抗生素类药物在畜产品中的残留容易给人类健康造成威胁。因此，研究“减抗”“替抗”的方法对养殖业的可持续发展具有重要意义。中草药含有生物碱、多糖和多肽类等多种活性成分，具有促进动物生长、抗病和改善机体性能等方面的作用。杨楷等[1]研究表明，使用金银花、白头翁、黄连、黄芩和黄柏混合物饲喂60日龄的麻鸡出栏率，达到94.2%，显著高于仅饲喂基础日粮的对照组。张丽云[2]研究表明，银翘解毒合剂能够显著提高10月龄鸡的抗病能力。桑叶的干物质中粗蛋白含量可达20％，且桑叶中含有多种活性物质，具有降血糖、降血压、抗菌和抗病毒等多种功效[3-4]。诸多研究已证实了桑叶的饲用价值，在饲粮中添加桑叶可以促进动物生长，改善肉质，提高抗病能力[5-6]。木棉花中含有黄酮类、苯丙素类、酚酸类和脂肪酸等活性物质，具有凉血、解毒及清热燥湿等作用，医学上主要用于治疗腹泻和痢疾等病症，并被广泛应用于制作中药方剂、中成药、凉茶及药膳[7]。目前，桑叶协同木棉花的药用价值在禽类饲料中的应用研究鲜有报道。因此，本研究在基础饲粮中添加桑叶等复合粉剂，探讨其对灵山麻鸡生长性能、消化酶活性、肠道菌群及免疫功能的影响，以期为中草药类添加剂在禽类生产中的推广和应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料桑叶等复合粉剂的制备：桑叶、木棉花及山药等材料购自南宁市伟康中草药市场，粉碎后按1.0∶0.5∶1.0进行配比混匀，分装并密封保存。试验鸡为56日龄的健康灵山麻鸡200只，由广西富凤农牧集团有限公司提供。1.2试验设计及饲养管理将200只麻鸡随机分为4组，每组5个重复，每个重复10只鸡。预试期7 d，正式试验期42 d。饲养试验在广西农腾林合作社养殖场进行，栏舍通风良好，试验饲养前对养殖栏舍采用消毒剂进行全面消毒。麻鸡采取地面平养，自由采食、饮水，免疫程序及饲养管理按常规进行。试验设计见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.02.006.T001表1试验设计组别处理对照组基础饲粮试验1组基础饲粮+2.0%桑叶等复合粉剂试验2组基础饲粮+1.0%桑叶等复合粉剂试验3组基础饲粮+0.5%桑叶等复合粉剂1.3试验饲粮试验所用的基础饲粮由广西南宁市漓源饲料有限公司提供。基础饲粮组成及营养水平见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.02.006.T002表2基础饲粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.0玉米66.0代谢能/(MJ/kg)11.55麦麸8.5粗蛋白/%16.85豆粕18.0钙/%0.65米糠5.5有效磷/%0.31预混料2.0注：1.预混料为每千克饲粮提供：VA 25 000 IU、VD 1 500 IU、VE 15 IU、VK 1.1 mg、VB1 6 mg、VB2 5 mg、VB6 6 mg、VB12 110 mg、泛酸25 mg、烟酸50 mg、叶酸1 mg、胆碱900 mg、钙150 mg、铁75 mg、铜7.5 mg、碘0.45 mg、锰55 mg、硒0.20 mg。2.营养水平中粗蛋白为实测值，其余均为计算值。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验开始和结束时，对各组试验麻鸡进行空腹称重并记录，记录每日投喂量及余料量，计算平均日增重、平均日采食量及料重比。平均日增重=(试验末重-试验初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2腹泻率试验期间，每天8：30和16：00观察并记录各组鸡群粪便状态，以白色或黄绿色稀粪判定为腹泻，进行数据收集，腹泻率计算方法参考苗旭等[8]的方法。1.4.3肠道菌群数量试验结束，参考刘风美等[9]的方法，无菌取直肠内容物，采用平板计数法测定微生物（大肠杆菌和沙门氏菌）的数量。1.4.4十二指肠及盲肠内容物消化酶活性在试验结束时，每个重复屠宰1只鸡，屠宰后，分别结扎十二指肠及盲肠两端，取出，并将其内容物分别挤入冻存管中，放入液氮罐速冻。十二指肠内容物测定胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性，盲肠内容物测定纤维素酶活性。测定时，取10 mg肠内容物样本，加100 μL生理盐水，匀浆，3 500 r/min离心5 min，取上清液，采用试剂盒测定胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶及纤维素酶活性。试剂盒由泉州市睿信生物科技有限公司提供。1.4.5血清生化指标试验结束当天18：00停止喂料，第2 d 7：00从每个重复中分别随机选取2只鸡，用真空采血管采血10 mL。采取的血样送广西南宁市江滨医院测定总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、白球比（A/G）和胆固醇（TC）等血清生化指标。1.4.6血清免疫指标试验结束后，每个重复挑选1只健康鸡，翅静脉采血约5 mL，置于抗凝血管中，3 500 r/min离心10 min，取上清液，于-20 ℃保存。采用鸡免疫球蛋白检测试剂盒（武汉纯度生物科技有限公司）测定免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）含量。白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量由广西南宁市江滨医院测定。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel 2003软件进行处理，DPS进行方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1桑叶等复合粉剂对灵山麻鸡生长性能的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，所有试验组麻鸡的平均日增重均有不同程度的提高，其中试验2组平均日增重增加了12.65%（P0.05），料重比显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.02.006.T003表3桑叶等复合粉剂对灵山麻鸡生长性能的影响组别初重/(g/只)末重/(g/只)平均日增重/[g/(只·d)]平均日采食量/[g/(只·d)]料重比对照组341.20±11.26792.70±1.24b10.75±1.24b39.44±0.97ab3.67±0.17a试验1组341.50±10.22826.18±1.60ab11.54±1.51ab39.15±0.87b3.39±0.65ab试验2组341.33±15.55849.95±1.34a12.11±1.35a39.55±1.23ab3.27±0.45b试验3组342.00±16.11803.16±1.25ab10.98±1.25ab39.75±0.81a3.62±0.54ab注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2桑叶等复合粉剂对灵山麻鸡肠道菌群及腹泻率的影响（见表4）由表4可知，所有试验组麻鸡大肠杆菌、沙门氏菌数量及腹泻率均显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.02.006.T004表4桑叶等复合粉剂对灵山麻鸡肠道菌群及腹泻率的影响组别大肠杆菌/（lgCFU/g）沙门氏菌/（lgCFU/g）腹泻率/%对照组7.88±0.21a4.69±0.21a12.00a试验1组6.57±0.16b3.48±0.16b4.00b试验2组6.28±0.12b3.40±0.15b2.00b试验3组6.45±0.14b3.49±0.08b4.00b2.3桑叶等复合粉剂对灵山麻鸡十二指肠及盲肠内容物消化酶活性的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，饲粮中添加桑叶等复合粉剂可显著提高鸡十二指肠胰蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶及盲肠纤维素酶活性（P0.05），其中胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性随着桑叶等复合粉剂添加量的增加逐步增强（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.02.006.T005表5桑叶等复合粉剂对灵山麻鸡十二指肠及盲肠内容物消化酶活性的影响组别胰蛋白酶淀粉酶脂肪酶纤维素酶对照组593.00±11.67b6.11±0.12b0.68±0.02b0.97±0.04b试验1组625.00±12.01a7.11±0.11a0.73±0.01a1.15±0.02a试验2组615.00±11.05a6.95±0.14a0.70±0.05a1.25±0.02a试验3组611.00±5.61a6.55±0.13a0.69±0.11a1.11±0.01aU/mg2.4桑叶等复合粉剂对灵山麻鸡血清免疫指标的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，各试验组灵山麻鸡血清IgG含量分别提高了40.69%、49.88%和25.72%（P0.05）；试验2组灵山麻鸡血清IgG含量较试验1组、试验3组分别提高了6.53%和19.22%（P0.05）。各桑叶等复合粉剂组麻鸡血清IL-2、IL-6、IL-10和TNF-α含量均高于对照组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.02.006.T006表6桑叶等复合粉剂对灵山麻鸡血清免疫指标的影响组别IgA/(g/L)IgG/(g/L)IgM/(g/L)IL-2/(ng/L)IL-6/(ng/L)IL-10/(ng/L)TNF-α/(ng/L)对照组0.436±0.0212.111±0.212b0.494±0.01127.64±2.3610.86±1.5210.24±1.4555.41±7.50试验1组0.446±0.0152.970±0.205a0.512±0.01928.91±2.1611.75±1.2211.86±1.7555.98±5.15试验2组0.449±0.0273.164±0.184a0.516±0.01728.38±1.8211.12±0.9711.12±1.8356.15±4.07试验3组0.442±0.0152.654±0.236a0.504±0.02227.99±2.8410.96±0.7710.77±2.2055.96±6.382.5桑叶等复合粉剂对灵山麻鸡血清生化指标的影响（见表7）由表7可知，与对照组相比，各试验组鸡血清TP、ALB和GLB含量显著升高（P0.05），A/G显著降低（P0.05）；各组麻鸡血清TC含量差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.02.006.T007表7桑叶等复合粉剂对灵山麻鸡血清生化指标的影响组别TP/(g/L)ALB/(g/L)GLB/(g/L)A/GTC/(mmol/L)对照组29.49±1.07b12.34±1.51b17.15±1.48b0.72±0.19a3.52±0.52试验1组33.46±1.21a13.51±1.32a19.95±1.45a0.69±0.09b3.21±0.46试验2组35.89±6.52a14.81±1.45a21.08±6.59a0.68±0.11b3.11±0.61试验3组34.75±1.51a14.29±1.08a20.46±2.31a0.70±0.06b3.31±0.613讨论3.1桑叶等复合粉剂对灵山麻鸡生长性能的影响本试验发现，在基础饲粮中添加2.0%、1.0%和0.5%以桑叶、木棉花、山药等原料制备的桑叶等复合粉剂可以促进灵山麻鸡的生长，降低腹泻率，当添加量为1.0%时效果较好。史开志等[10]研究发现，复合中草药制剂能够显著提高肉仔鸡的生长性能。黄燕等[11]研究发现，在乌蒙乌鸡的日粮中添加0.1%复方中草药能够促进其生长。杨楷等[1]也得到了类似的研究结果。桑叶等复合粉剂改善灵山麻鸡的生长性能、降低腹泻率原因可以用中兽医药方药性及配伍的理论解释。中兽医理论认为，脾胃功能正常能够确保食欲和促进生长发育，长期脾胃不和会降低动物食欲，导致机体抵抗力下降，生长缓慢。郝静怡等[4]研究发现，桑叶等复合粉剂中的桑叶含有γ－氨基丁酸、黄酮及多糖类等多种生物活性物质，具有调节胃肠功能及抗炎的作用；山药具有促进胃液分泌及消食健脾等功效。唐爱存等[7]研究发现，木棉花含有黄酮类和苯丙素类等多种活性物质，对机体的正常运转起到直接或间接功效；对动物肠炎和腹泻等症状具有较好的阻抗作用。3.2桑叶等复合粉剂对灵山麻鸡肠道菌群及腹泻率的影响肠道中富含多种微生物菌群，包括有益菌、有害菌和条件致病菌。当各种微生物菌群处于动态平衡时，动物抵抗力强，机体处于健康状态。本试验中，饲喂桑叶等复合粉剂的试验麻鸡的大肠杆菌和沙门氏菌数量均显著低于对照组，与许建华等[12]、邝哲师等[13]、黄思雨[14]、赵雪莲[15]和魏瑞敬[16]研究结果相似，表明桑叶等复合粉剂具有维护肠道菌群的平衡、抗炎作用。根据中兽医的辨证论理论，腹泻是由于肺胃湿气过重、血瘀气滞引起机体抵抗力下降，病原趁机入侵，大量繁殖后产生毒素而引起的。本试验中，基础饲粮中添加桑叶等复合粉剂，麻鸡腹泻率降低。原因一方面是桑叶和木棉花均含有活性物质，对肠道有害微生物具有一定的抑制作用，会破坏细菌细胞膜脂质层，引起细胞外形的改变，还能够抑制有害微生物入侵及其分泌毒素的活性；另一方面是木棉花中的鞣酸具有涩肠收敛作用，能够保护麻鸡肠道壁及肠道中的有益菌。此外，桑叶粉中含有的槲皮素、芸香甙具有抑制浮肿作用及降低肠管平滑肌的张力，因而起到消炎止泻作用。3.3桑叶等复合粉剂对灵山麻鸡十二指肠及盲肠内容物消化酶活性的影响本试验结果发现，桑叶等复合粉剂能够提高灵山麻鸡十二指肠内消化酶活性。阮栋等[17]在蛋鸭饲粮中添加发酵混合饲料，发现添加4%发酵混合饲料能够提高小肠脂肪酶和蛋白酶活性。林丽花等[18]给黄羽肉鸡饲喂发酵豆粕，发现十二指肠中的消化酶活性显著提高。上述结论与本试验部分结果基本一致。不同的饲料成分会改变胃酶、胰液和胆汁的分泌，小肠内消化液的理化性质和消化酶的活性也随之改变。本研究表明，与对照组相比，试验组灵山麻鸡盲肠纤维素酶活性显著提高。饲料中粗纤维主要靠大肠内纤维素分解菌的作用进行消化。桑叶等复合粉剂中粗纤维会刺激盲肠内纤维素分解菌生长，从而分泌更多纤维素酶。由此可见，本土选育的灵山麻鸡具有耐粗饲的特性，对粗纤维具有一定的消化能力。3.4桑叶等复合粉剂对灵山麻鸡血清免疫指标的影响本研究结果表明，在灵山麻鸡的饲粮中添加桑叶等复合粉剂可提高血清免疫功能；与对照组相比，各试验组麻鸡血清IgG含量均显著提高。林盛裕等[19]研究认为，日粮中添加300 mg/kg中草药提取物能够显著提高广西麻鸡血清IgA、IgG和IgM的含量。许祯莹等[20]研究表明，桑枝叶干粉可一定程度提高蛋鸡血清免疫球蛋白含量。雷春龙等[21]研究表明，蛋鸡饲粮中添加桑枝叶提取物，各试验组血清IgG含量均显著提高。黄静等[5]研究表明，在胡须鸡饲粮中添加不同比例的桑叶粉和发酵桑叶粉，各试验组血清TP和GLB含量均高于对照组。苏海涯等[22]研究表明，桑叶所含的黄酮类物质及γ-氨基丁酸等活性成分可提高养殖动物抗病能力，对禽流感具有一定的预防作用。桑叶富含蛋白质，其中的蛋氨酸、赖氨酸以及谷氨酸能够维护肠道免疫功能的正常。由此可见，在灵山麻鸡的饲粮中添加桑叶等复合粉剂具有营养和激活机体免疫功能的双重作用，但其激活的机制及发挥作用的活性成分需要进一步研究。本研究中，各桑叶等复合粉剂组灵山麻鸡血清IL-2、IL-6、IL-10和TNF-α含量均高于对照组。细胞因子是由机体内具有多种免疫功能的细胞分化、产生的蛋白质，具有调节免疫功能和损伤修复等作用。细胞因子含量反映了动物机体的免疫状态。本试验条件下，各试验组鸡血清细胞因子含量呈上升的趋势，可能是桑叶等复合粉剂中的多糖类物质等有效成分有利于合成抗体、促进了细胞因子的分泌。贠娜娜等[23]报道，多糖能够诱导T细胞增生，进而促进细胞因子增长。申恒然[24]报道，日粮中添加不同比例的中草药超微粉可使肉羊血清中细胞因子和免疫球蛋白的含量均呈不同幅度的提升。张洁等[25]对青蒿鳖甲汤进行加减治疗研究，发现青蒿鳖甲汤能够缩短患者体温恢复正常的时间，能够改善NF-κB p65蛋白、IL-6、IL-10和TNF-α的水平。李丽艳等[26]以没药、乳香等中药自拟脉管炎Ⅰ号组方进行研究，发现自拟脉管炎Ⅰ号组方能够有效改善下肢缺血症状，调节血清TNF-α和IL-6水平。李明利等[27]对玛咖不同提取物进行研究，发现玛咖提取物能够提高免疫因子IL-2和TNF-α的分泌水平。高然等[28]研究发现，以红花、桃仁等中药制成的桃红四物汤可有效调节PHN大鼠白细胞介素-1β（IL-1β）和TNF-α含量，具有一定的抗炎作用。刘孟洋等[29]研究表明，中草药处理组肉仔鸡血清IL-2和IL-10含量均显著提高，与本试验结果相似。3.5桑叶等复合粉剂对灵山麻鸡血清生化指标的影响本试验表明，饲粮中添加1.0%桑叶等复合粉麻鸡血清TP、ALB和GLB含量较高，A/G与TC含量相对其他组较低，说明桑叶等复合粉剂添加量为1.0%时饲喂效果较好，能够有效调控机体蛋白质代谢和脂肪代谢。鲁利萍等[30]报道，日粮中添加女贞子、当归、益母草和黄芪等中草药能够对犊牛的生长性能和血清生化指标产生积极影响，进而提高免疫力及抗病力。唐爱存等[7]报道，木棉花具有降低总胆固醇的作用。林盛裕等[19]报道，中草药饲料添加剂能够降低TC含量，改善广西麻鸡的血清生化指标，与本试验结果相似。4结论本研究结果表明，桑叶等复合粉剂可以提高灵山麻鸡的生长性能和免疫力，改善血清生化指标，其适宜添加量为10%。