核苷酸是核酸的前体物质，是构成机体遗传物质的基本单位，包括嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸[1]。核苷酸广泛分布于各个器官、组织和细胞中，在遗传信息的转录、翻译、能量代谢的调节和细胞信号转导等方面起到重要作用[2]。机体在某些情况下对外源核苷酸的需求量会大大增加，如组织损伤、疾病、应激或快速生长阶段[3]。目前，核苷酸作为新型饲料添加剂得到广泛关注。洪翊棻等[4]报道，补充酵母核苷酸可提高母猪哺乳期采食量，改善母猪初乳中的免疫球蛋白水平。王友明[5]指出，饲粮中添加不同水平的核苷酸可显著降低肉仔鸡料重比，提高平均日增重，改善小肠形态结构。吴醒强等[6]报道，饲粮添加外源核苷酸能够有效改善断奶仔猪生长性能和胃肠道功能。Carver[7]指出，饲料中添加核苷酸可作为免疫增强剂促进细胞因子分泌。此外，核苷酸在水生动物中的应用也得到了广泛研究，如对凡纳滨对虾[8]、石斑鱼[9]、虹鳟鱼[10]、海参[11]等的研究得到了类似结果。但目前关于核苷酸在犊牛生产中的应用研究较少，本试验探讨核苷酸对荷斯坦犊牛生长性能、血清生化指标和免疫功能的影响，以期为核苷酸在犊牛养殖中的合理应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料核苷酸制备：酿酒酵母分离得到核糖核酸，酶解喷干得到核苷酸产品，有效核苷酸含量大于65%，由南京同凯兆业生物技术有限责任公司提供。1.2试验设计同一批犊牛中，挑选80头体重相近的5日龄犊牛，随机分成4组，每组5个重复，每个重复4头犊牛。对照组犊牛只饲喂基础饲粮，试验1组、试验2组、试验3组犊牛灌服1、2、3 g/(头·d)的核苷酸。试验期56 d。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.003.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.0玉米44.5净能/(MJ/kg)8.15豆粕20.0粗蛋白/%19.12棉籽粕10.0钙/%1.44麸皮20.0总磷/%0.69石粉1.0干物质/%83.60碳酸氢钙1.5食盐0.8小苏打1.2预混料1.0注：1.预混料购自富佑饲料有限公司。2.营养水平中净能为计算值，其余均为实测值。1.3饲养管理试验期间，犊牛每日饲喂3次牛奶（7：00、14：00、21：00）；1~14日龄，每次饲喂量为2.4 L；15~30日龄，每次饲喂量为3.0 L；31~45日龄，每次饲喂量为3.6 L；46~60日龄，每次饲喂量为2 L。试验组犊牛在采食基础日粮后，将核苷酸溶解在温水中给犊牛灌服。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能分别称量试验前后犊牛体重，记录各重复犊牛采食量，用于分析平均日增重和平均日采食量。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/试验天数(2)1.4.2健康情况试验期间，每日观察各组犊牛的腹泻、气管肺炎发病情况。肠炎率=(发病天数×肠炎头数)/(试验天数×总头数)×100%(3)肺炎率=(发病天数×肺炎头数)/(试验天数×总头数)×100%(4)1.4.3血液样品采集与指标测定1.4.3.1血液样品采集试验结束前1 d，各组分别随机抽取犊牛8头，牛尾根处采集EDTA抗凝血5~8 mL，混匀后立即送检。另采集15 mL血样，4 ℃、4 000 r/min离心20 min，制备血清。1.4.3.2血常规指标采用全血分析仪（TEK8550, 济南欧莱博技术有限公司）测定血常规指标，包括白细胞数（WBC）、红细胞数（RBC）、血细胞比容（HCT）、血红蛋白（HGB）、淋巴细胞计数（LYM）、血小板数（PLT）、血球容积（BCV）等。1.4.3.3血清生化指标采用全自动生化分析仪（BK-200，爱来宝医疗科技有限公司）测定血清生化指标，包括肌酐（CREA）、尿素氮（BUN）、白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、血糖（GLU）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）等。试剂盒购自南京建成生物工程研究所，按照说明书中的方法和步骤操作。1.4.4免疫指标采用酶联免疫试剂盒人工测定血清免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG），试剂盒购自美国CUSABIO，按照说明书中的方法和步骤操作。利用试剂盒测定血清白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-10（IL-10）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量。试剂盒购自北京北方生物技术研究所，按照说明书中的方法和步骤操作。1.4.5抗氧化指标采用试剂盒测定血清谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、总抗氧化能力（T-AOC）等指标。试剂盒购自南京建成生物工程研究所，按照说明书中的方法和步骤操作。1.4.6经济效益分析试验期结束后，计算各组犊牛头均利润。头均利润＝头均收入－饲料费用－核苷酸费用(5)头均收入＝净增重×犊牛单价(6)饲料费用＝总采食量×饲料单价=平均日采食量×试验天数×饲料单价(7)核苷酸费用=核苷酸总量×单价=核苷酸每日灌服量×试验天数×核苷酸单价(8)1.5数据统计与分析采用SPSS 18.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1核苷酸对犊牛生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，试验2组和试验3组犊牛的平均日增重显著升高（P0.05），各试验组犊牛的肠炎率和肺炎率显著下降（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.003.T002表2核苷酸对犊牛生长性能的影响组别初重/(kg/头)末重/(kg/头)平均日增重/[kg/(头·d)]平均日采食量/[kg/(头·d)]肠炎率/%肺炎率/%对照组40.17±3.9886.09±15.260.82±0.20a0.67±0.1311.29±0.40b13.56±1.28b试验1组39.24±3.0185.72±14.460.83±0.16a0.68±0.057.34±0.20a8.87±0.20a试验2组38.78±4.2087.50±19.420.87±0.16b0.68±0.126.56±0.20a7.86±0.20a试验3组38.43±4.5388.27±18.380.89±0.26b0.68±0.087.45±0.20a6.56±0.20a注：同列数据肩标相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05），不同字母表示差异显著（P0.05）；表3、表5、表6与此同。2.2核苷酸对犊牛血常规指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，试验2组和试验3组犊牛的WBC显著降低（P0.05）；试验组犊牛的HCT显著下降（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.003.T003表3核苷酸对犊牛血常规指标的影响组别WBC/(×109/L)RBC/(×1012/L)HCT/%HGB/(g/L)LYM/(×109/L)PLT/(×109/L)BCV/%对照组9.11±0.81b5.25±0.7838.78±6.75b143.07±15.692.24±0.46196.00±30.910.48±0.02试验1组9.23±1.21b4.99±0.5835.76±6.57a138.24±16.432.32±0.76200.26±28.360.46±0.08试验2组8.21±1.29a4.92±0.8334.55±5.50a136.14±19.792.34±0.55204.80±43.990.49±0.12试验3组8.02±0.68a5.14±0.9935.12±3.68a140.86±21.342.28±0.28198.82±38.770.48±0.022.3核苷酸对犊牛血清生化指标的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，试验1组和试验2组犊牛血清ALB含量显著增大（P0.05）；试验组犊牛血清AST活性显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.003.T004表4核苷酸对犊牛血清生化指标的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组CREA/(μmol/L)77.24±19.3482.32±10.6583.91±11.0679.35±8.05BUN/(mmol/L)4.31±1.434.45±0.654.22±0.994.55±0.69ALB/(g/L)34.70±4.79a38.24±4.54b37.68±3.00b35.03±5.37aTP/(g/L)55.16±9.8955.53±9.1256.69±12.2056.26±8.54ALT/(U/L)30.92±12.6931.54±5.8732.71±9.6629.71±6.64AST/(U/L)31.00±13.61b25.65±4.26a24.45±6.61a25.68±3.34aGLU/(mmol/L)7.32±1.067.68±0.657.36±0.967.56±1.11TG/(mmol/L)0.36±0.060.36±0.030.35±0.010.38±0.02TC/(mmol/L)5.37±0.865.02±0.565.38±0.655.21±0.58HDL-C/(mmol/L)2.34±0.062.24±0.142.36±0.172.42±0.23LDL-C/(mmol/L)1.86±0.051.74±0.111.82±0.091.78±0.12注：同行数据肩标相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05），不同字母表示差异显著（P0.05）。2.4核苷酸对犊牛血清免疫指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，试验2组犊牛血清TNF-α含量显著降低（P0.05），试验1组和试验3组犊牛血清TNF-α含量有所降低，但差异不显著（P0.05）；各试验组犊牛血清IgG、IgA、IL-1、IL-2和IL-10的含量较对照组差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.003.T005表5核苷酸对犊牛血清免疫指标的影响组别IgG/(g/L)IgA/(g/L)IL-1/(μg/L)IL-2/(μg/L)IL-10/(μg/L)TNF-α/(μg/L)对照组216.30±47.5352.67±12.8124.19±5.0611.34±2.94539.11±127.80159.39±48.08b试验1组201.34±36.5453.23±5.2323.65±4.6512.05±1.99514.37±101.26150.11±23.75b试验2组185.36±45.2454.90±8.6723.15±5.6010.05±1.87502.36±119.08143.91±36.28a试验3组188.76±38.8755.54±6.7624.83±4.4511.24±2.17527.66±88.16152.55±18.73b2.5核苷酸对犊牛血清抗氧化指标的影响（见表6）由表6可知，各试验组犊牛血清中SOD、MDA、T-AOC和GSH-Px水平与对照组相比差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.003.T006表6核苷酸对犊牛血清抗氧化指标的影响组别SOD/(U/mL)MDA/(μmol/L)T-AOC/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)对照组78.14±6.825.29±1.086.88±1.2472.65±6.27试验1组80.26±5.814.98±0.676.76±0.5770.83±5.82试验2组76.75±9.864.90±0.977.05±1.2072.02±11.03试验3组78.74±10.285.08±0.576.92±0.6369.43±6.642.6核苷酸对犊牛养殖经济效益的影响（见表7）由表7可知，试验1组、试验2组和试验3组头均利润分别为692.16、720.89、729.64元，分别比对照组增加了-1.33、27.40、36.15元，提高了-0.19%、3.95%、5.21%。分析结果数据可知，试验2组和试验3组的利润明显优于其他组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.003.T007表7核苷酸对犊牛养殖经济效益的影响组别犊牛单价/(元/kg)净增重/(kg/头)饲料单价/(元/kg)总采食量/(kg/头)核苷酸单价/(元/kg)核苷酸总量/(kg/头)头均利润/(元/头)对照组1845.923.538.023000693.49试验1组1846.483.538.083000.056692.16试验2组1848.723.538.193000.112720.89试验3组1849.843.538.253000.168729.643讨论3.1核苷酸对犊牛生长性能的影响饲粮中核苷酸含量一般较低，但动物在出生初期处于快速生长和免疫应激阶段，对核苷酸的需求量较大[12-13]。外源核苷酸可作为诱食剂增加动物采食量，也可作为营养物质促进肠道发育，提高饲粮的消化率。在本试验中，与对照组相比，试验2组和试验3组犊牛的平均日增重分别增加6.1%和8.5%。Kil[14]研究发现，仔猪断奶初期对核苷酸的需求较大，无法从饲粮中获得足够的核苷酸，从而限制了仔猪的生长。乔建国等[15]研究表明，添加核苷酸可增加断奶仔猪的日均采食量和日增重。初生犊牛消化系统发育不完善、肠道微生物结构不稳定，犊牛易发生肺炎、肠炎和腹泻，从而导致犊牛生长滞后，甚至死亡[16]。本试验中，各试验组犊牛均无死亡，且肠炎率和肺炎率较对照组均显著降低，表明核苷酸有利于改善肠道结构，促进肠道发育，提高免疫功能。3.2核苷酸对犊牛血常规及血清生化指标的影响血液中的WBC参与机体的免疫防御和炎症反应[17]。本研究中，试验2组和试验3组犊牛的WBC较对照组显著下降，这可能是对照组受到了病原菌感染，导致WBC水平上升。血液浓缩会引起HCT升高，从而出现腹泻现象。本研究中，各试验组的HCT较对照组均显著下降。鲁文[18]发现，犊牛腹泻时血细胞比容显著高于正常组，这表明可能由于试验组犊牛腹泻情况较轻，从而使HCT处于较低的水平。本试验中，与对照组相比，试验组犊牛血清ALB含量有所增加，表明饲粮中添加核苷酸能够促进蛋白质在机体中的沉积。王会[19]试验发现，添加0.10%的酵母核苷酸可使断奶仔猪血清的白蛋白含量显著增加。ALT和AST是肝脏损伤的重要指标，肝脏细胞发生氧化损伤时，ALT和AST活性增强[20-21]。闻勤生等[22]研究发现，家兔处于应激状态时，其血清AST活性增强，肝细胞形态学发生异常变化。本试验中，各试验组的AST活性较对照组明显降低，可能因为核苷酸更有利于保护肝脏结构完整性，维护肝脏正常功能。3.3核苷酸对犊牛血清免疫功能的影响动物机体内的细胞因子、补体及免疫球蛋白含量可以直接反映机体的免疫功能，IgG可以与病原微生物结合，刺激机体产生补体[23-24]。在本研究中，各试验组犊牛血清中IgG含量与对照组相比差异均不显著。TNF-α能够诱导细胞凋亡，加重机体炎症反应[25-26]。在本试验中，各组TNF-α、IgG的含量及肠炎率和肺炎率的变化趋势较为一致，这可能因为饲粮中添加核苷酸缓解了犊牛的应激，降低了犊牛血清IgG含量。TNF-α水平较高会使肠腔形成积液，导致犊牛发生腹泻[27]。这表明核苷酸可能有利于机体维持在正常的免疫状态，从而缓解腹泻和肠炎等问题的发生，降低了肺炎率。3.4核苷酸对犊牛血清抗氧化功能的影响初生犊牛机体抗逆能力差，容易发生氧化应激[28-29]。SOD是一种重要的抗氧化剂，能够催化超氧阴离子自由基发生歧化反应，生成氧气和过氧化氢，通过清除自由基，阻止氧化应激造成的氧化损伤，维持氧化还原的平衡[30]；MDA作为脂质过氧化反应的产物，可以反映机体的氧化应激程度[31]；T-AOC反映了机体抗氧化的综合指标[23]；GSH-Px是机体内最重要的非酶性抗氧化物。Chen等[32]报道，添加0.2~0.4 g/kg核苷酸能够明显提高罗氏沼虾血清中SOD的活性。Chen等[1]报道，添加0.4 g/kg的核苷酸能够明显提高大口鲈鱼血清中SOD活性。但本试验中，核苷酸对各试验组犊牛的SOD、MDA、T-AOC和GSH-Px水平均无显著影响，可能因为本试验时间较短，抗氧化作用未能完全体现，也可能在本试验状态下未对犊牛机体产生氧化损伤。3.5核苷酸对犊牛养殖经济效益的影响犊牛饲粮中添加核苷酸可以显著提高犊牛平均日增重，降低腹泻率和肺炎率，从而提高了头均利润。本试验结果表明，试验2组和试验3组与对照组相比头均利润分别增加了3.95%和5.21%，可以明显提高经济效益。4结论本试验结果表明，饲喂核苷酸可提高犊牛的日增重和健康水平，增强机体免疫力，并且能够增加养殖的经济效益，建议添加量为2~3 g/(头·d)。