在养殖业中，抗生素的不规范使用会使病原体产生耐药性[1-2]。因此开发健康、绿色的饲料添加剂势在必行。中草药具有来源广泛、低残留、不易产生抗药性的优点，能够调节动物的机体免疫系统功能，增强机体免疫力[3-4]。目前，关于中草药添加剂在动物生产中的应用研究较多。依据中兽医基本理论，结合现代肉牛养殖业的生产状况，本课题组选用土藿香、龙胆草、黄芩、山楂、陈皮、大青叶等经加工组成复方中草药——藿香龙黄散，按一定比例添加到育肥牛精料中，研究藿香龙黄散对育肥牛生产性能的影响[5]。本试验在前期研究的基础上，研究藿香龙黄散对育肥牛血清生化指标、抗氧化指标和免疫指标的影响，为其在育肥牛生产中的应用和推广提供参考。1材料与方法1.1试验材料藿香龙黄散根据育肥牛的养殖特点研制，其成分主要由土藿香、山楂、龙胆草、陈皮、黄芩、大青叶、女贞子、小苏打和苹果渣组成。小苏打购自科威动物药业有限公司，苹果渣由爱诺饮料有限公司提供，中药材均购自安徽亳州中药材大市场。藿香龙黄散的配制：苹果渣和中药材经晾晒和去杂后，按一定的配比混合并加工成40目的粉剂，混入适量的小苏打粉组成复方中草药添加剂，其中土藿香、山楂、龙胆草、陈皮、黄芩、大青叶、女贞子、苹果渣、小苏打的比例为16∶16∶16∶10∶10∶10∶10∶10∶2。1.2试验设计在商睢肉牛养殖基地选择健康无病、体况良好、体重（385.0±16.3）kg、月龄相近的西门塔尔杂交牛80头，随机分为4组，每组4个重复，每个重复5头牛。对照组饲喂全混合日粮，试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组在全混合日粮中分别添加1%、2%、4%藿香龙黄散替代相应小麦秸秆。预试期10 d，正式试验期60 d。试验饲粮参考我国《肉牛饲养标准》（NY/T 815—2004）和NRC（2000）肉牛营养需要配制。试验采用精粗比为60∶40的全混合日粮（TMR）进行饲喂。粗饲料由黄贮玉米秸秆、青贮玉米秸秆和小麦秸秆按2∶2∶1的比例组成。精料组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.02.003.T001表1精料组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.0玉米62.0综合净能/(MJ/kg)7.12麸皮10.0粗蛋白/%16.08棉籽饼10.0粗脂肪/%2.19豆粕10.0粗纤维/%3.58油脂1.0中性洗涤纤维/%26.01石粉1.5酸性洗涤纤维/%11.72磷酸氢钙1.5钙/%0.97食盐0.5磷/%0.48预混料2.0小苏打1.5注：1.每千克预混料为精料提供：VA 26 300 IU、VD3 28 000 IU、VE 870 IU、Fe 8.5 g、Cu 1.62 g、Zn 4.61 g、Mn 4.15 g、I 53.6 mg、Co 18.1 mg、Se 13.1 mg。2.营养水平中综合净能为计算值，其余均为实测值。1.3饲养管理在预试期间，试验组和对照组均饲喂基础饲粮，进行常规的驱虫、免疫和消毒，为了准确记录，给每头牛只打上耳号。各组牛只采取拴系饲喂模式，为了防止相互抢食，牛与牛之间空1个槽位。试验期内，每天7：30和17：30各饲喂1次，保证料槽内有适量的剩料。试验牛自由饮水和采食。1.4测定指标及方法1.4.1血清生化指标在试验结束当天，每个重复选择1头牛，空腹颈静脉采血15 mL，37 ℃水浴30 min，3 500 r/min离心10 min，取上清液于离心管中，采用迈瑞Mindray BS-280全自动血液生化分析仪和Elabscience公司生产的试剂盒测定血清中的总蛋白、球蛋白、白蛋白、血糖、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、甘油三酯、总胆固醇、尿素氮、碱性磷酸酶、谷草转氨酶和谷丙转氨酶等生化指标，操作步骤见试剂盒和全自动血液生化分析仪说明书。1.4.2血清抗氧化指标按照试剂盒说明书，采用羟胺法测定血清总超氧化物歧化酶活性，采用硫代巴比妥酸法测定血清丙二醛含量，采用可见光法测定血清过氧化氢酶活性，采用Fe3+还原法测定血清总抗氧化能力。试剂盒的型号分别为D004-I、D002-I、D003-I和D005-Ⅱ，均由商丘市动物疾病预防与控制中心提供。测定仪器为WFZ UV-2000紫外可见分光光度计，购自中国上海尤尼柯仪器有限公司。1.4.3血清免疫指标采用免疫比浊法测定血清中免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M、补体C3、补体C4、白细胞介素-6和白细胞介素-10含量。测定仪器为WFZ UV-2000紫外可见分光光度计，购自中国上海尤尼柯仪器有限公司。试剂盒规格为LY-617，由商丘市动物疾病预防与控制中心提供。1.5数据统计与分析采用SPSS 19.0软件对试验数据进行统计分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1藿香龙黄散对育肥牛血清生化指标的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，各试验组育肥牛血清中总蛋白含量分别提高了1.62%、10.87%和1.60%，球蛋白含量分别提高了2.56%、17.83%和2.43%，血清中尿素氮含量分别降低了3.84%、20.25%和4.11%；各试验组育肥牛血清中甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白和血糖的含量均升高，其中试验Ⅱ组显著升高（P0.05），血清中碱性磷酸酶活性分别提高了7.00%、24.82%和12.30%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.02.003.T002表2藿香龙黄散对育肥牛血清生化指标的影响项目对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组试验Ⅲ组总蛋白/(g/L)77.63±1.56b78.89±1.63ab86.07±1.13a78.87±1.21ab白蛋白/(g/L)31.14±0.3531.21±0.4831.29±0.3731.25±0.34球蛋白/(g/L)46.49±1.12b47.68±2.21b54.78±1.86a47.62±2.31b尿素氮/(mmol/L)25.28±0.58a24.31±0.56a20.16±0.57b24.24±0.52a甘油三酯/(mmol/L)0.31±0.07b0.36±0.08ab0.48±0.12a0.43±0.09ab总胆固醇/(mmol/L)1.94±0.35b2.54±0.12ab2.86±0.43a2.60±0.41ab高密度脂蛋白/(mmol/L)1.55±0.16b1.68±0.10ab1.72±0.38a1.66±0.09ab低密度脂蛋白/(mmol/L)1.66±0.271.48±0.181.69±0.151.46±0.13血糖/(mmol/L)4.05±0.25b4.62±0.28ab4.87±0.43a4.60±0.26ab碱性磷酸酶/(U/L)103.28±11.43b110.51±13.34ab128.92±14.35a115.98±13.12ab谷丙转氨酶/(U/L)32.19±0.1631.96±0.1531.55±0.1332.03±0.12谷草转氨酶/(U/L)67.33±0.8366.92±0.7567.41±0.6867.89±0.83乳酸脱氢酶/(U/L)1 224.33±41.231 224.92±40.011 223.97±39.481 224.26±39.83注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。2.2藿香龙黄散对育肥牛血清抗氧化指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，各试验组育肥牛血清中超氧化物歧化酶活性分别提高了7.09%、36.70%和5.57%，其中试验Ⅱ组显著升高（P0.05）；各试验组育肥牛血清中过氧化氢酶活性分别提高了4.61%、28.63%和5.83%，其中试验Ⅱ组显著升高（P0.05）；各试验组育肥牛血清中总抗氧化能力分别提高了9.22%、35.28%和15.34%，其中试验Ⅱ组显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.02.003.T003表3藿香龙黄散对育肥牛血清抗氧化指标的影响组别超氧化物歧化酶/(U/mL)丙二醛/(μmol/L)过氧化氢酶/(U/mL)总抗氧化能力/(U/mL)对照组82.31±2.16b4.11±0.1511.49±0.12b11.28±0.38b试验Ⅰ组90.29±2.31ab4.10±0.2812.02±0.23ab12.32±0.43ab试验Ⅱ组112.52±2.13a4.08±0.3714.78±0.86a15.26±0.57a试验Ⅲ组89.01±2.96ab4.13±0.3412.16±0.31ab13.01±0.51ab注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.3藿香龙黄散对育肥牛血清免疫指标的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，各试验组育肥牛血清中免疫球蛋白A含量分别提高了7.69%、18.99%和8.89%，其中试验Ⅱ组显著升高（P0.05）；各试验组育肥牛血清中免疫球蛋白G含量分别提高了13.68%、29.98%和16.44%，其中试验Ⅱ组显著升高（P0.05）；各试验组育肥牛血清中免疫球蛋白M含量有升高趋势。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.02.003.T004表4藿香龙黄散对育肥牛血清免疫指标的影响组别免疫球蛋白A/(g/L)免疫球蛋白G/(g/L)免疫球蛋白M/(g/L)补体C3/(g/L)补体C4/(g/L)白细胞介素-6/(μg/L)白细胞介素-10/(μg/L)对照组4.16±0.16b14.11±1.15b4.59±0.234.11±0.272.81±0.38812.01±8.05466.08±3.25试验Ⅰ组4.48±0.23ab16.04±1.28ab4.62±0.254.12±0.292.79±0.36809.16±7.56468.01±3.39试验Ⅱ组4.95±0.26a18.34±1.37a4.78±0.364.09±0.262.82±0.47813.18±8.03465.35±3.14试验Ⅲ组4.53±0.31ab16.43±1.34ab4.67±0.314.10±0.252.75±0.32809.41±7.30465.06±3.093讨论3.1藿香龙黄散对育肥牛血清生化指标的影响血液中的蛋白质是动物体内不可缺少的营养物质之一[6]。白蛋白和球蛋白在营养物质运输和机体免疫方面发挥重要作用，白蛋白表面的负离子能够吸附难溶于水的营养物质，而球蛋白对抗原物质具有杀灭作用[7]。本试验中，各试验组育肥牛血清中总蛋白、白蛋白和球蛋白含量均高于对照组，且试验Ⅱ组的总蛋白和球蛋白含量均显著高于对照组，与范钊[8]报道的中草药添加剂能够改善热应激奶牛血液生化指标的结果相似，也与高辉等[9]报道的中草药添加剂对犊牛血液生化指标无不良影响的结果相似。本试验结果表明，饲喂一定量的藿香龙黄散能够增加育肥牛血清中总蛋白含量，促进白蛋白和球蛋白的合成，提高机体内物质的运输能力和机体的免疫力。尿素氮是体内蛋白质代谢的产物，当机体蛋白质代谢良好时，血清中尿素氮水平较低[10]。本试验中，各试验组育肥牛血清中尿素氮含量均低于对照组，且试验Ⅱ组显著低于对照组，与赵小伟等[11]和高治国等[12]的研究结果一致。本试验结果表明，藿香龙黄散能够提高育肥牛对蛋白质的利用率，促进蛋白质的沉积。血清中甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和血糖的含量是反映机体脂肪代谢活跃程度的指标[13]。本试验发现，添加藿香龙黄散提高了育肥牛血清中总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和血糖的含量，与尚相龙等[14]的研究报道相似。本试验结果表明，添加藿香龙黄散能够增强育肥牛的脂肪代谢，促进脂肪的合成与沉积。血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶和乳酸脱氢酶活性是衡量肝脏功能的重要指标[15]。本试验中，各试验组育肥牛血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶和乳酸脱氢酶活性与对照组均无显著差异，说明藿香龙黄散对肝脏功能无影响。血清中碱性磷酸酶的活性是衡量机体代谢强度的重要指标之一[16]。本试验中，各试验组育肥牛血清中碱性磷酸酶活性均高于对照组，说明添加一定量的藿香龙黄散能够促进育肥牛的代谢。3.2藿香龙黄散对育肥牛血清抗氧化指标的影响血清抗氧化指标是体现机体健康状况的重要指标之一[16]。丙二醛是脂质氧化和过氧化的产物，能够损伤蛋白质分子，抑制细胞内生物酶的催化活性，从而对细胞造成损伤[17]。周花艳等[18]研究表明，复方中草药可以增强奶牛抗氧化能力，提高奶牛繁殖性能。张腾龙等[19]研究表明，中草药提取物复合制剂对乳中高体细胞数奶牛的抗氧化能力无显著影响。本试验中，各试验组育肥牛血清中丙二醛含量与对照组无显著差异，表明藿香龙黄散不影响脂质和膜脂的过氧化过程；各试验组育肥牛血清中总抗氧化能力、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性均高于对照组。分析原因可能是藿香龙黄散里的黄酮和多糖类活性物质能够抑制过氧化反应，减少细胞损伤和活性氧类自由基的产生[20-21]。有关藿香龙黄散的抗氧化机制有待进一步研究。3.3藿香龙黄散对育肥牛血清免疫指标的影响血清免疫指标包括免疫球蛋白、补体和白细胞介素等。免疫球蛋白是体液免疫系统的主要成分，免疫球蛋白Ａ主要参与黏膜局部免疫；免疫球蛋白G含量约占免疫球蛋白总量的75%，具有激活补体、中和毒素的作用，能够直接反映机体的免疫力情况；免疫球蛋白Ｍ具有激活补体的功能[22]。本试验中，饲喂一定量的藿香龙黄散，育肥牛血清免疫球蛋白A和免疫球蛋白G的含量均升高，免疫球蛋白Ｍ有升高趋势。才格加等[23]研究表明，饲粮中添加中草药添加剂能够提高牦牛血液的免疫功能。胡永灵等[24]研究表明，中草药添加剂能够改善热应激奶牛的免疫功能。本试验结果与上述研究结果相似。因此，藿香龙黄散有助于增强育肥牛机体的免疫力。4结论本试验表明，在饲粮中添加2%的藿香龙黄散可以有效改善育肥牛的血清生化指标，促进脂肪和蛋白质沉积，对肝脏功能无损伤，增强了育肥牛的抗氧化性能和免疫力。