高密度的集约化养殖易造成蛋鸡卵巢功能受损，使蛋鸡达不到产蛋高峰或达到高峰后产蛋量迅速下降[1]。其中，饲料营养不足、卵巢炎、输卵管炎、应激等因素均会影响蛋鸡卵巢功能[2]。中药具有疗效好、副作用小、残留低及增强机体免疫力等特点被广泛用于防治畜禽各种疾病[3]。部分中药具有调节机体阴阳平衡、保肝护肾、调气血、益卵巢的功能[4-5]。但中药类多以粉碎后直接添加拌料为主，不能较好地利用其有效成分，导致用药量较大、成本较高。中药因含有蛋白质、氨基酸、微量元素和功能性物质，可在一定程度上刺激益生菌增殖。益生菌在肠道内增殖会产生大量的益生素及消化酶类，提高机体对中药的消化吸收，保证药效的发挥[6]。因此，本研究以两种不同功效中药复方，通过中药与微生态制剂的联合使用以提高药物的吸收率，促进蛋鸡的卵巢发育和卵泡成熟，进而提高蛋鸡的产蛋性能，为后续相关产品的开发提供参考。1材料与方法1.1中药益生菌复合制剂的制备复方一（F1）：以补气益肾、清热解毒为原则，由黄芪、板蓝根、党参、淫羊藿按照6∶4∶2∶5配比组成。复方二（F2）以补血滋阴、活血散瘀为原则，由当归、熟地、白芍、益母草按照5∶5∶3∶2配比组成。中药材均购自泰安市永春堂永兴药店。各中草药按处方称好，蒸煮干燥后粉碎，复配枯草芽孢杆菌B7348（CCTCCM2010260）和粪肠球菌SRG（CCTCCM-2010046），添加量均为5×108 CFU/g，配成中药益生菌复合制剂一和制剂二。1.2试验设计与试验日粮选用50周龄产蛋后期蛋鸡450只，随机分为5组，每组6个重复，每个重复15只蛋鸡。对照组（CK组）蛋鸡饲喂基础日粮，F1-1组和F1-2组在基础日粮中添加1‰、2‰中药益生菌复合制剂一，F2-1组和F2-2组在基础日粮中添加1‰和2‰中药益生菌复合制剂二。预试期7 d，正式试验期21 d。参照NY/T 33—2004中蛋鸡营养需要的推荐值配制玉米-豆粕型基础日粮[7]。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.010.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米65.05代谢能/(MJ/kg)11.30豆粕23.00粗蛋白/%16.50磷酸氢钙1.50钙/%3.50石粉8.50有效磷/%0.40食盐0.30蛋氨酸/%0.35蛋氨酸0.15赖氨酸/%0.65预混料1.50蛋氨酸+胱氨酸/%0.50注：1.预混料可为每千克日粮提供：VA 12 500 IU、VB1 1 mg、VB2 8.5 mg、泛酸钙50 mg、VB6 2 mg、VB12 0.01 mg、VD3 4 125 IU、VE 20 IU、VK3 30 mg、泛酸4.5 mg、烟酸20 mg、叶酸1 mg、生物素1 mg、胆碱450 mg、铜5 mg、碘0.5 mg、铁40 mg、锰75 mg、硒0.2 mg、锌50 mg。2.营养水平中粗蛋白和钙为实测值，其余均为计算值。1.3饲养管理试验期间蛋鸡自由采食、饮水。按常规进行饲养管理与免疫。观察鸡饮水、饮食、粪便排泄情况。1.4测定指标及方法1.4.1生产性能每天定时记录各组蛋鸡的产蛋数、产蛋重、耗料量，计算合格蛋率，记录死亡鸡数。以周为单位统计产蛋率、平均蛋重、料蛋比。1.4.2蛋品质试验期每周末时分别从每个重复中随机取鸡蛋5枚，采用蛋品质分析仪测定蛋品质，包括蛋黄颜色、蛋黄比重、蛋壳厚度、蛋形指数、哈夫单位。使用电子天平称量蛋重，用游标卡尺测量鸡蛋的横径和纵径，使用游标卡尺测量蛋壳两头及中部的蛋壳厚度，取平均值；用蛋黄分离器将蛋清和蛋黄完全分离，收集蛋黄称重。蛋形指数=横径/纵径×100%(1)蛋黄相对重=蛋黄重/全蛋重×100%(2)1.4.3生殖激素含量试验结束时每个重复随机选取3只蛋鸡，翅下静脉采血，3 000 r/min离心10 min，吸取上层血清，-20 ℃保存。采用鸡血清ELISA试剂盒检测血清雌二醇（E2）、黄体酮（P4）和促卵泡激素（FSH）和促黄体素（LH）的水平。试剂盒购自南京建成生物工程研究所，采用TECAN Infinite F50酶标仪测定。1.4.4血清免疫指标检测血清白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白A（IgA）的含量，方法同1.4.3。1.5数据统计与分析采用Excel 2007软件对试验数据进行处理，SPSS 16.0进行单因素方差分析，LSD法进行组间多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1中药益生菌复合制剂对蛋鸡生产性能的影响（见表2）由表2可知，第1周时，各试验组蛋鸡平均日采食量、产蛋率均低于CK组，F1-2组蛋鸡的料蛋比显著低于CK组（P0.05），F1-2组平均蛋重分别比F1-1组和F2-1组高3.47%和5.63%（P0.05）。第2周时，F2-1组、F2-2组蛋鸡平均日采食量均显著低于CK组（P0.05）。第3周时，F1-2组蛋鸡产蛋率和平均蛋重最高，料蛋比较低。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.010.T002表2中药益生菌复合制剂对蛋鸡生产性能的影响项目产蛋率/%平均蛋重/(g/枚)平均日采食量/[g/(只·d)]料蛋比第1周CK组83.19±3.3960.95±0.05ab130.87±2.42a2.26±0.02aF1-1组80.42±1.9159.66±0.61b119.84±1.43b2.19±0.05abF1-2组81.81±1.0061.73±0.72a121.35±1.38b2.11±0.02bF2-1组80.28±2.4558.44±0.09b118.73±1.77b2.22±0.04aF2-2组78.22±2.6460.00±0.15ab116.48±3.12b2.21±0.02a第2周CK组80.48±3.3060.46±1.26ab119.07±1.70a2.42±0.06aF1-1组76.19±1.7260.89±0.88a111.89±2.77ab2.43±0.11aF1-2组81.43±2.1860.04±0.69ab109.89±1.95bc2.25±0.03bF2-1组78.41±1.6159.15±0.37ab103.88±1.07c2.24±0.02bF2-2组74.76±2.5258.77±0.07b100.99±2.58c2.30±0.02b第3周CK组78.47±3.7460.51±0.43131.72±4.722.43±0.10F1-1组77.50±1.9759.88±0.73122.56±4.552.31±0.02F1-2组78.75±2.0560.61±0.32125.59±1.082.31±0.07F2-1组77.50±1.2759.16±0.54124.21±5.072.37±0.09F2-2组77.08±3.1559.30±0.30121.08±2.092.32±0.07注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2中药益生菌复合制剂对蛋品质的影响（见表3）由表3可知，第1周时，F1-2组鸡蛋的蛋壳厚度、蛋黄颜色、哈夫单位均为最高。第2周时，F1-2组哈夫单位显著高于对照组（P0.05），蛋壳厚度与蛋形指数均处于较高水平（P0.05）。第3周时，F1-1组、F1-2组的蛋壳厚度显著高于F2-2组（P0.05），F2-2组蛋形指数最高，显著高于CK组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.010.T003表3中药益生菌复合制剂对蛋品质的影响项目蛋形指数蛋黄相对重/%蛋壳厚度/mm蛋黄颜色哈夫单位第1周CK组1.289±0.00726.98±0.710.310±0.0054.93±0.07ab74.35±1.98F1-1组1.295±0.00626.87±0.510.290±0.0085.50±0.27a73.98±2.13F1-2组1.299±0.00625.71±0.490.310±0.0105.57±0.31a78.21±2.37F2-1组1.309±0.00925.92±0.500.290±0.0074.53±0.38b74.96±2.32F2-2组1.305±0.00826.83±0.510.300±0.0085.40±0.32ab73.36±1.49第2周CK组1.294±0.00827.69±0.600.300±0.008b5.21±0.21ab69.96±1.43bF1-1组1.305±0.00928.09±0.570.310±0.007ab5.08±0.18b72.15±2.53abF1-2组1.305±0.01226.76±0.670.310±0.012ab5.40±0.21a77.98±4.65aF2-1组1.306±0.00926.98±0.640.330±0.010a5.08±0.18a77.57±2.30aF2-2组1.305±0.01227.30±0.470.320±0.009ab5.13±0.34ab74.92±3.41ab第3周CK组1.290±0.006b26.83±0.880.310±0.008ab5.86±0.2773.36±2.15F1-1组1.310±0.010ab27.14±0.690.330±0.009a5.46±0.2274.44±2.15F1-2组1.310±0.008ab25.80±0.560.330±0.012a5.64±0.2976.07±1.86F2-1组1.300±0.009ab26.04±0.460.320±0.007ab5.64±0.2974.87±2.16F2-2组1.320±0.011a26.87±0.300.300±0.009b5.31±0.2172.25±2.232.3中药益生菌复合制剂对蛋鸡血清生殖激素的影响（见表4）由表4可知，与CK组相比，F1-2组蛋鸡血清P4、LH水平分别提高77.20%、58.02%（P0.05），F2-2组血清E2、FSH水平分别提高41.08%和19.53%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.010.T004表4中药益生菌复合制剂对蛋鸡血清生殖激素的影响组别E2/(ng/L)P4/(μg/L)FSH/(IU/L)LH/(IU/L)CK组36.90±3.63b10.35±1.32b2.56±0.21b2.62±0.33bF1-1组37.44±7.40b14.42±2.10ab2.74±0.16ab3.02±0.54abF1-2组41.65±8.96ab18.34±1.80a2.87±0.09ab4.14±0.76aF2-1组37.06±9.07b15.64±0.83ab2.69±0.14ab3.09±0.39abF2-2组52.06±10.95a13.32±1.83ab3.06±0.17a3.82±0.20ab2.4中药益生菌复合制剂对蛋鸡血清免疫指标的影响（见表5）由表5可知，与CK组相比，F2-1组蛋鸡血清IL-6含量降低了37.35%（P0.05），F1-2组、F2-1组和F2-2组蛋鸡血清IL-2含量分别降低了24.54%、29.88%、27.25%（P0.05）。F1-2组蛋鸡血清IgG含量比CK组提高了19.64%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.24.010.T005表5中药益生菌复合制剂对蛋鸡血清免疫指标的影响组别IL-6/(ng/L)IL-2/(ng/L)TNF-α/(ng/L)IgA/(mg/L)IgG/(mg/L)CK组45.86±2.71a23.96±1.38a8.12±1.7148.12±9.36462.99±10.82bF1-1组37.50±6.27ab22.94±0.60ab8.61±0.4350.21±4.11468.12±9.84bF1-2组35.26±5.05ab18.08±1.99b7.10±0.7559.30±15.97553.93±28.18aF2-1组28.73±4.20b16.80±2.32c8.17±0.2747.56±0.35453.90±28.79bF2-2组35.26±5.06ab17.43±2.10bc7.60±0.7745.96±2.21480.93±37.14ab3讨论3.1中药益生菌复合制剂对蛋鸡生产性能的影响由于产蛋高峰时过度的自身消耗，产蛋中后期的蛋鸡身体机能逐渐衰退，导致产蛋率持续下降。黄芪具有利水消肿、脱疮生肌，提高免疫的功能[8]。板蓝根可清热解毒。益母草具有活血化瘀的功效，可以调节激素分泌。当归常用于治疗血虚萎黄、痈疽疮疡等，发挥抗炎、抗氧化的作用[9]。本研究使用的中药组方具有补中益气、清热解毒和滋阴补肾、活血散瘀作用，可调节机体内分泌，改善造血功能，增强机体免疫[10]。谢全喜等[11]发现，在基础日粮中添加0.1％的含有黄芪等药材的中草药复方和0.15％的复合益生菌显著提高了蛋鸡的产蛋率，降低了料蛋比和软破蛋率，降低了炎症因子水平。石建存等[12]研究表明，发酵中药可显著提高蛋鸡的生长性能和抗体效价，增加鸡盲肠中菌群的物种多样性。因此，中药材与益生菌合用或发酵后使用均可发挥益生菌和中药的协同作用[13]，有助于提高抵抗力和缓解输卵管炎症，进而提高产蛋性能。本试验发现，海兰褐蛋鸡日粮中添加2‰中药益生菌复合制剂一能够更好地提高产蛋率，降低料蛋比，这可能是由于益生菌改善了蛋鸡肠道功能，促进了中药中多糖、黄酮、皂苷等功能性成分的吸收。3.2中药益生菌复合制剂对蛋鸡蛋品质的影响蛋黄比重、蛋黄颜色、蛋白高度和哈夫单位等能够反映鸡蛋的新鲜度，是衡量蛋品质的重要指标。本试验中，整个试验期内，日粮中添加中药益生菌复合制剂，试验组的蛋形指数均高于CK组，F1-2组蛋黄颜色高于CK组，哈夫单位均大于75，蛋品质优于其他各组。研究表明，益生菌中的乳酸菌能够产酸，抑制肠道内病原菌的占位和繁殖，调节肠道健康，增强饲料消化吸收，从而影响哈夫单位和蛋黄颜色[14]。黄芪多糖能够在一定程度上增强蛋白分泌，提高蛋白高度和哈夫单位[15]。研究表明，蛋鸡日粮中添加黄芪、当归和蒲公英等中草药可改善蛋黄颜色，但对蛋白高度和哈夫单位的影响不显著[16]。试验与上述研究结果存在一定差异，可能与添加的中草药种类和益生菌剂量不同有关。3.3中药益生菌复合制剂对蛋鸡血清生殖激素水平的影响E2是衡量禽类生殖性能、卵巢功能的重要指标[17]。卵黄前体物质的合成和卵泡发育均受到卵巢产生的E2水平的调控；E2还会影响钙的吸收，进而影响蛋壳的强度和厚度[18]。因此，E2水平的高低与蛋鸡产蛋率紧密相关。颗粒细胞位于卵泡壁内侧，其增殖、分化、凋亡决定了卵泡的生长、选择和闭锁，只有当卵泡经过选择进入到等级阶段，其中的颗粒细胞才具备合成、分泌P4的能力。因此P4是衡量卵泡发育、颗粒细胞功能的重要指标。FSH和LH是蛋鸡卵泡发育的主要调控激素，FSH可促进卵泡颗粒层增生分化，LH可加快血液循环，两者共同作用分泌雌激素，促进卵泡成熟和排卵[19]。禽类的生产性能与生殖激素的水平密切相关。很多中药，如黄芪、益母草等含有的黄酮类化合物，在内源激素水平较低时可与雌激素受体结合，表现出雌激素样作用，通过维持卵泡的生长及成熟，平衡黄体酮激素的水平，发挥修复受损卵巢的功能[20-21]。淫羊藿入肾经，可治疗排卵期出血，减少血蛋，淫羊藿黄酮可调节下丘脑的内分泌，促进孕激素分泌[22]。益母草能够促进子宫和卵巢发育及成熟卵泡的增加，疏通输卵管内淤血，兴奋下丘脑-垂体-性腺轴，促进E2等性腺激素的分泌，提高蛋鸡的产蛋率[23]。本研究发现，两种复方制剂均不同程度提高了生殖激素的水平。3.4中药益生菌复合制剂对蛋鸡血清免疫功能的影响IL-2、IL-6和TNF-α是先天免疫应答引起代谢级联改变的主要细胞信使[24]，在多种炎症反应中发挥重要作用，并和免疫球蛋白一同参与机体的免疫应答。IL-2主要由活化的Thl细胞产生，可诱导淋巴细胞增殖及分化，诱导并刺激细胞产生细胞因子，引起炎症反应。IL-6是一种功能广泛的多效性细胞因子，可以调节多种细胞的生长与分化，具有调节免疫应答、急性期反应及造血功能，是急性炎症反应的主要标志之一。姬晓琪[25]研究发现，蛋鸡输卵管炎模型组中IL-2、IL-6含量显著高于正常组，表明IL-2、IL-6参与了蛋鸡输卵管炎反应，治疗后蛋鸡输卵管组织中IL-2、IL-6的表达明显下调。本研究中，两种中药益生菌复合制剂均可降低蛋鸡血清IL-2、IL-6的含量，减轻蛋鸡体内炎症反应。IgG在血清中含量较高，是蛋鸡体内初级免疫应答中最持久、最重要的物质，对机体的主动免疫和被动免疫均有明显作用[26]。天然植物提取物、中草药多糖和益生菌均能够提高畜禽抗病能力，增强免疫功能[27]。乔宏兴[28]研究表明，利用植物乳杆菌发酵的黄芪能够作用于蛋鸡IL-2-IFN-NKC免疫调节网络，从而发挥免疫增强作用。陈天龙[29]研究发现，采用酵母菌及酵母菌+中药混合制剂均极显著提高了蛋鸡血清IgＡ、IgＭ和IgＧ的含量。本研究中，在日粮中添加2‰中药益生菌复合制剂一可以提高蛋鸡血清IgG含量。原因可能是复方中的益生菌具有免疫激活作用，而添加黄芪等在提高免疫力的同时，也能够起到抗菌消炎的作用，从而减轻蛋鸡体内炎症反应，提高了机体免疫力。4结论本研究结果表明，在蛋鸡日粮中添加2‰中药益生菌复合制剂一能够更好地提高产蛋后期蛋鸡产蛋率，改善蛋品质；能够促进黄体酮和促黄体素的分泌，促进卵泡的发育和排卵，改善蛋鸡的卵巢功能；减轻蛋鸡体内炎性反应，提高免疫力。