犊牛断奶后，营养物质的供给应及时满足犊牛组织器官生长发育的需要，营养物质摄入不足会导致犊牛组织器官发育不全或发育迟缓，也会影响后期犊牛生产性能的发挥[1]。氨基酸能够参与蛋白质合成，能够作为营养信号调控代谢通路、调控动物的生长发育和营养物质代谢[2]。在降低日粮中蛋白质水平时应补充必需氨基酸，以满足动物对氨基酸的需要，并提高饲粮蛋白质和氨基酸的利用效率[3]。么学博等[4]研究表明，饲料蛋白质中的氨基酸组成影响犊牛对氨基酸的吸收利用效率。云强等[5]研究发现，在低蛋白质饲粮中添加过瘤胃氨基酸能够减缓反刍动物因蛋白质缺乏而导致的不良后果。王波等[6]研究发现，降低饲粮粗蛋白水平虽然能够提高蛋白质的利用率，但蛋白供给不能满足机体需要，也会造成生长性能降低。杨志林等[7]研究发现，在肉牛日粮中直接添加未经处理的氨基酸，会被瘤胃中微生物分解和利用，从而减少到达小肠内的氨基酸数量。本试验探究在日粮中添加过瘤胃氨基酸对犊牛断奶后生长性能、体尺指标、营养物质表观消化率及氮代谢的影响，为犊牛的健康养殖提供参考。1材料与方法1.1试验材料选择36头日龄为91 d、体重（55±11）kg的贵州关岭犊牛（公、母各半）。1.2试验设计试验于2022年3月—7月在贵州省农业科学院草业研究所长顺科研示范基地进行。将36头犊牛随机分为4组，每组9个重复，每个重复1头犊牛。犊牛基础日粮营养水平参照动物营养参数与饲养标准（2010）[8]配制。基础日粮组成及营养水平见表1。对照组（A组）饲喂基础日粮，Ｂ组在基础日粮中添加15 g/d RP-Lys，Ｃ组在基础日粮中添加15 g/d RP-Met，Ｄ组在基础日粮中添加15 g/d RP-Lys+15 g/d RP-Met。试验期为90 ｄ。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.001.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米18.20干物质/%91.50麦麸4.10粗蛋白/%13.15豆粕8.50粗脂肪/%3.75菜籽粕3.00中性洗涤纤维/%53.38食盐0.30钙/%0.58预混料0.30磷/%0.77磷酸氢钙0.60小肠可消化蛋白/%10.70全株青贮玉米60.00赖氨酸/%0.42花生秧5.00蛋氨酸/%0.19综合净能/(MJ/kg)6.50注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 15 000 IU 、VD 5 000 IU、VE 50 mg、铁35 mg、铜12.5 mg、锰130 mg、锌100 mg、硒0.3 mg、碘1.5 mg、钴0.5 mg。2.营养水平中综合净能和小肠可消化蛋白为计算值，其余均为实测值。1.3饲养管理犊牛采取单独圈舍饲养，每个圈舍面积为8 m2，每15 d更换1次垫料。每天日粮干物质饲喂量为犊牛体重的2.5%，分别于9：00和17：00饲喂，饲喂前对每头牛的剩料进行称重并记录。每14 d根据采食情况和体况变化调整饲喂量，自由饮水。1.4样品采集采用全收粪、尿法，在犊牛120~126日龄和173~179日龄时，每组选择6头体重相近的健康犊牛，进行两期消化代谢试验。预试期7 d，正式试验期7 d。记录每头犊牛正式试验期每日排粪量和排尿量，每天收集粪便总量的10%作为混合样品，每100 g新鲜粪便加入10%的稀硫酸10 mL固氮，每天收集尿总量的2%作为混合样品，用10%稀硫酸调试尿样，使pH值小于3，于-20 ℃冰箱保存。1.5测定指标及方法1.5.1生长性能记录每头犊牛每天采食量，计算干物质采食量（DMI）、平均日采食量，在试验第1、30、60、90 d清晨对每头犊牛空腹称重，测量体尺指标（体高、体直长、体斜长、胸围、腹围、管围），计算平均日增重（ADG）、料重比、增长率。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=试验期间总采食量/试验天数(2)料重比=消耗饲料总量/总增重(3)增长率=(末期体尺长度-初始体尺长度)/初始体尺长度×100%(4)1.5.2营养物质表观消化率收集日粮和粪便样品，采用张丽英[9]的方法测定日粮和粪便中的总能（GE）以及干物质（DM）、粗蛋白（CP）、粗灰分（Ash）、中性洗涤纤维（NDF）、粗脂肪（EE）、酸性洗涤纤维（ADF）、钙（Ca）、磷（P）的含量。采用日立L-8900氨基酸自动分析仪按照GB/T 18246—2019的方法测定Lys和Met含量。根据测定结果计算营养物质表观消化率。营养物质表观消化率=(食入日粮总养分-食入日粮后排泄物养分)/食入日粮总养分×100%(5)1.5.3氮代谢饲料氮、粪氮含量采用张丽英[9]的方法测定，尿中尿素氮（BUN）含量的测定参照杜建文[10]方法。粪氮、尿氮数据处理采用Excel 20016计算。饲料氮利用率=(饲料氮摄入量-粪氮排泄量-尿氮排泄量)/饲料氮摄入量×100%(6)1.6数据统计与分析采用Excel 2016软件整理试验数据，SPSS 22.0软件进行统计分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸水平对犊牛生长性能的影响（见表2）由表2可知，在180 d，D组犊牛ADG高于其他3组；在121~150 d，D组犊牛ADG显著高于A组（P0.05）；在151~180 d，D组犊牛ADG显著高于其他3组（P0.05）。在150 d，D组犊牛体重显著高于A组（P0.05）；在180 d，D组犊牛体重显著高于其他3组（P0.05）。121~150、151~180、91~180 d，D组犊牛料重比均低于其他3组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.001.T002表2过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸水平对犊牛生长性能的影响项目日龄/dA组B组C组D组SEMP值体重/(kg/头)9152.5551.1853.2650.880.9760.0712064.5564.9865.5665.580.4300.0815082.06b84.84ab83.49ab86.88a1.7760.03180103.96b107.64b105.69b111.78a2.9120.02平均日增重/[kg/(头·d)]91~1200.400.460.410.490.0370.11121~1500.58b0.66ab0.6ab0.71a0.0510.02151~1800.73b0.76b0.74b0.83a0.0390.0491~1800.57b0.63ab0.58b0.68a0.0440.02平均日采食量/[kg/(头·d)]91~1201.972.241.932.290.1600.12121~1503.543.933.463.930.2150.07151~1805.135.294.985.550.2120.1091~1803.373.703.293.830.2230.09料重比91~1204.924.874.714.680.1020.11121~1506.11a5.96ab5.77b5.53b0.2200.03151~1807.03a6.96b6.73b6.69b0.1450.0191~1805.92a5.87a5.67ab5.63b0.1250.04注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸水平对犊牛体尺指标的影响（见表3）由表3可知，各处理组犊牛91、180 d体高、体直长、体斜长、胸围、腹围、管围及其增长率均无显著差异（P0.05）；D组犊牛180 d体高、体直长、体斜长、胸围及增长率高于其他3组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.001.T003表3过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸水平对犊牛体尺指标的影响项目A组B组C组D组SEMP值体高91 d/cm72.2674.0773.7175.051.000.12180 d/cm87.0589.8389.0192.431.930.08增长率/%20.4721.2820.7623.161.050.12体直长91 d/cm73.9677.2580.0579.182.340.22180 d/cm81.7286.2588.3392.413.850.45增长率/%10.4911.6510.3416.712.600.56体斜长91 d/cm77.1081.9279.0485.103.020.11180 d/cm92.1399.0095.20103.444.230.40增长率/%19.4920.8520.4521.550.740.23胸围91 d/cm90.2493.6993.17103.975.190.32180 d/cm117.19120.11118.99130.055.000.67增长率/%29.8628.2027.7125.081.720.35腹围91 d/cm98.6797.5599.08101.961.630.26180 d/cm127.23136.61134.67142.555.470.66增长率/%28.9440.0435.9239.814.490.27管围（左前）91 d/cm10.1210.6510.2310.500.210.09180 d/cm12.4313.0512.6213.500.410.13增长率/%22.8322.5422.3628.572.470.54管围（右前）91 d/cm12.1211.539.5013.441.420.33180 d/cm14.7014.0512.0016.851.730.45增长率/%21.2921.8626.3225.372.170.342.3过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸水平对犊牛营养物质表观消化率的影响（见表4）由表4可知，A组粗脂肪（EE）表观消化率低于其他3组，蛋氨酸（Met）表观消化率高于其他3组。120~126 d，B组赖氨酸表观消化率显著低于其他各组（P0.05）；173~179 d，B组赖氨酸表观消化率显著低于A组和D组（P0.05）。120~126 d和173~179 d，A组蛋氨酸表观消化率显著高于C组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.001.T004表4过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸水平对犊牛营养物质表观消化率的影响项目日龄/dA组B组C组D组SEMP值干物质120~12671.6073.2374.8871.541.370.12173~17976.6277.7676.7774.841.050.09氮120~12668.8668.5869.0767.310.680.08173~17963.08b86.00a76.53a79.63a8.370.04中性洗涤纤维120~12635.3132.6129.6234.452.180.22173~17943.0739.7739.1242.022.660.06粗脂肪120~12670.3373.2478.6780.033.950.12173~17973.7376.7882.4883.914.150.09钙120~12655.3452.2354.4354.091.130.11173~17955.3852.2754.4754.131.130.18总氨基酸120~12677.7180.5575.4283.132.910.23173~17982.7685.7980.3288.533.100.07赖氨酸120~12676.78b68.22a74.88b77.77b3.720.04173~17978.45a69.70b76.51ab79.45a3.800.03蛋氨酸120~12678.57a75.39ab69.70b73.75ab3.200.02173~17980.69a77.43ab71.58b75.74ab3.280.05%2.4过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸水平对犊牛氮代谢的影响（见表5）由表5可知，在173~179 d阶段，A组粪氮排泄量显著高于其他3组（P0.05），A组尿氮排泄量显著低于B组（P0.05）；A组饲料氮利用率显著高于其他3组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.001.T005表5过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸水平对犊牛氮代谢的影响项目日龄/dA组B组C组D组SEMP 值饲料氮摄入量/(g/W0.75)120~1262.4202.7062.3462.7680.180.15173~1792.5602.5722.4542.6220.060.09粪氮排泄量/(g/W0.75)120~1260.7540.8500.7260.9050.070.16173~1790.945a0.360b0.576b0.534b0.210.04尿氮排泄量/(g/W0.75)120~1260.7540.8030.7530.7400.020.06173~1790.843b1.251a1.003ab1.072b0.150.01饲料氮利用率/%120~12636.55038.19037.17038.2200.710.08173~17943.280a28.680b36.620b36.980b5.180.023讨论3.1过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸水平对犊牛生长性能的影响氨基酸是动物机体内构成蛋白质的基本物质，在动物的生长发育方面起到非常重要的作用。降低反刍动物饲粮蛋白质水平会直接减少饲粮中必需和非必需氨基酸的含量，导致氨基酸不平衡，因此动物不能摄取足够的营养物质，从而显著降低动物生产性能[11]。云强等[5]研究表明，犊牛日粮中添加过瘤胃氨基酸后，日粮中粗蛋白水平由14.67%降低至12.02%，犊牛体增重保持不变。Lee等[11]研究发现，在奶牛日粮中添加过瘤胃氨基酸，饲粮的蛋白质水平从15.7%降低至13.5%。此外，向白菊等[12]研究表明，在肉牛低蛋白质水平的日粮中添加适量的过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸，肉牛生长性能优于饲喂正常蛋白质水平的肉牛，与本研究结果相一致。郭伟等[13]研究发现，在杜寒杂交肉羊饲粮中添加过瘤胃氨基酸和尿素可以降低日粮粗蛋白水平，不会影响肉羊的生产性能。日粮中添加过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸对犊牛ADG影响显著，原因可能是日粮中添加过瘤胃氨基酸在瘤胃中能够有效避免被瘤胃微生物分解利用，小肠内的氨基酸含量增加，小肠中氨基酸比例平衡，提高小肠中氨基酸的消化吸收率，为机体增重提供物质基础。马姜静等[14]研究发现，在低蛋白质日粮补充合成氨基酸，能够提高肉牛生长前期的日增重，降低料重比。本试验结果显示，在试验期间，过瘤胃氨基酸添加处理组犊牛ADG高于未添加处理组，说明在犊牛日粮中添加过瘤胃氨基酸对犊牛的ADG具有重要作用。本研究结果表明，在日粮中同时添加赖氨酸和蛋氨酸，犊牛ADG高于单一添加赖氨酸或蛋氨酸组，原因可能是赖氨酸和蛋氨酸在机体对营养物质消化、吸收及利用过程中起到协同作用。3.2过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸水平对犊牛体尺指标的影响体尺指标能够反映各部位是否发育完全、匀称以及是否符合某品种的特征，同时也反映出该阶段日粮营养水平是否满足机体生长发育需要。犊牛阶段体尺生长发育情况反映该阶段肉牛饲养管理水平、饲料营养供给情况及品种遗传潜力。同时，犊牛体尺可作为该品种肉牛后期生长性能评估的依据。本研究中，各试验组犊牛末重和平均日增重均高于对照组，相应的犊牛体尺指标也高于对照组。在同等条件下犊牛体尺受日粮中过瘤胃氨基酸水平的影响，说明日粮中氨基酸水平是影响犊牛体尺生长发育的主要因素。单一添加赖氨酸或蛋氨酸，犊牛体尺发育情况低于同时添加赖氨酸和蛋氨酸，说明氨基酸之间的不同组分对犊牛体尺指标生长发育具有协同作用。Heinrichs等[15]研究表明，体重与体尺各项指标间存在较强的相关性，与本研究结果相似。3.3过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸水平对犊牛营养物质表观消化率的影响犊牛在90~180日龄阶段的消化系统初步发育完善，犊牛日龄增长，但营养物质表观消化率变化较小，可能是瘤胃内微生物发酵功能已经趋于稳定[16]。Hill等[17]研究发现，在肉牛日粮中额外添加氨基酸对DM表观消化率没有影响，与本试验的研究结果一致。Hussein等[18]研究发现，向荷斯坦生长公牛真胃内注射6 g未经包被处理的赖氨酸对日粮中DM表观消化率没有影响。机体血浆中必需氨基酸与总氨基酸浓度是影响体蛋白沉积的主要因素[19]。血浆中充足的氨基酸含量为体蛋白质沉积提供必需的氮素来源，保证氨基酸平衡供给，促进体蛋白的沉积[20]。本试验在犊牛日粮中添加过瘤胃氨基酸，提高了饲料中粗蛋白的表观消化率，粪氮排泄量降低，研究结果与张仔堃等[21]和李海霞等[22]的研究结果一致。日粮中蛋白水平含量过低，进入瘤胃内氮不足会抑制瘤胃内微生物繁殖生长；而日粮中蛋白水平含量过高，大量氮素过剩，通过消化道排出体外，造成氮源浪费[23]。Kamiya等[24]研究发现，在肉牛日粮中添加蛋氨酸或赖氨酸，可以减少氮的排泄，提高饲料氮的利用率。粪便中排泄的氮主要由未消化的饲粮蛋白、微生物蛋白、消化道上皮组细胞脱落和消化酶等组成，而尿液中排泄的氮主要是瘤胃中蛋白质降解及组织细胞[25]。李荫柱等[26]研究表明，日粮中分别添加氮氨甲酰谷氨酸和过瘤胃蛋氨酸，能够降低滩羔羊血清尿素氮含量，但两种氨基酸组合可以显著降低血清尿素氮含量。Tamminga[27]研究表明，提高奶牛日粮中蛋白水平能够改变机体排泄物中氮量，然而粪便中氮量的变化不明显，对尿氮的变化影响较大。沈佳佳等[28]研究表明，在饲料中添加氨基酸，机体氮代谢量增加，进而增加了尿氮的排泄量。李成贤等[29]研究发现，在肉牛日粮中添加瘤胃保护性精氨酸，可降低血清中尿素氮的含量。动物体内氨基酸含量不足或不平衡可抑制其他氨基酸吸收，未被机体吸收利用的氨基酸以氨的方式进入肝脏，经鸟氨酸循环生成尿素后，通过肾脏随尿排出，导致尿氮排出量增加。当体内氨基酸含量超过机体需要量时，氨基酸经糖异生作用参与能量代谢，增加尿氮排出量[30]，与本试验结果一致，但与栾玉静等[31]和Alferink等[32]的研究结果存在差异。氨基酸是动物机体内构成蛋白质的基本物质，降低反刍动物日粮中氨基酸含量，机体维持和生产所需氨基酸缺乏，导致氨基酸供需不平衡，因此动物不能摄取足够的氨基酸，从而导致动物的生产性能降低[11]。本试验中，在犊牛日粮中添加瘤胃赖氨酸和蛋氨酸，在120~126日龄时尿氮排泄量并没有受到氨基酸的影响，直到173~179日龄时尿氮排泄量出现异常变化。其原因可能是不同动物机体对氨基酸的需要量不同；同时，额外添加的氨基酸在进入小肠后被机体吸收进入体内参与代谢，打破饲料中原有氨基酸的平衡，进而导致不同种类氨基酸在动物体内代谢途径之间存在相互的交叉、抑制或促进，进而证明了添加氨基酸后，氨基酸的表观消化率存在不同程度的降低。4结论在日粮中添加过瘤胃赖氨酸和蛋氨酸对犊牛生长性能、营养物质表观消化率、氮代谢、体尺指标具有一定作用。在每头贵州关岭牛犊牛日粮中添加15 g/d RP-Lys+15 g/d RP-Met组合比例的过瘤胃氨基酸，能够促进犊牛生长发育，降低粪氮排泄量，并对犊牛体况发育无影响。