊的合理利用及推广提供参考。1材料与方法1.1试验材料紫色达利菊采自加拿大阿尔伯塔省莱斯布里奇研究中心（Lethbridge，AB，Canada）的3块牧草试验地，在盛花期时进行收割，留茬5 cm。1.2试验方法将从每块试验地收获的牧草分成3份，分别以冷冻干燥（F组）、干草（H组）和青贮（S组）的形式进行贮藏。本试验用冷冻干燥的牧草代表鲜草（F），这一部分紫色达利菊收获后立即存放在-40 ℃，之后进行冻干。用于制作干草的紫色达利菊在田间晒至约85%干物质时，采用打捆机打成方形草捆（92 cm × 46 cm × 31 cm），置于密闭干燥的仓库内室温贮藏。贮藏45 d。随机对来自3块试验地的草捆进行采样，将相同试验地的样品混匀，用于化学成分的分析和瘤胃尼龙袋降解试验。制作青贮时，紫色达利菊在田间枯萎至约30%干物质，切短至1.0 cm左右，分成两个等份。一部分以每千克干物质300 mL的比例喷洒去离子水，分装至6个实验室型青贮罐中（直径10.4 cm × 高度35.6 cm，2.7 kg容量），每块地2个重复。第二部分喷洒聚乙二醇溶液（333 g/L，MW6000，Sigma），同样以每千克干物质300 mL的比例分装至相同的6个实验室型青贮罐中，作为青贮+聚乙二醇处理（SP组）。青贮罐压实后两端用橡胶盖密封，每个盖子装有一个长7 cm左右的橡胶管，在青贮的前7 d橡胶管保持开放，便于排气。青贮45 d后，打开青贮筒，每块试验地的两个青贮罐的内容物混匀，进行随机采样，采集的样品冻干后用于化学成分的分析和后续瘤胃尼龙袋降解试验。1.3瘤胃尼龙袋降解试验选择3头32月龄体重相近（475.0±8.6）kg、健康状况良好并装有永久瘤胃瘘管的安格斯母牛，由加拿大农业农村部莱斯布里奇市研究中心养殖场提供。基础日粮组成及营养水平见表1。每天8：00和18：00进行饲喂，母牛自由饮水。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.002.T001表1基础日粮组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100苜蓿干草39粗蛋白/%12.6大麦青贮44中性洗涤纤维（NDF）/%37.4大麦片14酸性洗涤纤维（ADF）/%21.5预混料3综合净能/(MJ/kg)8.0注：1.每千克预混料为日粮提供：Cu 250 mg、Fe 1 500 mg、Zn 800 mg、Mn 1 000 mg、NaCl 150 g、VA 750 000 IU、VD 200 000 IU、VE 4 600 IU。2.营养水平均为计算值。所有的牧草样品研磨过2 mm筛。称取4 g样品，装入尼龙袋（5 cm × 20 cm，孔径53 µm，ANKOM公司，USA）内，每个样品为每头牛每个时间点设置两个重复，尼龙袋放入大的网袋（20 cm × 30 cm）内，在投入瘤胃之前，为了除去可溶性物质，在温水（39 ℃）中浸泡5 min。投入瘤胃内后分别培养1、2、4、8、12、24、48、72 h后取出，即使用自来水进行冲洗，直至水变清为止。其中空白的尼龙袋不放进瘤胃内，但是在相同条件下进行清洗。将所有带有消化残渣的尼龙袋在55 ℃的烘箱内干燥48 h，保存于自封袋中，置于阴凉干燥处。1.4测定指标及方法1.4.1营养成分OM、DM和酸性洗涤木质素（ADL）的测定参照AOAC[12]的方法，NDF和ADF的测定方法参照Van Soest等[13]的方法。总氮（N）含量通过燃烧试验测定（NA 1500，Carlo Erba Instruments，Rodano，MI，Italy）。测定中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维后的残渣中氮的含量用于确定中性洗涤不溶性氮（NDIN）和酸性洗涤不溶性氮（ADIN）的含量。采用Nelson-Somogyi法[14]测定可溶性碳水化合物（WSC）含量。缩合单宁的测定采用丁醇-盐酸法，参照Terrill等[15]的方法。1.4.2瘤胃养分降解率采用公式计算DM、CP和NDF的瘤胃降解率。瘤胃养分降解率=(1-降解后残渣养分含量/降解前样品养分含量)×100%(1)SP组样品计算得到的上述变量通过去除样品中聚乙二醇的含量进行校正。瘤胃降解参数采用Mcdonald的公式进行计算。P=a+b(1-e-c(t-L)) (2)式中：P为饲料DM、NDF和CP在某一时间点t的降解率（%），a为饲料中可溶性部分的快速降解部分（%），b为饲料慢速降解部分（%），c为慢速降解部分b的降解速率（%/h），t为培养时间，L为滞后时间（h）。1.4.3有效降解率根据公式计算有效降解率（ED）。ED=a+[bc/(c+k)]e-(c+k)L (3)式中：k为瘤胃食糜的外流速度，计算NDF有效降解率时k=0.02，计算DM和CP有效降解率时k=0.05。计算NDF的降解参数和有效降解率时，设置a为0，因为粗纤维不含可溶性部分。每头牛的常量a、b、c、L使用SAS程序的非线性回归模型进行计算。1.5数据统计与分析试验数据采用SAS 2009软件的Mix模型进行统计分析，LSD法进行多重比较。结果以平均值和标准误表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1贮藏方法对紫色达利菊营养成分的影响（见表2）由表2可知，贮藏方法对紫色达利菊中N、ADF和ADL的含量无影响（P0.05）。SP组紫色达利菊中ADF含量显著低于S组（P0.05）。3种不同贮藏方式紫色达利菊中OM含量排列为H组F组S组，WSC含量排列为F组H组S组。S组和SP组紫色达利菊中OM和WSC的含量相似（P0.05）。F组紫色达利菊NDF含量显著低于其他组（P0.05）。H组和SP组紫色达利菊中的NDIN和ADIN的含量显著低于F组和S组（P0.05）。S组紫色达利菊CT含量显著低于H组和F组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.002.T002表2贮藏方法对紫色达利菊营养成分的影响项目OM/(g/kg DM)N/(g/kg DM)NDIN/(g/kg TN)ADIN/(g/kg TN)NDF/(g/kg DM)ADF/(g/kg DM)ADL/(g/kg DM)WSC/(g/kg DM)CT/(g/kg DM)F组927.00b25.00112.00a124.00a440.00b389.00b74.3026.80a77.00aH组932.00a27.0097.00b83.40b478.00a403.00ab90.2012.00b78.00aS组923.00c27.00110.00a113.00a480.00a418.00a87.002.72c28.00bSP组924.00c28.0081.40c78.40b483.00a386.00b85.501.25c—标准误0.950.602.285.6110.107.534.750.633.19P值0.010.060.010.010.030.070.200.010.01注：1.同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。2.“—”表示未检测。2.2贮藏方法对紫色达利菊DM瘤胃降解特性的影响（见表3）由表3可知，与其他组相比，H组在各个时间点上均表现出了较低的DM瘤胃降解率（P0.05）。随着各组紫色达利菊在瘤胃内的消化时间增加，DM降解率也随之增大，但在48 h后DM降解率增长速度变缓。与其他组相比，SP组紫色达利菊在瘤胃DM可溶性组分a显著减少（P0.05），慢速降解组分b显著升高（P0.05），降解速率c显著升高（P0.05）。F组的DM降解动力学参数a、b、c均显著高于H组（P0.05），与S组数据相近。与S组相比，H组DM降解速率c显著降低（P0.05）。DM的有效降解率（ED）排序为SP组F组S组H组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.002.T003表3贮藏方法对紫色达利菊DM瘤胃降解特性的影响项目F组H组S组SP组标准误P值降解率/%1 h33.61a26.43b30.93a34.07a1.540.012 h36.77a29.22b35.38a38.88a0.790.014 h38.64a29.87c37.62b43.59a0.340.018 h46.36a39.39c43.96b44.12a1.030.0124 h55.34b51.57c55.14b59.83a2.000.0148 h68.05a64.07b66.70a67.39a0.790.0172 h70.39a66.58b69.13a68.75a0.800.01降解参数a/%23.30a21.40b22.30ab18.10c0.630.01b/%41.20b38.20c40.10bc47.30a0.850.01c/(%/h)0.09b0.04c0.08b0.14a0.010.01L/h00.03000.010.15ED/%49.40b38.00d46.10c53.10a0.830.01注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。%2.3贮藏方法对紫色达利菊CP瘤胃降解特性的影响（见表4）由表4可知，H组的CP瘤胃降解率在1~48 h间的各个时间点均显著低于其他组（P0.05）。CP瘤胃降解率在2~24 h的排序为SP组S组F组H组，在48 h时的排序为SP组F组S组H组。H组、S组、SP组的CP瘤胃降解参数a均显著高于F组（P0.05），S组的CP降解参数b显著低于其他组（P0.05）。CP的降解速率c的排序为SP组S组F组H组，而ED的排序为SP组S组F组H组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.002.T004表4贮藏方法对紫色达利菊CP瘤胃降解特性的影响项目F组H组S组SP组标准误P值降解率/%1 h37.92c34.08c59.76b66.98a3.380.012 h43.23c38.83d64.72b73.65a1.610.014 h54.89c44.73d68.19b77.09a1.030.018 h64.14c56.53d73.18b83.96a1.200.0124 h69.38c63.72d74.73b84.05a2.410.0148 h84.42b81.18c83.91b86.58a0.800.0172 h85.83ab84.14b86.14ab87.75a0.820.01降解参数a/%24.40b34.50a35.40a30.80a1.840.01b/%55.60a53.10a43.10b53.30a1.570.01c/(%/h)0.19c0.05c0.66b1.17a0.100.01L/h0000——ED/%68.10c59.20d75.10b81.50a0.900.012.4贮藏方法对紫色达利菊NDF瘤胃降解特性的影响（见表5）由表5可知，H组在各个时间点的NDF降解率均最低。S组在各个时间点的NDF降解率均显著高于F组（P0.05）。贮藏方法对NDF瘤胃降解参数影响不大，其中对降解参数b和c没有影响。与F组和S组相比，H组的滞后时间更长，ED显著降低（P0.05）。S组和SP组的所有NDF瘤胃降解参数b、c、L和ED数据均相近。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.002.T005表5贮藏方法对紫色达利菊NDF瘤胃降解特性的影响/%项目F组H组S组SP组标准误P值降解率/%1 h8.75b1.53c14.71a15.15a1.240.012 h11.97b1.84c17.41a17.14a1.330.014 h9.05b1.58c18.23a20.15a1.040.018 h12.36b5.10c20.34a18.67a1.110.0124 h26.99b22.13c32.47a34.92a2.200.0148 h40.52b34.83c44.50a43.95ab1.530.0172 h45.47b40.22c48.79a46.82ab1.460.01降解参数b/%48.1050.5043.6042.702.420.09c/%0.040.110.110.120.010.43L/h0b5.49a0b0b1.210.01ED/%31.90a20.70b36.80a36.40a1.940.013讨论3.1贮藏方法对紫色达利菊营养成分的影响研究表明，贮藏后的牧草化学成分会随牧草的种类以及制备青贮或干草时的条件的改变而变化[16]。本试验中，干草和青贮中的NDF含量高于鲜草，表明干草的制备过程和青贮过程增加了紫色达利菊中纤维素的含量。与鲜草相比，干草中NDF含量增加可能是由于牧草晒制和打捆过程中叶子的大量丢失造成。相反，青贮紫色达利菊中粗纤维含量增加可能是由于青贮过程中大量可溶性营养物质发酵造成的，可根据青贮紫色达利菊中WSC低于冻干草判断。Broderick[17]研究发现，苜蓿青贮中NDF含量显著增加，与本试验结果相似。本试验中，S组和SP组的OM、CP、NDF含量无显著性差异，表明缩合单宁对紫色达利菊青贮OM、CP、NDF含量无影响，与之前的研究结果相似[18-20]。研究表明，在pH值3.5~7.0的青贮酸性环境下，单宁可与植物蛋白发生交联反应保护蛋白质[21]。Fitri等[22]研究发现，青贮饲料的NDIN和ADIN含量随着单宁含量增加而增加。NDIN和ADIN含量增加表明单宁与蛋白质在青贮过程形成了具稳定氢键的复合物，从而抵抗植物和微生物蛋白酶的降解[23]。本试验中，S组NDIN和ADIN含量均显著高于SP组，证实了这一结论。本试验所测缩合单宁的含量实际上仅是可提取缩合单宁的含量。而干草中可提取缩合单宁的含量与鲜草的含量相似，表明晒干过程没有影响紫色达利菊中可提取缩合单宁的含量。研究发现，红豆草干草中的可提取缩合单宁含量与鲜草中含量相似[24-26]。但有研究发现，与鲜草相比，晒干的绢毛胡枝子[27]和红豆草[28]干草中的可提取缩合单宁含量降低。这些研究之间存在的差异可能与干燥条件和牧草种类的不同有关。与鲜草相比，青贮中可提取缩合单宁含量大量减少，主要是因为青贮过程中植物细胞破裂，使缩合单宁与植物碳水化合物和蛋白质结合形成复合体[29]，增加了结合缩合单宁的含量。红豆草青贮和桑叶青贮被发现可提取缩合单宁含量减少而结合缩合单宁含量增加[25-26]。3.2贮藏方法对紫色达利菊DM、CP和NDF瘤胃降解率的影响研究表明，牧草贮藏时的条件会影响贮藏牧草的瘤胃降解率[30]。在本试验中，干草的DM、CP和NDF瘤胃降解率均低于鲜草，可能是由于在牧草晒制和打捆过程中叶子的大量丢失造成，与干草比鲜草中NDF含量增高而WSC减少的结果一致。叶子中含有大量可溶性物质，因此叶子的丢失造成了干草干物质可溶性组分a的减少。干草制作过程中叶子的丢失是降低干草营养价值的主要因素之一[31]。降解速率的降低也造成了干草DM降解率的减少。与冻干牧草相比，干草CP和NDF有效降解率的降低主要是降解速率较低和瘤胃滞后时间较长。在鸭茅和黑麦草中，也发现晒干的牧草比鲜草蛋白和粗纤维的瘤胃降解率降低[32-33]。与鲜草相比，青贮紫色达利菊的DM瘤胃有效降解率减少，这可能与青贮中相对较高含量的ADF有关，因为ADF的含量通常被认为与DM的消化率呈负相关[34]。青贮中CP瘤胃有效降解率相比鲜草的增加可能是由于青贮过程中蛋白质的裂解增加了可溶性组分和降解速率。刘桃桃等[32]研究发现，甜高粱青贮的CP瘤胃有效降解率明显高于青贮前。与干草相比，青贮在增加DM和NDF的瘤胃降解率方面有优势，但这可能造成蛋白质的过度降解。本试验发现，SP组的DM和CP瘤胃降解率均明显高于S组，表明青贮虽然降低了可提取性缩合单宁的含量，但是仍然能保持一定的生物活性，抑制营养物质的降解，与马逢春[35]的研究结果一致。而青贮中CP的瘤胃降解率高于干草和鲜草，与青贮中可提取缩合单宁的含量大幅度减少有关。4结论本研究表明，青贮降低了紫色达利菊中缩合单宁的含量。与鲜草相比，紫色达利菊青贮和干草均降低了DM的瘤胃降解率。干草贮藏降低了紫色达利菊的CP和NDF的瘤胃降解率。紫色达利菊青贮提高了CP瘤胃降解率，对NDF的瘤胃降解无影响。因此，紫色达利菊贮藏为干草时能够有效保存缩合单宁的生物活性，降低CP的瘤胃降解率，具有改善反刍动物蛋白质利用率的潜能。