胍基乙酸（GAA）又被称为胍乙酸、N-咪基甘氨酸，是来自自然界的氨基酸及其类似物，多存在于脊椎动物体内，是合成肌酸的直接前体物质[1-2]。肌酸能够促进动物肌肉合成，提高动物的能量代谢和蛋白质代谢，肌酸在肌酸激酶作用下转化成磷酸肌酸，磷酸肌酸能够为机体生命活动提供能量[3-4]。动物自身可合成机体所需约60%的肌酸，合成量达不到自身需要量，仍需要从外界摄取肌酸[5]。但是直接补充肌酸存在稳定性差、利用率低等问题，故现多用GAA代替肌酸。饲粮中添加GAA能够提高荷斯坦牛血清中TP含量[6]；提高育肥猪血清中白蛋白（ALB）含量，并降低尿素氮（BUN）含量以及AST、ALT活性[7]。研究表明，GAA能够增强动物的抗氧化能力[8-9]。但是目前GAA在动物饲粮中应用还处在探索阶段，研究和应用多集中在肉鸡和育肥猪饲料添加剂方面，在水貂饲粮中的应用较少。本试验以水貂为研究对象，探究不同水平GAA对水貂抗氧化能力和血清生化指标的影响，以期为GAA在水貂生产实践中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料GAA有效含量为99%，由山东亿宝莱生物科技有限公司提供。1.2试验设计及饲养管理选取65日龄、体重相近的育成期短毛黑水貂120只（公、母各半），随机分为6组，每组10个重复，单笼饲养。Ⅰ~Ⅵ组日粮分别添加0、200、400、600、800、1 000 mg/kg GAA，Ⅰ组为对照组。饲养试验于山东省诸城市某水貂养殖场进行，试验分为Ⅰ期和Ⅱ期，Ⅰ期为7月2日~8月6日，Ⅱ期8月7日~9月10日，试验期共71 d。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.012.T001表1基础日粮组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00海杂鱼6.25代谢能/(MJ/kg)17.22鳕鱼排8.50粗蛋白/%30.24黄花鱼8.00粗脂肪/%20.64安康鱼头7.00粗灰分/%9.33鸡架18.75钙/%2.12鸭架22.50磷/%1.06鸡肝5.00鸡蛋4.00鸡头3.00鸭肉5.50膨化玉米6.00膨化小麦2.50预混料3.00注：1.预混料为每千克日粮提供：蛋氨酸5 000 mg、赖氨酸5 000 mg、烟酸35 mg、泛酸15 mg、叶酸1 mg、生物素0.5 mg、氯化钠5 000 mg、VA 10 000 IU、VK3 1 mg、VB1 21 mg、VB2 11 mg、VB6 11 mg、VB12 0.1 mg、铜5 mg、铁60 mg、锌50 mg、锰30 mg、碘0.5 mg、硒0.4 mg。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。试验前对棚舍与笼舍进行彻底消毒，按照免疫程序对水貂进行犬瘟热、肠炎和出血性肺炎疫苗接种，每天饲喂2次，全期自由采食和饮水。1.3测定指标及方法1.3.1血清生化指标和抗氧化指标饲养试验结束后，分别从每组挑取体重相近的公、母貂各6只，进行心脏采血，3 000 r/min离心10 min，制备血清并分装，-80 ℃冷冻保存。采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定血清中总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、碱性磷酸酶（AKP）、尿素氮（BUN）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、肌酐（CRE）、总抗氧化能力（T-AOC）、过氧化氢酶（CAT）、抑制羟自由基能力、抗超氧阴离子活力、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）等指标。1.3.2肝脏组织抗氧化指标将上述水貂处死，取其肝脏并置于液氮中冷冻，-80 ℃保存。将肝脏组织按质量比1∶9加入9倍预冷的生理盐水，于冰浴条件下匀浆，3 000 r/min离心10 min，制备10%组织匀浆。采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定肝脏组织T-AOC、CAT、抑制羟自由基能力、抗超氧阴离子活力、GSH-Px、MDA、T-SOD等指标。1.4数据统计与分析试验数据采用SPSS 22.0进行单因素方差分析，LSD法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1胍基乙酸对育成期公貂血清生化指标的影响（见表2）由表2可知，与对照组（Ⅰ组）相比，Ⅳ组公貂血清TP、ALB含量显著提高，AKP活性显著降低（P0.05），Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组公貂血清BUN含量极显著降低（P0.01），Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组公貂血清CRE水平极显著降低（P0.01），Ⅳ组公貂血清ALT活性极显著降低（P0.01），Ⅲ组、Ⅳ组公貂血清AST活性极显著降低（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.012.T002表2胍基乙酸对育成期公貂血清生化指标的影响项目Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组Ⅵ组P值TP/(g/L)37.89±6.20b44.48±9.94ab48.01±5.83ab52.08±5.69a38.94±3.38b38.24±5.86b0.036ALB/(g/L)23.68±3.28b29.20±7.79ab30.14±3.18ab32.66±6.78a30.65±7.84ab24.33±2.80b0.049GLB/(g/L)15.35±2.2215.87±2.1217.88±3.0622.78±2.7617.09±1.5916.48±3.380.103AKP/(U/L)50.31±1.37a46.12±4.42a41.15±4.26ab32.78±3.28b43.49±9.26a46.57±3.84a0.033BUN/(mmol/L)8.82±1.00Aa7.84±0.63ABab7.01±0.73BCbc7.00±0.37BCbc6.39±1.30BCcd5.73±0.65Cd0.001CRE/(μmol/L)87.13±3.50Aa68.02±7.81BCc60.74±7.60Ccd56.52±7.17Cd61.30±2.42Ccd77.61±6.17ABb0.001ALT/(U/L)236.08±21.10Aa227.82±13.46ABab202.47±26.57ABbc189.33±16.87Bc201.81±31.35ABbc207.11±20.83ABbc0.010AST/(U/L)49.95±1.07Aa45.16±5.28ABb40.18±0.77Bc39.99±1.71Bc43.89±4.15ABbc46.76±5.09Aab0.001注：同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2胍基乙酸对育成期母貂血清生化指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，Ⅴ组母貂血清中TP和GLB含量极显著升高（P0.01），Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组母貂血清中AKP活性显著降低（P0.05），Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组母貂血清中BUN含量显著降低（P0.05），Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组母貂血清中CRE水平极显著降低（P0.01），Ⅳ组、Ⅴ组母貂血清中ALT活性显著降低（P0.05），Ⅳ组、Ⅴ组母貂血清中AST活性极显著降低（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.012.T003表3胍基乙酸对育成期母貂血清生化指标的影响项目Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组Ⅵ组P值TP/(g/L)44.49±9.29Bc52.36±6.98ABbc54.19±7.61ABbc58.33±0.72ABab67.09±9.89Aa57.12±8.59ABab0.004ALB/(g/L)21.33±0.0326.01±6.3922.69±0.9725.15±7.2823.15±8.1024.98±4.730.919GLB/(g/L)26.53±3.16Bc29.72±3.65Bbc29.83±5.25Bbc36.78±6.84Bb49.43±5.66Aa33.23±3.11Bbc0.001AKP/(U/L)29.61±4.64a23.33±5.09ab18.89±3.14b17.78±4.04b16.90±1.19b21.02±5.35b0.019BUN/(mmol/L)9.27±1.28a8.08±1.98ab7.69±1.61ab6.07±1.67b5.76±0.74b6.94±2.49b0.021CRE/(μmol/L)76.62±8.78Aa66.14±2.72ABbc50.98±2.00Cd51.03±4.16Cd60.88±5.41BCc70.83±3.19ABab0.001ALT/(U/L)222.10±14.32a219.06±13.84a210.92±14.87ab198.72±12.64b198.68±9.73b206.03±13.92ab0.016AST/(U/L)47.65±2.32Aa46.60±1.85Aa45.18±2.20ABa41.46±3.55Bb40.91±2.01Bb44.77±0.33ABa0.0012.3胍基乙酸对育成期公貂血清抗氧化能力的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，Ⅲ组、Ⅳ组公貂血清抑制羟自由基能力显著升高（P0.05），Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组公貂血清中T-SOD活性显著升高（P0.05），Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组MDA含量极显著降低（P0.01），Ⅱ组~Ⅵ组公貂血清中GSH-Px活性极显著升高（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.012.T004表4胍基乙酸对育成期公貂血清抗氧化能力的影响项目Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组Ⅵ组P值T-AOC/(U/mL)5.01±1.405.14±0.506.07±1.675.99±1.225.52±0.715.06±2.070.759CAT/(U/mL)1.53±0.081.45±0.361.34±0.391.65±0.651.76±0.561.80±0.220.692抑制羟自由基能力/(U/mL)603.46±179.00b692.19±142.91ab835.61±89.12a865.63±173.28a748.10±139.45ab712.85±103.58ab0.050抗超氧阴离子能力/(U/mL)927.49±67.81944.47±32.17972.91±60.39977.09±37.34964.54±32.00940.49±31.00.521T-SOD/(U/mL)180.28±34.16c209.56±29.66abc221.85±27.81ab244.47±23.32a232.93±39.26ab199.36±18.79bc0.026MDA/(nmol/mL)65.78±3.52Aa58.55±2.39ABab52.45±7.11BCbc45.38±5.08Cc45.06±2.11Cc51.28±4.40BCbc0.001GSH-Px/(U/mL)847.78±63.90Cc960.19±54.48Bb1 116.67±19.25Aa1 138.89±20.03Aa1 186.11±11.79Aa991.67±28.27Bb0.0012.4胍基乙酸对育成期母貂血清抗氧化能力的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，Ⅳ组、Ⅴ组母貂血清中T-AOC显著升高（P0.05），Ⅳ组母貂血清中T-SOD活性极显著升高（P0.01），Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组母貂血清MDA含量极显著降低（P0.01），Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组母貂血清GSH-Px活性显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.012.T005表5胍基乙酸对育成期母貂血清抗氧化能力的影响项目Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组Ⅵ组P值T-AOC/(U/mL)3.52±1.24b3.75±0.82b4.44±1.14ab5.27±0.98a5.30±0.01a4.89±0.91ab0.026CAT/(U/mL)1.38±0.281.13±0.811.44±0.381.75±1.001.41±0.311.45±0.620.910抑制羟自由基能力/(U/mL)748.40±161.03828.44±107.59833.54±174.73794.89±195.10826.54±122.40777.57±189.910.959抗超氧阴离子能力/(U/mL)937.00±21.95959.16±44.44976.49±44.99970.37±20.35956.77±58.22935.26±39.530.415T-SOD/(U/mL)206.42±46.63Bb271.78±47.34ABab280.42±33.07ABa319.50±34.33Aa296.45±32.00ABa292.90±11.93ABa0.009MDA/(nmol/mL)76.95±9.67Aa64.42±5.85ABb61.89±9.23Bb57.54±6.14Bb57.83±8.59Bb58.51±10.45Bb0.005GSH-Px/(U/mL)785.19±75.84b879.17±32.83a909.63±58.38a934.89±16.27a887.04±58.13a868.52±52.80a0.0322.5胍基乙酸对育成期公貂肝脏抗氧化能力的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，Ⅱ组~Ⅵ组公貂肝脏组织T-AOC极显著升高（P0.01），Ⅲ组、Ⅳ组公貂肝脏组织CAT活性显著升高（P0.05），Ⅳ组公貂肝脏组织抑制羟自由基能力极显著升高（P0.01），Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组公貂肝脏组织抗超氧阴离子能力极显著升高（P0.01），Ⅳ组、Ⅴ组公貂肝脏组织T-SOD和GSH-Px活性极显著升高（P0.01），Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组公貂肝脏组织MDA含量极显著降低（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.012.T006表6胍基乙酸对育成期公貂肝脏抗氧化能力的影响项目Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组Ⅵ组P值T-AOC/(U/mg prot)3.13±0.69Cd5.84±0.71Bc6.95±0.53ABbc8.17±0.12Aa8.05±0.83Aab6.87±0.36ABbc0.001CAT/(U/mg prot)17.70±1.05b20.16±1.92ab21.19±1.03a21.72±2.32a20.00±1.49ab18.41±2.39b0.016抑制羟自由基能力/(U/mg prot)48.76±7.89Bc55.70±7.81ABbc65.07±7.47ABab68.78±8.83Aa54.76±9.35ABbc50.90±5.51Bc0.050抗超氧阴离子能力/(U/g prot)146.53±7.76Cc155.21±6.59Cbc162.79±8.28ABbc176.19±8.66ABa178.33±10.97Aa160.05±12.75BCb0.001T-SOD/(U/mgprot)65.33±8.35Bc70.50±7.31Bbc78.91±5.50ABab87.76±5.93Aa84.80±8.52Aa76.61±7.95ABbc0.026MDA/(μmol/g prot)2.07±0.42Aa1.85±0.13ABab1.62±0.34ABbc1.47±0.21Bbc1.37±0.24Bc1.28±0.24Bc0.003GSH-Px/(U/mg prot)165.52±27.12Cd181.24±30.39BCcd201.06±21.86ABCbc220.93±32.41ABab238.97±21.52Aa206.36±22.00ABCbc0.0012.6胍基乙酸对育成期母貂肝脏抗氧化能力的影响（见表7）由表7可知，与对照组相比，Ⅲ组~Ⅵ组母貂肝脏组织T-AOC显著升高（P0.05），Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组母貂肝脏组织CAT活性和T-SOD活性极显著升高（P0.01），Ⅳ组母貂肝脏组织抑制羟自由基能力极显著升高（P0.01），Ⅱ组~Ⅴ组母貂肝脏组织抗超氧阴离子能力极显著升高（P0.01），Ⅵ组母貂肝脏组织MDA含量显著降低，Ⅴ组母貂肝脏组织GSH-Px活性极显著升高（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.012.T007表7胍基乙酸对育成期母貂肝脏抗氧化能力的影响项目Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组Ⅵ组P值T-AOC/(U/mg prot)8.25±0.99b9.10±0.77ab9.80±0.77a10.31±0.88a10.57±0.87a9.76±0.66a0.029CAT/(U/mg prot)12.84±2.00Bb16.76±1.18ABa17.11±1.62Aa17.42±1.98Aa17.55±1.68Aa14.65±1.14ABab0.006抑制羟自由基能力/(U/mg prot)72.80±1.25Bc83.96±0.97ABbc94.36±12.97ABab106.30±11.03Aa92.68±8.37ABab90.20±11.32ABab0.008抗超氧阴离子能力/(U/g prot)129.49±14.01Bc155.05±10.75Aab163.10±8.34Aab165.23±12.09Aa156.63±13.47Aab147.67±10.52ABb0.001T-SOD/(U/mg prot)61.13±6.84Bc71.73±6.51ABb76.37±8.95Aab78.72±6.94Aab81.84±7.12Aa71.98±3.94ABb0.002MDA/(μmol/g prot)1.34±0.26a1.25±0.13ab1.15±0.20ab1.04±0.28ab1.00±0.17ab0.96±0.21b0.044GSH-Px/(U/mg prot)219.35±21.34Bb231.74±23.31Bb247.78±25.98ABab250.86±22.39ABab278.99±20.64Aa238.43±16.99ABb0.0063讨论3.1GAA对育成期水貂血清生化指标的影响血清生化指标是衡量动物机体物质代谢和健康状况的重要指标，能够反映动物体内营养物质沉积的状况[10-11]。动物机体内TP、ALB、BUN含量能够反映机体抗病能力和蛋白代谢水平[12-13]。在本试验中，日粮添加GAA能够提高水貂血清中TP、ALB、GLB含量，降低BUN含量，表明GAA能够提高水貂机体的蛋白代谢水平。ALB和GLB参与构成TP，这两种蛋白与机体的免疫性能有关[14]。TP、ALB、GLB含量升高表明GAA能够增强机体的免疫能力，其具体机制还有待研究。AST和ALT是参与机体正常代谢的重要酶类，能够直接反映心脏和肝脏等脏器的功能状况，其活性升高表明机体的肝脏等脏器受损[15]。AKP也是肝脏损伤的重要指标[16]。本试验中，日粮添加600 mg/kg GAA可以降低母貂血清中AKP、AST和ALT活性，日粮添加600~800 mg/kg GAA能够降低公貂血清中AKP、AST和ALT活性。因此，日粮添加GAA对水貂的肝脏等脏器具有保护功能。GAA能够提高育肥猪血清中TP含量，降低BUN含量以及AST和ALT活性[17]，提高羔羊血清中肌酸的含量[18]，降低湖羊血清中碱性磷酸酶的活性[19]。上述研究结果与本试验结果相似，说明在水貂基础日粮中添加GAA能够提高水貂机体的蛋白代谢水平，且对肝脏具有保护作用。水貂日粮中GAA的适宜添加量为600~800 mg/kg，此时效果较好。3.2GAA对育成期水貂血清、肝脏抗氧化能力的影响动物机体产生自由基速率和消除自由基速率持平时，说明机体正处在稳定状态。但是当动物机体应激或周围环境改变时，机体自由基产生和消除的动态平衡会被打破，对机体产生危害[20]。动物机体的自由基主要源自线粒体的氧化，包括羟自由基和超氧化物等。动物机体的自由基生成速率大于其消除速率时，会导致机体脂质的过氧化，损坏细胞结构和功能，损伤机体[21]。T-AOC能够反映动物机体多种抗氧化酶共同作用的效果[22]。MDA是脂质过氧化产物，其含量能够判定脂质过氧化的程度[23-24]，而GSH-Px、CAT、T-SOD活性代表动物机体内清除自由基的能力[13]，超氧化物歧化酶能够有效清除超氧根阴离子的毒性[25]。血清中抗氧化指标能够反映动物生长健康状态。GAA能够提高育肥猪和小鼠血清中T-AOC、GSH-Px、CAT和SOD活性，降低MDA含量[26-27]，提高鱼类肝脏组织中T-AOC、SOD和CAT活性[28]。本试验中，日粮添加GAA能够提高水貂血清中抑制羟自由基能力、T-SOD和GSH-Px活性，降低血清中MDA含量，且在添加量为600 mg/kg时效果最好。GAA还能够提高水貂肝脏组织中T-AOC、CAT活性、抑制氧自由基能力、抗超氧阴离子自由基能力，添加量为600~800 mg/kg时效果最好。本试验结果与上述研究结果相似，推测其机制是机体吸收GAA后，肌酸含量上升，肌酸能够直接清除自由基，还能够经肌酸激酶激活后清除自由基[29]；肌酸还具有防止线粒体DNA受到氧化破坏的功能[30]。4结论本试验条件下，日粮中添加GAA能够提高水貂血清和肝脏组织抗氧化能力，改善水貂血清生化指标，且GAA添加量为600~800 mg/kg时效果较好。