宠物的免疫系统可以保护其身体免受疾病侵袭[1]。目前市场上绝大部分营养补充剂会添加一些羊乳粉、乳清蛋白、免疫球蛋白和β-葡聚糖等具有免疫功效的成分，这些物质具有增强机体免疫功能的作用。MA等[2]研究发现，羊乳粉可以提高小鼠免疫的增强效应，可能是补充羊乳粉可以增加循环免疫细胞水平，改善免疫功能。LOW等[3]研究发现，乳清蛋白可以提高体内免疫细胞水平，改善小鼠的免疫功能。免疫球蛋白是构成机体免疫系统的重要组成部分，其主要功能是识别和结合病原体表面的抗原，从而中和并清除病原体，保护机体免受感染。口服免疫球蛋白具有促进动物机体生长、提高免疫力及改善肠道稳态等功能[4]。β-葡聚糖具有抗感染及增强免疫的功能，可以通过激活补体系统、促进免疫细胞增殖及分泌来增强免疫系统抵御外界侵袭的能力[5]。虽然复合营养补充剂已经在生产实践中得到了广泛应用，但仍需要进一步的研究确认其对犬猫的作用效果。因此，本试验旨在探究复合营养补充剂对犬猫免疫指标以及抗氧化指标的影响，为进一步开发复合营养补充剂产品提供参考。1材料与方法1.1主要试剂复合营养补充剂中含60%羊乳粉、15%浓缩乳清蛋白、10% IgG、1.5% IgY以及3% β葡聚糖。1.2试验设计试验选取2~3岁、体重（3.26±0.84）kg的成年健康临清狮猫20只，公、母各半。4~5岁、体重（9.23±4.94）kg成年健康中华田园犬20只，公、母各半。20只临清狮猫和20只中华田园犬，各随机分为2组，每组10个重复，每个重复1只。试验组将5 g复合营养补充剂与60 mL水混合进行补饲，对照组不进行补饲。试验期内犬猫自由采食，并给予饮水300 mL（猫）以及500 mL（犬）。正式试验期30 d。试验犬猫的基础饲粮参照美国饲料协会AAFCO宠物营养需要标准进行配置，采用膨化方法进行加工。基础全价猫饲粮和全价犬饲粮组成及营养水平见表1、表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.01.025.T001表1基础全价猫饲粮组成及营养水平 （干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米27.60代谢能/(MJ/kg)18.52鸡肉粉12.30粗蛋白/%33.86牛肉骨粉11.20粗脂肪/%16.25鱼粉10.40粗灰分/%7.12虾粉8.30赖氨酸/%2.53豌豆10.40牛磺酸/%0.25马铃薯粉3.50钙/%1.87鸡油5.50磷/%1.16鱼油4.80啤酒酵母粉3.50预混料1.00丝兰提取物1.00食盐0.50注：1.预混料为每千克饲粮提供：VA 16 000 IU、VD3 4 120 IU、VE 300 mg、VB1 200 mg、VB2 220 mg、VB12 50 mg、烟酸100 mg、Cu 21 mg、Mn 10 mg。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.01.025.T002表2基础全价犬饲粮组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00脱骨鸡肉粉24.80代谢能/(MJ/kg)16.25豌豆20.20粗蛋白/%31.11木薯粉17.50粗脂肪/%17.30鸡油7.40粗灰分/%6.25水解鸡肝4.30赖氨酸/%0.76鱼粉4.00蛋氨酸/%0.59红薯粉3.50钙/%1.23鸡肝粉3.00磷/%1.08鱼油4.00酵母水解物4.20苹果2.40胡萝卜1.00西兰花1.30预混料1.00海带0.90丝兰0.50注：1.预混料为每千克饲粮提供：VA 15 000 IU、VD3 11 000 IU、VE 380 IU、VB1 22.5 mg、VB2 52 mg、VB12 50 mg、烟酸100 mg、Cu 56 mg、Mn 40 mg。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。1.3饲养管理试验期内每只猫在宠物猫笼（1.6 m×0.7 m×0.7 m）内单笼饲养，每只犬在宠物犬笼（3 m×1 m×1 m）内单笼饲养。每天8：00开始饲喂犬猫并给予复合营养补充剂和饮水。试验前进行免疫，驱虫。每天更换猫砂，清理圈舍，打扫卫生，保持宠物圈舍内清洁。试验期内观察所有宠物采食情况及精神状态，是否存在厌恶、拉稀、呕吐等不良反应，若较长时间存在上述不良现象则终止试验。试验期内每2~3 d将犬猫放风30 min。1.4测定指标及方法1.4.1采食性能试验第1、30 d，试验犬猫空腹称重；试验期内记录每只犬猫的采食量、饮水量及饮奶量，计算平均日采食量、平均日饮水量、平均日饮奶量及平均水分总摄入量。平均水分总摄入量=平均日采食量×饲料水分百分比+平均饮水量+平均饮奶量(1)1.4.2血液指标试验第30 d晨饲前，对每只动物进行前肢静脉采血，其中一部分注入含肝素钠的抗凝管中，后续进行血常规测定；另一部分在普通离心管中静置15 min，4 000 r/min离心5 min，血清分装于离心管中，-20 ℃保存，后续进行血清生化指标、免疫指标以及抗氧化指标的测定。红细胞、白细胞、淋巴细胞、血红蛋白、血小板数目等血常规指标和肌酐、尿素氮、总蛋白、白蛋白、球蛋白、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、血糖等血液生化指标由动物医院进行测定。免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）及白细胞介素-6（IL-6）等指标使用试剂盒（北京华英生物技术研究所）检测。总抗氧化能力（T-AOC）、过氧化氢酶（CAT）、总超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）以及丙二醛（MDA）使用试剂盒（南京建成生物工程研究所）检测。1.4.3粪便评分试验期内，每天参照粪便评分标准对犬猫的粪便的外观和形态进行综合评分。粪便评分标准见表3。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.01.025.T003表3粪便评分标准评分外观形态5坚硬，干片状或小石头样成形4成型，干结，但软硬适中成形3柔软、湿润条状部分成形2柔软不成形1完全液状粪便（无实质固体结构）不成形1.5数据统计与分析试验数据采用SPSS 24.0软件进行统计分析，独立样本t检验对试验结果进行差异显著性分析。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1复合营养补充剂对犬猫采食性能的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，试验组犬猫末重以及平均日采食量差异均不显著（P0.05）。试验组犬平均日饮水量显著低于对照组（P0.05）；试验组猫平均日饮水量略低于对照组，但差异不显著（P0.05）。试验组犬猫平均水分总摄入量均显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.01.025.T004表4复合营养补充剂对犬猫采食性能的影响项目猫P值犬P值试验组对照组试验组对照组初重/(kg/只)3.25±0.933.28±0.790.9379.03±5.559.42±4.550.863末重/(kg/只)3.29±0.983.36±0.740.8549.11±4.749.39±4.490.894平均日采食量/[g/(只·d)]64.24±10.7270.49±16.520.329695.87±259.33695.67±258.080.999平均日饮水量/[mL/(只·d)]166.13±48.46188.69±33.860.243306.90±12.45333.80±18.360.001平均日饮奶量/[mL/(只·d)]41.34±14.33——60.00±0.00——平均水分总摄入量/[mL/(只·d)]211.29±13.26192.99±19.550.025412.20±25.83379.09±21.580.006注：“—”表示无相关数据。2.2复合营养补充剂对犬猫血常规及血清生化指标的影响（见表5、表6）由表5、表6可知，试验组猫血液平均血红蛋白含量、平均红细胞体积以及球蛋白含量显著高于对照组（P0.05）。试验组犬血液粒细胞数目显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.01.025.T005表5复合营养补充剂对犬猫血常规的影响项目猫P值犬P值试验组对照组试验组对照组白细胞数目/(×109/L)8.12±2.507.23±4.570.6117.21±2.678.00±2.220.481淋巴细胞数目/(×109/L)2.32±3.112.52±4.800.9194.55±2.915.93±1.620.212单核细胞数目/(×109/L)0.23±0.120.17±0.090.2970.54±0.260.63±0.190.391粒细胞数目/(×109/L)5.57±2.854.54±2.270.3922.12±0.581.44±0.500.012血红蛋白/(g/L)184.07±52.29184.94±62.830.974180.99±25.78165.71±40.510.328平均血红蛋白含量/pg23.87±1.2822.14±0.620.00427.55±1.7227.93±0.800.537平均血红蛋白浓度/(g/L)447.78±21.26459.30±14.280.179426.00±14.50433.80±21.390.353红细胞数目/(×1012/L)7.83±2.258.35±2.860.6676.55±0.825.93±1.430.244平均红细胞体积/fL53.60±4.9648.39±2.600.01064.81±3.2264.60±2.790.878血细胞比容/%41.26±10.8740.10±13.450.84042.34±5.0137.99±8.370.175血小板/(×109/L)242.11±55.82256.80±43.820.530253.80±62.24296.60±74.530.180血小板压积/%0.26±0.080.31±0.100.2000.26±0.070.32±0.100.090平均血小板体积/fL10.48±1.2011.90±1.950.0729.95±0.6310.76±1.250.090大血小板比率/%25.06±11.0234.6±16.680.16522.18±6.3029.04±11.20.10910.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.01.025.T006表6复合营养补充剂对犬猫血清生化指标的影响项目猫P值犬P值试验组对照组试验组对照组白蛋白/(g/L)27.29±2.8728.79±3.470.32232.33±2.5831.77±2.220.609总蛋白/(g/L)87.96±5.5684.19±9.310.30667.99±5.6069.95±4.440.397球蛋白/(g/L)60.32±6.6755.40±11.420.04435.64±6.3538.18±5.440.350谷丙转氨酶/(U/L)45.00±14.3543.00±14.790.76953.20±33.8351.60±13.270.891碱性磷酸酶/(U/L)45.11±10.8938.30±9.480.16380.00±21.7978.33±27.780.885肌酐/(μmol/L)82.51±15.3899.52±33.980.18664.08±13.4970.55±11.540.264尿素氮/(mmol/L)7.15±0.968.65±3.510.2335.29±1.255.30±1.200.980血糖/(mmol/L)2.04±0.802.32±0.610.4062.55±0.692.42±0.850.7032.3复合营养补充剂对犬猫血清抗氧化及免疫指标的影响（见表7、表8）由表7、表8可知，试验组犬猫血清SOD活性和IL-6水平均显著高于对照组（P0.05）。试验组猫血清IgD水平显著高于对照组（P0.05）。试验组犬血清IgA和IgG水平显著高于对照组（P0.05），MDA含量显著低于对照组（P0.05）。两组犬猫其他血清抗氧化和免疫相关指标差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.01.025.T007表7复合营养补充剂对犬猫血清抗氧化指标的影响项目猫P值犬P值试验组对照组试验组对照组T-AOC/(U/mL)5.38±0.184.97±0.580.1188.60±0.499.30±0.800.070CAT/(U/mL)11.40±0.7011.86±0.610.2123.42±0.632.84±0.450.071SOD/(U/mL)61.46±6.2046.26±4.830.00167.96±3.1861.00±6.680.028GSH-Px/(U/mL)1 677.52±107.551 714.29±84.300.4901 487.17±121.561 470.67±89.810.778MDA/(μmol/L)3.98±0.454.75±1.130.1322.73±0.693.65±0.810.04110.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.01.025.T008表8复合营养补充剂对犬猫血清免疫指标的影响项目猫P值犬P值试验组对照组试验组对照组IgA/(g/L)1.29±0.281.25±0.360.8091.49±0.261.24±0.130.044IgG/(g/L)7.56±1.036.96±1.400.3798.06±1.077.01±0.290.042IgM/(g/L)0.76±0.100.66±0.180.2390.73±0.190.84±0.160.251IgD/(mg/L)22.03±2.1717.35±1.420.00125.43±3.0727.27±1.620.187IL-6/(ng/L)120.92±13.6096.51±9.450.00297.08±7.3187.13±4.030.0082.4复合营养补充剂对犬猫粪便评分的影响（见表9）由表9可知，与对照组相比，试验组猫粪便评分显著高于对照组（P0.05），试验组犬粪便评分未出现明显变化（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.01.025.T009表9复合营养补充剂对犬猫粪便评分的影响项目猫P值犬P值试验组对照组试验组对照组粪便评分3.30±0.123.16±0.120.0243.47±0.193.48±0.120.8803讨论3.1复合营养补充剂对犬猫采食性能的影响随着人民的生活水平提高，养宠人数逐渐增多，宠物的饲养方式也在逐渐改变。犬猫肾脏疾病一直是兽医界较为关注的一个问题[6]。犬猫对水摄入较少、饮食中含有大量的盐分等均会使犬猫肾脏负担加重，从而引起肾脏的各种问题[7]。因此，了解和关注宠物肾脏问题、采取相应的预防措施成为目前宠物饲养的重点。本研究中，虽然试验组犬平均日饮水量显著低于对照组，但犬猫平均水分总摄入量得到明显提高，可能是以水作为载体的复合营养补充剂往往具有更好的适口性，可以提高犬猫的总饮水量，有助于缓解犬猫肾脏负担。3.2复合营养补充剂对犬猫血常规和血清生化指标的影响平均血红蛋白含量、平均红细胞体积的变化可反映机体是否存在贫血或缺氧等问题[8-9]。平均血红蛋白含量以及平均红细胞体积的变化可提示机体红细胞和血红蛋白的合成受到影响。本研究中，饲喂复合营养补充剂的猫平均血红蛋白含量以及平均红细胞体积均明显提高，可能是由于复合营养补充剂中含有的蛋白质、脂肪、维生素以及微量元素可以为机体补充营养，提高机体的营养水平。粒细胞的变化可反映机体的炎症状态以及免疫功能[10]。本研究中，与对照组相比，饲喂复合营养补充剂的犬血液中的粒细胞数目显著提高。复合营养补充剂含有的乳清蛋白、免疫球蛋白及β-葡聚糖等可以刺激机体的免疫系统，激活粒细胞、淋巴细胞等免疫细胞及免疫因子的释放。有研究表明，由中性粒细胞以及嗜酸性粒细胞产生的FcαRI受体可与IgA交联从而激活免疫系统，调节免疫功能[11-12]。3.3复合营养补充剂对犬猫抗氧化功能的影响抗氧化系统是机体的重要的防御系统之一，免疫系统的活动也会导致氧化应激的产生。免疫细胞在清除病原体时会释放氧化物质，外界的抗氧化剂或者体内的抗氧化因子可以通过清除自由基和其他氧化物质，减轻氧化应激对免疫系统的影响，从而提高免疫系统的功能[6,13]。本研究结果显示，添加复合营养补充剂的猫血清SOD活性显著提高；添加复合营养补充剂可以提高试验犬血清SOD活性，降低MDA含量。羊乳中含有的羊乳蛋白、维生素C以及维生素E等均具有一定的抗氧化能力[14]。SIMOS等[15]研究发现，与驴乳和牛乳相比，羊乳的体外抗氧化能力最高，并且饮用羊乳的人群血液抗氧化能力显著提高。KAYLAN等[16]通过对大鼠饲喂羊乳以及酪蛋白发现，羊乳脂和酪蛋白均能够降低血浆和肝脏的脂质过氧化作用，具有良好的抗氧化性能。乳清蛋白是分离自牛乳中的一种营养价值高且易消化的蛋白质，其可以刺激机体谷胱甘肽的产生。谷胱甘肽对细胞保护和机体的修复活动具有一定的作用，能够起到抗氧化的作用，提高机体的免疫力[17]。3.4复合营养补充剂对犬猫免疫功能的影响免疫系统是机体内的重要防御系统，它可以抵抗外来的病原体（如细菌、病毒、真菌等）和异常细胞，保护机体免受感染和疾病的侵害，具有识别和诱导免疫应答、免疫细胞的活化和增殖、炎症反应的调节等多种功能[18-19]。羊乳粉是通过喷雾干燥或滚筒干燥将流体羊乳转化为粉末状固体，与牛乳相比，羊乳粉具有乳糖低，含有较高的短链脂肪酸、易吸收等特点，能够更好地被机体吸收[20]。羊乳粉中含有大量的酪蛋白、乳清蛋白以及乳铁蛋白等，可在为机体提供营养物质的基础上，提高机体的免疫能力[21-22]。AMATI等[23]研究发现，免疫功能低下的中老年人每日饮用羊奶后可减少机体炎症反应，降低体内白细胞介素-1β（IL-1β）以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平，提高机体免疫能力。Balan等[24]研究发现，对小鼠和猫饲喂羊血清免疫球蛋白，小鼠的免疫功能得到明显提高。此外，β-葡聚糖在免疫提升方面也发挥了一定作用。曲昆鹏等[25]研究表明，在鸡日粮中添加β-葡聚糖可显著提高其脾脏指数。IgG是最常见的免疫球蛋白，占机体免疫球蛋白总量的75％~80％，是动物机体二次体液免疫的关键指标[26]。IgA主要存在于黏膜表面，如呼吸道、消化道、泌尿道等，能够阻止病原体侵入机体[27]。IgD在血清中含量很低，约占总免疫球蛋白的1%，且含量个体差异较大，可作为膜受体存在于免疫细胞表面[28-29]。本研究中，添加复合营养补充剂会提高试验猫血清IgD水平，添加复合营养补充剂可提高试验犬血清IgA和IgG水平，同时添加复合营养补充剂犬猫血清中IL-6水平均显著提高。这可能是由于复合营养补充剂会刺激机体免疫细胞产生相关细胞因子如免疫球蛋白、IL-6等或激活相关的免疫信号通路，刺激相关免疫细胞和细胞因子表达上调。3.5复合营养补充剂对犬猫粪便的影响粪便评分是根据粪便的外观和形态判断动物是否健康的重要指标之一，粪便评分过高或过低会提示机体处于一个不健康的状态。本研究中，添加复合营养补充剂提高了猫的粪便评分。免疫球蛋白一方面通过增加小鼠肠道微生物的多样性，降低微生物病原体入侵调节肠道，另一方面可以提高胃肠黏蛋白的分泌，进而提高胃肠道应对化学及机械刺激的抵抗力[24,30]。李明亮等[31]研究表明，乳清蛋白可改善小鼠的由抗生素导致的胃肠道紊乱问题。此外羊乳粉中含有的酪蛋白对动物肠道同样也起到了保护作用，能够降低肠炎的风险[32-33]。潘树德等[34]在断奶仔猪饲粮中添加β-葡聚糖，结果发现，仔猪肠道中微生物环境得到改善。上述报道与本试验结果相似，可能是由于复合营养补充剂中多种成分在调节胃肠道稳态方面发挥了一定作用。4结论本研究结果表明，复合营养补充剂能够提高犬血液中粒细胞数目、血清SOD活性及IgA、IgG、IL-6水平，降低MDA含量，可以提高猫血清球蛋白含量、SOD活性及IgD、IL-6水平。复合营养补充剂能够提高犬猫的水分摄入量，减少猫软便的发生。虽然犬和猫在某些方面存在差异，但综合分析，复合营养补充剂均能够提高犬猫的免疫能力和抗氧化能力。