淡水石斑鱼（Cichlasoma managuense）产于热带地区，不耐低温，具有生长快、肉质鲜美及高蛋白低脂肪等优点[1-2]，观赏价值高。银杏（Ginkgo biloba L.）又称鸭脚、白果。银杏叶提取物（EGB）是利用适当溶剂从银杏原料中提取的一类有效成分，其中银杏叶多糖具有较好的抗氧化功能[3]。银杏叶主要含有两类重要的活性物质，分别为萜类内酯和黄酮类[4]。其中，黄酮类主要功效为抗氧化，同时还具备降血脂、保护肝脏及免疫调节等功效[5-8]。仇业鹏等[9]、ZHANG等[10]和李焰等[11]研究表明，EGB可以改善大鼠、小鼠和仔猪的抗氧化功能。徐之勇等[12]研究表明，饲料中添加EGB能够显著提高血清中T3/T4值及生长激素（GH）含量，促进雏鸭的生长。但关于EGB在鱼类生产中的应用研究报道较少。本试验旨在研究不同浓度EGB对淡水石斑鱼血清生化指标及抗氧化功能的影响，为其在淡水石斑鱼养殖中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验淡水石斑鱼由天津市某水产科技有限公司提供。12个自制网箱（1 m × 1 m × 1 m）提前放入消毒、清塘、曝气3 d的池塘中。EGB购自天津市某中草药店，主要成分为银杏黄酮、萜内脂、儿茶素、多酚类、VC、VE、胡萝卜素及钙、磷、硼、硒等，总黄酮甙含量24%~26%、总菇内酯含量8%~10%、白果内酯含量≥2.5%、银杏内酯A含量1.4%、银杏内酯B含量≥1.2%、银杏内酯C含量≥0.9%。1.2试验设计与饲养管理淡水石斑鱼暂养7 d，选择体质健康、平均体重为（60.30±0.25）g的淡水石斑鱼240尾，随机分为4组，每组3个重复，每个网箱放20尾淡水石斑鱼。基础饲料组成及营养水平见表1。G0组（对照组）、G1组、G2组和G3组分别在基础饲料中添加0、50、100、200 mg/kg的EGB，饲料置于通风阴凉处风干1周，装于密封袋。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.01.009.T001表1基础饲料组成及营养水平（风干基础）原料组成含量营养水平合计100.00鱼粉48.00粗蛋白47.97豆粕17.00粗脂肪15.91酪蛋白6.00水分6.40酵母3.00粗灰分2.73次粉11.40预混料4.00鱼油4.80豆油4.80褐藻酸钠1.00注：1.预混料购自天津傲农红祥生物科技有限公司。2.营养水平均为实测值。%试验鱼驯化期间，投饵量为鱼体重的1%~3%。投喂时间分别为9：00和17：00，9：00投喂时要适量，0.5 h后观察记录鱼的采食情况，进行进食评估。经过7 d的驯食，鱼可形成定点、定时的摄食特性。控制水温为22~25 ℃，及时清理残饵及粪便。定期检测水体，保持水体的氨氮浓度不高于0.05 mg/L，亚硝酸盐浓度低于0.1 mg/L、溶解氧浓度不低于6.0 mg/L，pH值7.5~7.8。试验期28 d。1.3测定指标及方法正式试验开始后的7、14、21、28 d，采集鱼尾静脉血液。采血前一天禁食，血样4 ℃、4 000 r/min离心10 min，取上层血清。利用试剂盒测定血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、总胆固醇（CHO）（酶法）及甘油三酯（TG）含量，以上试剂盒购自北京北化康泰临床试剂有限公司。采用试剂盒测定过氧化氢酶（CAT）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）活性以及丙二醛（MDA）含量，以上试剂盒购自南京建成生物工程研究所。采用试剂盒测定葡萄糖（GLU）含量，试剂盒购自上海荣盛生物药业有限公司。1.4数据统计与分析数据采用PASW Statistics 18.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1EGB对淡水石斑鱼血清抗氧化指标的影响（见表2）由表2可知，试验21 d时，各试验组淡水石斑鱼血清T-SOD活性显著高于G0组（P0.05）；试验28 d时，G3组淡水石斑鱼血清T-SOD活性显著高于其他组（P0.05）；G1组和G2组试验第7 d时血清T-SOD活性显著低于其他时间（P0.05）；G3组试验第21 d时淡水石斑鱼的血清T-SOD活性显著高于其他时间（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.01.009.T002表2EGB对淡水石斑鱼血清抗氧化指标的影响项目时间/dG0组G1组G2组G3组T-SOD/(U/mL)752.37±0.4653.19±1.48a50.53±2.99b53.74±3.54a1451.23±1.4861.81±2.85b59.93±8.23a64.95±5.22b2153.83±1.35A66.51±3.91Bb65.31±1.79Ba69.39±0.31Bd2851.62±2.26A61.42±3.83Bb63.73±3.52Ba68.98±2.91CcGSH-Px/(U/mL)7104.76±7.80100.89±6.07a109.04±6.55a106.77±19.26a14101.55±6.75106.01±6.19a106.36±4.75a105.38±4.92a21111.53±8.71A114.14±4.65Bb119.01±5.19Cb116.07±7.49Bab28104.75±4.65A115.07±7.49Bb118.56±7.47Cb116.64±5.37BCbMDA/(μmol/L)7147.99±7.31Ba135.85±3.22ABa122.94±9.94ABc120.89±8.08Ab14118.89±7.09Cb92.49±5.38Bc96.36±4.75Ba71.38±4.92Aa21114.53±8.71Bb108.85±6.73Ab104.02±9.14Ab118.22±2.66Bb28138.02±7.76Bb131.71±8.14Ab129.21±8.19Ac130.84±6.24AcCAT/(U/mL)79.37±1.078.88±0.94b8.69±1.11b8.23±0.93c149.43±0.599.43±0.82b7.57±0.23b8.52±0.11d219.49±0.13C7.45±0.23Ba7.13±0.34Bb6.13±0.24Ab289.92±0.22C9.08±0.33Bb4.09±0.12Aa4.17±0.37Aa注：大写字母表示同行数据的差异显著性，小写字母表示同列数据的差异显著性；数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。试验21、28 d时，G2组淡水石斑鱼的血清GSH-Px活性显著高于G0组和G1组（P0.05）；G1组和G2组试验21、28 d时淡水石斑鱼的血清GSH-Px活性显著高于其他时间（P0.05）；G3组试验28 d时淡水石斑鱼的血清GSH-Px活性显著高于7、14 d（P0.05）。试验14、21、28 d时，G1组和G2组淡水石斑鱼的血清MDA含量显著低于G0组（P0.05），G0组试验7 d时淡水石斑鱼的血清MDA含量显著高于其他时间（P0.05）；G1组、G2组和G3组试验14 d时淡水石斑鱼的血清MDA含量显著低于其他时间（P0.05）。G1组试验21 d时淡水石斑鱼血清CAT活性显著低于7 d（P0.05）；G2组试验28 d时，血清CAT活性显著低于其他时间（P0.05）；G3组试验28 d时，淡水石斑鱼的血清CAT活性显著低于其他时间（P0.05）。2.2EGB对淡水石斑鱼血清肝功能指标的影响（见表3）由表3可知，试验7 d时，G1组淡水石斑鱼AST活性显著低于G0组（P0.05）；14、28 d时，G2组淡水石斑鱼AST活性显著低于G0组和G1组（P0.05）；G1组试验7 d时淡水石斑鱼AST活性显著低于其他时间（P0.05）；G2组中，21 d时淡水石斑鱼AST活性显著高于其他时间（P0.05）；G3组试验14 d时淡水石斑鱼AST活性显著低于其他时间（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.01.009.T003表3EGB对淡水石斑血清肝功能指标的影响项目时间/dG0组G1组G2组G3组AST722.94±0.12B15.49±0.49Aa17.55±0.47ABa18.30±3.24ABb1422.07±3.96B21.63±4.09Bb13.31±0.59Aa15.57±0.59Aa2121.11±4.5218.67±01.79b19.99±2.74b17.98±1.17b2820.91±1.26B19.92±0.94Bb15.75±0.94Aa16.06±1.31AbALT721.04±0.32B17.89±0.31Aa19.05±0.23Bb19.60±1.38Bb1423.07±3.77B22.63±3.69Bc17.31±0.77Aa17.68±0.73Aa2121.91±3.69B17.97±0.83Aab20.99±2.34Ab18.07±1.44Aa2821.11±0.97B20.02±0.89Bb15.66±0.79Aa15.97±1.45AaU/L7 d时，G1组淡水石斑鱼ALT活性显著低于其他组（P0.05）；14 d时，G2组和G3组淡水石斑鱼ALT活性较G0组和G1组显著降低（P0.05）；21 d时，各EGB添加组中淡水石斑鱼ALT活性显著低于G0组（P0.05）；28 d时，G2组和G3组淡水石斑鱼ALT活性较G0组和G1组显著降低（P0.05）；G1组试验14 d时淡水石斑鱼ALT活性显著高于其他时间（P0.05），G2组试验14、28 d时淡水石斑鱼ALT活性较7、21 d时显著降低（P0.05）；G3组试验7 d时淡水石斑鱼ALT活性显著高于其他时间（P0.05）。2.3EGB对淡水石斑鱼血脂代谢指标的影响（见表4）由表4可知，试验7 d时，与G0组相比，各EGB添加组淡水石斑鱼CHO含量均显著降低（P0.05）。G1组、G2组和G3组试验7 d时淡水石斑鱼CHO含量显著低于其他时间（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.01.009.T004表4EGB对淡水石斑鱼血脂代谢指标的影响项目时间/dG0组G1组G2组G3组CHO/(mmol/L)76.04±0.05B3.78±0.32Aa4.03±0.19Aa3.07±0.54Aa146.64±0.856.14±0.66b5.48±0.41b5.58±0.67b216.22±0.426.01±0.25b6.06±0.32b5.57±0.29b286.17±0.406.03±0.27b6.15±0.02c6.09±0.44bLDL-C/(mmol/L)72.07±0.73B1.76±0.19Aa1.88±0.97Aa1.89±0.54Aa142.13±0.55B1.88±0.25Ab1.99±0.11Aa1.98±0.32Ab212.19±0.23B1.82±0.44Aa1.77±0.15Aab1.81±0.08Aa282.03±0.141.89±0.56b1.87±0.09b1.98±0.79bTG/(μmol/L)72.69±0.03AB2.36±0.06A2.59±0.07Bb2.28±0.12A142.61±0.03B2.17±0.06A2.57±0.17Bb2.11±0.11A212.63±0.222.31±0.181.89±0.17a2.02±0.28282.63±0.21AB2.07±0.21A2.23±0.38ABb2.19±0.19AHDL-C/(mmol/L)71.27±1.43B0.98±0.09Aa1.28±0.07Ba1.31±0.13Ba141.24±0.09B1.27±0.15Aa1.28±0.08Aa1.31±0.12ABa211.22±0.151.32±0.15b1.29±0.14ab1.46±0.12ab281.43±0.40B1.49±0.05Ab1.46±0.18Ab1.80±0.89Ab7、14、21 d时，与G0组相比，各EGB添加组淡水石斑鱼LDL-C含量均显著降低（P0.05）。G1组试验7、21 d时淡水石斑鱼LDL-C含量显著低于14、28 d时（P0.05）；G2组试验28 d时淡水石斑鱼LDL-C含量显著低于7、14 d时（P0.05）；G3组试验21 d时淡水石斑鱼LDL-C含量显著低于14、28 d时（P0.05）。7 d时，G2组淡水石斑鱼TG含量较G1组和G3组显著升高（P0.05），14 d时，G1组和G3组淡水石斑鱼TG含量显著低于G0组和G2组（P0.05）；G2组试验21 d时淡水石斑鱼TG含量显著低于其他时间（P0.05）。7 d时，G1组淡水石斑鱼HDL-C含量显著低于其他组（P0.05）；14 d时，G2组淡水石斑鱼HDL-C含量较G0组显著升高（P0.05）；28 d时，与G0组相比，各EGB添加组淡水石斑鱼HDL-C含量均显著升高（P0.05）。G1组21、28 d时淡水石斑鱼HDL-C含量较7、14 d显著升高（P0.05）；G2组和G3组试验28 d时淡水石斑鱼HDL-C含量较7、14 d时显著升高（P0.05）。2.4EGB对淡水石斑鱼血清GLU含量的影响（见表5）由表5可知，14 d时，G3组GLU含量显著低于其他各组（P0.05）；28 d时，G2组和G3组GLU含量较G0组和G1组显著降低（P0.05）；G2组和G3组28 d的GLU含量较其他组显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.01.009.T005表5EGB对淡水石斑鱼血清GLU含量的影响时间/dG0组G1组G2组G3组77.71±1.75.15±0.215.08±0.47b5.56±0.36a146.67±0.36B5.31±0.17B6.13±0.12Ba5.18±0.58Ab215.59±0.495.23±0.245.52±0.48a5.03±0.31ab285.86±0.35B5.11±0.39B3.99±0.16Ac3.99±0.16Acmmol/L3讨论3.1EGB对淡水石斑鱼血清抗氧化功能的影响MDA是氧自由基作用于不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应的代谢产物，SOD、CAT及GSH-Px是重要的过氧化物酶，对氧化与抗氧化的平衡起着重要的作用[13]。本试验进行21 d时，发现EGB能够显著提高淡水石斑鱼T-SOD和GSH-Px活性；添加100 mg/kg EGB，在14 d时淡水石斑鱼MDA含量较其他时间显著降低，试验21 d时GSH-Px活性较7、14 d时显著升高。说明EGB在提升淡水石斑鱼清除自由基能力与抗氧化能力方面具有显著作用，这可能是银杏叶中的有效生物活性成分黄酮类、白果内酯与菇类内酯化合物共同作用的结果。何勤等[14]在鲤的饲料中添加不同水平的EGB，发现鲤肝脏中T-AOC、SOD及GSH-Px活性显著升高，抗应激、抗氧化能力增强。陈洪博等[15]研究发现，EGB能够降低心肌细胞发生氧化损伤后细胞内MDA的含量，提高SOD活性。许维唯等[16]和ABDEL等[17]研究发现，饲料中添加不同水平EGB能够显著降低斜带石斑鱼、人工养殖尼罗罗非鱼肝脏MDA含量，显著提高肝脏SOD和GSH-Px活性。任小杰[18]和EL-KASRAWY等[19]研究表明，EGB可以不同程度地改善肉鸡的抗氧化性能，提高肉鸡血清和肝脏中T-SOD和GSH-Px活性，降低血清MDA含量。以上结果均与本试验得到的结果一致。本试验表明，21、28 d时，各试验组淡水石斑鱼血清CAT活性显著低于对照组，G2组和G3组的CAT活性在7 d时高于其他时期，说明EGB对动物CAT活性的影响与添加时间和添加量有关，具体关系有待进一步探究。3.2EGB对淡水石斑鱼肝功能的影响肝脏是氨基酸代谢的主要场所，ALT和AST在动物机体蛋白质代谢中起重要作用。肝脏受损时，肝细胞中ALT和AST会进入血液[20]。米红梅等[21]采用银杏叶提取物给药二甲苯导致肝损伤的小鼠，发现二甲苯导致肝损伤组小鼠的肝组血清ALT活性显著减低。陈强等[22]研究发现，在基础饲料中添加0.5 g/kg EGB能够显著降低肉雏鸡血清AST和ALT活性。本试验表明，EGB试验组淡水石斑鱼AST和ALT活性较对照组下降，与上述研究结果一致。3.3EGB对淡水石斑鱼血脂代谢的影响HDL-C和LDL-C能够反映体内血脂的代谢情况。LDL-C、CHO及TG含量升高，可能加速动脉硬化，增加心脑血管疾病发生率；HDL-C含量越高，心脑血管疾病发生率越低。本试验表明，在饲料中加入50、100、200 mg/kg EGB，对淡水石斑鱼血清中LDL-C、CHO及TG含量有降低效果。添加EGB后淡水石斑鱼血清HDL-C含量呈小幅度升高趋势。陈梅霞等[23]和张琪等[24]研究表明，服用EGB显著降低了高脂血症大鼠的TG、CHO和LDL-C含量，并显著提高了HDL-C含量。LI等[25]试验表明，EGB可以降低高脂饮食小鼠的TC、TG和LDL-C含量，减轻肝脏脂肪变性和脂质堆积。陆江等[26]将EGB添加到饲料中喂食泰迪型贵宾犬，喂食8周后发现中剂量和高剂量添加组血清TG和LDL-C含量显著降低，HDL-C含量显著升高。TAN等[27]在杂交石斑鱼日粮中添加EGB，发现鱼血浆中TP和ALP含量升高。周锦龙[28]在蛋鸡饲料中添加0.04%和0.08% EGB，发现其血清TG和LDL-C含量显著降低。上述试验结果均与本试验结果一致。本试验中，G2组21 d时TG含量显著降低，说明100 mg/kg EGB能够增强淡水石斑鱼对脂肪的利用率，28 d时TG含量出现回升趋势，可能是因为随时饲喂时间延长，EGB促使其采食量增加，脂肪摄入量增加。3.4EGB对淡水石斑鱼血清葡萄糖含量的影响蔡德雷等[29]研究发现，EGB对代谢紊乱高血糖模型大鼠糖耐量产生影响，且被灌胃0.25 g/kg EGB的模型对照组大鼠0.5 h后血糖显著降低。于蕾妍等[30]研究发现，螺旋藻多糖和EGB具有协同增效作用，二者以2∶1比例混合效果最好，可以显著降低糖尿病模型小鼠血糖水平，提高机体对葡萄糖的耐受力，改善糖代谢异常，并能够增加肝糖原的利用率。本试验进行28 d时，G2组和G3组淡水石斑鱼血清GLU含量显著降低，推测EGB对于淡水石斑鱼的降血糖的作用需要高浓度配合长期饲喂。4结论本试验结果表明，饲料中添加EGB可以调节淡水石斑鱼血脂代谢，可用于预防和治疗高脂血症。EGB水平为100 mg/kg投喂14~21 d效果较好。