秸秆的饲料化利用不仅可以为反刍动物的养殖生产提供粗饲料来源，缓解饲料资源紧缺的现状，还可以降低环境污染，促进我国节粮型畜牧业的发展[1-2]。我国每年会产生大量的水稻秸秆，但水稻秸秆的粗纤维含量较高，导致其利用率较低，约有20%的水稻秸秆被丢弃或者焚烧，从而造成资源的浪费，污染环境[3]。水稻秸秆直接应用于反刍动物生产中，其适口性较差，会影响动物的采食量，进而影响动物的生产性能及养殖利润[4-5]。因此，提高水稻秸秆的利用率对促进反刍动物养殖业的发展具有重要意义。目前，相关研究将水稻秸秆进行青贮来提高水稻秸秆的营养价值及适口性[6-7]。水稻秸秆中水溶性碳水化合物含量较低，且表面附着的乳酸菌数量也较少，导致水稻秸秆青贮的品质不是很理想[8-9]。研究发现，在水稻秸秆青贮过程中添加适量的青贮添加剂，如有机酸、酶类和菌制剂等，可以明显改善青贮的营养成分及发酵品质，提高水稻秸秆青贮的成功率[10-12]。本试验采用酶制剂、菌制剂及菌酶复合制剂对水稻秸秆进行青贮，探究不同添加剂对其青贮品质的影响，为水稻秸秆在反刍动物生产中的高效利用与推广提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验采用的水稻秸秆为去籽粒的茎秆，完熟期刈割，切成2 cm左右。水稻秸秆中干物质含量为30.65%，粗蛋白含量为5.06%，粗脂肪含量为5.32%，酸性洗涤纤维含量为44.64%，中性洗涤纤维含量为72.10%。酶制剂由纤维素酶（1×105 U/g）、漆酶（2×106 U/g）、果胶酶（3×105 U/g）及木聚糖酶（1.5×106 U/g）组成；菌制剂由布氏乳杆菌和植物乳杆菌组成（总活菌数2×106 CFU/g）。1.2水稻秸秆青贮的制作及试验设计将2 cm左右的水稻秸秆均分16份，每组4份。试验1组、试验2组、试验3组分别添加1.0 g/kg酶制剂、2.0 g/kg菌制剂、1.0 g/kg酶制剂+2.0 g/kg菌制剂，对照组水稻秸秆不添加添加剂。将上述2 kg水稻秸秆与添加剂混合均匀，装入真空袋（480 mm × 650 mm）中，27 ℃条件下青贮60 d后，取样检测各组水稻秸秆青贮的感官、营养成分、发酵品质及瘤胃养分降解率等指标。1.3测定指标及方法1.3.1感官评定水稻秸秆青贮的感官评定参考德国农业协会（DLG）评分标准进行，具体步骤及方法依据文献[13]进行。16~20分为1级优良，10~15分为2级尚好，5~9分为3级中等，0~4分为4级腐败。1.3.2营养成分每个重复按照四分法取500 g水稻秸秆青贮样品，65 ℃烘箱中烘干至恒重，粉碎。干物质含量参考GB/T 6435—2014的方法测定，粗蛋白含量参考GB/T 6432—2018的方法测定，粗脂肪含量参考GB/T 6433—2006的方法测定，中性洗涤纤维（NDF）含量参考GB/T 20806—2022的方法测定，酸性洗涤纤维含量参考NY/T 1459—2022的方法测定，可溶性碳水化合物含量参考文献[14]的方法进行测定。水稻秸秆青贮后的总可消化养分（TND）[15]和相对饲喂价值（RFV）[16]的计算公式为：TND＝(88.9－ADF×0.779)×100%(1)RFV＝(TDN×120/NDF)／1.29(2)1.3.3发酵参数人工瘤胃缓冲液的配制法参照文献[17]的方法配制。将加入还原剂的人工瘤胃缓冲液持续通入二氧化碳，直到缓冲液颜色变为无色。培养液的制备方法是将1倍体积的人工瘤胃缓冲液（预热到39 ℃）混合2倍体积的瘤胃液而成。采用pH计测定发酵液的pH值，采用气相色谱仪（GC-2010，日本岛津）测定乙酸、丙酸、丁酸、戊酸等挥发性脂肪酸[18]，氨态氮含量采用苯酚-次氯酸钠比色法测定[19]。1.3.4瘤胃营养物质降解率选择3头安装永久性瘤胃瘘管的健康肉牛进行体外瘤胃营养物质降解率的试验。肉牛饲粮购自天康饲料厂，其粗蛋白含量为13.86%，粗脂肪含量为4.19%，中性洗涤纤维含量为35.28%，酸性洗涤纤维含量为27.39%，钙含量为0.71%，磷含量为0.39%。每日早晚分别饲喂1次，自由饮水。体外瘤胃发酵营养物质降解率计算公式为：营养物质降解率＝(发酵前该营养物质含量－发酵后该营养物质含量)/发酵前该营养物质含量×100%(3)1.4数据统计与分析试验数据采用SPSS 28软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行组间数据多重比较。结果用“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同添加剂处理对水稻秸秆青贮感官评定结果的影响（见表1）由表1可知，对照组的水稻秸秆青贮感官总分为13分，2级尚好；而试验1组、试验2组及试验3组水稻秸秆的感官评定结果均较好，达到1级优良，芳香味较浓，颜色呈黄绿色，质地比较松软、不粘手、茎叶结构完整。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.02.021.T001表1不同添加剂处理对水稻秸秆青贮感官评定结果的影响组别气味色泽质地总分对照组芳香味较弱（10）亮黄色（1）茎叶结构较差（2）13试验1组芳香酸味（13）黄绿色（2）茎叶结构保持良好，柔软松散（3）18试验2组芳香酸味（13）黄绿色（2）茎叶结构保持良好，柔软松散（3）18试验3组芳香酸味（13）黄绿色（2）茎叶结构保持良好，柔软松散（4）192.2不同添加剂处理对水稻秸秆青贮营养成分的影响（见表2）由表2可知，与对照组比较，试验2组和试验3组水稻秸秆青贮的干物质含量和总可消化养分含量升高（P0.05），试验3组粗脂肪含量升高（P0.05），酸性洗涤纤维含量降低（P0.05）。试验1组、试验2组、试验3组水稻秸秆青贮的中性洗涤纤维含量降低（P0.05），可溶性碳水化合物含量和相对饲喂价值升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.02.021.T002表2不同添加剂处理对水稻秸秆青贮营养成分的影响项目干物质/%粗脂肪/%粗蛋白/%酸性洗涤纤维/%中性洗涤纤维/%可溶性碳水化合物/%总可消化养分/%相对饲喂价值P值0.0390.0430.1040.0290.0210.0430.0360.019对照组29.46±0.93b6.48±0.28b7.04±0.3742.19±2.04a69.74±3.05a0.87±0.04b54.21±2.19c72.31±4.18c试验1组30.59±1.32ab7.04±0.33b7.47±0.4540.41±3.19ab65.02±4.17b1.35±0.12a56.39±3.09bc80.68±5.74b试验2组31.37±1.63a7.41±0.46ab7.62±0.3939.74±2.18ab64.39±4.13b1.41±0.18a57.37±4.03b82.88±6.03b试验3组32.74±2.04a7.92±0.43a7.88±0.5236.05±2.16b62.16±3.18c1.68±0.11a58.84±4.17a88.05±5.85a注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或者无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.3不同添加剂处理对水稻秸秆青贮发酵品质的影响（见表3）由表3可知，与对照组比较，试验2组和试验3组水稻秸秆青贮的乙酸和总挥发性脂肪酸浓度升高（P0.05），试验1组、试验2组和试验3组的pH值降低（P0.05），试验3组氨态氮浓度降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.02.021.T003表3不同添加剂处理对水稻秸秆青贮发酵品质的影响项目乙酸/(mmol/L)丙酸/(mmol/L)乙酸/丙酸丁酸/(mmol/L)异丁酸/(mmol/L)戊酸/(mmol/L)异戊酸/(mmol/L)总挥发性脂肪酸/(mmol/L)pH值氨态氮/(mg/L)P值0.0430.8520.7510.9320.7940.6390.5930.0470.0350.032对照组42.18±2.05b16.49±1.042.56±0.178.38±0.530.45±0.010.78±0.030.38±0.0171.19±4.48b6.97±0.18a118.3±10.2a试验1组43.36±3.07ab16.85±1.372.57±0.288.27±0.390.42±0.010.76±0.040.39±0.0272.62±3.86b6.73±0.22b107.4±9.6ab试验2组44.94±3.28a17.03±1.352.64±0.158.11±0.490.4±0.010.78±0.040.38±0.0174.28±5.08a6.69±0.16b102.9±8.3ab试验3组45.32±4.07a17.11±1.482.65±0.258.06±0.520.39±0.010.77±0.040.38±0.0174.68±4.73a6.53±0.14c95.3±7.3b2.4不同添加剂处理对水稻秸秆青贮瘤胃营养物质降解率的影响（见表4）由表4可知，与对照组比较，试验1组、试验2组和试验3组水稻秸秆青贮的粗蛋白、中性洗涤纤维及干物质的降解率均得到提高（P0.05），且菌酶复合处理的效果优于单一酶制剂和菌制剂。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.02.021.T004表4不同添加剂处理对水稻秸秆青贮瘤胃营养物质降解率的影响项目粗蛋白中性洗涤纤维酸性洗涤纤维干物质P值0.0380.0390.0930.041对照组46.38±2.19b39.37±1.83c43.29±3.0440.03±1.96b试验1组49.36±3.04a43.58±2.07b45.22±3.2743.29±2.17a试验2组50.27±3.14a44.39±2.17b46.04±3.5844.04±2.56a试验3组52.27±3.46a45.36±3.49a46.38±4.0246.59±3.18a%3讨论3.1不同添加剂处理对水稻秸秆青贮感官评定结果的影响感官评定直观判断青贮饲料的发酵品质。秸秆青贮后的颜色与原料颜色相近、带有酸香味、茎叶结构完整表示青贮成功，品质优良[20]。本试验中，对照组的水稻秸秆青贮后颜色呈现亮黄色、茎叶结构不完整、酸香味较弱，感官总分为13分，为2级尚好；而酶制剂、菌制剂及菌酶制剂处理的水稻秸秆感官评定均较好，达到1级优良，芳香味较浓，颜色呈黄绿色，质地比较松软、不粘手、茎叶结构完整，表明水稻秸秆青贮过程中添加适量的酶制剂和菌制剂可以明显改善青贮饲料的感官品质。酶制剂和菌制剂改善水稻秸秆青贮的感官品质主要是由于酶制剂和菌制剂抑制了发酵过程中有害菌的生长，防止有害菌对饲料的腐败[21-22]。3.2不同添加剂处理对水稻秸秆青贮营养成分的影响秸秆青贮过程中添加适量的酶制剂和菌制剂可以明显提高水稻秸秆的营养成分含量[23-24]。本研究中，与对照组比较，添加适量的酶制剂、菌制剂、菌酶复合制剂对水稻秸秆青贮中的干物质、粗脂肪、酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维、可溶性碳水化合物含量均有不同程度的改善作用，总可消化养分含量和相对饲喂价值均升高，表明水稻秸秆青贮过程添加酶制剂、菌制剂或者菌酶复合制剂明显改善了水稻秸秆中的营养成分，提高了水稻秸秆的饲料化利用价值。周苗育等[25]研究了不同复合酶制剂对水稻秸秆青贮品质的影响，发现水稻秸秆中的干物质、粗蛋白和粗纤维等营养物质均得到不同程度的改善，并提高了水稻秸秆的相对饲喂价值。顾拥建等[26]研究了纤维素酶、糖蜜和乳酸菌对水稻秸秆青贮品质的影响，发现适量的纤维素酶、糖蜜和乳酸菌可以明显降低水稻秸秆中的中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维水平，提高可消化养分的水平，且添加7.5 g/t乳酸菌+400 g/t纤维素酶+1%糖蜜的效果较好，与本研究结果类似。水稻秸秆添加酶制剂与菌制剂青贮后，可以提高乳酸菌对结构性碳水化合物的降解，进而提高了粗蛋白含量[27]；而酶制剂可以有效降解植物细胞壁的纤维素、半纤维素等成分，进而提高了水稻秸秆中可溶性碳水化合物的含量，并降低了中性洗涤纤维及酸性洗涤纤维含量[28]。3.3不同添加剂处理对水稻秸秆青贮发酵品质的影响瘤胃适宜的pH值可以使瘤胃内环境保持稳定，利于瘤胃内微生物的代谢活动，促进粗纤维的降解与消化，改善瘤胃发酵功能，适宜的瘤胃pH值为6~7[29]。氨态氮是瘤胃微生物分解氮的最终产物，可为菌体蛋白的合成提供底物[30]。挥发性脂肪酸为反刍动物机体提供约70%的能量[31]。本试验中，与对照组比较，菌制剂组和菌酶复合制剂组水稻秸秆青贮的乙酸和总挥发性脂肪酸浓度升高，所有添加剂组水稻秸秆青贮的pH值显著降低，菌酶复合制剂组水稻秸秆青贮的氨态氮浓度显著降低，表明水稻秸秆经添加剂处理后，更有利于改善瘤胃的发酵功能，进而为机体提供更多的能量。相关研究均表明，添加酶制剂、菌制剂或者有机酸均可以降低水稻秸秆的pH值和氨态氮浓度，提高挥发性脂肪酸浓度，改善发酵品质[25,32]。原因是水稻秸秆青贮过程中添加适量的酶制剂和菌制剂，可以使发酵青贮过程中产生大量的乳酸，进而降低pH值，而适宜的发酵条件利用氨态氮转化为菌体蛋白，导致氨态氮浓度降低，进而改善了水稻秸秆的发酵品质[33-34]。3.4不同添加剂处理对水稻秸秆青贮瘤胃营养物质降解率的影响秸秆饲料在瘤胃内的降解率可以反映秸秆饲料的品质及营养价值[25]。本试验中，与对照组比较，水稻秸秆经酶制剂、菌制剂及菌酶复合制剂处理后，其粗蛋白、中性洗涤纤维及干物质的降解率均提高，且菌酶复合处理的效果优于单一酶制剂和菌制剂，表明水稻秸秆经添加剂处理青贮后，明显提高了水稻秸秆的利用率，促进机体对水稻秸秆营养成分的消化吸收。王玉荣等[34]研究发现，水稻秸秆经果胶酶+漆酶+复合酶制剂处理后，其干物质降解率提高了14.89%，粗蛋白降解率提高了54.64%，中性洗涤纤维降解率提高了169.41%，酸性洗涤纤维降解率提高了62.24%。周苗育等[25]研究表明，复合酶制剂处理水稻秸秆，可以提高水稻秸秆青贮的干物质、粗蛋白及中性洗涤纤维降解率。以上研究结果均表明，水稻秸秆经酶制剂或者菌制剂发酵后，提高了瘤胃内营养物质的降解率，改善了水稻秸秆的利用率，进而促进反刍动物的生长。4结论本研究表明，水稻秸秆经酶制剂、菌制剂或菌酶复合处理后，可以改善水稻秸秆青贮饲料的感官评分，增加了营养成分含量，改善了体外发酵品质，提高了瘤胃营养物质的降解率，菌酶复合处理的效果优于酶制剂和菌制剂单独处理。