随着我国畜牧业的快速发展及人们对动物产品需求的增长，充分利用牧草等非粮型饲料资源，发展节粮型畜牧业，是缓解我国粮食供求矛盾、保障畜产品有效供给的必由之路[1]。青贮饲料具有营养损失少、消化利用率高、营养价值高、适口性好等特点，受气候影响较小，是南方地区牧草加工的理想方式。然而，豆科牧草含糖量低、缓冲能值高、原料附着的乳酸菌较少，单独青贮往往不易成功[2-3]。不少学者将豆科与禾本科牧草混合青贮或采用添加剂以平衡饲草营养，有效提高了青贮品质[4-9]。多花木蓝为多年生豆科饲用灌木，生长迅速，枝叶繁茂，蛋白含量高，牛、羊喜食，是贵州地区一种优良的乡土饲用植物[10]。宽叶雀稗为半匍匐型多年生禾本科牧草，是热带亚热带地区草地改良、边坡绿化、矿山治理中常用的草被植物[11]。宽叶雀稗与多花木蓝等多种豆科牧草共生良好，饲草生产高峰期相似，便于统一收获与青贮调制，可以缓解家畜冬春季饲草供求矛盾。本课题组根据预试验结果以多花木蓝与宽叶雀稗质量比1∶2[12]为混贮原料，分析不同添加剂对多花木蓝与宽叶雀稗混贮饲料品质的影响，筛选出最佳添加剂处理方式，为多花木蓝等非粮型牧草资源的开发与利用提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验以贵州省草业研究所独山试验基地的黔南多花木蓝嫩枝叶（孕蕾期）和宽叶雀稗（抽穗期）为原料，青贮原料的营养成分见表1，以1∶2鲜质量比进行混合青贮。亚芯秸秆乳酸菌青贮发酵剂（活菌数≥1.0×1010 CFU/g）由台湾亚芯生物科技有限公司生产，纤维素酶（3 U/mg）和葡萄糖（分析纯）均购自贵州恩格瑞生物科技有限公司。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.019.T001表1青贮原料的营养成分（干样）原料干物质/%粗蛋白/%中性洗涤纤维/%酸性洗涤纤维/%酸性洗涤木质素/%可溶性碳水化合物/%磷/(g/kg)钙/(g/kg)多花木蓝32.1520.1068.7547.8110.982.243.8015.08宽叶雀稗27.0111.1873.1545.225.861.973.377.701.2试验设计采用完全随机试验设计，以等量水（65 mL）为对照（T1），设置1 g/kg纤维素酶（T2）、0.03 g/kg青贮发酵剂（T3）、30 g/kg葡萄糖（T4）、0.5 g/kg纤维素酶+0.015 g/kg青贮发酵剂（T5）、0.5 g/kg纤维素酶+15 g/kg葡萄糖（T6）、0.015 g/kg青贮发酵剂+15 g/kg葡萄糖（T7）、0.5 g/kg纤维素酶+0.015 g/kg青贮发酵剂+15 g/kg葡萄糖（T8）共8个处理，每个处理3个重复。1.3青贮调制将黔南多花木蓝嫩枝叶切成1~2 cm、宽叶雀稗切成3~4 cm的小段，并按鲜质量比1∶2混合均匀。使用小喷壶均匀喷入添加剂，拌匀并迅速装入30 cm × 50 cm真空袋，封口，每袋1.0 kg。室温下贮存，70 d后开袋进行感官评定、酵品质及营养价值测定。1.4测定指标及方法1.4.1青贮感官质量评价采用德国农业协会（DLG）青贮感官质量评分标准，根据气味、质地和色泽对青贮饲料品质进行感官评定[13]，按照得分评定为优、良、中、下4个等级，青贮感官质量评分标准见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.019.T002表2青贮感官质量评分标准项目评分标准分数气味无丁酸臭味，有芳香果味或明显的面包香味14分触手上残留微弱的丁酸臭味，或具有较强酸味，芳香味弱10分丁酸味颇重，或有刺鼻的焦煳臭或霉味4分有很强的丁酸臭或氨味，或几乎无酸味2分粪味、霉败味、或有很强的堆肥味0分结构茎叶结构保存良好4分叶子结构保存较差2分茎叶结构保存极差或发现有轻度霉菌或轻度污染1分茎叶腐烂或污染严重0分色泽色泽与原材料相似，烘干后呈淡褐色2分略有变色，呈淡黄色或带褐色1分变色严重，墨绿色或褪色呈黄色，又呈现较强的霉味0分总分20~16分15~10分9~5分4~0分等级1级优良2级尚好3级中等4级下（腐败）建议使用情况正常使用正常使用少量使用禁用1.4.2营养品质和发酵品质采用徐春城[13]的方法测定青贮饲料的干物质（DM）、粗蛋白（CP）、酸性洗涤纤维（ADF）、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤木质素（ADL）、可溶性碳水化合物（WSC）、钙（Ca）、磷（P）等营养价值指标及pH值、氨态氮（NH3-N）、乳酸（LA）、乙酸（AA）、丙酸（PA）和丁酸（BA）含量等发酵品质指标。采用日本草地畜产协会（2001）制定的V-Score评分法进行青贮料发酵品质评定分级[14]。相对饲用价值（RFV）参照Rohweder等[15]方法计算。RFV=(DMI×DDM)/1.29(1)DMI=120/NDF(2)DDM=88.9-0.779ADF(3)式中：DMI为单位体重的家畜对粗饲料干物质的随意采食量（%）；DDM为可消化的干物质占干物质总量的比值（%）。1.4.3灰色关联分析采用灰色关联分析法对青贮饲料的营养价值和发酵品质进行综合评价。按照灰色关联度理论，以各处理混贮料的营养成分及发酵品质指标作为一个灰色系统，而各测定指标为系统中的因素，以各指标的最优值构建参考系列（X0），各添加剂处理为比较系列（Xi），分析比较系列与参考序列的相似性大小（γi）以综合评价各添加剂处理混贮料青贮品质的优劣。由于各添加剂对青贮料的影响程度不同，在评价时根据影响大小赋予不同的权重（ωi），并以加权关联度γi'的大小进行综合评价。γi'越大，则比较系列与参考系列越相似，则该处理青贮料的青贮效果越好，反之越差。其中，原始数据采用Z-score标准化进行无纲量化处理；关联系数（δ）按公式（6）计算，n为样本数，|x0(k)-xi(k)|为x0与xi在第k点的绝对差值；ρ为分辨率系数，其取值范围为[0，1]（通常情况取值为0.5），为提高其关联系数间的差异显著性，此处取值0.5，认为同等重要。最小绝对差值△(min)=minimink |x0k-xik| (4)最大绝对差值△(max)=maximaxk |x0k-xik| (5)关联系数δi(k)=∆min+ρ∆max|X0k-Xik|+ρ∆max (6)等权关联度γi=1n∑i=1nδik (7)权重系数ωi=γi∑γi (8)加权关联度γi'=∑k=1nωik×δik (9)1.5数据统计与分析试验数据采用Excel软件整理，SPSS 28软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同添加剂处理混贮饲料的感官评价（见表3）由表3可知，青贮70 d后，8个处理的感官评价总分在17.75~20.00分之间，均达到Ⅰ级优良等级，其中T7评分最高，青贮效果最佳。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.019.T003表3不同添加剂处理混贮饲料的感官评价组别气味结构色泽总分等级T114.00±0.003.17±0.601.00±0.0018.17Ⅰ级优良T214.00±0.002.83±0.441.33±0.1718.17Ⅰ级优良T312.67±1.333.58±0.301.50±0.2917.75Ⅰ级优良T412.67±1.333.33±1.671.67±0.3317.67Ⅰ级优良T514.00±0.003.33±0.331.00±0.0017.67Ⅰ级优良T614.00±0.003.42±0.221.42±0.2218.33Ⅰ级优良T714.00±0.004.00±0.002.00±0.0020.00Ⅰ级优良T812.67±1.334.00±0.002.00±0.0018.67Ⅰ级优良2.2不同添加剂对混贮饲料营养品质的影响（见表4）由表4可知，不同添加剂对混贮饲料的DM、NDF含量无显著影响（P0.05），对CP、ADF、ADL和WSC含量有影响。CP含量以T5最高，达15.49%，其次为T1和T3，但三者间差异不显著（P0.05）；T8的CP含量最低，仅为12.71%。除T4和T6外，其余处理ADF含量均在30%以上，其中以T4最低，为26.69%。T2和T4的ADL含量最低，T3最高，达6.62%，高于宽叶雀稗原料中ADL的含量。各添加剂处理以T4和T6的WSC含量最高，显著高于除T8外的其他处理（P0.05）。8个添加剂处理间混贮料的RFV差异不显著，T4最高，达118.12，其次为T6，二者与T3、T5和T7的RFV均在100以上，T1的RFV最低，仅为85.91。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.019.T004表4不同添加剂处理对混贮饲料营养品质的影响组别DM/%CP/%NDF/%ADF/%ADL/%WSC/%RFVT122.12±0.2214.80±0.51ab64.12±4.9739.32±3.00a4.43±0.22bc0.43±0.02d85.91±8.97T222.06±0.1913.89±0.28bc57.95±1.2637.68±2.40a3.71±0.31c0.98±0.02bc95.76±4.64T322.54±0.8814.25±0.34abc58.80±4.4930.46±0.37bc6.62±0.87a0.51±0.04d104.47±8.88T423.29±0.2113.70±0.46bc54.11±3.0726.69±1.44c4.10±0.19c1.36±0.10a118.12±9.01T522.70±0.1515.49±0.28a59.27±2.1032.57±1.02abc4.40±0.09bc0.77±0.04c100.01±4.32T624.27±1.0313.99±0.84abc58.19±4.3328.51±2.90bc5.00±0.10bc1.34±0.13a108.39±12.10T723.10±1.7413.37±0.58bc58.38±0.5233.13±1.39abc5.57±0.18ab0.84±0.04c100.57±2.53T824.97±0.6012.71±0.06c60.52±0.8634.25±2.37ab5.44±0.51ab1.14±0.08ab95.75±4.04注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.3不同添加剂处理对混贮饲料发酵品质的影响（见表5）由表5可知，不同添加剂处理对混贮饲料的pH值及NH3-N/TN、LA、AA和PA含量均有影响，各处理均未检出BA。T4的pH值最低，显著低于T6、T7和T8（P0.05），4组的pH值均在4.2以下，青贮效果较好；其余4个未加糖处理的pH值均高于4.2，青贮效果较差。T3、T4、T6和T7的NH3-N/TN较低，氨基酸、蛋白质等降解较少。T4的LA含量最高，其次为T6、T7和T8，均在25.95 g/kg以上，显著高于其他处理（P0.05）。T4、T6、T7和T8的AA含量均为最低，但PA含量均为最高，但4组间无显著差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.019.T005表5不同添加剂处理对混贮饲料发酵品质的影响组别pH值NH3-N/TN/%有机酸/(g/kg)V-ScoreLAAAPABAT14.96±0.04a1.99±0.06b7.19±0.33e1.02±0.01b0.71±0.04b090.00T24.54±0.03d2.99±0.26a11.89±0.67c1.15±0.03a1.42±0.04b090.00T34.89±0.01b1.51±0.03c6.97±0.71e1.23±0.07a1.02±0.02b090.00T43.92±0.01f1.37±0.02c30.47±0.20a0.44±0.01c4.69±0.39a090.00T54.70±0.01c2.02±0.06b9.07±0.52d1.21±0.02a1.52±0.09b090.00T64.01±0.01e1.47±0.22c26.97±0.30b0.46±0.01c4.49±0.36a090.00T74.05±0.02e1.23±0.07c26.54±0.50b0.48±0.01c4.32±0.32a090.00T84.05±0.02e2.75±0.04a25.95±1.07b0.49±0.01c4.45±0.40a090.00采用V-Score评分法对不同添加剂处理混贮料的发酵品质进行综合评定。结果显示，8个添加剂处理混贮饲料的综合评分均为90.00分，发酵品质良好。2.4不同添加剂处理混贮饲料的灰色关联分析（见表6）采用灰色关联度分析，根据各添加剂对青贮饲料的影响程度赋予不同的ωi，并以γi'的大小对各添加剂处理青贮料的营养成分和发酵品质指标进行综合评价。由表6可知，不同添加剂处理的γi'排序为：T4T6T7T8T5T2T3T1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.23.019.T006表6不同添加剂处理混贮料的灰色关联分析组别γiωiγi'排序T10.525 40.104 70.604 88T20.555 00.110 60.674 96T30.536 00.106 80.629 57T40.827 40.164 81.499 91T50.582 70.116 10.743 95T60.729 30.145 31.165 52T70.637 70.127 00.890 93T80.626 90.124 90.861 143讨论3.1不同添加剂处理对混贮饲料营养价值的影响WSC作为乳酸菌厌氧发酵的底物，能够快速地降低青贮饲料的pH值，抑制不良微生物的生长，保证青贮发酵品质[16]。多花木蓝和宽叶雀稗的营养成分中，WSC含量均偏低，不利于青贮乳酸发酵，且NDF和ADF含量偏高，RFV较低。本试验采用不同添加剂进行混合青贮，效果较好，8个添加剂处理对混贮饲料的CP、ADF、ADL和WSC等含量均有显著影响，不同程度地改善了混贮饲料的营养价值，提高了DM含量，使纤维含量大幅降低，提高了相对饲用价值。但除T5外，各处理CP含量均有不同程度的降低，这可能与发酵时间较长有关。较长的发酵时间会使微生物消耗更多的蛋白质、糖类等底物以维持生长繁殖[17-18]。常规青贮中，通常会添加乳酸菌制剂、酶制剂、有机酸、无机酸或糖类等进行辅助发酵，促进乳酸菌发酵或抑制有害微生物的生长，提高青贮品质[19-22]。本试验中，添加葡萄糖处理组的青贮饲料中纤维含量明显降低，尤其是T4组添加大量葡萄糖后，ADF和NDF含量降幅较大，RFV较T1提高了37.49%。原因是葡萄糖等发酵底物的添加促进了微生物的繁殖，使其分解的酶类物质增加，进而提高了微生物对部分纤维的利用[17-18]，这与李顺等[23]、顾拥建等[24]、吴龙飞等[25]、付锦涛等[4]的研究结果一致。乳酸菌的添加有利于促进LA发酵，在实际生产中，乳酸菌的添加效果受植物本身附着的乳酸菌数量、碳水化合物的可利用性和环境因素的影响较大[26]。吴长荣等[27]、刘欣宇等[20]研究发现，添加乳酸菌可显著降低青贮饲料的NDF和ADF含量。司华哲等[28]研究发现，单独添加乳酸菌制剂难以有效降解青贮饲料的纤维成分，提高青贮品质的效果有限。本试验中T3与司华哲等[28]试验表现一致，原因可能是多花木蓝中ADL含量较高，细胞壁中的纤维素和半纤维素被木质素包裹，限制了微生物对细胞壁成分的消化[29]；同时，对比T3及半剂量乳酸菌添加水平下的T7和T8，发现乳酸菌的添加也会加剧CP和WSC的消耗，这可能与发酵后期乳酸菌自身生长有关。有学者认为，纤维素酶可水解青贮原料细胞壁的结构性多糖，增加WSC含量，同时改变牧草的纤维素结构，降低其纤维素、半纤维素和木质素含量[30-31]。本试验T2中纤维素酶的添加对青贮饲料的品质改善不明显，且比较T5、T6和T8除纤维素酶外，乳酸菌及葡萄糖的添加也并未大幅提高混贮料的RFV，这与梁小玉等[32]的研究结果类似，但与黄媛等[33]的结果有一定差异，分析其可能与青贮原料的纤维构成及添加剂的量有关。对比分析T5、T6、T7和T8等4个添加剂组合，T6的DM、CP及WSC含量较高，ADF含量较低，总体上优于其他3个处理；且与T1相比，4个处理中添加半剂量葡萄糖处理的DM和WSC含量增加，CP含量降低，这是因为发酵底物的增加促进了微生物的生长繁殖，增加了对蛋白质的消耗；在WSC充足的条件下，纤维素酶与某些乳酸菌之间可能存在拮抗作用[34]，导致其促进发酵的作用有所降低。3.2不同添加剂处理对混贮饲料发酵品质的影响一般认为pH值低于4.2有利于抑制发酵过程，尤其是有氧阶段有害微生物的生长，保存饲料营养，获得优等青贮饲料[35]。本试验中，不同添加剂对混贮饲料的pH值、NH3-N/TN及有机酸含量具有显著影响。充足的发酵底物是青贮发酵pH值迅速降低的关键，而T1、T2、T3和T5因未添加葡萄糖导致发酵底物较少，pH值均在4.2以上，且LA和PA含量均显著低于加糖处理组，AA含量均显著高于加糖处理，这与姜富贵等[36]的结果一致。张晶龙等[37]研究发现，碳水化合物的添加可显著降低孕蕾期锦鸡儿青贮料的pH值，显著增加盛花期锦鸡儿青贮料的pH值。而本试验多花木蓝原料为孕蕾期，与其结果一致。对比该4个处理，T2的pH值最低，LA含量在四者中为最高，说明足量的纤维素酶可为LA发酵提供底物，验证了纤维素酶在pH值为4.5时活性最强[38-39]的论断。有研究发现，青贮原料中WSC较少时，单独添加乳酸菌对发酵品质的改善效果不显著[40-41]，这与T3的表现一致。NH3-N/TN是反映饲料蛋白降解程度的指标[42]。优质青贮饲料要求NH3-N/TN的比值小于10%[43]，本研究各处理的比值均在3%以下，符合优质青贮料的标准。Kaiser等[44]研究发现，青贮中NH3-N含量不仅与青贮发酵过程有关，还受不同种类牧草中化学成分含量的影响。本研究T2处理可能与此有关，具体体现在即使添加了纤维素酶，其NH3-N/TN的比值依然显著高于T1对照处理。LA是青贮的主要发酵产物，AA主要由异质型乳酸菌发酵产生，能够增加青贮料的有氧稳定性[45-46]。Mcdonald等[47]研究发现，LA/AA大于2是青贮发酵良好的表现，本研究各处理的比值均大于2，说明各处理混贮料发酵品质优良，以同质型发酵为主。PA为中等强度的酸（pH值为4.87），本研究中4个加糖处理的PA含量较高、pH值均较低，说明PA的产生对混贮料的酸度具有一定的贡献。由于各处理的V-Score评分难分高下，该评分体系并未考虑青贮料的pH值及营养价值对青贮品质的影响，因此，本研究采用灰色关联度法对各处理混贮料的营养价值及发酵品质进行综合评价，结果显示T4处理的γi'最高，说明足量葡萄糖对多花木蓝和宽叶雀稗这类WSC不足的混贮饲料的青贮品质有促进作用。4结论8个添加剂处理均可提高多花木蓝与宽叶雀稗混贮饲料的青贮品质，且以T4（30 g/kg葡萄糖）和T6处理（0.5 g/kg纤维素酶+15 g/kg葡萄糖）处理效果较好，为多花木蓝和宽叶雀稗混贮的最佳处理方式。