生物活性肽是由蛋白质分子在生物体内经过酶的作用或其他生化反应产生的短肽链[1]。按照来源不同，活性肽可分为乳肽、大豆肽、玉米肽等[2]；根据功能不同，活性肽又可分为抗菌肽、抗氧化肽、免疫肽等[3]。不同的氨基酸序列和结构使活性肽具有多种生物学功能，活性肽在体内能够与金属离子及矿物质结合，形成螯合物，进而提高机体对金属离子和矿物质的吸收[4]。大豆活性肽通过促进消化吸收、提高饲料利用效率等方式，促进动物的生长发育；部分大豆活性肽还具有免疫调节作用，可以增强动物的免疫力，提高动物的健康水平[5-6]。大豆活性肽食用安全且营养丰富，将其作为饲料添加剂用于动物生产，可以避免传统抗生素的耐药性问题，具有很好的发展潜力[7-8]。本试验以大豆活性肽为原料，旨在分析添加大豆活性肽后，育肥猪生长性能、胴体性状、血清生化指标及肠道微生物的变化情况，以期为活性肽产品在畜禽养殖中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料大豆活性肽由甘肃农业大学提供，含有效活性肽40 g/kg。1.2试验设计和饲养管理选取平均体重（72.40±1.10）kg的育肥猪120头，随机分为4组，每组3个重复，每个重复10头猪。对照组育肥猪饲喂基础日粮，试验组分别在基础日粮中添加0.2%、0.4%、0.6%的大豆活性肽。试验期42 d。试验期间每天早晚各饲喂2次，不限量采食和饮水，按照猪场常规程序进行清洁、消毒、免疫和驱虫。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.007.T001表1基础日粮组成及营养水平项目对照组A组B组C组原料组成/%玉米63.3063.6063.7064.00豆粕16.0115.7515.6015.50麦麸15.5215.2915.1914.88大豆肽00.200.400.60大豆油2.502.502.402.30磷酸氢钙0.700.700.700.70石粉0.970.961.011.02预混料1.001.001.001.00合计100.00100.00100.00100.00营养水平消化能/(MJ/kg)13.5113.5513.5613.58粗蛋白/%14.8314.8414.8614.90赖氨酸/%0.830.830.840.83蛋氨酸/%0.260.250.260.26钙/%0.580.580.580.58总磷/%0.510.520.520.51注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 2 600 IU、VB1 3.12 mg、VD3 2 000 IU、VE 80 IU、叶酸0.56 mg、泛酸16.52 mg、烟酸26.35 mg、锌56 mg、铁62 mg、锰28 mg、铜21 mg、碘0.4 mg、硒0.2 mg。2.营养水平均为计算值。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能试验第1、42 d上午，所有猪称重并计算平均日增重，根据每天的采食量计算平均日采食量和料重比。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.3.2胴体性状和肉品质饲养试验结束当天，每组选择9头猪（每个重复3头猪）进行屠宰，屠宰率、眼肌面积、体直长、体斜长和背膘厚等胴体性状指标参考《瘦肉型猪胴体性状测定技术规范》相关方法测定。眼肌面积为家畜倒数第一、二胸椎之间背腰最长肌的横断面面积；从两耳根连线的中点，沿背线到尾根的长度为体直长；锁骨前上关节到坐骨结节间的距离为体斜长；胴体背中线肩部最厚处、胸腰椎结合处和腰荐椎结合处三点膘厚的平均值为背膘厚。屠宰率=胴体重/宰前活重×100%(4)瘦肉率=瘦肉重量/剥离组织总重×100%(5)脂肪率=脂肪重量/剥离组织总重×100%(6)肉品质测定指标包括pH值（45 min和24 h）、剪切力、肉色（45 min和24 h）、滴水损失等。其中pH值利用便携式酸度计（YY-1030，深圳仪二仪科技有限公司）测量，利用物性分析（TAXTC，上海保圣实业发展有限公司）测定剪切力，利用色差仪（CR-400，Konica Minolta）测定肉质的红度（a*）、黄度（b*）和亮度（L*）值。1.3.3血清生化、抗氧化及免疫指标试验最后一天早晨，每组选择15头猪，空腹进行前腔静脉采血，低温静置30 min，3 000 r/min离心15 min，血清于-20 ℃保存。采用全自动生化分析仪（AU5800，Beckman Coulter）分别测定血清生化指标、抗氧化指标和免疫指标。试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。血清生化指标：总蛋白（TP）、球蛋白（GLB）、白蛋白（ALB）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、尿素氮（BUN）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）。血清抗氧化指标：总抗氧化能力（T-AOC）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）。血清免疫指标：免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）、补体C3、补体C4。1.3.4肠道微生物提取粪便总DNA，送至北京诺禾致源科技股份有限公司进行肠道微生物测序，分析操作分类单元（OTU）聚类和物种分类。依照聚类结果，将OTUs的代表序列与silva数据库中的细菌序列进行比对，同时对alpha多样性（Shannon、Simpson、Ace、Chao指数）进行量化，计算各样本内的物种丰富度，依照注释的结果，统计各组在不同分类水平上丰度排名前几位的物种并计算相对丰度。1.4数据统计与分析采用Excel软件初步处理试验数据，SPSS 26.0软件进行单因素方差分析，LSD法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1大豆活性肽对育肥猪生长性能的影响（见表2）由表2可知，各试验组猪平均日增重显著高于对照组（P0.05），B组、C组料重比显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.007.T002表2大豆活性肽对育肥猪生长性能的影响组别初重/(kg/头)末重/(kg/头)平均日增重/[g/(头·d)]平均日采食量/[kg/(头·d)]料重比对照组73.50±7.71106.22±10.43779.05±20.88b2.70±0.833.45±0.98aA组71.82±9.60109.36±8.96893.80±35.09a2.91±0.693.26±1.31abB组72.93±5.44113.05±11.06955.24±25.34a2.94±0.473.08±1.20bC组71.32±6.37110.94±7.00963.72±18.76a3.01±0.663.12±1.00b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表3、表5~表7与此同。2.2大豆活性肽对育肥猪胴体性状的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，C组育肥猪的平均背膘厚显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.007.T003表3大豆活性肽对育肥猪胴体性状的影响组别屠宰率/%眼肌面积/cm2体直长/cm体斜长/cm平均背膘厚/mm瘦肉率/%脂肪率/%对照组73.84±2.3245.63±3.1789.02±4.0277.38±0.9836.24±1.04a59.12±0.9316.94±0.49A组74.17±2.3046.17±2.8989.43±6.3177.62±1.6735.91±1.54ab60.09±1.2816.86±1.31B组74.92±4.5847.20±3.2590.10±5.9378.05±1.2534.75±1.90ab60.63±1.6415.30±1.26C组75.05±3.2346.88±3.1190.07±2.1078.11±1.5233.81±1.65b59.87±1.1715.85±2.902.3大豆活性肽对育肥猪肉品质的影响（见表4）由表4可知，宰后45 min，B组肉质L*值显著高于对照组（P0.05），C组肉质pH值显著高于其他各组（P0.05）；宰后24 h，各试验组肉质a*、b*和L*值与对照组相比均有升高的趋势，但差异不显著（P0.05）。B组和C组肉质滴水损失显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.007.T004表4大豆活性肽对育肥猪肉品质的影响项目对照组A组B组C组a*45 min值4.52±0.404.49±0.194.53±0.364.53±0.17b*45 min值2.63±0.112.64±0.082.61±0.102.58±0.11L*45 min值45.32±1.30b46.48±1.66ab47.05±2.04a46.85±1.22abpH45 min值6.06±0.74b6.06±0.86b6.05±0.52b6.22±0.90aa*24 h值6.42±0.306.47±0.216.50±0.186.51±0.65b*24 h值5.16±0.395.15±0.825.11±0.465.07±0.71L*24 h值49.81±3.3149.85±4.7849.87±4.2649.92±3.99pH24 h值5.86±0.465.88±0.705.85±1.035.90±0.94滴水损失/%2.37±0.08a2.26±0.07ab2.15±0.04b2.12±0.07b剪切力/N37.14±1.5136.99±1.9637.08±1.6937.10±2.04肌内脂肪/%9.02±0.529.03±0.589.02±0.569.00±0.30注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表9与此同。2.4大豆活性肽对育肥猪血清生化指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，B组和C组育肥猪血清BUN含量显著降低（P0.05），C组血清AST活性显著低于对照组和A组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.007.T005表5大豆活性肽对育肥猪血清生化指标的影响组别TP/(g/L)GLB/(g/L)ALB/(g/L)TC/(mmol/L)TG/(mmol/L)BUN/(mmol/L)AST/(U/L)ALT/(U/L)对照组66.43±3.7532.54±3.0633.74±3.662.13±0.060.80±0.046.97±0.10a24.50±2.31a58.66±3.15A组66.81±4.7133.11±4.1833.63±2.302.17±0.180.81±0.066.30±0.07ab24.01±3.04a57.53±3.48B组67.40±5.2533.26±3.7534.10±4.482.15±0.170.84±0.055.88±0.06b22.82±1.39ab57.81±3.55C组68.93±4.8634.09±2.9134.75±3.152.18±0.130.86±0.045.71±0.12b21.93±2.77b56.72±2.682.5大豆活性肽对育肥猪血清抗氧化指标的影响（见表6）由表6可知，各试验组育肥猪血清MDA含量显著低于对照组（P0.05），B组和C组T-AOC显著高于对照组（P0.05），C组GSH-Px活性显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.007.T006表6大豆活性肽对育肥猪抗氧化指标的影响组别T-AOC/(U/mL)CAT/(U/mL)SOD/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)MDA/(μmol/L)对照组9.93±0.72b43.15±2.53223.41±15.43286.74±18.61c4.84±0.09aA组10.02±1.10b43.01±1.66225.65±12.87292.60±20.45bc4.21±0.10bB组12.54±0.83a44.62±3.58232.30±17.40300.17±26.14b3.77±0.08cC组14.03±1.31a45.10±2.91236.07±20.14313.64±30.18a3.50±1.02c2.6大豆活性肽对育肥猪血清免疫指标的影响（见表7）由表7可知，与对照组相比，B组育肥猪血清IgM含量显著升高（P0.05），C组育肥猪血清IgG和IgM含量显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.007.T007表7大豆活性肽对育肥猪免疫指标的影响组别IgAIgMIgG补体C3补体C4对照组1.05±0.062.15±0.16b12.26±1.03b0.45±0.020.11±0.01A组1.16±0.082.27±0.12ab13.77±0.47b0.47±0.040.13±0.03B组1.19±0.112.44±0.14a14.18±0.56ab0.45±0.020.17±0.05C组1.22±0.122.47±0.20a15.05±0.88a0.46±0.010.19±0.03g/L2.7大豆活性肽对育肥猪肠道微生物的影响（见表8、表9）由表8可知，与对照组相比，各试验组Shannon指数、Simpson指数、Ace指数和Chao指数均无显著差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.007.T008表8育肥猪肠道内容物中微生物多样性指数组别OTU数量Shannon指数Simpson指数Ace指数Chao指数对照组823.00±26.064.22±0.090.041±0.001792.60±27.24841.07±32.54A组807.40±38.574.58±0.110.043±0.001799.31±30.07839.88±26.62B组819.00±29.414.43±0.130.036±0.000815.72±19.66871.30±35.88C组833.00±32.554.74±0.150.033±0.001824.55±23.49867.67±28.90由表9可知，在门水平上，相对丰度超过1%的菌群有厚壁菌门、变形菌门和拟杆菌门。其中C组厚壁菌门的相对丰度较对照组提高4.56%，但差异不显著（P0.05），C组变形菌门的相对丰度较对照组显著降低17.61%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.007.T009表9主要门与属水平相对丰度项目微生物对照组A组B组C组菌门厚壁菌门51.94±8.1252.17±7.6652.65±5.8354.31±6.02变形菌门24.36±1.09a23.77±1.17ab21.81±3.02ab20.07±2.68b拟杆菌门1.74±0.021.70±0.061.64±0.041.61±0.04软壁菌门0.46±0.040.47±0.050.51±0.030.50±0.06放线菌门0.16±0.020.12±0.020.13±0.030.13±0.05菌属放线菌属21.07±8.0322.31±4.2121.96±6.3022.05±4.58粪球菌属18.66±6.0918.03±5.2218.45±5.3617.99±7.48梭菌属6.56±3.106.77±2.316.28±2.336.84±1.77肠杆菌属1.24±0.341.29±0.251.18±0.181.21±0.28拟杆菌属0.40±0.020.36±0.030.43±0.060.43±0.05%在属水平上，相对丰度超过1%的菌群有放线菌属、粪球菌属、梭菌属和肠杆菌属，各菌属相对丰度与对照组相比差异均不显著（P0.05）。3讨论3.1大豆活性肽对育肥猪生长性能的影响与游离氨基酸相比，动物体吸收小肽的速度更快，过程耗能更少，效率更高[9]。这可能是因为在肠道内，通过被动吸收方式，转运蛋白（如肽转运蛋白）快速地吸收小肽，从而更快速地提供氨基酸来源[10]。此外，小肽可为动物提供必需氨基酸，促进蛋白质合成和细胞生长，有助于改善动物的生长性能[11]。左倩等[12]研究发现，在断奶仔猪日粮中分别添加5、10 g/kg的大豆活性肽，仔猪平均日增重和平均日采食量均显著升高，料重比显著下降。邱玉朗等[13]研究表明，利用大豆活性肽替代日粮中2%的豆粕，试验组仔猪的平均日增重显著升高，腹泻率和料重比显著下降。李新国等[14]研究发现，在断奶仔猪日粮中添加2%的大米活性肽后，与对照组相比，试验组仔猪的平均日增重和平均日采食量分别显著升高了13.27%和10.90%。本研究结果表明，在生长性能方面，试验组育肥猪的平均日增重均显著高于对照组，B组和C组料重比显著低于对照组；在胴体性状方面，在育肥猪日粮中添加大豆活性肽对大部分胴体性状无显著影响，C组育肥猪的平均背膘厚显著低于对照组；在肉品质方面，添加大豆活性肽能够改善肉色，显著降低B组和C组育肥猪的滴水损失，综合宰后45 min和24 h的肉品质数据，C组日粮改善肉色的效果最好。以上研究结果表明，在动物饲料中添加肽制品，可能通过提高氨基酸的利用效率改善动物的生长性能。3.2大豆活性肽对育肥猪血清生化指标的影响血清生理、生化指标可以反映机体的健康、营养代谢和免疫状态等情况[15]。TP含量可以反映蛋白质代谢状况；ALB由肝脏合成，其含量可以反映肝脏功能和蛋白质合成能力；GLB的变化可以反映猪的免疫状态和抵抗力[16]。本研究中，各试验组育肥猪血清TP含量高于对照组，表明大豆肽具有增强机体肝功能和抵抗力的功能。BUN是反映氮代谢的指标，受饲料中蛋白质含量和氨基酸供应的影响[17]。BUN含量低表明机体氨基酸平衡较好，蛋白质利用率较高[18]。本试验中，B组和C组育肥猪血清BUN含量显著降低，表明大豆活性肽能够促进氨基酸的平衡吸收，提高机体对蛋白质的利用率。AST和ALT是两种与肝功能和细胞损伤有关的酶，在机体内参与氨基酸的转移反应[19]。本试验中，C组育肥猪血清AST活性显著低于对照组，表明大豆活性肽会影响机体的生理代谢。3.3大豆活性肽对育肥猪血清抗氧化指标的影响活性氧是有氧呼吸条件下产生的，可以调节细胞周期进程、细胞内信号传导途径，并作为基因表达系统的信号分子[20]。发生氧化应激反应时，机体内活性氧过量，这些自由基会与生物体内的基团或大分子物质发生反应，导致细胞或组织的损伤[21]。活性肽能够减少或中和过量的活性氧，从而降低氧化应激的程度，保护细胞免受损害[22]。活性肽可通过多种机制发挥抗氧化作用，包括清除自由基、螯合金属离子、还原三价铁至亚铁和促进抗氧化酶的活性等[23]。左倩等[12]研究表明，大豆肽对DPPH自由基和羟自由基的清除率高达98.33%和84.38%，具有较高的抗氧化能力。于维等[24]同样发现，在日粮中添加0.6%的大豆活性肽后，肉鸡血清T-AOC提高16.66%，血清MDA含量呈下降趋势。以上结果表明活性肽具有良好的抗氧化能力。本研究结果表明，试验组育肥猪血清MDA含量显著低于对照组，B组和C组育肥猪血清T-AOC显著高于对照组，表明大豆活性肽具有良好的抗氧化能力。3.4大豆活性肽对育肥猪血清免疫指标的影响本试验结果中，B组和C组育肥猪血清IgM含量显著升高，C组育肥猪血清IgG含量显著升高，表明活性肽还具有增强机体免疫力的功能。抗菌肽可破坏细菌的结构，调节炎症反应，促进免疫细胞的吞噬作用，增强机体对细菌的免疫响应[25-26]。抗病毒肽具有抑制病毒复制和传播的能力，可以阻止病毒进入宿主细胞，干扰病毒的复制过程，从而降低病毒感染的发生[27]。免疫活性肽可以与其他免疫因子相互作用，提高免疫细胞的活性，增加抗体的产生等，促进细胞增殖和分化，从而增强机体的免疫反应[28]。左倩[29]在评估大豆肽对仔猪免疫能力的影响时发现，日粮中添加10 g/kg的大豆肽能够显著提高仔猪血清IgG、IgM、白细胞介素-6（IL-6）的含量，上调免疫相关基因的表达，提高机体免疫功能。左伟勇等[30]研究表明，在基础饲粮中添加2%的大豆肽，能够显著提高断奶仔猪空肠黏膜白细胞介素-2（IL-2）和分泌型免疫球蛋白A（sIgA）水平，改善肠道免疫功能。3.5大豆活性肽对育肥猪肠道微生物的影响活性肽调节肠道菌群的作用机制主要包括破坏有害菌的结构、清除肠道活性氧以及作为肠道菌群的底物被利用[31]。抗菌肽与微生物相互作用可增加细胞膜的通透性，导致细菌细胞膜损伤[32]，部分抗菌肽可以进入细菌细胞内部，干扰细胞内的生理过程和代谢通路，进而降低肠道内致病菌的数量[33]。过量的活性氧可能导致肠道菌群紊乱[34]。有研究表明，许多肽具有抗氧化活性，可帮助机体维持氧化还原平衡，从而提高肠道微生物群的多样性和丰富度[35]。部分肠道微生物如梭状芽孢杆菌、拟杆菌和乳杆菌等具有蛋白酶活性，可将蛋白质降解为多肽，多肽进一步被内肽酶降解为寡肽和氨基酸，这些肽和氨基酸作为底物可促进肠道微生物发酵[36]。此外，活性肽还能够促进有益菌的增殖，维持肠道微生态平衡[37]。左伟勇等[30]研究表明，在日粮中添加低分子质量的大豆肽后，21日龄仔猪空肠乳酸杆菌数量显著增多，空肠大肠杆菌数量显著减少，肠道微生物结构得到改善。岳洪源[11]研究发现，当日粮中大豆肽的添加水平为3 000 mg/kg时，能够显著降低仔猪结肠沙门氏菌的数量，极显著升高结肠乳酸菌数量，表明大豆肽能够改善猪肠道微生物区系，保护肠道健康。本研究结果表明，与对照组相比，各试验组厚壁菌门的相对丰度有所升高，C组变形菌门的相对丰度显著降低，表明大豆肽在一定程度上能够促进有益菌增殖，抑制病原菌的生长。4结论本研究结果表明，大豆活性肽能够改善育肥猪的生长性能和胴体性状，增强机体抗氧化和免疫功能，调节肠道菌群结构，维护肠道健康。本试验条件下，大豆活性肽的适宜添加量为0.4%~0.6%。